Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La Resistencia Bacteriana es un problema de salud pública mundial que ha ido mermando la eficacia de muchos de los antiobióticos actualmente utilizados, reduciendo enormemente las posibilidades de tratar las enfermedades infecciosas severas de manera efectiva, lo que sumado a la tendiente disminución de la investigación y desarrollo (I+D) de agentes antibacterianos con nuevos mecanismos de acción por parte de la Industria Farmacéutica, conllevaría a una escasez de alternativas terapéuticas en un futuro cercano. Por esto surge la urgente necesidad de promover la investigación hacia nuevos blancos moleculares entre los que se destaca la proteína FtsZ (del inglés Filamentous Temperature-Sensitive Z) cuyo papel es fundamental en la citocinesis celular bacteriana, pues polimeriza en protofilamentos para ensamblar el anillo Z en medio de la bacteria, permitiendo así el reclutamiento de proteínas necesarias para formar el complejo divisor que lleva a cabo el proceso de la división celular, convirtiéndose en un blanco atractivo para el diseño agentes antimicrobianos. Al respecto se han desarrollado diversos Inhibidores de FtsZ entre los que se destaca PC190723 (1) que presenta una potente y selectiva actividad antiestafilocócica con eficacia en modelos in vivo de infección y con un perfil farmacocinético muy parecido al de un fármaco. Con el objetivo de generar nuevos ligandos capaces de inhibir esta proteína se diseñaron los compuestos fenilfuranoxibenzamidas (2), que son análogos estructurales de 1 y que incluyen el núcleo 5-fenilfurano que tiene potencial actividad biológica, a los cuales se les llevó a cabo un estudio de docking molecular en el sitio de unión de PC190723 a la FtsZ de S. aureus, cuyas soluciones señalan que el modo de unión y las interacciones generadas en el bolsillo son favorables para cada uno de estos compuestos ya que son similares a las de 1 obtenidas por cristalografía de rayos-X, y con puntajes docking semejantes en magnitud a las del patrón de 1 relacionados con el volumen o lipofilia por sobre la polaridad del sustituyente aceptor de electrones. Posteriormente se sintetizaron las series 3 y 4, que contienen el núcleo 5-fenilfurano. Primeramente se empleó la reacción de arilación de Meerwein sobre el furfural (obtención de la serie 3), seguido por la reducción del aldehído utilizando borohidruro de sodio (obtención de la serie 4). Se evaluó la actividad antibacteriana para todos los derivados sobre cocáceas Gram-positivas y se encontró actividad sólo para el compuesto 3c contra S. aureus resistente a meticilina, un auspicioso resultado que establece un primer paso para investigar el desarrollo de derivados con potecial actividad antiestafilocócica incluyendo cepas resistentes. Aunque la serie 4 no presentó actividad biológica, distintos antecedentes indicarían que contribuirían a la actividad antibacteriana de la serie 2 y a la unión en el bolsillo de la FtsZ / Bacterial Resistance is a worldwide public health problem that has been weakening the effectiveness of many of the antibiotics currently used, greatly reducing the chances of treating severe infectious diseases effectively, which joined the aimed decrease of the research and development (R&D) of antibacterial agents with new mechanisms of action on the part of the Pharmaceutical Industry, would lead to a shortage of therapeutic alternatives in the near future. This prompts the urgent need to promote research toward new molecular targets the most significant of which is the FtsZ (Filamentous Temperature-Sensitive Z) protein whose role is crucial in the bacterial cell cytokinesis, because polymerizes in protofilaments to join the Z ring in the middle of the bacterium, thus allowing the recruitment of proteins needed to form the complex divisome that carried out the process of cell division, becoming an attractive target for the design antimicrobial agents. In this regard have developed various inhibitors of FtsZ prominent among them being PC190723 (1) which provides a potent and selective antistaphylococcal activity with effectiveness in vivo models of infection and with a pharmacokinetic profile very similar to that of a drug. With the aim of generating new ligands capable of inhibiting this protein were designed phenylfuranoxybenzamides compounds (2), which are structural analogues of 1 and to include the core 5-phenylfuran which has the potential biological activity, all of which have been carried out a study of molecular docking at the site of union of PC190723 to the FtsZ of S. aureus, whose solutions indicate that the mode of union and interactions generated in your pocket are favorable for each one of these compounds because they are similar to those of 1 obtained by X-ray crystallography, and docking scores similar in magnitude to 1 pattern related to the volume or lipophilicity by on the polarity of the substituent electron acceptor. Subsequently, the series 3 and 4, containing the core 5-phenylfuran were synthesized. First the Meerwein arylation reaction of furfural (obtaining serie 3), followed by reduction of the aldehyde using sodium borohydride (obtaining serie 4) was used. The antibacterial activity was assessed for all derivatives on coccus Gram-positive and activity was found only for the compound 3c against S. aureus resistant to methicillin, an auspicious result that provides a first step to investigate the development of derivatives with skimming antistaphylococcal activity including strains resistant. Although the 4 series did not present biological activity, different background would indicate that would contribute to the antibacterial activity of the series 2 and to the union in the pocket of the FtsZ

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Poco tiempo después de la introducción de un antimicrobiano al mercado ha sido posible encontrar bacterias que se muestran resistentes a su acción. Esta resistencia es de tipo natural en algunas bacterias, mientras que en otras es una condición adquirida mediante la incorporación de genes que codifican diversos mecanismos de resistencia. Estas cepas resistentes representan un gran problema en hospitales humanos al ocasionar infecciones nosocomiales, ya que las opciones terapéuticas se ven limitadas. En medicina veterinaria, aunque las infecciones nosocomiales están en aumento, siguen siendo menos estudiadas que las adquiridas por personas. Sin embargo, estas infecciones –tanto en pacientes humanos como veterinarios– tienen en común ser ocasionadas, principalmente, por estafilococos resistentes a meticilina. Por este hecho, sumado a que Staphylococcus aureus meticilino resistente se transmite entre diferentes especies animales, incluyendo al hombre, es que el propósito de esta Memoria de Título fue el de detectar el gen de resistencia mecA en bacterias descritas como nosocomiales. Para ello, se utilizaron tres cepas bacterianas ambientales aisladas de Hospitales Veterinarios de la Universidad de Chile y que mostraron resistencia a oxacilina: Staphylococcus kloosii, Micrococcus sedentarius y Enterococcus faecium. Luego de realizada la extracción del ADN, la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa y la electroforesis correspondientes, se obtuvieron bandas fluorescentes de aproximadamente 500 pb. Estos amplicones se enviaron a secuenciar y las secuencias obtenidas se compararon con las descritas en el GenBank® para el gen mecA. Los porcentajes de identidad nucleotídica de 97%, 97% y 98% respectivamente, permiten confirmar la presencia de cepas que poseen el gen mecA y sugiere su pronta incorporación como cepas controles positivos en futuras investigaciones

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En la actualidad la detección de cepas bacterianas resistentes a múltiples agentes antimicrobianos parece ir en aumento y se atribuye principalmente a la inadecuada utilización de ellos. Estos fármacos han permitido la selección de genes de resistencia en bacterias zoonóticas, como Salmonella, los cuales pueden diseminarse a los seres humanos a través de la cadena alimentaria. Además cobra importancia el rol de las aves silvestres como reservorios y agentes diseminadores de genes de resistencia a antibióticos hacia los seres humanos y otros animales. El objetivo de esta Memoria de Título fue comparar los perfiles genéticos de resistencia antimicrobiana de cepas de S. enterica ser. Enteritidis aisladas desde aves silvestres, aves comerciales y seres humanos en Chile, y determinar su relación con el hospedero de origen de estas cepas. Se analizaron 96 cepas en total, de las cuales 33 fueron aisladas desde aves silvestres, 31 de aves comerciales y 32 de seres humanos. Se utilizó la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para determinar los perfiles de resistencia antimicrobiana. Los genes seleccionados fueron: tet(A), tet(B), tet(G) (resistencia a tetraciclinas), blaPSE-1, blaTEM, blaCMY (resistencia a β-lactámicos), aadB, aacC (resistencia a aminoglicósidos) y además se detectó la presencia de integrones clase 1. Para determinar la asociación de los perfiles genéticos de resistencia con su hospedero de origen se utilizó el programa Infostat®. De las 96 cepas analizadas en esta Memoria, se encontraron 13 perfiles genéticos de resistencia antimicrobiana diferentes, los cuales resultaron estar asociados con el hospedero de origen de las cepas. Adicionalmente, los datos obtenidos fueron analizados con la finalidad de determinar la asociación de genes de resistencia antimicrobiana con hospedero de origen de las cepas, siendo tet(A) el único gen asociado a cepas obtenidas de aves silvestres. Los resultados de esta Memoria proporcionan evidencia sobre los efectos colaterales que provoca la sobreutilización de antimicrobianos en el medio ambiente, impactando indirectamente en la fauna silvestre

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Durante muchos años las infecciones nosocomiales han representado un serio problema, tanto en medicina humana como veterinaria. Con el paso del tiempo, en las bacterias causantes de estas infecciones, se ha observado un incremento de los niveles de resistencia a los antimicrobianos comúnmente utilizados en la clínica hospitalaria. Esto último ha provocado una creciente preocupación a nivel mundial, adoptándose medidas que permitan controlar y prevenir su aparición. El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio en dos hospitales clínicos veterinarios de la Universidad de Chile con el fin de muestrear, aislar, identificar, junto a determinar la sensibilidad a antimicrobianos de cepas bacterianas ambientales descritas dentro de las nosocomiales. Para cada cepa aislada, se utilizó el kit comercial de identificación, el BBL Crystal®, mientras que para la evaluación de los niveles de resistencia se empleó el método de difusión en placa de Kirby Bauer. Se tomaron 120 muestras desde distintas dependencias de los dos hospitales clínicos veterinarios de la Universidad de Chile, aislando e identificándose 56 cepas potencialmente nosocomiales, 28 Gram (+): Enterococcus faecium (25), Enterococcus faecalis (2), Staphylococcus intermedius (1); y 28 Gram (-): Enterobacter cloacae (13), Escherichia coli (10), Acinetobacter baumannii (2), Pseudomonas aeruginosa (2) y Pantoea agglomerans (1). Del total de cepas Gram (+) 82,1% presentaron resistencia a tres o más de los antimicrobianos probados, es decir resultaron ser multiresistentes. Los mayores niveles de resistencia se observaron frente al grupo de los β-lactámicos: oxacilina (89,3%) y ampicilina (57,1%); tetraciclinas: doxiciclina (71,4%) y tetraciclina (64,3%); y quinolonas enrofloxacino (67,9%) y ciprofloxacino (64,3%). Ninguna cepa de E. faecium fue resistente a vancomicina. Las cepas Gram (-) presentaron sólo un 32,1% de multiresistencia, destacando aquéllas frente a sulfa/trimetropim (46,4%) y ampicilina (42,9%). Por otra parte, el 39,3% de las cepas de este grupo fueron sensibles a todos los antimicrobianos probados. Se concluye que de manera similar a lo que ocurre en medicina humana, en los hospitales veterinarios también se presentan los problemas asociados a la existencia de bacterias nosocomiales. Es preocupante que 36/56 (64,3%) de las cepas potencialmente nosocomiales estudiadas mostraron multiresistencia que, en la práctica, implica un serio conflicto clínico al elegir la terapia antimicrobiana adecuada frente a las infecciones producidas por estos microorganismos Los resultados corresponden a la realidad de sólo dos hospitales veterinarios muestreados; sin embargo, es posible su extrapolación a una mayor escala, situación que hace recomendar la instauración de programas activos de vigilancia dedicados a seguir la evolución de estas infecciones

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La aparición de la resistencia antimicrobiana por parte de bacterias zoonóticas es una preocupación actual en la salud pública. Salmonella enterica es un patógeno emergente que ha cobrado mayor importancia en este último tiempo y se desconoce su impacto en especies acuáticas. El objetivo de este estudio fue determinar fenotipos de resistencia a antibióticos en cepas de Salmonella enterica y su asociación con distintos hospederos en Chile. Se analizaron 111 cepas correspondientes 49 de aves acuáticas, 30 de aves comerciales y 32 humanas. Se utilizó el método de difusión en placa Kirby Bauer según las normas recomendadas por el Clinical Laboratory Standards Institute (2007) para determinar los fenotipos de resistencia. Los antibióticos utilizados fueron 10: enrofloxacino, amoxicilina - ácido clavulánico, cefotaxima, gentamicina, tetraciclina, sulfametazol - trimetoprim, ceftofiur, cefradina, ampicilina y cefradroxilo. Para analizar la asociación de los fenotipos de resistencia con su hospedero de origen se utilizó el programa Infostat versión 2010. Del total de cepas de S. enterica analizadas se encontraron 42 cepas resistentes en aves acuáticas, 16 en aves comerciales y 10 en humanos. Dentro de las cepas de aves acuáticas 33 demostraron resistencia al antimicrobiano tetraciclina. En el caso de aves comerciales y humanos los valores absolutos de resistencia no fueron significativos. En relación a la asociación de los fenotipos de resistencia con su hospedero de origen, se demostró en aves acuáticas en relación a 4 agentes antimicrobianos: Tetraciclina, amoxicilina + ácido clavulánico, ampicilina y gentamicina. De acuerdo al estudio realizado, se demuestra el efecto del uso de antimicrobianos en la fauna silvestre como es el caso de las aves acuáticas y de qué manera se ve desfavorecido el medio ambiente con los altos niveles de resistencia. Los resultados sugieren que las infecciones con Salmonella en aves acuáticas podría tener un gran impacto en la salud pública y animal. / Proyecto Fondecyt 11110398

Memoria para optar al título de Ingeniero Civil en Biotecnología / La creciente tendencia por parte de bacterias patógenas de volverse resistentes a los antibióticos ha llevado al campo de la ciencia a una incansable búsqueda por nuevas moléculas capaces de acabar con estos microorganismos. Una tendencia ha sido buscar compuestos naturales desarrollados por bacterias de ambientes extremos. En esa búsqueda, científicos hallaron una cepa de Streptomyces en el Salar de Huasco, región de Tarapacá, Chile, con propiedades antibióticas y citotóxicas. Con el fin de poder comprender de mejor manera el metabolismo de esta cepa, se realizó un modelo metabólico in silico de tal cepa, denominada HST28, en base al genoma secuenciado de ésta. La primera fase fue determinar la filogenia de la cepa mediante comparación de rRNA 16S, lo cual reveló una cercanía del 97% con Streptomyces avermitilis. Posteriormente, usando la información disponible en la base de datos KEGG, se elaboró el modelo metabólico en base a la comparación entre HST28 y S. avermitilis mediante BLAST usando la extensión de Python COBRApy en Jupyter para armar metabolitos y reacciones. Se generó una serie de funciones destinadas a facilitar el trabajo de elaboración del modelo, junto con un protocolo para encontrar errores en el modelo terminado. El modelo final cuenta con 804 reacciones, 627 metabolitos y 594 genes, lo que constituye un modelo de tamaño promedio para este tipo de estructuras. El análisis al modelo determinó que el HST28 debería crecer mejor con sacarosa como fuente de carbono, y amonio como fuente de nitrógeno. Las tasas de crecimiento en medios mínimos fueron altas en comparación a otros Streptomyces. Finalmente, queda destacar que el procedimiento para generar y curar el modelo tiene la potencialidad de ser útil en otras investigaciones que impliquen el desarrollo de un modelo metabólico.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La microbiota intestinal corresponde a las poblaciones bacterianas que habitan en el sistema gastrointestinal de los animales y humanos, esta participa directamente en la estimulación del sistema inmune, en la síntesis de vitaminas y en la inhibición de poblaciones bacterianas nocivas para el huésped. En la producción avícola destaca el uso de variados antimicrobianos para el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas, el efecto de estos antimicrobianos sobre la microbiota intestinal en términos de resistencia y variaciones poblacionales ha sido escasamente estudiado en aves de postura. Por esto es que el objetivo del presente trabajo fue estudiar la variación de poblaciones intestinales de Escherichia coli, Enterococcus spp. y Lactobacillus spp. en aves de postura expuestas a un tratamiento con enrofloxacino y además medir la variación en los niveles de resistencia bacteriana en las poblaciones de E. coli y Enterococcus spp. en su rol de bacterias indicadoras de resistencia. Se utilizaron 30 gallinas ponedoras raza leghorn las cuales fueron separadas en un grupo tratado (n=15) y control (n=15), el grupo tratado recibió enrofloxacino 5% por vía oral y el grupo control un placebo (agua destilada) durante 10 días. A los 3, 7 y 15 días posteriores al tratamiento se obtuvieron muestras de contenido intestinal a partir de íleon y ciego de los animales, las cuales se sembraron y cultivaron en los diferentes medios de cultivo para el posterior conteo de colonias intestinales. A partir de estas muestras se aislaron 99 cepas de E. coli y 90 cepas de Enterococcus spp. para el análisis de la variación en los niveles de resistencia frente a amoxicilina, cefotaxima, enrofloxacino, ácido nalidíxico, estreptomicina, oxitetraciclina y sulfametoxazol + trimetoprim para E. coli; y frente a amoxicilina, enrofloxacino, eritromicina y oxitetraciclina para Enterococcus spp. En el caso del conteo de colonias bacterianas solo se encontraron diferencias significativas posteriores al tratamiento en las colonias de Lactobacillus spp. En el caso de los niveles de resistencia posteriores al tratamiento con enrofloxacino para las cepas de E. coli, estos aumentaron respecto del grupo control frente a amoxicilina, enrofloxacino, ác nalidíxico, estreptomicina y sulfametoxazol + trimetoprim. En el caso de las cepas de Enterococcus spp. la resistencia se incrementó solo en el caso de enrofloxacino, mientras que para eritromicina y oxitetraciclina disminuyeron respecto al control. De acuerdo a estos resultados se puede concluir que la utilización de antimicrobianos afecta directamente a la microbiota intestinal tanto en términos de variación en las poblaciones bacterianas como también en relación a los niveles de resistencia antimicrobiana de estas mismas

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Las infecciones nosocomiales y la resistencia antimicrobiana, constituyen una problemática mundial en el área de la salud pública, ambas se interrelacionan ya que las bacterias asociadas con infecciones nosocomiales son a menudo resistentes a los antibióticos, siendo cada vez más frecuente el fenómeno de la multiresistencia en las cepas involucradas. Entre los antimicrobianos, ampliamente usados en medicina veterinaria, que han visto reducida su efectividad se encuentra el grupo de las tetraciclinas, fármacos de amplio espectro utilizados con diferentes fines terapéuticos. Las bacterias resistentes son capaces de transmitir y adquirir genes de resistencia antimicrobiana, en el caso de las bacterias resistentes a tetraciclinas estas presentan genes denominados tet, describiéndose en la actualidad 43 genes tet que codifican, principalmente, proteínas de eflujo activo y proteínas de protección ribosomal. El objetivo de este trabajo fue la detección de tres genes de resistencia a tetraciclinas- tet(K), involucrados en la generación de proteínas de eflujo y tet(M) y tet(O), involucrados en la generación de proteínas de protección ribosomal, mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), en cepas bacterianas Gram positivas ambientales descritas como nosocomiales, previamente aisladas y caracterizadas en los años 2007 y 2008, desde unidades clínico Veterinarias de la Universidad de Chile. La aplicación de esta técnica de biología molecular permitió detectar en cepas fenotípicamente resistentes mediante antibiograma por difusión en agar, al menos uno de los tres genes de resistencia a tetraciclinas. En un alto porcentaje de cepas con sensibilidad intermedia también se detectó al menos un gen de resistencia y en algunas cepas sensibles a tetraciclinas se obtuvo este mismo resultado / PROYECTO FIV 4602016

Memoria para optar al Título Profesional de Bioquímico / La colonización del Pacífico se gestó en dos grandes procesos de migración: el primero alrededor de 50.000 a 30.000 años antes del presente, y el segundo hace 5.000 a 1.000 años antes del presente. Este último gran movimiento fue complejo y se ha estudiado integrando evidencias arqueológicas, lingüísticas y genéticas con el propósito de dilucidar incógnitas como las diferentes rutas migratorias propuestas sobre el poblamiento de Oceanía. Entre los modelos de estudios genéticos se han analizado muestras humanas, pero éstas presentan diversas complejidades que limitan el alcance de los estudios con este modelo. Por este motivo, surgen los estudios de especies asociadas a los colonizadores polinésicos, de los cuales se han analizado especies animales y vegetales. Entre estos últimos se encuentra la morera de papel (Broussonetia papyrifera), una planta nativa de Asia e introducida a la región de Oceanía Remota. Debido a su uso como fuente de fibra vegetal para textiles y la importancia cultural que representa, resulta interesante abordar su estudio para aportar a la comprensión de las rutas migratorias en Oceanía Remota. La principal herramienta de los estudios genéticos son los marcadores moleculares, que corresponden a regiones de ADN que presentan cierto grado de variabilidad detectable. En B. papyrifera se han analizado regiones de ADN ribosomal y de ADN de cloroplastos, encontrando ausencia de diversidad en muestras de Oceanía Remota. Una alternativa para este tipo de análisis podría ser el uso de marcadores basados en retrotransposones, los cuales han sido descritos como ubicuos en plantas y como fuente de gran diversidad genética. Entre los marcadores basados en retrotransposones se encuentran los Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphisms (IRAP) y Retrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphisms (REMAP), los cuales amplifican regiones entre secuencias de Repeticiones Terminales Largas (LTR), o entre LTR y secuencias microsatélites, respectivamente. Estos marcadores han sido ampliamente empleados en estudios de diversidad genética debido a su facilidad de uso. En base a los antecedentes presentados, se plantea la siguiente hipótesis: “El estudio de B. papyrifera por medio de marcadores moleculares basados en retrotransposones IRAP y REMAP permite detectar diversidad genética presente en muestras obtenidas de Oceanía Remota que no han sido diferenciadas mediante otros marcadores moleculares”. Con el objetivo de caracterizar la diversidad genética de muestras de B. papyrifera provenientes de Oceanía Remota usando marcadores IRAP y REMAP, se seleccionaron partidores a partir de la literatura para el análisis de muestras de B. papyrifera del hábitat nativo y de la región introducida. En primer lugar, se corroboró que las secuencias amplificadas mediante estos marcadores corresponden a retroelementos, caracterizando cinco secuencias amplificadas con un marcador IRAP. Estas secuencias corresponden a dos posibles tipos de elementos TRIM (Terminal-repeat Retrotransposon In Miniature), los cuales son derivados cortos de retrotransposones que conservan algunas regiones características de retroelementos, pero carecen de marcos de lectura abiertos funcionales. En una etapa siguiente se estandarizaron los protocolos IRAP y REMAP para obtener patrones de amplificación óptimos. Además, se ajustaron las condiciones de electroforesis y de captura de imagen. Inicialmente, se probaron 45 combinaciones de partidores IRAP y 36 combinaciones de partidores REMAP con un grupo de cuatro muestras de prueba de Oceanía Remota. A partir de los resultados obtenidos, se seleccionaron cuatro combinaciones REMAP para analizar 55 muestras representativas del banco genómico de B. papyrifera de distintas localidades del Pacífico. Estos análisis mostraron una baja diversidad genética, apoyando la noción de una dispersión clonal de la morera de papel en las distintas islas del Pacífico. Esta información complementa los resultados obtenidos con otros marcadores utilizados en esta y otras especies, y favorecen modelos migratorios como el “tren rápido” o el de la “Triple I”. Esta memoria de título constituye el primer estudio de retrotransposones en B. papyrifera y abre la posibilidad a nuevos trabajos que profundicen el análisis de la dispersión y la diversificación clonal de la morera de papel en Oceanía Remota, considerando que los retroelementos han sido descritos como fuente importante de diversidad en otras especies vegetales / The human colonization of the Pacific occurred in two major stages: the first migration took place about 50,000 to 30.000 years before present, and the second stage occurred more recently, about 5.000 to 1.000 years before present. This latter large movement was complex and has been widely studied gathering archeological, linguistic and genetic evidence in order to elucidate questions such as the different routes proposed for the settlement of Oceania. Human samples have been analyzed using genetic tools, but these present several complexities that limit their scope. Therefore studies centered on human-associated species (known as commensal species) arise. Animal and plant species have been studied, and among the latter, paper mulberry (Broussonetia papyrifera), a plant native from Asia and introduced in the Remote Oceania Region has been used a commensal model species. Due to its use as a fiber source to make textiles and the cultural importance of paper mulberry, it is interesting to address the study of this species to contribute to the understanding of migratory routes in Remote Oceania. Molecular markers are the main tools to analyze DNA regions that present genetic diversity. In B. papyrifera, ribosomal and chloroplast DNA regions have been analyzed, finding no genetic diversity in samples from Remote Oceania. An alternative to approach this kind of analysis could be the use of retrotransposon-based markers, which have been reported as ubiquitous and a major source of genetic diversity in plants. Retrotransposon-based markers are Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphisms (IRAP) and Retrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphisms (REMAP), among others. IRAP and REMAP amplify regions between Long Terminal Repeats (LTR), or between LTR and microsatellites, respectively. These markers are easy to apply and have been widely used for genetic diversity studies in different plant species. Based on this background, the following hypothesis is proposed: “The study of B. papyrifera by retrotransposon-based markers IRAP and REMAP allow to detect genetic diversity in samples from Remote Oceania not previously differentiated with others molecular markers”. In order to characterize the genetic diversity of B. papyrifera samples from Remote Oceania by IRAP and REMAP, primers were selected from the literature to analyze samples of B. papyrifera from native and introduced areas. First, we checked that the amplified sequences with these primers were obtained from retroelements. Five sequences amplified with an IRAP marker were characterized and shown to correspond to two types of TRIM (Terminal-repeat Retrotransposon In Miniature) elements, which are short retrotransposon derivatives that have some conserved regions characteristic of retroelements, but lack functional open reading frames. Then, protocols for IRAP and REMAP amplification were standardized in order to obtain optimal amplification patterns. In addition, electrophoresis and image capture conditions were defined. From 45 IRAP and 36 REMAP primer combinations, 4 REMAP combinations showed distinct amplification patterns in a reduced group of B. papyrifera samples from Remote Oceania. The results obtained from the analysis of 55 samples of B. papyrifera using four selected REMAP markers showed little diversity, supporting the notion of a clonal dispersal of paper mulberry among Pacific islands. These results complement data obtained with others markers in paper mulberry and other species, and are consistent with the previously proposed models of human colonization of the Pacific as the “fast train” or the “Triple-I” models. The present work is the first retrotransposon study in B. papyrifera and opens the possibility to further work to analyze the clonal dispersal and diversification of paper mulberry in Remote Oceania, considering that retroelements have been described as an important source of molecular diversity in plant species / Fondecyt

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La resistencia bacteriana a antimicrobianos y su diseminación son una de las mayores epidemias del mundo en la actualidad. Hoy en día, el uso masivo, y en algunos casos, el mal uso de los antimicrobianos, han generado una presión de selección en los microorganismos, creando nuevos y mejores mecanismos de resistencia tanto en cepas bacterianas comensales como en cepas patógenas, generando un grave problema de salud pública que no cesa de aumentar de forma alarmante en todo el mundo. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los perfiles de resistencia genotípica frente a macrólidos y aminoglucósidos en cepas indicadoras de Enterococcus spp. y Escherichia coli fenotípicamente resistentes a estos fármacos, que fueron aisladas de la microbiota intestinal de gallinas de postura. Se determinaron los genes de resistencia a eritromicina ermB, ermA, mefA, msrA/B y msrC en 37 cepas de Enterococcus spp. resistentes fenotípicamente a eritromicina y los genes de resistencia a estreptomicina aadA1, aadA2, aadE, strA y strB en 26 cepas de E. coli resistentes fenotípicamente a estreptomicina. Se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). El gen de resistencia a eritromicina más frecuente en cepas de Enterococcus spp. fue ermB encontrándose en 48,6% de las cepas. Los genes ermA, mefA, msrA/B y msrC no fueron encontrados en ninguna de las cepas del estudio. En cuanto a los genes de resistencia a estreptomicina, los genes más frecuentes encontrados fueron strA y strB, encontrándose en un 57,7% de las cepas de E. coli del estudio. Estos genes se encontraron siempre juntos. Los genes aadA1, aadA2 y aadE no fueron encontrados en ninguna de las cepas del estudio. Los resultados de este estudio entregan información actualizada de la situación de resistencia bacteriana en cepas indicadoras aisladas de animales productores de alimentos de alto consumo en nuestro país. Finalmente se puede señalar que los datos presentados en este trabajo podrían servir de base junto a otros estudios, para promover el desarrollo de un programa de monitoreo de la resistencia bacteriana en medicina veterinaria