Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2018-06-19T19:39:34Z No. of bitstreams: 2 Tese - Roberto Araujo Bezerra - 2017.pdf: 6402541 bytes, checksum: ed090dd91775b5a16e6798f3fdfa191e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-06-27T10:33:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Roberto Araujo Bezerra - 2017.pdf: 6402541 bytes, checksum: ed090dd91775b5a16e6798f3fdfa191e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-27T10:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Roberto Araujo Bezerra - 2017.pdf: 6402541 bytes, checksum: ed090dd91775b5a16e6798f3fdfa191e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The world's fishery production is constantly growing, with expansion of aquaculture parks, fish farms and fish-pay, however, these activities can trigger damages to aquatic systems. The process of eutrophication is characterized by the excess of nutrients available in the water, which when associated with high temperatures and luminosity, provide cyanobacteria blooms, some of which are toxic. Microcystins pose risks to human and other animal health due to the consumption of contaminated fish and can cause serious problems for the aquatic community. The present study had as main objective to evaluate the mutagenic damages that toxic blooms of Microcystis aeruginosa and Microcystis panniformis in different densities of cells can cause when exposed to the Piaractus brachypomus (pirapitinga), native species of the Amazon basin and commercialized in fish farms and fish-pays of the Goiânia metropolitan region, and to evaluate the profile of fish consumption by the community of the Federal University of Goiás. The results showed that even at low densities, the effect of microcystins generated different genomic damages in fish. Juveniles presented erythrocytic nuclear alterations exposed to M. aeruginosa - reniformes: 33%; binucleate: 28.6%; micronucleus: 28.1% and exposed to M. panniformis reniformes: 6.43%; binucleate: 75.5%; micronucleus: 2.4%. There was a higher concentration of microcystins produced by M. panniformis cells. As for the profile of the academic community, more than 80% consume fish, since tilapia is the most preferred species among respondents (22.4%). Of these, only 49.6% go to fish-pay and the main reason for going is leisure with family or friends (46.7%), however, only 21.7% take into account the hygiene of the place, but are unaware of the quality of the waters of these places, as well as that of fish. It was concluded in this study that the group most threatened by the action of cyanotoxins are the fish consumers themselves due to the low concentration found in the muscular tissues and that when investigated, some do not reach the peak of detection, passing unnoticed by the human population. / A produção pesqueira mundial está em constante crescimento, com expansão de parques aquícolas, pisciculturas e pesque-pague, no entanto, essas atividades podem desencadear danos aos sistemas aquáticos. O processo de eutrofização é caracterizado pelo excesso de nutrientes disponibilizados na água, que quando associados a elevadas temperaturas e luminosidade, proporcionam florações de cianobactérias, sendo algumas tóxicas. As microcistinas oferecem riscos à saúde humana e de outros animais devido ao consumo de peixe contaminado, podendo causar sérios problemas à comunidade aquática. O presente estudo teve como objetivo principal avaliar os danos mutagênicos que florações tóxicas de Microcystis aeruginosa e Microcystis panniformis em diferentes densidades de células podem ocasionar quando expostas à Piaractus brachypomus (pirapitinga), espécie nativa da bacia Amazônica e comercializada em pisciculturas e pesque-pague da região metropolitana de Goiânia/GO, e avaliar o perfil do consumo de peixes pela comunidade da Universidade Federal de Goiás. Os resultados demonstraram que mesmo em baixas densidades, o efeito das microcistinas geraram diferentes danos genômicos nos peixes. Os juvenis apresentaram alterações nucleares eritrocíticas expostos à M. aeruginosa - reniformes: 33%; binucleadas: 28,6%; micronúcleo: 28,1% e expostos à M. panniformis – reniformes: 6,43%; binucleadas: 75,5%; micronúcleo: 2,4%. Verificou-se maior concentração de microcistinas produzidas por células de M. panniformis. Quanto ao perfil da comunidade acadêmica, mais de 80% consomem peixes, posto que a tilápia é a espécie de maior preferência pelos entrevistados (22,4%). Destes, apenas 49,6% frequentam pesque-pague e o principal motivo pela ida é o lazer em família ou com amigos (46,7%), todavia, apenas 21,7% levam em consideração a higiene do local, mas desconhecem a qualidade das águas desses locais, bem como a dos peixes. Concluiu-se neste estudo, que o grupo mais ameaçado pela ação das cianotoxinas são os próprios consumidores de peixe, devido à baixa concentração encontrada nos tecidos musculares e que quando investigadas, algumas não atingem o pico de detecção, passando despercebido pala população humana.

Em estudos de proteção ao genoma contendo lesões de C. crescentus, foi feita uma varredura em uma biblioteca clones mutados pelo transposon Tn5 e sensíveis à luz UV-B e MMS. Dos 249 clones selecionados conseguimos identificar mutações em 102 genes, distribuídos em dez categorias funcionais, incluindo metabolismo de DNA. Além de genes já descritos como atuantes na defesa de genoma a lesões, os dados ainda adicionam funções potenciais para outros genes. Investigação mais detalhada indica que vários dos genes identificados podem afetar o estresse e ciclo celular, podendo estar relacionados a respostas do tipo pontos de checagem. Além disso, verificamos que mutantes para genes envolvidos em reparo excisão de nucleotídeos são mais sensíveis à H2O2, indicando que nessa bactéria, este sistema de reparo atua também em lesões oxidativas no DNA. Os dados obtidos são pioneiros no estabelecimento de funções para vários genes de C. crescentus e de outras alfa-proteobactérias. / This work aimed to identify genes related to DNA damage protection in C. crescentus, by means of screening a Tn5 -mutated library for clones sensitive to UV-B light and MMS. Out of 249 selected clones, we were able to identify mutations in 102 genes, classified in ten different functional categories, including DNA metabolism. In addition to genes already described as playing a role in genome defense to lesions, the results provide new potential functions to several other genes. More detailed investigation indicates also that the mutations in some of these genes may also affect cell stress and cell cycle, being potentially involved in check-point responses. Moreover, mutants for nucleotide excision repair genes were also found to be sensitive to H2O2, indicating that this DNA repair system also acts in DNA oxidative damage. These data are the first establishing a role in genome protection for several genes in C. crescentus, as well as other alpha-proteobacteria.

Em estudos de proteção ao genoma contendo lesões de C. crescentus, foi feita uma varredura em uma biblioteca clones mutados pelo transposon Tn5 e sensíveis à luz UV-B e MMS. Dos 249 clones selecionados conseguimos identificar mutações em 102 genes, distribuídos em dez categorias funcionais, incluindo metabolismo de DNA. Além de genes já descritos como atuantes na defesa de genoma a lesões, os dados ainda adicionam funções potenciais para outros genes. Investigação mais detalhada indica que vários dos genes identificados podem afetar o estresse e ciclo celular, podendo estar relacionados a respostas do tipo pontos de checagem. Além disso, verificamos que mutantes para genes envolvidos em reparo excisão de nucleotídeos são mais sensíveis à H2O2, indicando que nessa bactéria, este sistema de reparo atua também em lesões oxidativas no DNA. Os dados obtidos são pioneiros no estabelecimento de funções para vários genes de C. crescentus e de outras alfa-proteobactérias. / This work aimed to identify genes related to DNA damage protection in C. crescentus, by means of screening a Tn5 -mutated library for clones sensitive to UV-B light and MMS. Out of 249 selected clones, we were able to identify mutations in 102 genes, classified in ten different functional categories, including DNA metabolism. In addition to genes already described as playing a role in genome defense to lesions, the results provide new potential functions to several other genes. More detailed investigation indicates also that the mutations in some of these genes may also affect cell stress and cell cycle, being potentially involved in check-point responses. Moreover, mutants for nucleotide excision repair genes were also found to be sensitive to H2O2, indicating that this DNA repair system also acts in DNA oxidative damage. These data are the first establishing a role in genome protection for several genes in C. crescentus, as well as other alpha-proteobacteria.

A combinação do teste de Ames e métodos seletivos de extração para os principais grupos de compostos responsáveis pela atividade genotóxica em amostras ambientais tem sido muito utilizada. O objetivo foi validar o uso do Blue rayon como alternativa para extração de compostos presentes em águas brutas e tratadas. Foram realizados experimentos comparativos entre o Blue rayon e XAD-4 com amostras fortificadas e amostras reais. Dois mananciais, um contaminado com compostos policíclicos e outro não, foram estudados. As amostras foram extraídas com resina XAD4, e com Blue rayon, este último seletivo para compostos policíclicos. Os extratos foram testados com as linhagens de Salmonella typhimurium TA98 e TA100 na presença e ausência de mistura S9. O Blue rayon foi menos eficiente na detecção da mutagenicidade total das amostras quando comparado com a XAD-4. Porém foi capaz de distinguir a mutagenicidade já presente na água bruta daquela gerada durante o tratamento. / The combination of the Ames test and selective extraction methodologies has been successfully used to indicate the possible classes of organic contaminants in environmental samples. The aim of this study was to validate the use of Blue rayon as an alternative extraction method to detect compounds in raw and treated waters. Two different water bodies were evaluated and in one of the sites, raw waters were known to be contaminated with polycyclic compounds. Experiments comparing the Blue rayon technique with XAD-4 resin were done in environmental and spiked samples. The extracts were tested for mutagenicity with Salmonella typhimurium strains TA98 and TA100, with and without metabolic activation. Blue rayon was less efficient in detecting the overall mutagenicity of the samples analyzed in comparison with XAD-4. It was able though to distinguish the mutagenicity due to the contaminants in raw from the ones generated by water treatment.

A combinação do teste de Ames e métodos seletivos de extração para os principais grupos de compostos responsáveis pela atividade genotóxica em amostras ambientais tem sido muito utilizada. O objetivo foi validar o uso do Blue rayon como alternativa para extração de compostos presentes em águas brutas e tratadas. Foram realizados experimentos comparativos entre o Blue rayon e XAD-4 com amostras fortificadas e amostras reais. Dois mananciais, um contaminado com compostos policíclicos e outro não, foram estudados. As amostras foram extraídas com resina XAD4, e com Blue rayon, este último seletivo para compostos policíclicos. Os extratos foram testados com as linhagens de Salmonella typhimurium TA98 e TA100 na presença e ausência de mistura S9. O Blue rayon foi menos eficiente na detecção da mutagenicidade total das amostras quando comparado com a XAD-4. Porém foi capaz de distinguir a mutagenicidade já presente na água bruta daquela gerada durante o tratamento. / The combination of the Ames test and selective extraction methodologies has been successfully used to indicate the possible classes of organic contaminants in environmental samples. The aim of this study was to validate the use of Blue rayon as an alternative extraction method to detect compounds in raw and treated waters. Two different water bodies were evaluated and in one of the sites, raw waters were known to be contaminated with polycyclic compounds. Experiments comparing the Blue rayon technique with XAD-4 resin were done in environmental and spiked samples. The extracts were tested for mutagenicity with Salmonella typhimurium strains TA98 and TA100, with and without metabolic activation. Blue rayon was less efficient in detecting the overall mutagenicity of the samples analyzed in comparison with XAD-4. It was able though to distinguish the mutagenicity due to the contaminants in raw from the ones generated by water treatment.