published_or_final_version / abstract / Zoology / Doctoral / Doctor of Philosophy

by Pong Tsang Wai Hai. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 1993. / Includes bibliographical references (leaves 98-105). / Acknowledgements --- p.i / Abstract --- p.ii / Abbreviations --- p.v / Chapter Chapter 1 --- Introduction / Chapter 1.1 --- Biological functions and structure of GH --- p.1 / Chapter 1.2 --- Application of recombinant GH --- p.2 / Chapter 1.3 --- Expression of eukaryotic gene in E.coli --- p.4 / Chapter 1.4 --- Methods for increasing expression of a cloned gene --- p.6 / Chapter 1.4.1 --- Changing the 5' end codons of the cDNA to E.coli preferred codons --- p.6 / Chapter 1.4.2 --- Optimization of distance between SD sequence and the initiation codons --- p.6 / Chapter 1.4.3 --- "Construction of a short ""dummy"" cistron at the 5' end of the cloned gene to improve attachment of ribosome" --- p.7 / Chapter 1.4.4 --- Increasing the copy number of recombinant expression plasmid --- p.8 / Chapter 1.4.5 --- Optimizing high density cell expression --- p.9 / Chapter 1.5 --- Quantitating the expression of cloned gene --- p.10 / Chapter 1.6 --- Inclusion bodies formation --- p.11 / Chapter 1.7 --- The purification of eukaryotic polypeptides synthesized as inclusion bodies --- p.12 / Chapter 1.7.1 --- Solubilization of the inclusion bodies --- p.13 / Chapter 1.7.2 --- Refolding the polypetides and disulfide bond formation --- p.13 / Chapter 1.8 --- Expression of secreted recombinant protein --- p.14 / Chapter 1.9 --- Purpose of present study --- p.15 / Chapter Chapter 2 --- Materials and Methods / Chapter 2.1 --- General techniques --- p.16 / Chapter 2.1.1 --- Chemical Synthesis of DNA linkers and primers --- p.16 / Chapter 2.1.2 --- Manipulation of DNA --- p.16 / Chapter 2.1.3 --- Electro-elution of DNA from Agarose Gel --- p.17 / Chapter 2.1.4 --- Preparation of Competent Cells and Transformation --- p.18 / Chapter 2.1.5 --- Screening of the Expressed Clones --- p.19 / Chapter 2.1.6 --- Sodium Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) --- p.21 / Chapter 2.1.7 --- Western blot analysis --- p.21 / Chapter 2.2 --- Purification procedures --- p.23 / Chapter 2.2.1 --- Growing up the cells in large scale --- p.23 / Chapter 2.2.2 --- Harvesting of cells from large scale culture --- p.23 / Chapter 2.2.3 --- Sonication of the cells --- p.24 / Chapter 2.2.4 --- Washing of the inclusion body --- p.24 / Chapter 2.2.5 --- Solubilization of the inclusion bodies --- p.25 / Chapter 2.2.6 --- Renaturation of r-gcGH --- p.26 / Chapter 2.2.6.1 --- Step down dilution mehtod --- p.26 / Chapter 2.2.6.2 --- Rapid dilution method --- p.26 / Chapter 2.2.7 --- Separation by reverse phase chromatography --- p.27 / Chapter 2.2.7.1 --- Octadodecylsilica (ODS) column separation --- p.27 / Chapter 2.2.7.2 --- Fast performance Liquid Chromatography(FPLC) --- p.28 / Chapter 2.3 --- Characterization methods --- p.29 / Chapter 2.3.1 --- Radioimmunoassay --- p.29 / Chapter 2.3.1.1 --- Iodination of r-gcGH --- p.29 / Chapter 2.3.1.2 --- Binding assay --- p.31 / Chapter 2.3.2 --- Preparation of anti-r-gcGH serum --- p.32 / Chapter 2.3.3 --- Determination of amino acid composition and N-terminal sequence of r-gcGH --- p.32 / Chapter Chapter 3 --- Results / Chapter 3.1 --- Recombinant plasmids construction --- p.34 / Chapter 3.1.1 --- Basic construction of plasmid producing gcGH in E.coli --- p.34 / Chapter 3.1.2 --- N-terminal modification of gcGH cDNA --- p.38 / Chapter 3.1.3 --- Constuction of a short 'dummy' cistron at the 5'end of gcGH cDNA --- p.40 / Chapter 3.1.4 --- Optimization of distance between ribosomal binding site and initiation codon --- p.42 / Chapter 3.1.5 --- Increasing expression level by increasing plasmid copy number --- p.44 / Chapter 3.1.6 --- Optimizing the high density expression by changing the promoter --- p.48 / Chapter 3.1.7 --- Construction of excretion plasmid for gcGH production from E. coli --- p.48 / Chapter 3.2 --- Quantitation and qualitation of the expressed protein --- p.51 / Chapter 3.3 --- Effect of IPTG on induction of r-gcGH in pp5 --- p.57 / Chapter 3.4 --- Stability of overproducing strain pp5 during continuous culture --- p.59 / Chapter 3.5 --- Stability of overproducing strain ppADH4 during continuous culture --- p.61 / Chapter 3.6 --- "Optimization of culture condition for high level expression strains,pp5 and ppADH4" --- p.64 / Chapter 3.7 --- Purification of r-gcGH --- p.67 / Chapter 3.7.1 --- Distribution of r-gcGH as Soluble and insoluble protein in E. coli --- p.67 / Chapter 3.7.2 --- Isolation and cleaning of the inclusion bodies --- p.69 / Chapter 3.7.3 --- Solubilization and renaturation of r-gcGH --- p.71 / Chapter 3.7.4 --- Purification of r-gcGH by chromatography --- p.73 / Chapter 3.8 --- Characterization of r-gcGH --- p.78 / Chapter 3.8.1 --- Amino acid composition and N-terminal sequence determination --- p.78 / Chapter 3.8.2 --- Immunological property of r-gcGH --- p.81 / Chapter 3.8.3 --- Physical Property of r-gcGH --- p.84 / Chapter 3.8.4 --- Stability of r-gcGH --- p.84 / Chapter 3.9 --- Expression and purification of r-gcGH in excretion vector ppSP14 --- p.86 / Chapter Chapter 4 --- Discussion / Chapter 4.1 --- Evaluation of expression strains --- p.88 / Chapter 4.1.1 --- Strain pKgcGH2 --- p.88 / Chapter 4.1.2 --- Strain pKgcGH2-17 --- p.88 / Chapter 4.1.3 --- Strain pSD78 --- p.89 / Chapter 4.1.4 --- "Strains pLl,pL2 and pL4" --- p.90 / Chapter 4.1.5 --- "Strains pp5,pplA,pp2I and pp4Q" --- p.90 / Chapter 4.1.6 --- Strain ppADH4 --- p.91 / Chapter 4.1.7 --- Strain ppSP14 --- p.91 / Chapter 4.2 --- Disulfide bond formation during refolding process --- p.92 / Chapter 4.2.1 --- Renaturaion in the presence of L-arginine and thiol reagent in oxidized form --- p.93 / Chapter 4.2.2 --- Renaturation in the presence of thiol reagent and 3M guanidine hydrochloride --- p.94 / Chapter 4.3 --- Stability of the r-gcGH --- p.94 / Chapter 4.4 --- Further studies --- p.96 / References --- p.98

by Lau King-Kwan. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 1997. / Includes bibliographical references (leaves 119-142). / ACKNOWLEDGMENTS --- p.I / ABSTRACT --- p.II / ABBREVIATIONS --- p.IV / TABLE OF CONTENTS --- p.V / Chapter CHAPTER 1 --- INTRODUCTION --- p.1 / Chapter CHAPTER 2 --- PURIFICATION OF ADH-I & ADH-C --- p.25 / Chapter CHAPTER 3 --- "PURIFICATION & IDENTIFICATION OF ""ADH-ACTIVATING"" PROTEASE" --- p.60 / Chapter CHAPTER 4 --- ACTIVATION OF ADH-I BY COMMERCIAL PROTEASE & BY ACETIMIDYLATION --- p.90 / Chapter CHAPTER 5 --- CONCLUSION --- p.114 / REFERENCES --- p.118

<p>I takt med ökad globalisering och den teknologiska utvecklingen blir klimatet för organisationer allt mer instabilt och föränderligt. Det är därför viktigt att kunna styra organisationen genom att fatta snabba beslut. På grund av detta krävs en ekonomistyrning som inkluderar många viktiga delar för beslutsfattarna.</p><p>Det har gjorts många studier om ekonomistyrning för vinstdrivande företag, men studier som behandlar den ideella sektorn är mer sällsynta. Därför har vi valt att studera ekonomistyrningen i en ideell organisation, Hyresgästföreningen. De slutsatser som dragits i studien kan jämföras med liknande organisationer, dock kan slutsatserna inte ses som allmängiltiga.</p><p>Syftet med studien är att öka förståelsen för ekonomistyrning i ideella organisationer genom att undersöka vilka styrmedel Hyresgästföreningen använder sig av. Vidare är syftet att identifiera hur dessa styrmedel används samt att analysera, utifrån institutionell teori och struktureringsteori, varför Hyresgästföreningen använder sina styrmedel på det sättet de gör.</p><p>För att besvara frågeställningarna har institutionell teori och struktureringsteori presenterats, vilka sedan ligger till grund för den avslutande analysen. Studien tar även upp vanliga styrmedel, så som kalkyler/budgetar, belöningssystem, balanserat styrkort och externredovisning. För att få en uppfattning om hur dessa delar används i Hyresgästföreningen har två telefonintervjuer genomförts. Den förta var med Urban Ehrenborg, som är ekonomichefen för Hyresgästföreningen, den andra med ekonomicontrollern Christian Rickardsson.</p><p>De viktigaste slutsatser vi dragit är att Hyresgästföreningen använder sig till stor del av det balanserade styrkortet och budgetar. Det balanserade styrkortet används till stor del för att mäta hur medlemmar förhåller sig till Hyresgästföreningen men även andra delar, så som allmänhetens uppfattning. Utifrån dessa mätningar sätts sedan mål upp som föreningen strävar efter att uppfylla. Anledningen till varför föreningen använder sina styrmedel på det sätt de gör har sin grund i att de ska generera medlemsnytta. Skapas inte medlemsnytta finns det ingen anledning att medlemmarna stannar i föreningen.</p>

I takt med ökad globalisering och den teknologiska utvecklingen blir klimatet för organisationer allt mer instabilt och föränderligt. Det är därför viktigt att kunna styra organisationen genom att fatta snabba beslut. På grund av detta krävs en ekonomistyrning som inkluderar många viktiga delar för beslutsfattarna. Det har gjorts många studier om ekonomistyrning för vinstdrivande företag, men studier som behandlar den ideella sektorn är mer sällsynta. Därför har vi valt att studera ekonomistyrningen i en ideell organisation, Hyresgästföreningen. De slutsatser som dragits i studien kan jämföras med liknande organisationer, dock kan slutsatserna inte ses som allmängiltiga. Syftet med studien är att öka förståelsen för ekonomistyrning i ideella organisationer genom att undersöka vilka styrmedel Hyresgästföreningen använder sig av. Vidare är syftet att identifiera hur dessa styrmedel används samt att analysera, utifrån institutionell teori och struktureringsteori, varför Hyresgästföreningen använder sina styrmedel på det sättet de gör. För att besvara frågeställningarna har institutionell teori och struktureringsteori presenterats, vilka sedan ligger till grund för den avslutande analysen. Studien tar även upp vanliga styrmedel, så som kalkyler/budgetar, belöningssystem, balanserat styrkort och externredovisning. För att få en uppfattning om hur dessa delar används i Hyresgästföreningen har två telefonintervjuer genomförts. Den förta var med Urban Ehrenborg, som är ekonomichefen för Hyresgästföreningen, den andra med ekonomicontrollern Christian Rickardsson. De viktigaste slutsatser vi dragit är att Hyresgästföreningen använder sig till stor del av det balanserade styrkortet och budgetar. Det balanserade styrkortet används till stor del för att mäta hur medlemmar förhåller sig till Hyresgästföreningen men även andra delar, så som allmänhetens uppfattning. Utifrån dessa mätningar sätts sedan mål upp som föreningen strävar efter att uppfylla. Anledningen till varför föreningen använder sina styrmedel på det sätt de gör har sin grund i att de ska generera medlemsnytta. Skapas inte medlemsnytta finns det ingen anledning att medlemmarna stannar i föreningen.

published_or_final_version / Biological Sciences / Doctoral / Doctor of Philosophy

published_or_final_version / abstract / toc / Zoology / Master / Master of Philosophy

published_or_final_version / Zoology / Master / Master of Philosophy

published_or_final_version / Zoology / Master / Master of Philosophy

Thesis (M. Phil.)--University of Hong Kong, 1999. / Includes bibliographical references (leaves 68-84).