A faringite estreptocócica desencadeada pelo Streptococcus pyogenes pode resultar em uma série de doenças humanas e complicações como a febre reumática (FR) em indivíduos predispostos não tratados. A FR é uma doença autoimune que afeta mais de 20 milhões de crianças em países em desenvolvimento. A proteína M presente na membrana do S. pyogenes representa o maior fator de virulência da bactéria, e é objetivo de estudos para o desenvolvimento de uma vacina contra essa patologia. Atualmente mais de 200 tipos de proteínas M foram descritos na literatura e a sua porção Cterminal é conservada entre os diferentes tipos. Desenvolvemos um protótipo de vacina que compreende 55 resíduos de aminoácido da porção C-terminal, denominado StreptInCor. Neste trabalho analisamos a resposta humoral e celular específica contra o peptídeo sintético StreptInCor, usando camundongos transgênicos portadores de HLA de classe II humanos DR2, DR4, DQ6 e DQ8. O protocolo de imunização consistiu em administrar 50 g do StreptInCor adsorvido em 300 g de hidróxido de alumínio nos dias 0 e 14. Os grupos controles foram injetados com salina nas mesmas condições. O soro obtido no 28º dia foi testado por ensaio imunoenzimático (ELISA) para verificarmos a presença de anticorpos contra o StreptInCor e os esplenócitos destes animais, obtidos nessa data, foram utilizados para ensaios de proliferação celular na presença do StreptInCor. Testes de segurança foram efetuados e não observamos reação cruzada contra a miosina cardíaca e após 12 meses de acompanhamento, amostras de tecidos desses animais foram submetidas à análise histológica. Em conclusão não verificamos indícios de reações autoimunes nos animais imunizados com o StreptInCor e os resultados obtidos mostram a capacidade do StreptInCor em desencadear uma resposta imune, duradoura e segura em camundongos portadores de moléculas HLA de classe II / Streptococcal pharyngitis triggered by Streptococcus pyogenes throat infection can result in rheumatic fever (RF) and rheumatic heart disease (RHD) in untreated susceptible individuals. RF is an autoimmune disease that affects more than 20 million children in developing countries. M protein is the major factor of virulence of the bacteria, and it has been studied to develop a vaccine. Currently more than 200 M protein types have been described and its Cterminal domain is conserved in many different serotypes. We developed a vaccine epitope (StreptInCor) composed by 55 amino acid residues of the Cterminal portion of the M protein. In the present work we analyze the ability of the StreptInCor of induce immune response in HLA class II transgenic mice. The transgenic mice harboring the HLA Class II DR2, DR4, DQ6 and DQ8 were immunized subcutaneously with 50 g StreptInCor adsorbed onto 300 g of aluminum hydroxide gel on days 0 and 14. Control groups were immunized with vehicle (Saline) in same conditions. The sera were obtained on day 28 and tested by ELISA to verify the presence of antibodies. The specific cellular immune response was evaluated by proliferation assay using splenocytes. No cross reaction with cardiac myosin were observed. Tissue samples from immunized mice followed by 12 months were analyzed in order to verify if StreptInCor induces some histological damage. No autoimmune or deleterious reactions were observed. In conclusion our results indicate that StreptInCor Induces a good and prolonged and safe immune response in HLA class II transgenic mice

T. gondii é um protozoário amplamente disseminado pelo mundo que pode causar doença em animais e humanos. A evolução e a gravidade da doença dependem de características genéticas do parasita e do hospedeiro. A prevalência varia geograficamente, em Erechim, RS, 88% da população é soropositiva e 18% destes apresentam toxoplasmose ocular (TO). A resposta imune humoral contra T. gondii é persistente em todas as fases da infecção. O objetivo deste retrospectivo estudo foi correlacionar a imunidade humoral e a resposta contra peptídeos cepa-específicos com a gravidade da TO em pacientes de Erechim. 327 amostras de soro foram testadas (ELISA) para a pesquisa dos isótipos específicos e contra peptídeos cepa-específicos de regiões polimórficas (GRA6 e GRA7) do parasita. Nossos resultados sugerem que IgG2 e IgG3 estão associados à infecção adquirida recente, porém não há associação entre os isótipos e a evolução clínica da TO. Entretanto, embora seis diferentes sorotipos infectem estes pacientes, a gravidade da TO está associada a um novo padrão sorotípico (Atípico D). / T. gondii is a widespread protozoan parasite that is associated with a large spectrum of diseases in both humans and animals. The progression and severity of disease is quite variable and presumably due to some combination of host and parasite genetics. Prevalence varies with geography. In Erechim, Brazil, it is 88% prevalent and is related with a high incidence (18%) of ocular toxoplasmosis (OT). Humoral immune response against the parasite is effective. The aim of this retrospective study was to correlate the humoral immunity and response against the strain-specific peptides with the severity of the TO in Erechim`s patients. 327 sera were evaluated by ELISA to isotypes, IgG avidity and serotyped using strain-specific polymorphic peptides (GRA6 and GRA7). Our results suggest that IgG2 and IgG3 were associated with recent acquired infection. However, there is no association between isotypes and clinical evolution of OT, and also 6 different serotype-strains were detected in this population, but only one of these (Atypical D) was strongly associated with severe OT.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_vanessa_galli.pdf: 1411317 bytes, checksum: f2cb4b3ef71fd9550e04ca13f65ab510 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Mycoplasma hyopneumoniae is the causative agent of Porcine Enzootic Pneumonia (PEP), one of the most common respiratory diseases in swine industry worldwide. Commercially available vaccines are inactivated whole-cell preparations (bacterin), which provide only partial protection and do not prevent microorganism colonization. In this context, it is necessary to search new alternatives prophylaxis. Potential antigens are being tested in different vaccination strategies; however none was more efficient than commercial bacterins for PEP control. This work aimed the production and evaluation of antigenicity and immunogenicity of M. hyopneumoniae antigens delivered as naked DNA and/or recombinant subunit vaccines, aiming the development of a vaccine against PEP. Recombinant subunit vaccines were obtained by the expression of eleven M. hyopneumoniae recombinant proteins in E. coli and purification by affinity chromatography, whereas the DNA vaccines were obtained by cloning four M. hyopneumoniae genes in pcDNA3 vector. Recombinant proteins antigenicity was verified against convalescent pig serum. The humoral and cellular immune response elicited by these vaccines was evaluated in mice immunized intramuscularly. All recombinant proteins evaluated were recognized by convalescent pig serum, in ELISA and/or Western blot assay, especially MHP0418, indicating that they are expressed during disease. These recombinant proteins, as well as P37, P42, P46 and P95 showed immunogenic capacity, eliciting both Th1 and Th2 immune response. The P37, P42, P46 and P95, and the DNA vaccine pcDNa3/P46 were also able to elicit INFγ expression, the cytokine associated with cellular immune response, and decrease TNFα and IL1 expression, both associated with pig lesions, during M. hyopneumoniae infeccion, suggesting their potencial as candidate vaccines. The immunization strategy using proteins combinated potencialized the immune response, and the MHP0443 and MHP0372 proteins were the main responsable for the Mix1 and Mix2 immunogenicity, respectivally. Moreover, MHP0107, MHP0418 and MHP0372 elicited antibodies that react against proteins from M. hyopneumoniae strains 7448, 4722 and J, and did not show cross reaction with M. hyohinis and M. flocculare. Thus, these proteins could be used in imunodiagnosis assay. / Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da Pneumonia Enzoótica Suína (PES), uma das doenças respiratórias de maior incidência na criação de suínos no mundo. As vacinas disponíveis comercialmente consistem de células inteiras inativadas (bacterina), as quais proporcionam apenas uma proteção parcial e não previnem a colonização pelo microrganismo. Neste contexto, faz-se necessária a busca de novas alternativas para a profilaxia da PES. Alguns antígenos vêm sendo testados em diferentes sistemas de vacinação, porém nenhum deles foi mais eficiente que as bacterinas comerciais no controle da PES. Este trabalho teve como objetivo a produção e avaliação da antigenicidade e imunogenicidade de antígenos de M. hyopneumoniae administrados como vacinas de DNA e/ou subunidade recombinante, visando o desenvolvimento de uma vacina contra a PES. As vacinas de subunidade recombinante foram obtidas através da expressão de onze proteínas recombinantes de M. hyopneumoniae em E. coli e purificação por cromatografia de afinidade, enquanto que as vacinas de DNA foram obtidas pela clonagem de quatro genes de M. hyopneumoniae no vetor pcDNA3. A antigenicidade das proteínas recombinantes foi verificada confrontando-as com soro de suínos convalescentes. A imunidade humoral e celular destas vacinas foi avaliada em camundongos imunizados intramuscularmente. Todas as proteínas recombinantes avaliadas foram reconhecidas pelo soro de animais convalescentes, em ensaios de ELISA e/ou Western blot, em especial a proteína MHP0418, indicando serem expressas durante o processo infeccioso. Estas proteínas recombinantes, bem como P37, P42, P46 e P95 apresentaram capacidade imunogênica, induzindo ambas as respostas imune Th1 e Th2. As proteínas P37, P42, P46 e P95, e a vacina de DNA pcDNa3/P46 também foram capazes de induzir a expressão de INFγ, citocina associada a resposta imune celular e reduzir a expressão de TNFα e IL1, relacionadas com as lesões em suínos, durante infecção por M. hyopneumoniae, sugerindo o potencial destas como candidatas vacinais. A estratégia de imunização utilizando proteínas combinadas potencializou a resposta imune, sendo que as proteínas MHP0443 e MHP0372 foram as principais responsáveis pela imunogenicidade induzida pelos Mix1 e Mix2, respectivamente. Além disso, MHP0107, MHP0418 e MHP0372 induziram anticorpos que reagiram especifiamente contra proteínas das cepas 7448, 4722 e J de M. hyopneumoniae, não apresentando reação cruzada com M. hyohinis e M. flocculare, podendo, portanto, serem utilizadas em ensaios de imunodiagnóstico.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kellen.pdf: 166529 bytes, checksum: 30f054a0d741dfd34cce8e65ed13dfd5 (MD5) Previous issue date: 2012-10-29 / The objective of this study was to evaluate the effect of supplementation with Matricaria chamomila CH12 through humoral immune response in vaccinated cattle with a single dose of antirabies vaccine. Twenty-eight female bovines, Pure Breed (PO), aged shape12 months old randomly divided into 2 groups (14 animals / group): control group (CG) received the mineral salt and rabies vaccine and group Testing (GT) received 4 grams of supplement with Matricaria chamomila CH12 added to mineral salt for voluntary intake. The individual titers of neutralizing antibodies were determined by the technique of neutralization based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). The average of serological titers observed for both groups at 48 and at 90 days were compared by using unpaired t-test with Welch correction, and serological titers within each group, at 48 and at 90 days post-vaccination, by paired t test. Within each group, the proportion of animals immunized against rabies were compared by chi-square MacNemar. There was no statistical difference in antibody titers between groups. It was concluded that the use of Matricaria chamomila CH12 core added to the mineral salt does not alter the humoral immune response, and that a single dose was not sufficient to maintain the antirrábicos protective antibody titers 90 days post vaccination. / O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da suplementação com Matricaria Chamomila CH12 sobre a resposta imune humoral em bovinos vacinados com uma única dose de vacina antirrábica. Vinte e oito bovinos, fêmeas, Puro de Origem (PO), com idade de 12 meses foram divididos aleatoriamente em 2 grupos (14 bovinos/grupo): o grupo controle (GC) recebeu o sal mineral sem suplemento e vacina antirrábica e o grupo Teste (GT) recebeu 4 gramas de suplemento com Matricaria Chamomila CH12 adicionado ao sal mineral e por ingestão voluntária. Os títulos individuais de anticorpos neutralizantes foram determinados por meio da técnica de soroneutralização baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). Os títulos sorológicos médios observados para os dois grupos estudados aos 48 e aos 90 dias foram comparados pelo teste t não-pareado com correção de Welch, e os títulos sorológicos dentro de cada grupo, aos 48 e 90 dias pós-vacinação, pelo teste t-pareado. Dentro de cada grupo, a proporção de animais imunizados contra raiva foram comparados pelo teste de Qui-quadrado de MacNemar. Não houve diferença estatística nos títulos de anticorpos neutralizantes entre os grupos estudados. Conclui-se que o uso da Matricaria chamomila CH12 adicionado ao sal mineral não alterou a resposta imune humoral, e que uma única dose não foi suficiente para manter os títulos de anticorpos antirrábicos protetores pós 90 dias de vacinação.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kellen.pdf: 166529 bytes, checksum: 30f054a0d741dfd34cce8e65ed13dfd5 (MD5) Previous issue date: 2012-10-29 / The objective of this study was to evaluate the effect of supplementation with Matricaria chamomila CH12 through humoral immune response in vaccinated cattle with a single dose of antirabies vaccine. Twenty-eight female bovines, Pure Breed (PO), aged shape12 months old randomly divided into 2 groups (14 animals / group): control group (CG) received the mineral salt and rabies vaccine and group Testing (GT) received 4 grams of supplement with Matricaria chamomila CH12 added to mineral salt for voluntary intake. The individual titers of neutralizing antibodies were determined by the technique of neutralization based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). The average of serological titers observed for both groups at 48 and at 90 days were compared by using unpaired t-test with Welch correction, and serological titers within each group, at 48 and at 90 days post-vaccination, by paired t test. Within each group, the proportion of animals immunized against rabies were compared by chi-square MacNemar. There was no statistical difference in antibody titers between groups. It was concluded that the use of Matricaria chamomila CH12 core added to the mineral salt does not alter the humoral immune response, and that a single dose was not sufficient to maintain the antirrábicos protective antibody titers 90 days post vaccination. / O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da suplementação com Matricaria Chamomila CH12 sobre a resposta imune humoral em bovinos vacinados com uma única dose de vacina antirrábica. Vinte e oito bovinos, fêmeas, Puro de Origem (PO), com idade de 12 meses foram divididos aleatoriamente em 2 grupos (14 bovinos/grupo): o grupo controle (GC) recebeu o sal mineral sem suplemento e vacina antirrábica e o grupo Teste (GT) recebeu 4 gramas de suplemento com Matricaria Chamomila CH12 adicionado ao sal mineral e por ingestão voluntária. Os títulos individuais de anticorpos neutralizantes foram determinados por meio da técnica de soroneutralização baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). Os títulos sorológicos médios observados para os dois grupos estudados aos 48 e aos 90 dias foram comparados pelo teste t não-pareado com correção de Welch, e os títulos sorológicos dentro de cada grupo, aos 48 e 90 dias pós-vacinação, pelo teste t-pareado. Dentro de cada grupo, a proporção de animais imunizados contra raiva foram comparados pelo teste de Qui-quadrado de MacNemar. Não houve diferença estatística nos títulos de anticorpos neutralizantes entre os grupos estudados. Conclui-se que o uso da Matricaria chamomila CH12 adicionado ao sal mineral não alterou a resposta imune humoral, e que uma única dose não foi suficiente para manter os títulos de anticorpos antirrábicos protetores pós 90 dias de vacinação.

Orientador: Mary Marcondes / Banca:Wagner Luis Ferreira / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Juliana Peloi Vides / Banca: Acácio Duarte Pacheco / Resumo: O presente estudo teve como objetivos investigar a presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e anti-saliva de Lutzomyia spp., e a presença do DNA de Leishmania spp. no sangue periférico de 284 indivíduos atendidos em um hospital público de área endêmica para leishmaniose visceral (LV). Baseando-se nos resultados de sorologia e da reação em cadeia da polimerase (PCR), 21,1% dos indivíduos foram considerados expostos. A presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e anti-saliva de Lutzomyia spp. foi observada em 20,8% e 37,7% dos indivíduos, respectivamente, observando-se uma associação significativa entre a presença dos dois anticorpos. Em 20,4% dos indivíduos verificou-se sororeatividade em ambos os testes, 17,3% apresentavam anticorpos anti-saliva de Lutzomyia spp. sem a presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e um indivíduo apresentava somente anticorpos anti-Leishmania spp. sem a presença de anticorpos anti-saliva de flebotomíneo. Em apenas um indivíduo foi possível amplificar fragmento do DNA de Leishmania spp. no sangue periférico. Concluiu-se que a infecção por Leishmania spp. pode estar sendo subdiagnosticada em áreas endêmicas para LV e, portanto, sugere-se que indivíduos atendidos em hospitais sejam melhor avaliados quanto à possibilidade de infecção e posterior desenvolvimento da doença. Ainda, a presença de anticorpos anti-saliva de flebotomíneo pode ser um possível indicador de exposição ao vetor. / Abstract: The present study aimed to investigate the presence of anti-Leishmania spp. and anti-saliva of Lutzomyia spp. antibodies, and the presence of Leishmania spp. DNA in the peripheral blood of 284 people attended at a public hospital in an endemic area for visceral leishmaniasis (VL). Based on the results of serology and PCR, 21.1% of the people were considered exposed. The presence of antibodies anti-Leishmania spp. and anti-saliva of Lutzomyia spp. was observed in 20.8% and 37.7% of the individuals, respectively, with a significant association between the presence of both antibodies. In 20.4% of the people there was serum reactivity in both tests, 17.3% had antibodies anti-saliva of Lutzomyia spp. without the presence of anti-Leishmania spp. antibodies, while one individual had only anti-Leishmania spp. antibodies without the presence of antibodies against saliva of sand flies. In only one individual it was possible to amplify the DNA fragment of Leishmania spp. in peripheral blood. It was concluded that the infection by Leishmania spp. may be underdiagnosed in endemic areas for VL and, therefore, it is suggested that people referred to hospitals should be better evaluated for the possibility of infection and subsequent development of the disease. Furthermore, the presence of antibodies anti-sandfly saliva may be an indicator of exposure to vector. / Doutor