CUNHA, Arcelina Pacheco. Caracterização e modificação química da Galactomanana de Caesalpinia Ferrea Mart Ex Tul.Var Ferrea: estudo do potencial antiviral, hipoglicemiante e cicatrizante. 2015. 88 f. Tese (Doutorado em Química)-Universidade Federal do Ceará, 2015. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2016-12-20T19:51:14Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_apcunha.pdf: 2614453 bytes, checksum: f0c152c111e433ce87017667416ab588 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-12-27T15:47:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_apcunha.pdf: 2614453 bytes, checksum: f0c152c111e433ce87017667416ab588 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-27T15:47:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_apcunha.pdf: 2614453 bytes, checksum: f0c152c111e433ce87017667416ab588 (MD5) Previous issue date: 2015 / This study aims to develop polymeric compositions that can be applied to produce antiviral, hypoglycemic and as an aid in the healing of skin lesions. Therefore, the galactomannan from Caesalpinia ferrea seeds were purified, and subsequently modified by a chemical sulfation reaction. Then, purified sulphated galactomannan (JSGp and JSGs) were characterized by the following techniques: Infrared Transform Infrared spectroscopy (FTIR); Thermal Analysis (TG and DSC); Dispersive Energy X Ray (EDX); Scanning Electron Microscopy (SEM); Surface tension; Atomic Force Microscopy (AFM); Zeta potential; Gel Permeation Chromatography (GPC) and studies in rheology, among others. The toxicity of the galactomannans was evaluated for possible pharmacological applications. The following toxicity tests have been applied: assessment of toxicity through bioassays against nauplios Artemia sp; bioassays in vivo using Swiss mice; assessment of toxicity compared to the human neutrophils, as measured by lactate dehydrogenase (LDH) activity. According to the analyzes performed in this study, the purified galactomannan presented a hypoglycemic effect and a promising adjuvant in the healing of skin lesions. The galactomannan modified by sulfating presented antiviral properties against Herpes (HSV1) and polio (PV1) viruses. / O presente trabalho teve como objetivo desenvolver composições poliméricas que possam ser aplicadas como: antiviral, hipoglicemiante e como coadjuvante na cicatrização de lesões dérmicas. Para isso foi realizado uma purificação e modificação de galactomanana de Caesalpinia ferrea Mart ex Tul.Var Ferrea para avaliar o potencial de bioatividade desse polímero purificado e modificado por sulfatação. Após o procedimento de purificação e modificação química, a galactomanana de jucá foi caracterizada por Espectroscopia na Região do Infravermelho (FTIR), Análise Térmica (TGA e DSC), Energia Dispersiva de Raio-X (EDX) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Tensão Superficial, Microscopia de Força Atômica (AFM), Potencial Zeta, Cromatografia de Permeação em Gel (GPC), estudos em reologia, avaliação da toxicidade das galactomananas (nativa, purificada e sulfatada) através dos bioensaios contra náuplios Artemia sp; bioensaios in vivo, utilizando camundongos da raça swiss e avaliação da toxicidade frente aos neutrófilos humanos, mensurada através da atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH). Pelas análises realizadas nesse trabalho, o polissacarídeo, do tipo galactomanana, purificado e modificado por sulfatação, apresentou respostas bioativas, como antiviral, contra vírus da Herpes (HSV1) e poliomielite (PV1), hipoglicemiante e promissor coadjuvante na cicatrização de lesões dérmicas.

Ocorrências comuns de infecções virais graves, aparecimento de cepas resistentes e um limitado número de quimioterápicos antivirais disponíveis mostram a necessidade da busca por novas substâncias ativas como antivirais. Muitas substâncias derivadas de plantas são candidatas ao estudo do seu potencial na terapia sistêmica e/ou profilaxia de herpes simplex virus 1 (HSV-1). Dentre as plantas com atividade antiviral, destacam-se as do gênero Baccharis. O objetivo geral do trabalho foi o estudo da composição química e avaliação da atividade antiviral das folhas de Baccharis anomala D.C. através de fracionamento bioguiado. Utilizando precipitação com etanol e fracionamento por permeação molecular foi possível separar os constituintes químicos ativos contra o vírus HSV-1 presentes no extrato aquoso de Baccharis anomala. Os testes de prospecção de constituintes químicos indicaram a presença de taninos, catequinas e saponinas no extrato aquoso da espécie. Através da análise cromatográfica foi possível detectar a presença de compostos fenólicos, utilizando-se coloração com cloreto férrico e reagente natural. Em relação à atividade antiviral, a fração ativa denominada AQ PPT FR 4-5 apresentou pronunciada atividade antiviral, inibindo a replicação viral em 100 % nas concentrações de 1,25, 0,625, 0,312 e 0,156 mg/mL, contra as cepas ATCC-VR733 e Aciclovir-resistente 29-R do HSV-1. Em relação ao mecanismo de ação, observou-se atividade virucida da fração AQ PPT FR 4-5. Estes resultados são muito importantes, pois, de acordo com a literatura, ainda não foram relatados compostos com atividade virucida úteis clinicamente para o tratamento de infecções por HSV-1. Conclui-se, portanto, que Baccharis anomala possui potente atividade antiviral contra o vírus HSV-1 e é promissora para estudos posteriores que visem ao isolamento, identificação e estudo do mecanismo de ação antiviral de compostos ativos da espécie, considerando a emergência de cepas resistentes e a necessidade de compostos com novos mecanismos de ação. / Common occurrences of severe viral infections, emergence of resistant strains and a limited number of available antiviral chemotherapeutics show the need to search for new active substances as antiviral. Many compounds derived from plants are candidates for the study of their potential in systemic therapy and/or prophylaxis of herpes simplex virus type 1 (HSV-1). Among the plants with antiviral activity, those from the genus Baccharis are remarkable. The main objective of the work was the study of the chemical composition and evaluation of the antiviral activity of extracts from Baccharis anomala D.C., using bioactivity guided fractionation. Through precipitation with ethanol and fractionation by molecular permeation it was achieved the separation of the active chemical constituents against HSV-1 virus in the aqueous extract of Baccharis anomala. Phytochemical tests indicated the presence of tannins, catechins and saponins in the aqueous extract. By thin layer chromatography it was detected the presence of phenolic compounds using ferric chloride and natural reagent. Concerning the antiviral activity, the active fraction named AQ PPT FR 4-5 showed pronounced antiviral activity, represented by 100 % inhibition of viral replication at concentrations of 1.25, 0.625, 0.312 and 0.156 mg/mL, against the strains ATCC-VR733 and Acyclovir-resistant 29-R of HSV-1 virus. Regarding the mechanism of action, virucidal activity on the fraction AQ PPT FR 4-5 was detected, which is also very important because, as far as we know, compounds with virucidal activity for clinical use in the treatment of HSV-1 infections were not reported yet. In conclusion, Baccharis anomala displayed pronounced antiviral activity against HSV-1 virus and it is promising for further studies aimed to the isolation, identification and mechanism of action of antiviral active compounds of the species, considering the emergence of resistant strains and the need for compounds with new mechanisms of action.

Ocorrências comuns de infecções virais graves, aparecimento de cepas resistentes e um limitado número de quimioterápicos antivirais disponíveis mostram a necessidade da busca por novas substâncias ativas como antivirais. Muitas substâncias derivadas de plantas são candidatas ao estudo do seu potencial na terapia sistêmica e/ou profilaxia de herpes simplex virus 1 (HSV-1). Dentre as plantas com atividade antiviral, destacam-se as do gênero Baccharis. O objetivo geral do trabalho foi o estudo da composição química e avaliação da atividade antiviral das folhas de Baccharis anomala D.C. através de fracionamento bioguiado. Utilizando precipitação com etanol e fracionamento por permeação molecular foi possível separar os constituintes químicos ativos contra o vírus HSV-1 presentes no extrato aquoso de Baccharis anomala. Os testes de prospecção de constituintes químicos indicaram a presença de taninos, catequinas e saponinas no extrato aquoso da espécie. Através da análise cromatográfica foi possível detectar a presença de compostos fenólicos, utilizando-se coloração com cloreto férrico e reagente natural. Em relação à atividade antiviral, a fração ativa denominada AQ PPT FR 4-5 apresentou pronunciada atividade antiviral, inibindo a replicação viral em 100 % nas concentrações de 1,25, 0,625, 0,312 e 0,156 mg/mL, contra as cepas ATCC-VR733 e Aciclovir-resistente 29-R do HSV-1. Em relação ao mecanismo de ação, observou-se atividade virucida da fração AQ PPT FR 4-5. Estes resultados são muito importantes, pois, de acordo com a literatura, ainda não foram relatados compostos com atividade virucida úteis clinicamente para o tratamento de infecções por HSV-1. Conclui-se, portanto, que Baccharis anomala possui potente atividade antiviral contra o vírus HSV-1 e é promissora para estudos posteriores que visem ao isolamento, identificação e estudo do mecanismo de ação antiviral de compostos ativos da espécie, considerando a emergência de cepas resistentes e a necessidade de compostos com novos mecanismos de ação. / Common occurrences of severe viral infections, emergence of resistant strains and a limited number of available antiviral chemotherapeutics show the need to search for new active substances as antiviral. Many compounds derived from plants are candidates for the study of their potential in systemic therapy and/or prophylaxis of herpes simplex virus type 1 (HSV-1). Among the plants with antiviral activity, those from the genus Baccharis are remarkable. The main objective of the work was the study of the chemical composition and evaluation of the antiviral activity of extracts from Baccharis anomala D.C., using bioactivity guided fractionation. Through precipitation with ethanol and fractionation by molecular permeation it was achieved the separation of the active chemical constituents against HSV-1 virus in the aqueous extract of Baccharis anomala. Phytochemical tests indicated the presence of tannins, catechins and saponins in the aqueous extract. By thin layer chromatography it was detected the presence of phenolic compounds using ferric chloride and natural reagent. Concerning the antiviral activity, the active fraction named AQ PPT FR 4-5 showed pronounced antiviral activity, represented by 100 % inhibition of viral replication at concentrations of 1.25, 0.625, 0.312 and 0.156 mg/mL, against the strains ATCC-VR733 and Acyclovir-resistant 29-R of HSV-1 virus. Regarding the mechanism of action, virucidal activity on the fraction AQ PPT FR 4-5 was detected, which is also very important because, as far as we know, compounds with virucidal activity for clinical use in the treatment of HSV-1 infections were not reported yet. In conclusion, Baccharis anomala displayed pronounced antiviral activity against HSV-1 virus and it is promising for further studies aimed to the isolation, identification and mechanism of action of antiviral active compounds of the species, considering the emergence of resistant strains and the need for compounds with new mechanisms of action.

Ocorrências comuns de infecções virais graves, aparecimento de cepas resistentes e um limitado número de quimioterápicos antivirais disponíveis mostram a necessidade da busca por novas substâncias ativas como antivirais. Muitas substâncias derivadas de plantas são candidatas ao estudo do seu potencial na terapia sistêmica e/ou profilaxia de herpes simplex virus 1 (HSV-1). Dentre as plantas com atividade antiviral, destacam-se as do gênero Baccharis. O objetivo geral do trabalho foi o estudo da composição química e avaliação da atividade antiviral das folhas de Baccharis anomala D.C. através de fracionamento bioguiado. Utilizando precipitação com etanol e fracionamento por permeação molecular foi possível separar os constituintes químicos ativos contra o vírus HSV-1 presentes no extrato aquoso de Baccharis anomala. Os testes de prospecção de constituintes químicos indicaram a presença de taninos, catequinas e saponinas no extrato aquoso da espécie. Através da análise cromatográfica foi possível detectar a presença de compostos fenólicos, utilizando-se coloração com cloreto férrico e reagente natural. Em relação à atividade antiviral, a fração ativa denominada AQ PPT FR 4-5 apresentou pronunciada atividade antiviral, inibindo a replicação viral em 100 % nas concentrações de 1,25, 0,625, 0,312 e 0,156 mg/mL, contra as cepas ATCC-VR733 e Aciclovir-resistente 29-R do HSV-1. Em relação ao mecanismo de ação, observou-se atividade virucida da fração AQ PPT FR 4-5. Estes resultados são muito importantes, pois, de acordo com a literatura, ainda não foram relatados compostos com atividade virucida úteis clinicamente para o tratamento de infecções por HSV-1. Conclui-se, portanto, que Baccharis anomala possui potente atividade antiviral contra o vírus HSV-1 e é promissora para estudos posteriores que visem ao isolamento, identificação e estudo do mecanismo de ação antiviral de compostos ativos da espécie, considerando a emergência de cepas resistentes e a necessidade de compostos com novos mecanismos de ação. / Common occurrences of severe viral infections, emergence of resistant strains and a limited number of available antiviral chemotherapeutics show the need to search for new active substances as antiviral. Many compounds derived from plants are candidates for the study of their potential in systemic therapy and/or prophylaxis of herpes simplex virus type 1 (HSV-1). Among the plants with antiviral activity, those from the genus Baccharis are remarkable. The main objective of the work was the study of the chemical composition and evaluation of the antiviral activity of extracts from Baccharis anomala D.C., using bioactivity guided fractionation. Through precipitation with ethanol and fractionation by molecular permeation it was achieved the separation of the active chemical constituents against HSV-1 virus in the aqueous extract of Baccharis anomala. Phytochemical tests indicated the presence of tannins, catechins and saponins in the aqueous extract. By thin layer chromatography it was detected the presence of phenolic compounds using ferric chloride and natural reagent. Concerning the antiviral activity, the active fraction named AQ PPT FR 4-5 showed pronounced antiviral activity, represented by 100 % inhibition of viral replication at concentrations of 1.25, 0.625, 0.312 and 0.156 mg/mL, against the strains ATCC-VR733 and Acyclovir-resistant 29-R of HSV-1 virus. Regarding the mechanism of action, virucidal activity on the fraction AQ PPT FR 4-5 was detected, which is also very important because, as far as we know, compounds with virucidal activity for clinical use in the treatment of HSV-1 infections were not reported yet. In conclusion, Baccharis anomala displayed pronounced antiviral activity against HSV-1 virus and it is promising for further studies aimed to the isolation, identification and mechanism of action of antiviral active compounds of the species, considering the emergence of resistant strains and the need for compounds with new mechanisms of action.

Peptídeos antimicrobianos (AMP) são importantes componentes do sistema imune de todos os organismos vivos. No plasma de Acanthoscurria rondoniae isolamos 15 AMP com similaridade com a hemocianina. As sete subunidades da hemocianina foram sequenciadas e sua estrutura tridimensional determinada. A rondonina, processada a partir de uma enzima do plasma em condições ácidas apresentou melhor atividade em pH ácido, sinergismo com gomesina, não citotóxico, não interagiu com membranas artificiais lipídicas, protegeu as células da infecção por vírus humanos de RNA e seu mecanismo de ação em leveduras está associado com material genético. Nossos resultados nos ajudam a entender porque aracnídeos sobreviveram por um longo tempo na escala evolutiva. E como as doenças infecciosas estão entre as principais causas de morte da população humana torna-se vital investir na busca de substâncias naturais ou sintéticas que exibam atividades antimicrobianas específicas e, acima de tudo, que as exerçam através de mecanismos de ação alternativos daqueles dos antibióticos disponíveis. / Antimicrobial peptides (AMP) are important components of the immune system of all living organisms. In the plasma of Acanthoscurria rondoniae we isolated 15 AMP with similarity to hemocyanin. The seven subunits hemocyanin were sequenced and determined its three-dimensional structure. The rondonin, processed from a plasma enzyme under acidic conditions showed best activity at acid pH, synergism with gomesin, non-cytotoxic, does not interacted with lipid artificial membrane, protected the cells from infection by human virus RNA and its mechanism of action in yeast is associated with genetic material. Our results help us understand why arachnids have survived for a long time on the evolutionary scale. And how infectious diseases are among the leading causes of death in human population becomes vital to invest in the search for natural or synthetic substances that exhibit specific antimicrobial activities and, above all, that engage through alternative mechanisms of action of these antibiotics available.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-05-08T14:44:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Cristina_Peter.pdf: 1012287 bytes, checksum: a6b5ae3184db955c29ee2d8a7adfa70f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-08T14:56:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Cristina_Peter.pdf: 1012287 bytes, checksum: a6b5ae3184db955c29ee2d8a7adfa70f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-08T14:56:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Cristina_Peter.pdf: 1012287 bytes, checksum: a6b5ae3184db955c29ee2d8a7adfa70f (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana (antibacteriana, antifúngica e antiviral), toxicidade celular e composição química de extratos hidroalcoólicos da própolis marrom (PM), verde (PV) e de abelhas nativas jataí (PJ). A atividade antibacteriana da própolis foi analisada pelo método de Microdiluição frente à Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli. Para a atividade antifúngica, foi utilizada metodologia semelhante, frente à Candida lipolytica, Candida parapsilosis, Sporothrix schenckii e Sporothrix brasiliensis. A atividade antiviral foi avaliada através de dois métodos distintos de tratamento das células com os extratos: antes e depois da inoculação viral, frente ao Herpes Vírus Bovino (BoHV-1) e ao Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV) e quantificado pelo teste de MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)- 2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo) e a atividade virucida, avaliada através de diferentes diluições dos vírus, temperaturas e tempos de incubações e analisadas por observação microscópica e quantificadas através da Dose Infectante (D.I.) 50%. A toxicidade foi avaliada através de diferentes concentrações e a viabilidade celular quantificada por MTT. À composição química das própolis foi determinada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Os resultados da atividade antibacteriana demonstraram que PM obteve valores menores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM), quando testados frente à S. aureus (6,7 mg/mL; 13,4 mg/mL, respectivamente), e E. coli (29,4 mg/mL; 54,3 mg/mL) quando comparados ao PV e PJ. Contudo frente Streptococcus sp., os menores valores de CIM e CBM encontrados foram da PV (p<0,01). Na atividade antifúngica as PM, PV e PJ apresentaram eficácia à Candida sp. eSporotrix sp. A PJ apresentou menor toxicidade, em sequência PV e PM. Na atividade antiviral, os extratos foram mais eficazes quando acrescentados no pré-tratamento e a PM e PV foram mais eficazes ao BoHV-1, enquanto a PJ ao BVDV. Na virucida, a PVa 37°C obteve valores diferentes e menores (log = 2,67) em relação a PM (log = 3,5) e PJ (log = 3,76). No entanto, para BVDV a PJ apresentou os melhores resultados para ambas temperaturas. Os resultados demonstram o potencial da própolis como antimicrobiano no tratamento de doenças em Medicina Veterinária e Humana. / The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity (antibacterial, antifungal and antiviral), cell toxicity and chemical composition of hydroalcoholic extracts of brown propolis (PM), green (PV) and native bees jataí (PJ). The antibacterial activity of propolis was analyzed by microdilution method against the Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli. For the antifungal activity, similar methodology was used, compared to Candida lipolytica, Candida parapsilosis, Sporothrix schenckii and Sporothrix brasiliensis. The antiviral activity was measured using two different methods of treatment of the cells with the extracts: before and after the viral inoculation against Bovine Herpes virus (bovine herpesvirus type 1) and Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) and quantitated by assaying MTT (3- (4,5 dimethylthiazol-2yl) - 2,5-diphenyl-2H-tetrazolato bromine) and virucidal activity, measured using different dilutions of virus, temperatures and incubation times and analyzed by microscopic observation and quantified by the infective dose (ID) 50%. Toxicity was evaluated using different concentrations and cell viability measured by MTT. In the chemical composition of propolis was determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) methods. The results demonstrated that the antibacterial activity had lower values PM Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) when tested against S. aureus (6.7 mg/mL; 13.4 mg/mL, respectively) and E. coli (29.4 mg/mL, 54.3 mg/mL) compared to the PV and PJ. However front Streptococcus sp., the lowest values of MIC and MBC were found of PV (p <0.01). In the antifungal activity PM, PV and PJ showed efficacy to Candida sp. and Sporotrix spp. The PJ showed lower toxicity in PV and PM sequence. In the antiviral activity, the extracts were more effective when added in the pre treatment and the PM and PV were more effective in BoHV-1, while the PJ to BVDV. In virucidal, PV obtained at 37°C and under different values (log = 2.67) compared to PM (log = 3.5) and PJ (log = 3.76). However, for BVDV PJ showed the best results for both temperatures. Results show the potential of propolis as an antimicrobial in the treatment of diseases in Veterinary Medicine and Human.

Plantas da família Guttiferae apresentam diversas atividades biológicas sendo Hypericum o gênero mais importante devido às atividades antidepressiva, antibacteriana e antiviral de algumas espécies. Hypericum connatum, utilizado no sul do Brasil para o tratamento de feridas de boca, demonstrou atividade contra o lentivírus, responsável pela imunodeficiência felina. Objetivo: isolar e identificar as substâncias majoritárias de H. connatum e testar a atividade de extratos obtidos das partes aéreas e raízes e das substâncias isoladas frente a duas cepas do herpesvírus simples tipo 1 (HSV-1). Método: foram obtidos frações nhexano, diclorometano e metanol e extratos bruto, aquosos a diferentes temperaturas e hidro-etanólico das partes aéreas e raízes. As frações n-hexano e metanólica das partes aéreas foram submetidas à coluna cromatográfica para o isolamento de substâncias. Os extratos e substâncias isoladas foram testados frente ao HSV-1, cepas KOS e ATCC-VR733. Determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNT) à célula e a concentração que provoca alteração morfológica em 50% das células (CC50) pela técnica da alteração morfológica celular, utilizando-se células VERO, linhagem ATCC CCL-81. A avaliação da atividade antiviral foi realizada em placas de microtitulação e medida pela inibição do efeito citopático (ECP) provocado pelo vírus. Resultados e Conclusões: da fração n-hexano foi isolado hiperbrasilol B, da fração metanólica foram isolados amentoflavona, hiperosídeo e guaijaveriana, além de um flavonol de estrutura ainda não definida (HCN3). A fração n-hexano e o extrato bruto das raízes inibiram o ECP das cepas KOS e ATCC-VR733. Os demais extratos testados não apresentaram atividade antiviral. Dentre as substâncias analisadas, hiperbrasilol B, amentoflavona e HCN3 foram ativos frente às duas cepas. Os flavonóides hiperosídeo e guaijaverina não apresentaram atividade anti-HSV-1. / Plants from Guttiferae family present many biological activities being Hypericum the most important genus due to the antidepressive, antiinflamatory and antimicrobial activities of some species. Hypericum connatum, used in south of Brazil for the treatment of mouth wounds, demonstrated activity against the feline immunodeficiency virus. Purpose: to isolate and identify the major compounds from H. connatum and to test extracts and compounds obtained from the roots and aerial parts against two strains of the herpes simplex virus type 1. Method: nhexane, dichloromethane and methanol fractions and aqueous and hydroethanolic from the aerial parts and roots were obtained. The n-hexane and methanolic fractions from the aerial parts were submitted to column chromatography. All extracts and isolated compounds were tested against the herpes simplex virus type 1, strains KOS and ATCC-VR733. The determination of The maximum non-toxic concentrations (CMNT) and the concentration that causes morphologic alterations in 50% of the cells (CC50) was carried out by the technique of cellular morphologic alterations, using VERO cells, strain ATCC CCL-81. The assay was performed in 96-well plates and the antiviral activity was evaluated by the inibition of the measured by the viral cytopathogenic effect assay (ECP). Results and Conclusions: hyperbrasilol B was isolated from the n-hexane fraction; amentoflavone, hyperoside, guaijaverin, and a flavonol not yet identified (HCN3) were isolated from methanolic fraction. The n-hexane fraction and the crude methanolic extracts were active against both strains tested. The other extracts tested did not display antiviral activity. Among the isolated compounds, hyperbrasilol B, amentoflavone and HCN3 were active against both strains. Hyperoside and guaijaverin were not active against HSV-1.

Plantas da família Guttiferae apresentam diversas atividades biológicas sendo Hypericum o gênero mais importante devido às atividades antidepressiva, antibacteriana e antiviral de algumas espécies. Hypericum connatum, utilizado no sul do Brasil para o tratamento de feridas de boca, demonstrou atividade contra o lentivírus, responsável pela imunodeficiência felina. Objetivo: isolar e identificar as substâncias majoritárias de H. connatum e testar a atividade de extratos obtidos das partes aéreas e raízes e das substâncias isoladas frente a duas cepas do herpesvírus simples tipo 1 (HSV-1). Método: foram obtidos frações nhexano, diclorometano e metanol e extratos bruto, aquosos a diferentes temperaturas e hidro-etanólico das partes aéreas e raízes. As frações n-hexano e metanólica das partes aéreas foram submetidas à coluna cromatográfica para o isolamento de substâncias. Os extratos e substâncias isoladas foram testados frente ao HSV-1, cepas KOS e ATCC-VR733. Determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNT) à célula e a concentração que provoca alteração morfológica em 50% das células (CC50) pela técnica da alteração morfológica celular, utilizando-se células VERO, linhagem ATCC CCL-81. A avaliação da atividade antiviral foi realizada em placas de microtitulação e medida pela inibição do efeito citopático (ECP) provocado pelo vírus. Resultados e Conclusões: da fração n-hexano foi isolado hiperbrasilol B, da fração metanólica foram isolados amentoflavona, hiperosídeo e guaijaveriana, além de um flavonol de estrutura ainda não definida (HCN3). A fração n-hexano e o extrato bruto das raízes inibiram o ECP das cepas KOS e ATCC-VR733. Os demais extratos testados não apresentaram atividade antiviral. Dentre as substâncias analisadas, hiperbrasilol B, amentoflavona e HCN3 foram ativos frente às duas cepas. Os flavonóides hiperosídeo e guaijaverina não apresentaram atividade anti-HSV-1. / Plants from Guttiferae family present many biological activities being Hypericum the most important genus due to the antidepressive, antiinflamatory and antimicrobial activities of some species. Hypericum connatum, used in south of Brazil for the treatment of mouth wounds, demonstrated activity against the feline immunodeficiency virus. Purpose: to isolate and identify the major compounds from H. connatum and to test extracts and compounds obtained from the roots and aerial parts against two strains of the herpes simplex virus type 1. Method: nhexane, dichloromethane and methanol fractions and aqueous and hydroethanolic from the aerial parts and roots were obtained. The n-hexane and methanolic fractions from the aerial parts were submitted to column chromatography. All extracts and isolated compounds were tested against the herpes simplex virus type 1, strains KOS and ATCC-VR733. The determination of The maximum non-toxic concentrations (CMNT) and the concentration that causes morphologic alterations in 50% of the cells (CC50) was carried out by the technique of cellular morphologic alterations, using VERO cells, strain ATCC CCL-81. The assay was performed in 96-well plates and the antiviral activity was evaluated by the inibition of the measured by the viral cytopathogenic effect assay (ECP). Results and Conclusions: hyperbrasilol B was isolated from the n-hexane fraction; amentoflavone, hyperoside, guaijaverin, and a flavonol not yet identified (HCN3) were isolated from methanolic fraction. The n-hexane fraction and the crude methanolic extracts were active against both strains tested. The other extracts tested did not display antiviral activity. Among the isolated compounds, hyperbrasilol B, amentoflavone and HCN3 were active against both strains. Hyperoside and guaijaverin were not active against HSV-1.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T23:51:26Z No. of bitstreams: 1 TabataLoiseCunhaLima_DISSERT.pdf: 1403767 bytes, checksum: 7424c70f286f04743b45ac7531e6829b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T20:23:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TabataLoiseCunhaLima_DISSERT.pdf: 1403767 bytes, checksum: 7424c70f286f04743b45ac7531e6829b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T20:23:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TabataLoiseCunhaLima_DISSERT.pdf: 1403767 bytes, checksum: 7424c70f286f04743b45ac7531e6829b (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / A dengue ? uma doen?a de notifica??o compuls?ria e cerca de 50 a 100 milh?es de casos s?o registrados anualmente. Possui amplo espectro cl?nico e ? transmitida ao homem atrav?s da picada dos mosquitos do g?nero Aedes, tendo como principal vetor a esp?cie Aedes aegypti. O agente etiol?gico da doen?a ? o v?rus dengue (DENV) pertencente ao g?nero Flavivirus, fam?lia Flaviviridae e s?o conhecidos quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4). Atualmente o tratamento da dengue ? apenas de suporte, feito atrav?s de intensa hidrata??o. Ainda n?o existe uma vacina comprovadamente eficaz ou tratamento espec?fico, o estudo de poss?veis antivirais que possam diminuir a viremia no paciente ? de alt?ssima relev?ncia, uma vez que a carga viral ? um dos fatores associado ao aparecimento das formas graves da doen?a (febre hemorr?gica da dengue e s?ndrome do choque da dengue). No presente estudo n?s avaliamos o potencial antiviral de extratos brutos obtidos a partir das folhas das plantas do Nordeste brasileiro Annona muricata (graviola) e Spondias mombin (caj?) contra o DENV-2 em cultura de c?lulas C6/36 e Vero. A avalia??o da a??o dos extratos brutos foi feita por meio da quantifica??o da carga viral atrav?s da PCR em Tempo Real (qRT-PCR) e pela t?cnica de contagem de unidades formadoras de placa (PFU). As concentra??es dos extratos de ambas as plantas utilizadas foram: 0,01, 0,1 e 1mg/mL. As culturas de c?lulas infectadas foram submetidas ao tratamento com os extratos durante os per?odos de 24-168h horas (7 dias). C?lulas Vero tratadas com o extrato da S. mombin n?o apresentaram redu??o na carga viral. Em contrapartida, quando estas c?lulas foram tratadas com o extrato da A. muricata, uma hora ap?s infec??o, observou-se uma redu??o significativa na carga viral nas primeiras horas (24h), quando comparadas com as c?lulas n?o tratadas utilizadas como controle positivo. Ao serem tratadas em intervalos de 24 horas apresentaram uma redu??o na carga viral nos dias subsequentes (at? o s?timo dia). N?o foi observada redu??o na carga viral em c?lulas C6/36 tratadas com ambos os extratos. De acordo com os nossos resultados, o extrato da planta A. muricata possui potencial antiviral promissor contra a infec??o pelo DENV-2 em cultura de c?lulas Vero. / Dengue is a reportable disease and about 50 to 100 million cases are reported annually. It has a wide clinical spectrum and is transmitted to humans through the bite of Aedes mosquitos, the main vector the Aedes aegypti species. The causative agent of disease is dengue virus (DENV) belonging to the genus Flavivirus, family Flaviviridae and are known four antigenically distinct serotypes (DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4). Currently the treatment of dengue is supportive, made by intense hydration. Although there is no proven effective vaccine or specific treatment, the study of potential antiviral drugs that can reduce viremia in patients is very high importance, since the viral load is one of the factors associated with the development of severe forms of the disease (hemorrhagic fever dengue and dengue shock syndrome). In the present study we evaluated the antiviral potential of crude extracts obtained from the leaves of plants in Northeastern Brazil Annona muricata (soursop) and Spondias mombin (caja) against DENV-2 in cultured C6/36 and Vero. The evaluation of the activity of the crude extracts was performed by the quantification of viral load by RT-PCR (qRT-PCR) and counting technique of plaque forming units (PFU). The concentrations of extracts of both plants used were 0.01, 0.1 and 1 mg/mL. The infected cell cultures were subjected to treatment with the extracts during periods of 24-168h hours (7 days). Vero cells treated with the S. mombin extract showed no reduction in viral load. In contrast, when these cells were treated with the extract of A. muricata, one hour after infection, significant reductions in viral load in the first hour was observed (24 h) when compared to untreated cells used as positive control. When they are treated at 24 hour intervals showed a reduction in viral load in subsequent days (until day). There was no reduction in viral load in C6/36 cells treated with both extracts. According to our results, the plant extract has antiviral A. muricata promising potential against infection by DENV-2 in Vero cell culture.

Plantas da família Guttiferae apresentam diversas atividades biológicas sendo Hypericum o gênero mais importante devido às atividades antidepressiva, antibacteriana e antiviral de algumas espécies. Hypericum connatum, utilizado no sul do Brasil para o tratamento de feridas de boca, demonstrou atividade contra o lentivírus, responsável pela imunodeficiência felina. Objetivo: isolar e identificar as substâncias majoritárias de H. connatum e testar a atividade de extratos obtidos das partes aéreas e raízes e das substâncias isoladas frente a duas cepas do herpesvírus simples tipo 1 (HSV-1). Método: foram obtidos frações nhexano, diclorometano e metanol e extratos bruto, aquosos a diferentes temperaturas e hidro-etanólico das partes aéreas e raízes. As frações n-hexano e metanólica das partes aéreas foram submetidas à coluna cromatográfica para o isolamento de substâncias. Os extratos e substâncias isoladas foram testados frente ao HSV-1, cepas KOS e ATCC-VR733. Determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNT) à célula e a concentração que provoca alteração morfológica em 50% das células (CC50) pela técnica da alteração morfológica celular, utilizando-se células VERO, linhagem ATCC CCL-81. A avaliação da atividade antiviral foi realizada em placas de microtitulação e medida pela inibição do efeito citopático (ECP) provocado pelo vírus. Resultados e Conclusões: da fração n-hexano foi isolado hiperbrasilol B, da fração metanólica foram isolados amentoflavona, hiperosídeo e guaijaveriana, além de um flavonol de estrutura ainda não definida (HCN3). A fração n-hexano e o extrato bruto das raízes inibiram o ECP das cepas KOS e ATCC-VR733. Os demais extratos testados não apresentaram atividade antiviral. Dentre as substâncias analisadas, hiperbrasilol B, amentoflavona e HCN3 foram ativos frente às duas cepas. Os flavonóides hiperosídeo e guaijaverina não apresentaram atividade anti-HSV-1. / Plants from Guttiferae family present many biological activities being Hypericum the most important genus due to the antidepressive, antiinflamatory and antimicrobial activities of some species. Hypericum connatum, used in south of Brazil for the treatment of mouth wounds, demonstrated activity against the feline immunodeficiency virus. Purpose: to isolate and identify the major compounds from H. connatum and to test extracts and compounds obtained from the roots and aerial parts against two strains of the herpes simplex virus type 1. Method: nhexane, dichloromethane and methanol fractions and aqueous and hydroethanolic from the aerial parts and roots were obtained. The n-hexane and methanolic fractions from the aerial parts were submitted to column chromatography. All extracts and isolated compounds were tested against the herpes simplex virus type 1, strains KOS and ATCC-VR733. The determination of The maximum non-toxic concentrations (CMNT) and the concentration that causes morphologic alterations in 50% of the cells (CC50) was carried out by the technique of cellular morphologic alterations, using VERO cells, strain ATCC CCL-81. The assay was performed in 96-well plates and the antiviral activity was evaluated by the inibition of the measured by the viral cytopathogenic effect assay (ECP). Results and Conclusions: hyperbrasilol B was isolated from the n-hexane fraction; amentoflavone, hyperoside, guaijaverin, and a flavonol not yet identified (HCN3) were isolated from methanolic fraction. The n-hexane fraction and the crude methanolic extracts were active against both strains tested. The other extracts tested did not display antiviral activity. Among the isolated compounds, hyperbrasilol B, amentoflavone and HCN3 were active against both strains. Hyperoside and guaijaverin were not active against HSV-1.