A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

Cavalcanti, BN. Resposta de fibroblastos de polpa humanos frente a substâncias liberadas por capeadores pulpares diretos [Tese de Doutorado]. São Paulo: Faculdade de Odontologia da USP; 2003. RESUMO O objetivo do presente estudo foi o de avaliar os efeitos citotóxicos de substâncias liberadas durante a aplicação de materiais utilizados em capeamento pulpar direto, sobre fibroblastos de polpa dentária humana. Utilizou-se para o experimento meios condicionados pelas substâncias a serem testadas, divididas nos grupos a seguir: grupo I: controle (meio de cultivo sem condicionamento); grupo II: cimento de hidróxido de cálcio; grupo III: adesivo dentinário; grupo IV: ácido ortofosfórico a 37%. O condicionamento foi realizado, colocando-se meio de cultivo fresco sobre os materiais de modo que a presa (grupo II), polimerização (grupo III) ou o contato direto (grupo IV) liberassem substâncias para esse meio de cultivo. Esse meio era colocado sobre as células durante todo o experimento, excetuando-se o grupo IV, onde o contato foi feito por um período de 15 segundos, conforme recomendações clínicas. Posteriormente foram realizadas contagens em hemocitômetro pelo método de exclusão por azul de Trypan, que cora somente as células mortas. As contagens foram realizadas em períodos de 0, 6, 12 e 24 horas para o experimento de viabilidade celular (curto prazo), onde se avaliou o percentual de células vivas sobre o total de células, e em períodos de 1, 3, 5 e 7 dias para o experimento de sobrevivência celular, no qual se avaliou o número absoluto de células vivas. Observou-se que as substâncias liberadas pelo adesivo dentinário são citotóxicas em qualquer período, diminuindo consideravelmente a viabilidade celular e afetando suas curvas de crescimento. Aquelas liberadas pelo ácido ortofosfórico a 37% provocam diminuição da viabilidade somente nos primeiros momentos do contato com as células, enquanto as substâncias liberadas durante a presa do hidróxido de cálcio não são citotóxicas em nenhum momento. / The purpose of the present study was to evaluate the cytotoxic effects of substances leached during the use of direct pulp capping materials, on human pulp fibroblasts. There were used cell culture mediums conditioned by the test materials, as follows: group I: control (fresh medium without conditioning); group II: calcium hydroxide cement; group III: bonding system; group IV: 37% orthophosphoric acid. The medium conditioning was made, pouring the fresh conditioning medium on the materials, in order that its setting (group II), polymerization (group III) or the direct contact (group IV) would be able to leach substances to this culture medium. These conditioned mediums were put on the cells for the entire experiment, excepting the group IV, in which the mediums were put in contact with the cells for 15 seconds, following clinical recommendations. Cell counting was performed in hemocytometer, using the Trypan blue exclusion method, which mark only the dead cells. These counting was made at experimental times of 0, 6, 12 and 24 hours for the cell viability assay (short term), where it is evaluated the percentage of live cells on the total number of cells, and at experimental times of 1, 3, 5 and 7 days for the survival assay, in which is evaluated the absolute number of live cells. It was observed that the substances leached by the bonding system are cytotoxic at all experimental times, decreasing significantly the cell viability and affecting its growing rate. Those leached by the 37% orthophosphoric acid decreased the cell viability only at the first contact with the cells, and the substances leached during the setting of the calcium hydroxide cement are not cytotoxic.

Cavalcanti, BN. Resposta de fibroblastos de polpa humanos frente a substâncias liberadas por capeadores pulpares diretos [Tese de Doutorado]. São Paulo: Faculdade de Odontologia da USP; 2003. RESUMO O objetivo do presente estudo foi o de avaliar os efeitos citotóxicos de substâncias liberadas durante a aplicação de materiais utilizados em capeamento pulpar direto, sobre fibroblastos de polpa dentária humana. Utilizou-se para o experimento meios condicionados pelas substâncias a serem testadas, divididas nos grupos a seguir: grupo I: controle (meio de cultivo sem condicionamento); grupo II: cimento de hidróxido de cálcio; grupo III: adesivo dentinário; grupo IV: ácido ortofosfórico a 37%. O condicionamento foi realizado, colocando-se meio de cultivo fresco sobre os materiais de modo que a presa (grupo II), polimerização (grupo III) ou o contato direto (grupo IV) liberassem substâncias para esse meio de cultivo. Esse meio era colocado sobre as células durante todo o experimento, excetuando-se o grupo IV, onde o contato foi feito por um período de 15 segundos, conforme recomendações clínicas. Posteriormente foram realizadas contagens em hemocitômetro pelo método de exclusão por azul de Trypan, que cora somente as células mortas. As contagens foram realizadas em períodos de 0, 6, 12 e 24 horas para o experimento de viabilidade celular (curto prazo), onde se avaliou o percentual de células vivas sobre o total de células, e em períodos de 1, 3, 5 e 7 dias para o experimento de sobrevivência celular, no qual se avaliou o número absoluto de células vivas. Observou-se que as substâncias liberadas pelo adesivo dentinário são citotóxicas em qualquer período, diminuindo consideravelmente a viabilidade celular e afetando suas curvas de crescimento. Aquelas liberadas pelo ácido ortofosfórico a 37% provocam diminuição da viabilidade somente nos primeiros momentos do contato com as células, enquanto as substâncias liberadas durante a presa do hidróxido de cálcio não são citotóxicas em nenhum momento. / The purpose of the present study was to evaluate the cytotoxic effects of substances leached during the use of direct pulp capping materials, on human pulp fibroblasts. There were used cell culture mediums conditioned by the test materials, as follows: group I: control (fresh medium without conditioning); group II: calcium hydroxide cement; group III: bonding system; group IV: 37% orthophosphoric acid. The medium conditioning was made, pouring the fresh conditioning medium on the materials, in order that its setting (group II), polymerization (group III) or the direct contact (group IV) would be able to leach substances to this culture medium. These conditioned mediums were put on the cells for the entire experiment, excepting the group IV, in which the mediums were put in contact with the cells for 15 seconds, following clinical recommendations. Cell counting was performed in hemocytometer, using the Trypan blue exclusion method, which mark only the dead cells. These counting was made at experimental times of 0, 6, 12 and 24 hours for the cell viability assay (short term), where it is evaluated the percentage of live cells on the total number of cells, and at experimental times of 1, 3, 5 and 7 days for the survival assay, in which is evaluated the absolute number of live cells. It was observed that the substances leached by the bonding system are cytotoxic at all experimental times, decreasing significantly the cell viability and affecting its growing rate. Those leached by the 37% orthophosphoric acid decreased the cell viability only at the first contact with the cells, and the substances leached during the setting of the calcium hydroxide cement are not cytotoxic.