A introdução de animais selvagens no convívio com humanos representa sério risco à saúde de ambos. O objetivo deste trabalho foi comprovar a hipótese de ser o HSV-1 o agente etiológico das lesões vesiculares e ulcerativas na pele e mucosas, associadas aos quadros neurológicos observados em sagüis no Brasil. Para tal, seis sagüis do tufo branco (Callithrix jacchus), cinco sagüis do tufo preto (C. penicillata) e um híbrido, provenientes de cativeiro com suspeita de infecção herpética foram necropsiados. Dos órgãos colhidos, realizou-se exame histopatológico e imunoistoquímico (IHQ), utilizando-se os anticorpos anti-HSV-1 e anti-HSV-2 policlonais, amplificados pelo sistema estreptavidina-biotina-peroxidase e revelados com diaminobenzidina. Realizou-se tipificação viral pela PCR em fragmentos do encéfalo de nove sagüis. Para tal, fez-se extração do DNA com o Kit Qiagen® e utilizaram-se os primers HSV-U, HSV-1L E HSV-2L, específicos para HSV-1 e HSV-2, os quais amplificam uma seqüência de 503 pb e 435 pb respectivamente. Clinicamente foram observadas convulsões, prostração, hiporexia, hipersalivação e agressividade. Na pele evidenciaram-se ulcerações, mucosa oral e língua com placas pseudomembranosas. Histologicamente, a principal lesão encontrada em todos os sagüis foi meningoencefalite necrotizante não supurativa difusa variando de leve a severa com gliose, manguitos perivasculares, vasculite necrotizante, necrose neuronal e necrose do neurópilo. Órgãos como a pele, mucosa oral, língua, fígado, baço, linfonodos, adrenais e rins também foram severamente afetados. No SNC e em alguns outros órgãos observaram-se inclusões intranucleares (Cowdry Tipo A). A IHQ revelou marcações positivas para HSV no encéfalo de todos sagüis. A mucosa oral, língua, pele, fígado, adrenais, rins, gânglios, nervos dentre outros órgãos também apresentaram marcações. A presença do HSV-1 foi confirmada pela PCR no encéfalo de 8/9 sagüis. Primatas não-humanos não são naturalmente infectados pelo HSV-1, adquirindo a doença através do contato com humanos. Sendo assim, o presente estudo comprova a existência do HSV-1 como causador de infecções fatais em sagüis no Brasil. / The introduction of wild animals in the conviviality with humans represents serious risk to the health of both. The objective of this work was to prove the hypothesis of the HSV-1 is the agent of vesicular and ulcerative lesion in the skin and mucous membranes, associated with neurological signs observed in marmosets in Brazil. Six white-tufted-ear marmosets (Callithrix jacchus), five black-tufted-ear marmosets (C. penicillata) and one hybrid were submitted to a postmortem examination. All of them were captive and their lesions were suggestive of herpetic infection. The immunohistochemistry (IHC) was performed, using streptavidin-biotin peroxidase technique with the use of polyclonal antibodies against HSV-1 and HSV-2. DNA from central nervous system (CNS) of nine marmosets was isolated by using the Qiagen Kit®. Type-specific PCR was performed using the specific primers HSV-U, HSV-1L AND HSV-2L for HSV-1 and HSV-2, which amplify a sequence of 503 pb and 435 pb respectively. Clinical finding were convulsion, weakness, hiporexia, salivation, aggressivity, skin ulcers and pseudomembranous patches in the tongue and in the oral mucosa. The histopathological examination showed in all marmosets a nonsuppurative necrotizing meningoencephalitis diffuse mild to severe with gliosis, perivascular cuffing, necrotizing vasculitis, neuronal and neuropil necrosis. The skin, oral cavity, tongue, liver, spleen, lymph nodes, adrenal glands and kidneys were also severely affected. In the CNS and in other tissues were observed intranuclear inclusion bodies (Cowdry Type A). The IHC showed a specific antigen-antibody reaction in the CNS of all marmosets. It was also found in tissues like the oral mucosa, the tongue, the skin, the liver, the adrenal glands, the kidneys, the lymph nodes and the nerves. The presence of the HSV-1 was confirmed by PCR in the CNS of 8/9 marmosets. Nonhuman Primates are not infected naturally by HSV-1, acquiring the disease through the contact with humans. The present study proves that HSV-1 causes fatal infections in marmosets in Brazil.

A introdução de animais selvagens no convívio com humanos representa sério risco à saúde de ambos. O objetivo deste trabalho foi comprovar a hipótese de ser o HSV-1 o agente etiológico das lesões vesiculares e ulcerativas na pele e mucosas, associadas aos quadros neurológicos observados em sagüis no Brasil. Para tal, seis sagüis do tufo branco (Callithrix jacchus), cinco sagüis do tufo preto (C. penicillata) e um híbrido, provenientes de cativeiro com suspeita de infecção herpética foram necropsiados. Dos órgãos colhidos, realizou-se exame histopatológico e imunoistoquímico (IHQ), utilizando-se os anticorpos anti-HSV-1 e anti-HSV-2 policlonais, amplificados pelo sistema estreptavidina-biotina-peroxidase e revelados com diaminobenzidina. Realizou-se tipificação viral pela PCR em fragmentos do encéfalo de nove sagüis. Para tal, fez-se extração do DNA com o Kit Qiagen® e utilizaram-se os primers HSV-U, HSV-1L E HSV-2L, específicos para HSV-1 e HSV-2, os quais amplificam uma seqüência de 503 pb e 435 pb respectivamente. Clinicamente foram observadas convulsões, prostração, hiporexia, hipersalivação e agressividade. Na pele evidenciaram-se ulcerações, mucosa oral e língua com placas pseudomembranosas. Histologicamente, a principal lesão encontrada em todos os sagüis foi meningoencefalite necrotizante não supurativa difusa variando de leve a severa com gliose, manguitos perivasculares, vasculite necrotizante, necrose neuronal e necrose do neurópilo. Órgãos como a pele, mucosa oral, língua, fígado, baço, linfonodos, adrenais e rins também foram severamente afetados. No SNC e em alguns outros órgãos observaram-se inclusões intranucleares (Cowdry Tipo A). A IHQ revelou marcações positivas para HSV no encéfalo de todos sagüis. A mucosa oral, língua, pele, fígado, adrenais, rins, gânglios, nervos dentre outros órgãos também apresentaram marcações. A presença do HSV-1 foi confirmada pela PCR no encéfalo de 8/9 sagüis. Primatas não-humanos não são naturalmente infectados pelo HSV-1, adquirindo a doença através do contato com humanos. Sendo assim, o presente estudo comprova a existência do HSV-1 como causador de infecções fatais em sagüis no Brasil. / The introduction of wild animals in the conviviality with humans represents serious risk to the health of both. The objective of this work was to prove the hypothesis of the HSV-1 is the agent of vesicular and ulcerative lesion in the skin and mucous membranes, associated with neurological signs observed in marmosets in Brazil. Six white-tufted-ear marmosets (Callithrix jacchus), five black-tufted-ear marmosets (C. penicillata) and one hybrid were submitted to a postmortem examination. All of them were captive and their lesions were suggestive of herpetic infection. The immunohistochemistry (IHC) was performed, using streptavidin-biotin peroxidase technique with the use of polyclonal antibodies against HSV-1 and HSV-2. DNA from central nervous system (CNS) of nine marmosets was isolated by using the Qiagen Kit®. Type-specific PCR was performed using the specific primers HSV-U, HSV-1L AND HSV-2L for HSV-1 and HSV-2, which amplify a sequence of 503 pb and 435 pb respectively. Clinical finding were convulsion, weakness, hiporexia, salivation, aggressivity, skin ulcers and pseudomembranous patches in the tongue and in the oral mucosa. The histopathological examination showed in all marmosets a nonsuppurative necrotizing meningoencephalitis diffuse mild to severe with gliosis, perivascular cuffing, necrotizing vasculitis, neuronal and neuropil necrosis. The skin, oral cavity, tongue, liver, spleen, lymph nodes, adrenal glands and kidneys were also severely affected. In the CNS and in other tissues were observed intranuclear inclusion bodies (Cowdry Type A). The IHC showed a specific antigen-antibody reaction in the CNS of all marmosets. It was also found in tissues like the oral mucosa, the tongue, the skin, the liver, the adrenal glands, the kidneys, the lymph nodes and the nerves. The presence of the HSV-1 was confirmed by PCR in the CNS of 8/9 marmosets. Nonhuman Primates are not infected naturally by HSV-1, acquiring the disease through the contact with humans. The present study proves that HSV-1 causes fatal infections in marmosets in Brazil.

Plantas da família Guttiferae apresentam diversas atividades biológicas sendo Hypericum o gênero mais importante devido às atividades antidepressiva, antibacteriana e antiviral de algumas espécies. Hypericum connatum, utilizado no sul do Brasil para o tratamento de feridas de boca, demonstrou atividade contra o lentivírus, responsável pela imunodeficiência felina. Objetivo: isolar e identificar as substâncias majoritárias de H. connatum e testar a atividade de extratos obtidos das partes aéreas e raízes e das substâncias isoladas frente a duas cepas do herpesvírus simples tipo 1 (HSV-1). Método: foram obtidos frações nhexano, diclorometano e metanol e extratos bruto, aquosos a diferentes temperaturas e hidro-etanólico das partes aéreas e raízes. As frações n-hexano e metanólica das partes aéreas foram submetidas à coluna cromatográfica para o isolamento de substâncias. Os extratos e substâncias isoladas foram testados frente ao HSV-1, cepas KOS e ATCC-VR733. Determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNT) à célula e a concentração que provoca alteração morfológica em 50% das células (CC50) pela técnica da alteração morfológica celular, utilizando-se células VERO, linhagem ATCC CCL-81. A avaliação da atividade antiviral foi realizada em placas de microtitulação e medida pela inibição do efeito citopático (ECP) provocado pelo vírus. Resultados e Conclusões: da fração n-hexano foi isolado hiperbrasilol B, da fração metanólica foram isolados amentoflavona, hiperosídeo e guaijaveriana, além de um flavonol de estrutura ainda não definida (HCN3). A fração n-hexano e o extrato bruto das raízes inibiram o ECP das cepas KOS e ATCC-VR733. Os demais extratos testados não apresentaram atividade antiviral. Dentre as substâncias analisadas, hiperbrasilol B, amentoflavona e HCN3 foram ativos frente às duas cepas. Os flavonóides hiperosídeo e guaijaverina não apresentaram atividade anti-HSV-1. / Plants from Guttiferae family present many biological activities being Hypericum the most important genus due to the antidepressive, antiinflamatory and antimicrobial activities of some species. Hypericum connatum, used in south of Brazil for the treatment of mouth wounds, demonstrated activity against the feline immunodeficiency virus. Purpose: to isolate and identify the major compounds from H. connatum and to test extracts and compounds obtained from the roots and aerial parts against two strains of the herpes simplex virus type 1. Method: nhexane, dichloromethane and methanol fractions and aqueous and hydroethanolic from the aerial parts and roots were obtained. The n-hexane and methanolic fractions from the aerial parts were submitted to column chromatography. All extracts and isolated compounds were tested against the herpes simplex virus type 1, strains KOS and ATCC-VR733. The determination of The maximum non-toxic concentrations (CMNT) and the concentration that causes morphologic alterations in 50% of the cells (CC50) was carried out by the technique of cellular morphologic alterations, using VERO cells, strain ATCC CCL-81. The assay was performed in 96-well plates and the antiviral activity was evaluated by the inibition of the measured by the viral cytopathogenic effect assay (ECP). Results and Conclusions: hyperbrasilol B was isolated from the n-hexane fraction; amentoflavone, hyperoside, guaijaverin, and a flavonol not yet identified (HCN3) were isolated from methanolic fraction. The n-hexane fraction and the crude methanolic extracts were active against both strains tested. The other extracts tested did not display antiviral activity. Among the isolated compounds, hyperbrasilol B, amentoflavone and HCN3 were active against both strains. Hyperoside and guaijaverin were not active against HSV-1.

Plantas da família Guttiferae apresentam diversas atividades biológicas sendo Hypericum o gênero mais importante devido às atividades antidepressiva, antibacteriana e antiviral de algumas espécies. Hypericum connatum, utilizado no sul do Brasil para o tratamento de feridas de boca, demonstrou atividade contra o lentivírus, responsável pela imunodeficiência felina. Objetivo: isolar e identificar as substâncias majoritárias de H. connatum e testar a atividade de extratos obtidos das partes aéreas e raízes e das substâncias isoladas frente a duas cepas do herpesvírus simples tipo 1 (HSV-1). Método: foram obtidos frações nhexano, diclorometano e metanol e extratos bruto, aquosos a diferentes temperaturas e hidro-etanólico das partes aéreas e raízes. As frações n-hexano e metanólica das partes aéreas foram submetidas à coluna cromatográfica para o isolamento de substâncias. Os extratos e substâncias isoladas foram testados frente ao HSV-1, cepas KOS e ATCC-VR733. Determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNT) à célula e a concentração que provoca alteração morfológica em 50% das células (CC50) pela técnica da alteração morfológica celular, utilizando-se células VERO, linhagem ATCC CCL-81. A avaliação da atividade antiviral foi realizada em placas de microtitulação e medida pela inibição do efeito citopático (ECP) provocado pelo vírus. Resultados e Conclusões: da fração n-hexano foi isolado hiperbrasilol B, da fração metanólica foram isolados amentoflavona, hiperosídeo e guaijaveriana, além de um flavonol de estrutura ainda não definida (HCN3). A fração n-hexano e o extrato bruto das raízes inibiram o ECP das cepas KOS e ATCC-VR733. Os demais extratos testados não apresentaram atividade antiviral. Dentre as substâncias analisadas, hiperbrasilol B, amentoflavona e HCN3 foram ativos frente às duas cepas. Os flavonóides hiperosídeo e guaijaverina não apresentaram atividade anti-HSV-1. / Plants from Guttiferae family present many biological activities being Hypericum the most important genus due to the antidepressive, antiinflamatory and antimicrobial activities of some species. Hypericum connatum, used in south of Brazil for the treatment of mouth wounds, demonstrated activity against the feline immunodeficiency virus. Purpose: to isolate and identify the major compounds from H. connatum and to test extracts and compounds obtained from the roots and aerial parts against two strains of the herpes simplex virus type 1. Method: nhexane, dichloromethane and methanol fractions and aqueous and hydroethanolic from the aerial parts and roots were obtained. The n-hexane and methanolic fractions from the aerial parts were submitted to column chromatography. All extracts and isolated compounds were tested against the herpes simplex virus type 1, strains KOS and ATCC-VR733. The determination of The maximum non-toxic concentrations (CMNT) and the concentration that causes morphologic alterations in 50% of the cells (CC50) was carried out by the technique of cellular morphologic alterations, using VERO cells, strain ATCC CCL-81. The assay was performed in 96-well plates and the antiviral activity was evaluated by the inibition of the measured by the viral cytopathogenic effect assay (ECP). Results and Conclusions: hyperbrasilol B was isolated from the n-hexane fraction; amentoflavone, hyperoside, guaijaverin, and a flavonol not yet identified (HCN3) were isolated from methanolic fraction. The n-hexane fraction and the crude methanolic extracts were active against both strains tested. The other extracts tested did not display antiviral activity. Among the isolated compounds, hyperbrasilol B, amentoflavone and HCN3 were active against both strains. Hyperoside and guaijaverin were not active against HSV-1.

Plantas da família Guttiferae apresentam diversas atividades biológicas sendo Hypericum o gênero mais importante devido às atividades antidepressiva, antibacteriana e antiviral de algumas espécies. Hypericum connatum, utilizado no sul do Brasil para o tratamento de feridas de boca, demonstrou atividade contra o lentivírus, responsável pela imunodeficiência felina. Objetivo: isolar e identificar as substâncias majoritárias de H. connatum e testar a atividade de extratos obtidos das partes aéreas e raízes e das substâncias isoladas frente a duas cepas do herpesvírus simples tipo 1 (HSV-1). Método: foram obtidos frações nhexano, diclorometano e metanol e extratos bruto, aquosos a diferentes temperaturas e hidro-etanólico das partes aéreas e raízes. As frações n-hexano e metanólica das partes aéreas foram submetidas à coluna cromatográfica para o isolamento de substâncias. Os extratos e substâncias isoladas foram testados frente ao HSV-1, cepas KOS e ATCC-VR733. Determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNT) à célula e a concentração que provoca alteração morfológica em 50% das células (CC50) pela técnica da alteração morfológica celular, utilizando-se células VERO, linhagem ATCC CCL-81. A avaliação da atividade antiviral foi realizada em placas de microtitulação e medida pela inibição do efeito citopático (ECP) provocado pelo vírus. Resultados e Conclusões: da fração n-hexano foi isolado hiperbrasilol B, da fração metanólica foram isolados amentoflavona, hiperosídeo e guaijaveriana, além de um flavonol de estrutura ainda não definida (HCN3). A fração n-hexano e o extrato bruto das raízes inibiram o ECP das cepas KOS e ATCC-VR733. Os demais extratos testados não apresentaram atividade antiviral. Dentre as substâncias analisadas, hiperbrasilol B, amentoflavona e HCN3 foram ativos frente às duas cepas. Os flavonóides hiperosídeo e guaijaverina não apresentaram atividade anti-HSV-1. / Plants from Guttiferae family present many biological activities being Hypericum the most important genus due to the antidepressive, antiinflamatory and antimicrobial activities of some species. Hypericum connatum, used in south of Brazil for the treatment of mouth wounds, demonstrated activity against the feline immunodeficiency virus. Purpose: to isolate and identify the major compounds from H. connatum and to test extracts and compounds obtained from the roots and aerial parts against two strains of the herpes simplex virus type 1. Method: nhexane, dichloromethane and methanol fractions and aqueous and hydroethanolic from the aerial parts and roots were obtained. The n-hexane and methanolic fractions from the aerial parts were submitted to column chromatography. All extracts and isolated compounds were tested against the herpes simplex virus type 1, strains KOS and ATCC-VR733. The determination of The maximum non-toxic concentrations (CMNT) and the concentration that causes morphologic alterations in 50% of the cells (CC50) was carried out by the technique of cellular morphologic alterations, using VERO cells, strain ATCC CCL-81. The assay was performed in 96-well plates and the antiviral activity was evaluated by the inibition of the measured by the viral cytopathogenic effect assay (ECP). Results and Conclusions: hyperbrasilol B was isolated from the n-hexane fraction; amentoflavone, hyperoside, guaijaverin, and a flavonol not yet identified (HCN3) were isolated from methanolic fraction. The n-hexane fraction and the crude methanolic extracts were active against both strains tested. The other extracts tested did not display antiviral activity. Among the isolated compounds, hyperbrasilol B, amentoflavone and HCN3 were active against both strains. Hyperoside and guaijaverin were not active against HSV-1.