Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-14T18:17:57Z No. of bitstreams: 1 Lais da Silva Pereira. Avaliação das histonas...2013.pdf: 2452594 bytes, checksum: 808d7633f6d2684df54ea8b640e282c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-14T18:17:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lais da Silva Pereira. Avaliação das histonas...2013.pdf: 2452594 bytes, checksum: 808d7633f6d2684df54ea8b640e282c0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa grave, causada por protozoários intracelulares obrigatórios do gênero Leishmania. Vários antígenos de Leishmania têm sido avaliados como candidatos vacinais, destacando-se as proteínas de histonas (HIS), antígenos altamente conservados. A exposição de HIS pela Leishmania induz uma resposta imune potente no hospedeiro vertebrado. Desse modo, neste estudo, avaliamos, em hamsters, a capacidade imunoprotetora dos antígenos de histonas contra a infecção por Leishmania infantum. Os animais foram vacinados com estratégia homóloga, utilizando-se plasmídeos de DNA que codificam para HIS (pcDNA3LiH2A-H3, pcDNA3LiH2B-H4) ou heteróloga (DNA/proteínas HIS) mais 1nM de CpG. Quinze dias após a última imunização, os animais foram desafiados pela via intradérmica com 105 Leishmania infantum metacíclicas mais 0,5 par de glândula salivar de Lutzomya longipalpis. Após a última imunização e durante a infecção, realizaram-se dosagens de citocinas por PCR em tempo real (linfonodo e baço), sorologia por ELISA (soro), carga parasitária por diluição limitante e análise histopatológica de tecidos (linfonodo, baço e fígado). Detectou-se produção de anticorpos IgG anti HIS nos grupos imunizados com a estratégia homóloga e heteróloga, quando comparados aos hamsters não imunizados. As imunizações homóloga e heteróloga diferiram na razão IFN-γ/IL-10 no linfonodo em relação ao grupo controle. Não houve diferença significativa na expressão dessas citocinas no baço após a imunização, entretanto, cinco meses após o desafio o grupo homólogo apresentou um aumento na produção de IL-10 nesse órgão. Na análise histopatológica do baço, verificou-se formação de mais folículos com centro germinativo, evidentes nos animais imunizados independentemente do grupo analisado. Observou-se, também, leucocitose intrasinusoidal e periportal no fígado, e folículos reativos no linfonodo. Nenhuma das estratégias de imunizações com antígenos de histonas acarretou em diminuição da carga parasitária no linfonodo, baço e fígado. As estratégias de imunização homóloga e heteróloga, com antígenos de histonas nucleossomais, não foram capazes de proteger contra infecção por L. infantum no modelo do hamster. / Visceral leishmaniasis is a serious infectious disease caused by obligatory intracellular protozoan of the Leishmania genus. Many antigens from Leishmania have been evaluated as vaccine candidates mainly the histones (HIS) that are highly conserved. Exposure to HIS from Leishmania elicits a strong host immune response in the vertebrate host. Threfore, in this study, we evaluated the immunoprotective ability of HIS antigens against infection by Leishmania infantum in hamsters. The animals were immunized with homologous strategy using plasmid of the DNA coding for HIS (pcDNA3LiH2A-H3, pcDNA3LiH2B-H4) or heterologous strategy using DNA and recombinant protein plus CpG. Fifteen days after last immunization, the animals were challenged by the intradermal route with 105Leishmania infantum metacyclics plus 0,5 pair of Lutzomya longipalpis salivary gland. After the last immunization and in the course of the infection, we determined cytokine production by Real time PCR (lymph node and spleen), serology by ELISA (sera), parasite burden was estimated by limiting dilution assay and histopathological analysis (lymph node, spleen and liver). Production of antibody anti HIS IgG was detected in the immunized groups treated with the homologous and heterologous strategies when compared to non-immunized hamsters. Homologous and heterologous immunizations altered the ratio of IFN-γ/IL-10 in the lymph node compared to the control group. There is not a significant difference in the expression of this cytokine in the spleen after the immunization, however, five months after the challenge the homologous group presented a higher expression of IL-10 in this organ. The histopathological analysis of the spleen showed the formation of high number of follicles with a germinative center in the immunized animals independently of the immunization employed. Intrasinusoidal and periportal leukocytosis were observed in the liver and reactive follicles in the lymph node. Both immunization strategies with histone antigen did not result in reduction of parasite burden in the lymph node, spleen and liver. Immunization with homologous and heterologous strategies using histone antigen were not able to confer protection in the hamster model against L. infantum infection.

O hamster sírio é utilizado como modelo experimental que permite explorar aspectos fisiopatológicos e avaliar a resposta terapêutica em diversas cardiopatias, algumas delas não tão bem reproduzidas em ratos. A avaliação cardiológica inclui a observação de aspectos fisiológicos e hemodinâmicos, assim como a utilização de exames complementares para análise estrutural e funcional cardíaca in vivo. Dentre esses exames destaca-se a ecocardiografia, que possibilita a avaliação da estrutura e função com elevada acurácia. Uma das formas de análise da função sistólica é por meio do cálculo da fração de ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE), que leva em consideração os volumes estimados diastólico final e sistólico final do ventrículo esquerdo. Outro importante parâmetro de análise de função sistólica é a avaliação da deformação miocárdica. Os índices de deformação miocárdica podem ser obtidos utilizando o método de rastreamento de pontos. No entanto, até o presente momento, não existem dados a respeito de valores de referência a serem utilizados para a deformação miocárdica em hamsters. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo definir a exequibilidade, os intervalos de referência e a variabilidade de parâmetros derivados da ecocardiografia convencional e da técnica de rastreamento de pontos em hamsters sírios adultos. Métodos: Foram incluídos no estudo 135 hamsters sírios fêmeas, anestesiados com ketamina/xilazina e submetidos à ecocardiografia em aparelho dedicado a pequenos animais, Vevo® 2100 utilizando transdutor linear de 30 MHz. Resultados: A exequibilidade da realização das medidas de ecocardiografia convencional foi superior a 93%. A análise da deformação endocárdica apresentou exequibilidade de 84% no eixo longo e, de 80% no eixo curto. A avaliação da deformação epicárdica nos eixos longo e curto apresentou baixa exequibilidade (42% e 62%, respectivamente). A FEVE pelo modo M, obtida no eixo longo, foi significativamente superior à obtida pelos métodos de área comprimento e de rastreamento de pontos (59,0±5,8; 53,8±4,7; 46,3±5,7; p<0,0001). Houve razoável correlação positiva da FEVE obtida pelos métodos de área comprimento e de rastreamento de pontos (r= +0,43; p<0,0001). A deformação longitudinal endocárdica global foi de -13,6(-7,5; -20,4)%, a deformação circunferencial endocárdica global foi de -20,5±3,1% e a deformação radial endocárdica global foi de +34,7±7,0%. A análise de regressão linear evidenciou influência da frequência cardíaca nos valores de deformação longitudinal e circunferencial, mas não da deformação radial (p=0,0003; p<0,0001 e p=0,83, respectivamente). Conclusões: Demonstrou-se que as medidas de ecocardiografia convencional e pelo método de rastreamento de pontos são exequíveis em hamsters. Foram definidos intervalos de referência para variáveis de ecocardiografia convencional e da deformação endocárdica global longitudinal, circunferencial e radial neste modelo experimental animal. / The Syrian hamster is an experimental model to study pathophysiology and to assess therapeutic response in several heart diseases, some of them not well reproduced in rats. The cardiologic evaluation includes observation of physiological and hemodynamic patterns, and complementary tests are used for in vivo cardiac structural and functional analysis. Among these, echocardiography allows the evaluation of structure and function with high accuracy. Analyzing systolic function can be done by calculating the left ventricular ejection fraction. Another important parameter of systolic function analysis is the assessment of the myocardial strain. Myocardial strain indices can be obtained using speckle tracking. However, there are no data regarding reference values for myocardial strain in hamsters. The present study aimed to determine feasibility, reference intervals and variability of parameters derived from conventional and speckle tracking echocardiography in adult Syrian hamsters. Methods: The study included 135 female Syrian hamsters anesthetized with ketamine/xylazine and submitted to a small animal dedicated echocardiography, Vevo® 2100 using a 30 MHz linear transducer. Results: The analysis of the endocardial strain presented a feasibility of 84% in the long axis and 80% in the short axis. The evaluation of the epicardial strain in the long and short axes presented low feasibility (42% and 62%, respectively). The M-mode left ventricular ejection fraction obtained on the long axis was significantly higher than that obtained by the area-length and Speckle tracking methods (59.0±5.8, 53.8±4.7, 46.3±5.7, p<0.0001). There was a reasonable positive correlation of left ventricular ejection fraction obtained by the area length method and the Speckle tracking method (r=+0.43; p<0.0001). The endocardial longitudinal strain was -13.6(-7.5;-20.4)%, the endocardial circumferential strain was -20.5±3.1% and the endocardial radial strain was +34,7±7.0%. Linear regression analysis showed influence of heart rate on the values of longitudinal and circumferential strain, but not on radial strain (p=0.0003, p<0.0001 and p=0.83, respectively). Conclusions: it has been shown that measurements of conventional echocardiography and speckle tracking are feasible in hamsters. Reference intervals for conventional echocardiographic variables and longitudinal, circumferential and radial global endocardial strain were obtained in this experimental animal model.

Introdução Os feijões comuns, da espécie Phaseolus vulgaris, são amplamente produzidos e consumidos no Brasil. As variedades, carioca e preto ganham destaque na região Sudeste do país. Encontra-se descrita na literatura a ação hipocolesterolemizante de algumas leguminosas, tais como, soja, tremoço e feijão caupi, que podem estar associados à redução do risco de doenças cardiovasculares. Objetivo Avaliar o potencial efeito da adição de farinhas de feijões carioca e preto (Phaseolus vulgaris) no metabolismo lipídico de hamsters alimentados com dieta contendo gordura saturada e colesterol. Métodos A produção das farinhas dos feijões envolveu as etapas de autoclavagem, congelamento, liofilização e moagem. As propriedades hipocolesterolemizantes destas farinhas foram avaliadas por meio de dois ensaios biológicos. Foram utilizados hamsters Golden Syrian, machos com 21 dias, pesando 60 ± 4g, que receberam as dietas experimentais ad libitum. No Ensaio A, os animais foram separados em 3 grupos, diferenciados pela dieta. Todas as dietas eram hipercolesterolemizantes [13.5 por cento de gordura de coco e 0.1 por cento colesterol] e tinham as mesmas quantidades de proteínas, carboidratos, fibras, vitaminas e minerais. O Grupo Controle (C) tinha como fonte protéica a caseína; no Grupo Feijão Carioca (FC) a farinha de feijão carioca representou 15 por cento do peso total da dieta e no Grupo Feijão Preto a farinha de feijão preto representou 15 por cento do peso total da dieta. No Ensaio B, os animais foram separados em três grupos novamente. Desta vez, a única diferença entre os grupos foi quanto a fonte protéica, para o grupo controle (C) somente caseína, para o grupo feijão carioca (FC), 67 por cento de feijão e 7,5 por cento de caseína e para o grupo feijão preto (FP), 62 por cento de feijão e 7,5 por cento de caseína. Nos dois ensaios, após 21 dias de experimento, foi realizada coleta de materiais biológicos (plasma, fígado e fezes). Resultados O processo de produção das farinhas de feijões cozidas liofilizadas não alterou a composição centesimal das matérias-primas. A análise de fibras alimentares revelou que não há diferenças entre os cultivares Pérola e Uirapuru. No Ensaio A, as concentrações de colesterol não HDL e HDL colesterol foram maiores nos grupos que receberam feijão de maneira significativa. Quanto aos demais parâmetros plasmáticos não foram observadas diferenças entre os grupos. No Ensaio B as concentrações plasmáticas de triglicerídeos foram maiores no grupo FP. As concentrações de HDL colesterol foram maiores nos grupos FP e FC, sendo estatisticamente significativa para o feijão carioca em relação ao grupo controle. As excreções fecais de ácidos biliares foram maiores no grupo FC e a de colesterol no grupo C. A determinação de lipídeos totais no fígado não revelou diferenças entre os grupos, dados que corroboraram com a análise do grau de esteatose nos fígados, a qual demonstrou desenvolvimento de acúmulo de lipídeos nos hepatócitos dos animais dos três grupos. O teste qui quadrado mostrou que as variáveis grau de esteatose e tipo de dieta, assim como tipo de dieta e grau de inflamação portal hepática são independentes. Já o grau de inflamação parenquimatosa hepática está associado ao tipo de dieta e o feijão carioca mostrou-se capaz de reduzir em 30 por cento o risco de desenvolver esteatoepatite severa. Conclusões Os feijões não foram capazes de proteger contra o aumento do colesterol total, triglicérides e colesterol não HDL no plasma, mas mesmo na presença de gordura saturada e colesterol na dieta, o feijão carioca foi capaz de aumentar a HDL, mostrando que o mecanismo de remoção do colesterol plasmático foi preservado. O feijão carioca mostrou-se eficaz na proteção contra a inflamação parenquimatosa hepática severa. / Carioca and black beans are the varieties of Phaseolus vulgaris most consumed on Brazil Southwest. It is well described that some legumes, as soy and cowpea beans, have hypocholesterolaemic effects. To test cholesterol-lowering properties of carioca and black beans, two biological assays were conducted. Golden Syrian hamsters, 21 days old, were housed individually under 12 h light-dark cycle and temperature-controlled environment, with free access to food and water. There was a adaptation period of 6 days, before the start of experimental period. In Assay A, the animals (n=19) were randomly assigned to three distinct groups. All groups received a hypercholesterolaemic diet (13.5 per cent coconut oil and 0.1 per cent cholesterol) and similar amounts of proteins, carbohydrates, fiber, vitamins and minerals to suit the animal requirements. Control group received casein as the only protein source; Carioca bean group received 15 per cent of carioca bean flour and casein to complement protein requirement and Black bean group received 15 per cent of black bean flour and casein to complement protein requirement. After 21 days, the experimental period was over and liver, blood and feces were collected. In Assay B, all groups also received a hypercholesterolaemic diet (13.5 per cent coconut oil and 0.1 per cent cholesterol). In this assay the only difference between groups (n=27) was protein source: casein for control group, and the others received carioca (67 per cent ) or black bean whole seed flour (62 per cent ) plus 7,5 per cent of casein. The beans flours obtained showed no differences in chemical composition. In Assay A, plasma HDL cholesterol and non-HDL cholesterol were higher in Carioca bean group and Black bean group. The other plasma parameters had no differences. In assay B, plasma triglyceride was higher in Black bean group. The HDL cholesterol was increased in both beans groups, and was significant in Carioca group. Fecal excretion of bile acids was higher in animals of Carioca bean group. Fecal excretion of cholesterol was higher in Control group. There were no differences between groups in total liver lipid concentration, data supporting the steatosis analysis in livers. The chi-square test showed that the type of experimental diet and steatosis grade were independents, also the portal hepatic inflammation was not associated with the experimental diets. The parenchymal inflammation of the liver was associated with Carioca bean group, which showed that the chance of developing severe inflammation was 30 per cent lower in carioca bean group compared with Control group. Beans had no cholesterol-lowering effect, but the HDL increases in plasma and lower inflammation in Carioca bean group deserves further investigation.

published_or_final_version / Biochemistry / Doctoral / Doctor of Philosophy

The major findings of this investigation are that polyamine biosynthetic enzymes and polyamine levels are regulated by specific cellular growth factors. A serum-free defined medium was developed for the Chinese hamster ovary cell line to examine the regulation of ornithine decarboxylase (ODCase) (EC.4.1.1.17), S-adenosylmethionine decarboxylase (SAMDCase) (EC.4.1.1.50), as well as polyamine catabolism. The activity of ODCase is dependent primarily on the presence of insulin, and appears to be modulated by transferrin and ferrous sulfate, indicating that iron transport may be important in the expression of ODCase activity. The enzyme activity can also be increased by depriving the substrate ornithine, which probably acts through a putrescine mediated event. This substrate limitation leads to an intracellular decrease in putrescine and spermidine, but not spermine. The activity of SAMDCase is not influenced by alterations in the growth factors or by ornithine deprivation. Since the spermidine levels are lower as compared to cells growing in medium with serum, it appears that SAMDCase activity is not generally regulated in a negative manner by spermidine. The polyamine interconversion enzymes, such as spermidine/spermine N¹-acetyltransferase and polyamine oxidase, appear to be regulated by growth factors other than insulin, transferrin, and ferrous sulfate. Cells maintained in defined medium are much more tightly attached to the surface of the dishes in which they are growing, which may be related to the growth factors present or a lack of cellular polyamines. Vinculin, a cell surface protein associated with focal adhesion plaques, moves away from the cell surface and into the nuclear area in defined medium cells as evidenced by fluorescent antibody staining. The major conclusions of this work are that ODCase synthesis is regulated by growth factors, that enzyme activity is also regulated post-transcriptionally by substrate and end-product, and that general polyamine metabolism is dependant on complex growth factors, other than insulin, which regulate the metabolism is dependant on complex growth factors, other than insulin, which regulate the metabolism and interconversion of polyamines.

Thèse de doctorat : Toxicologie de l'environnement : Metz : 2000. / Thèse : 2000METZ053S. Bibliogr. p. 119-123.

published_or_final_version / Anatomy / Master / Master of Philosophy

This study investigated the effects of age on behavior controlled by temporal contingincies and also describes bar press responding by an animal infrequently used in the operant laboratory: the Syrian hamster. A review of the literature revealed a paucity of research on aging and temporal control thus providing an impetus for the study. The performance of four young (12months) and four old (24+months) male Syrian hamsters on Fixed-Interval schedules o f reinforcement was analyzed according t o post-reinforcement-pause duration, response rate, running rate, and cummulative record measures. Failure of the behavior to stabilize consistently over time precluded the interpretation of age differences. The discussion presents rationales for the inconclusive results and describes the atypical behavior of the hamsters.

Thesis (Ph. D.)--University of Hong Kong, 1999. / Includes bibliographical references (leaves 160-192).

Thèse (M.Sc.) -- Université Laval, 1997. / Bibliogr.: f. 57-73. Publié aussi en version électronique.