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Qualidade do sêmen fresco, refrigerado e criopreservado em garanhões suplementados com produto comercial composto por aminoácidos, vitaminas, antioxidantes e mineraisFreitas, Mariane Leão 09 1900 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2016-01-15T12:00:48Z
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2015_MarianeLeaoFreitas_Parcial.pdf: 573874 bytes, checksum: 8267d700a11d1eeb7981a21422501583 (MD5) / Objetivou-se com esse estudo avaliar a suplementação de garanhões com um produto comercial fornecido via oral, contendo antioxidantes, ômega 3 e 6, L-carnitina, vitaminas do complexo B, entre outros, na dieta de garanhões, e a sua influência nos parâmetros do sêmen fresco, refrigerado e criopreservado dos animais. Sete garanhões, com histórico reprodutivo conhecido, foram divididos em dois grupos de forma balanceada, levando em consideração a qualidade do sêmen fresco, previamente avaliada. O grupo tratamento (n=3) recebeu 50 mL do produto comercial por 60 dias consecutivos, e o grupo controle (n=4) recebeu 50 mL de solução placebo, no mesmo período. Ao término dos 60 dias de suplementação, foram realizadas três colheitas de sêmen de cada garanhão, em dias alternados, para a avaliação do sêmen fresco, refrigerado e congelado. Avaliou-se a motilidade e a cinética espermática através das variáveis obtidas pela análise espermática computadorizada e a integridade de membrana plasmática e acrossomal através de sondas fluorescentes. Nos animais que receberam o tratamento, observou-se que o sêmen fresco apresentou um aumento (P <0.05) da motilidade total (MT; 67,14 ± 5,24 x 72,28 ± 8,13 %), da motilidade progressiva (MP; 16,67 ± 8,69 x 22,49 ± 8,81% ), da velocidade de trajeto (VAP; 50,21 ± 5,30 µm/s), da espermatozoides com membrana íntegra (MI; 72,31 ± 6,65 x 79,27 ± 5,30 %) e de espermatozoides com membrana acrossomal íntegra (ISRA; 68,67 ± 5,79 x 74,67 ± 6,88 %). No sêmen refrigerado obteve-se um aumento (P <0.05) da MT, da VAP, da MI e da ISRA em todos os momentos avaliados (24h, 36h e 48h), nos animais que receberam o produto comercial. Na avaliação do sêmen criopreservado, observou-se um aumento (P <0.05) da MT (33,02 ± 10,88 x 47, 50 ± 10,61 %), da MP (3,77 ± 2,75 x 9,77 ± 4,54 %), da VAP (39,29 ± 3,24 x 44,87 ± 1,49 µm/s) e da velocidade retilínea (VSL; 31,94 ± 2,02 x 35,74 ± 1,46 µm/s), nos animais que receberam o tratamento. Dessa forma, os elementos presentes no produto comercial fornecido para os animais do grupo tratamento, podem ter atuado incrementando a qualidade do sêmen fresco, refrigerado e criopreservado dos garanhões. / The objective of this study was to evaluate the addition of a nutraceutical containing antioxidants, omega 3 and 6, L-carnitine, B-complex vitamins, among others, in the diet of stallions, and their influence on parameters of fresh, cooled and cryopreserved semen. Seven stallions with proven fertility were divided into two groups in a balanced way, taking into account the quality of fresh semen, previously evaluated. The treatment group (n = 3) received 50 mL of the nutraceutical for 60 consecutive days and the control group (n = 4) received 50 ml of placebo solution for the same period. By the end of the 60 days of supplementation, were realized three collections of semen of each stallion, on alternate days, for the assessment of fresh, cooled and cryopreserved semen. Motility and sperm motion kinetics using computerized assisted semen analysis and integrity of acrosome and plasmatic membrane using fluorescent dyes were evaluated. In animals that received treatment, it was observed that the fresh semen showed an improvement (P <0.05) in total motility (MT; 67.14 ± 5.24 x 72.28 ± 8.13 %), of the progressive motility (MP; 16.67 ± 8.69 x 22.49 ± 8.81% ), the average path velocity (VAP; 50.21 ± 5.30 µm/s), and the integrity of the plasmatic (MI; 72.31 ± 6.65 x 79.27 ± 5.30 %) and acrosome membranes (ISRA; 68.67 ± 5.79 x 74.67 ± 6.88 %).In cooled semen was obtained an increase (P <0.05) of the MT, the VAP, MI and ISRA in all moments of the evaluation (24h, 36h and 48h), in animals that received the commercial product. After the evaluation of cryopreserved semen, there was an increase (P <0.05) of MT (33.02 ± 10.88 x 47, 50 ± 10.61%), MP (3.77 ± 2.75 x 9, 77 ± 4.54%), VAP (39.29 ± 3.24 x 44.87 ± 1.49 µm/s), and straight line velocity (VSL; 31.94 ± 2.02 x 35.74 ± 1.46 µm/s), in animals receiving treatment. Thus, the elements present in the commercial product supplied for the animals on the treatment group, may have acted improving the quality of fresh semen, cooled and cryopreserved of the stallions.
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Inseminação artificial intracornual com protocolos de IATF em fêmeas da raça nelore / Intracornual insemination using timed fixed artificial insemination protocols with nelore breed cowsAssis Júnior, Vilton Francisco de 30 January 2018 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-27T18:11:40Z
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Previous issue date: 2018-08-27 / A pecuária de corte moderna dispõe de diversas ferramentas a serem utilizadas na busca de maior eficiência econômica. Tal eficiência pressupõe uma maior produtividade de bezerros desmamados por hectare, além, da busca incessante de agregar um maior número de arrobas produzidas por hectare, para que a pecuária se torne tão competitiva quanto a agricultura. A fim de buscar um incremento nos índices de prenhez dentre as fêmeas bovinas trabalhadas com protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), o uso da Inseminação Artificial Intracornual pode ser utilizada como uma ferramenta para este fim. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência do uso desta técnica em vacas Nelore pluríparas não lactantes e suas correlações com as respectivas taxas de prenhez. Foram sincronizadas 400 fêmeas para o trabalho, sendo divididas em 2 grupos com 200 animais cada (grupo 1 e grupo 2). O grupo 1 foi trabalhado em um dia e o grupo 2 no dia seguinte, seguindo esta ordem em todos os manejos do protocolo hormonal. Todos os animais do experimento receberam o mesmo protocolo; no dia 0 foi inserido um dispositivo intravaginal novo com 1 g de progesterona (Sincrogest®, Ouro Fino, Brasil) e aplicação por via intramuscular de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Sincrodiol®, Ouro Fino, Brasil). No dia 8 os dispositivos foram retirados e aplicado simultaneamente 1 mg de cipionato de estradiol (SincroCP®, Ourofino, Brasil); 0,526 mg de Cloprostenol Sódico (Sincrocio®, Ouro Fino, Brasil), 300 UI de eCG (SincroECG®, Ourofino, Brasil). A inseminação foi realizada a partir de 48 horas após a retirada do dispositivo intravaginal. Antes da realização da inseminação, os ovários das vacas foram avaliados por meio de ultrassom (Sonoscape A5VET, transdutor linear 7MHz, China); fêmeas com folículo pré-ovulatório menor que 11,0 mm ou sem folículo dominante foram descartadas do trabalho. Fêmeas com folículos maiores ou iguais a 11,0 mm eram inseminadas alternadamente, no corpo ou corno uterino, de modo que cada lote ficou composto por 50 fêmeas inseminadas no corpo e 50 no corno uterino, perfazendo um total de 100 animais para o grupo 1 e 100 animais para o grupo 2. O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a inseminação artificial. Utilizou-se a estatística descritiva seguida pelo teste de normalidade D' Agostino-Pearson omnibus, seguido do teste Chi-quadrado para comparação entre dois grupos no programa GraphPad Prism ® 6. Os dados estão expressos em média ± desvio padrão da média, e P ≤ 0.05 considerado significativo. Entre as fêmeas que foram inseminadas no método convencional (inseminação no corpo do útero logo após a passagem da cérvix), a taxa média de gestação foi de 59,0% e no método experimental (deposição do sêmen dentro do corno uterino), a taxa média de gestação foi de 54,0%, não havendo diferença estatística entre os grupos (P>0,05). / The modern herd livestock has several tools to be used in the search for greater economic efficiency. Such efficiency presupposes a higher productivity of weaned calves per hectare, in addition to the incessant search to aggregate a larger number of kilograms per hectare, so that livestock farming becomes as competitive as agriculture. In order to increase the pregnancy rates among bovine females treated with IATF protocols, the use of Intracornual Artificial Insemination can be used as a tool for this purpose. The objective of the present study was to evaluate the efficiency of the use of this technique in non-lactating pluriparous Nelore cows and their correlations with the respective pregnancy rates. 400 females were synchronized for the work; divided into 2 groups with 200 animals each (group 1 and lot 2). Group 1 was worked on one day and group 2 the next day, following this order in all managements of the hormonal protocol. All animals in the experiment received the same protocol; on day 0 a new intravaginal device with 1 g of progesterone was inserted (Sincrogest®, Ouro Fino, Brazil) and intramuscular application of 2 mg of Estradiol Benzoate (Sincrodiol®, Ouro Fino, Brazil). On day 8 the devices were removed and simultaneously applied 1 mg of estradiol cypionate (SincroCP®, Ourofino, Brazil); 0.526 mg Cloprostenol Sodium (Sincrocio®, Ouro Fino, Brazil), 300 IU of eCG (SincroECG®, Ourofino, Brazil). Insemination was performed 48 hours after the remotion of the intravaginal device. Prior to insemination, cow ovaries were evaluated by ultrasound (Sonoscape A5VET, 7MHz linear transducer, China); females with preovulatory follicles smaller than 11.0 mm or without dominant follicle were discarded from work. Females with a follicle greater than or equal to 11.0 mm were inseminated alternately in the uterine body or horn, so that each group was composed of 50 cows inseminated in the body and 50 in the uterine horn, making a total of 100 cows for group 1 and 100 cows for group 2. The diagnosis of gestation was performed 30 days after artificial insemination. Descriptive statistics were used followed by the D 'Agostino-Pearson omnibus normality test, followed by the Chi-square test for comparison between two groups in the GraphPad Prism ® program. Data are expressed as mean ± standard deviation of the mean, and P ≤ 0.05 considered significant. Among the females that were inseminated in the conventional method (insemination in the body of the uterus shortly after the passage of the cervix), the mean pregnancy rate was 59.0% and in the experimental method (deposition of semen within the uterine horn), the rate mean of gestation was 54.0%, there being no statistical difference between the groups.
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Avaliação de protocolos de inseminação artificial em tempo fixo para bovinos Curraleiro Pé-Duro / Insemination protocols of artificial evaluation in fixed time for cattle Curraleiro Pé-DuroSantos, Renato dos 02 February 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2016. / O estudo teve como objetivo verificar a resposta fisiológica de fêmeas da raça Curraleiro Pé- Duro submetidas a diferentes protocolos de sincronização e indução da ovulação, buscando-se o aumento da eficiência reprodutiva. Três experimentos foram realizados para avaliar o melhor momento de indução da ovulação e o tempo de exposição à progesterona. No Experimento 1, 12 vacas receberam um dispositivo intravaginal de progesterona (P4) e 2 mg de benzoato de estradiol (BE) intramuscular (IM) no dia zero (D0). Após oito dias (D8) os animais tiveram o implante de P4 removido e receberam 150 μg de D-cloprostenol Sódico (PGF2α) e 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) via IM, sendo então separadas em dois grupos. Grupo 8D (n=6), as vacas receberam 1mg de BE IM no D8, e no grupo 9D (n=6), receberam BE no D9. No Experimento 2, cinco vacas foram submetidas ao mesmo protocolo usado no Grupo 9D do Experimento um, e seis vacas no D8 receberam 150 μg de PGF2α e 300 UI de eCG e no D9 receberam 1 mg de BE e tiveram o dispositivo de P4 retirado (Grupo P4D9). Em ambos os experimento, após a retirada do implante de P4 foram realizadas avaliações ovarianas ultrassonográficas. No Experimento 3, 88 matrizes foram submetidas aos protocolos utilizados nos grupos 8D (n=43) e P4D9 (n=45) e inseminadas em tempo fixo. No Experimento 1, os grupos 8D e 9D levaram a uma taxa de sincronização do folículo dominante de 92% (11/12) e 83% (10/12) e uma taxa de ovulação de 73% (8/11) e 100% (10/10), respectivamente. O tempo para ovulação após a retirada da P4 foi menor nas fêmeas do 8D. No Experimento 2, os grupos 9D e P4D9, levaram a uma taxa de sincronização do folículo dominante de 72% (8/11) e 100% (11/11), respectivamente e a uma taxa de ovulação de 87,5% (7/8) e 91% (10/11), não havendo diferença nos demais parâmetros foliculares estudados. No experimento 3, a taxa de gestação nos grupos 8D e P4D9 foram de 23% (10/43) e 20% (9/45; P>0,05) respectivamente. Conclui-se que, os protocolos utilizados neste trabalho tiveram resultados de desenvolvimento folicular satisfatórios, mas não refletiram em uma boa taxa de prenhes após inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Nesse contexto, há necessidade de mais estudos em relação à fisiologia reprodutiva das fêmeas Curraleiro Pé- Duro e quanto à aplicação de protocolos de IATF para animais desta raça. / This study aimed to determine the physiological response of locally adapted females Curraleiro Pé-Duro race under different synchronization protocols and ovulation induction, evaluating the efficiency of these, as well as the determination of ovulation time, ovulatory follicle size, emergency wave and finally the pregnancy rate of females submitted to TAI programs. In one experiment, all females (n=12) on day zero (D0) received an intravaginal device containing 1g of progesterone (P4) which remained for eight days and 2 mg of estradiol benzoate (EB) intramuscular (IM). After that the animals were randomly divided into two groups; 8D treatment (n=6) and 9D treatment (n=6). On removal day of the implant P4 (D8) cows in the 8D group received IM 150 μg of Sodium D-cloprostenol, 300 IU eCG and 1 mg of EB. In 9D treatment group the cows had the implant removed in D8 and received IM 150 μg of D-cloprostenol Sodic and 300 IU eCG, and in contrast to the control group, the animals received IM in D9 1mg EB. The treatments differed among themselves as to the BE application day. For the second experiment, all animals (n=11) in D0 received the same pharmacological treatment of the previous experiment and were randomly divided into two groups; 9D treatment (n=5) and P4D9 treatment (n=6). The animals 9D treatment group had P4 implant removed in D8 and received IM 150 μg of D-cloprostenol Sodic and 300 IU eCG, and D9 received IM, 1mg EB. In contrast the P4D9 treatment group the females received D8 IM 150 μg of D-cloprostenol Sodium and 300 IU eCG and D9 were removed P4 implant followed by IM administration of 1mg of EB. The treatments differed on the withdrawal time of P4 implants. In both experiments, on the P4 implant removal day was also initiated ovarian ultrasound assessment every 24h up to 24h after removal of the P4 implant. After this period, the evaluations were performed every 8 hours for up to 96 hours in the attempt to monitor from the FD to the ovulation. Experiments one and two occurred in crossover format. For the third experiment we used the protocols for the treatment 8D and P4D9 to TAI. Where, for the 8D treatment group (n=43) insemination occurred in the period of 40/42 hours and P4D9 for the treatment group (n=45) 24/26 hours after removing the P4 implant. For the experiment one, the 8D and 9D treatments led to a sync rate of the dominant follicle 92% (11/12) and 83% (10/12) and ovulation rate of 73% (8/11) and 100% (10/10), respectively. There was no effect of treatments on group and interaction day VS group (P> 0.05) in follicular development, only daily growth (P<0.05). The time of ovulation was early in the 8D treatment and variation of ovulation tended to differ (P=0,06). In the second experiment, the treatments 9D and P4D9 led to a sync rate of the dominant follicle 72% (8/11) and 100% (11/11) and ovulation rate of 87,5% (7/8) and 91% (10/11), respectively. For both experiment there was no difference in the luteal volume (P>0,05). As for the three experiments where animals were submitted to TAI, it is found to 8D treatment group and P4D9 treatment group pregnancy rates of 23% (10/43) and 20% (9/45) respectively (P>0,05), concluding that there is still need for more studies on the reproductive physiology of females Curraleiro Pé-Duro, is the hormonal and ultrasonographic control of follicular development, or the development of new methodologies in TAI specific protocols for animals of this breed.
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Avaliação de diferentes alternativas para aumentar a eficiência da sincronia do estro e ovulação em ovelhas deslanadas / Different alternatives assessment to improve efficiency estrus and ovulation synchrony in hair sheepMoreira, Nathalia Hack 08 December 2016 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Ciências Animais, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-23T14:52:03Z
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2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / A inseminação artificial é uma poderosa ferramenta para os programas de melhoramento
genético e conservação de raças, porém, é menos difundida em ovinos. Isso ocorre devido aos
resultados irregulares e baixos de fertilidade após a sincronização do estro e inseminação
artificial em tempo fixo (IATF). Um dos fatores que pode contribuir para a piora nesse resultado
é a assincronia do estro e da ovulação após o tratamento hormonal. Neste estudo objetivou-se
avaliar diferentes alternativas para aumentar a eficiência dos protocolos de sincronização do
estro utilizados em programas de IATF em ovinos. Entre as abordagens utilizadas estão (1) o
uso de diferentes promotores do desenvolvimento folicular (eCG e FSH:LH) em diferentes
épocas do ano (períodos chuvoso e seco); (2) o uso do protocolo longo com MAP em diferentes
épocas do ano (períodos chuvoso, seco e transições); (3) o uso do estradiol associado a
progesterona (4) o uso de diferentes doses de eCG e momentos de aplicação; e (5) o uso de
dois protocolos curtos com diferentes fontes de progesterona (MAP e P4). Em todos os
experimentos, diferentes avaliações quanto a manifestação estral, condição folicular, lutea e
hormonal foram realizadas para determinar a eficiência das alternativas propostas. Apesar do
protocolo longo com MAP apresentar um melhor desempenho na sincronia do estro e/ou
ovulação na época seca do que na época chuvosa, os resultados mostraram que esse protocolo
não sincroniza eficientemente a ovulação, o que poderia afetar negativamente as taxas de
fertilidade após IATF. A sincronia do estro e ovulação também é prejudicada quando se utiliza
400 UI de eCG, 24 horas antes da remoção do pessário de progesterona. O uso de diferentes
fontes de estradiol, em conjunto com a progesterona, auxilia no recrutamento de uma nova onda
e padroniza a condição folicular ovariana, portanto essa abordagem pode ser usada em estudos
futuros, para atingir essa finalidade. A utilização da progesterona tanto em um protocolo longo,
quanto no curto, resulta em uma boa sincronia da ovulação, contudo, o protocolo curto parece
apresentar uma maior eficiência em sincronizar o tempo das ovulações. Essa abordagem em um
programa de IATF com a utilização de sêmen congelado, não melhora as taxas de fertilidade
utilizando a inseminação artificial por via cervical superficial, contudo, quando a inseminação é
realizada por via laparoscópica resulta em valores próximos a 70% de taxa de fertilidade. / Artificial insemination is a powerful tool for breeding programs and conservation of breeds,
however, it is less widespread in sheep. This is due to irregular and low fertility results after estrus
synchronization and fixed-time artificial insemination (FTAI). One of the factors that may
contribute to the decline of this result is the is the asynchrony of estrus and ovulation after
hormonal treatment. This study aimed to evaluate different alternatives to increase the efficiency
of estrus synchronization protocols used in FTAI programs in sheep. Among the approaches used
are (1) the use of different promoters of follicular development (eCG and FSH:LH) in different
seasons (rainy and dry); (2) using the long-term protocol with MAP in different seasons (rainy, dry
and transitions); (3) the use of estradiol associated with progesterone (4) the use of different
doses of eCG and application times; and (5) the use of two short-term protocols with different
sources of progesterone (MAP and P4). In all experiment, different assessments of the estrous
manifestation, follicular, luteal and hormonal condition were performed to determine the
effectiveness of the proposed alternatives. Despite long-term protocol with MAP perform better in
synchrony of estrus and/or ovulation in the dry season than in the rainy season, the results
showed that this protocol does not effectively synchronize ovulation, which could negatively affect
fertility rates after TAI. Synchrony of estrus and ovulation is also impaired when using 400 UI of
eCG 24 hours before removal of progesterone pessaries. The use of different sources of estradiol
in combination with progesterone, helps to recruit a new wave and standardizes the ovarian
follicular condition, so this approach can be used in future studies to achieve this purpose. The
use of progesterone in both a long protocol as in short, results in a good synchronization of
ovulation, however, the short protocol seems to have a higher efficiency in synchronizing the time
of ovulation. This approach in a FTAI program with frozen semen does not improve fertility rates
using superficial cervical artificial insemination, however, when insemination is performed
laparoscopically it results in values close to 70% fertility rate.
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Avaliação do citoesqueleto, padrão de atividade mitocondrial e ultraestrutura de embriões ovinos produzidos in vivo congelados ou vitrificados em etilenoglicol / Evaluation of the cytoskeleton, pattern of mitochondrial activity and ultrastructure of sheep embryos frozen or vitrified in ethylene glycolDalcin, Luciana 24 February 2010 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:00:32Z
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2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / A criopreservação de embriões ovinos tem sido amplamente difundida, porém seus índices de sobrevivência e prenhez têm mostrado grande variação. Neste estudo, embriões produzidos in vivo foram congelados ou vitrificados e reaquecidos para avaliação ultraestrutural e determinação do padrão de atividade mitocondrial e integridade do citoesqueleto. Os embriões foram colhidos de ovelhas superovuladas, classificados e selecionados para criopreservação. Embriões submetidos à congelação lenta (n=22) foram exposto à solução de 0,75M de etilenoglicol (EG) por 10 minutos, 1,5M de EG por 10 minutos, acondicionados em palhetas de 0,25mL e submetidos a curva de congelação programável (-1°C/min, seeding a -7°C, 0,3°C/min até -35°C) com posterior imersão em nitrogênio líquido. Embriões vitrificados (n=24) foram submetidos à solução de 10% de EG+10% de DMSO por 1 minuto e 30 segundos, passando para a solução de 20% de EG+20% de DMSO com 0,5M de sacarose por 30 segundos acondicionados em OPS e mergulhados em nitrogênio líquido. Os embriões descongelados/reaquecidos foram cultivados por 1 hora, reclassificados em estereomicroscópio e subdivididos para avaliação. Os embriões criopreservados mostraram variável grau de desorganização de citoesqueleto e ausência de marcação para atividade mitocondrial. Foi possível correlacionar os achados anteriores com a ultraestrutura e distribuição das organelas pelo citoplasma. Embriões congelados mostraram características ultraestruturais semelhantes a embriões frescos de mesma qualidade. Embriões vitrificados apresentaram maior frequência de grandes vesículas de digestão. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryopreservation of sheep embryos has been widespread, but their survival rate and pregnancy have shown great variation. After in vivo production sheep embryos were frozen or vitrified and processed for ultrastructural evaluation and determining the pattern of mitochondrial activity and integrity of the cytoskeleton. Embryos were collected from superovulated ewes, classified and selected for cryopreservation. Embryos subjected to slow freezing (n = 22) were exposed to 0.75 M ethylene glycol (EG) for 10 minutes, 1.5M EG for 10 minutes, packed in 0.25mL straws and subjected to programmable freezing (-1 ° C / min, seeding at -7 ° C, 0.3 ° C / min to -35 ° C) followed by immersion in liquid nitrogen. Vitrified embryos (n = 24) were placed in 10% EG +10% DMSO solution for 1 minute and 30 seconds, then in 20% EG +20% DMSO solution with 0,5M sucrose for 30 seconds packed in OPS and dipped in liquid nitrogen. The cryopreserved embryos were warmed, cultured for 1 hour, reclassified and subdivided for evaluation. Cryopreserved embryos showed variable degree of cytoskeleton disorganization and no marker for mitochondrial activity. It was possible to correlate these findings with the ultrastructure and distribution of the organelles. Frozen embryos showed ultrastructural features similar to fresh embryos of the same quality. Vitrified embryos showed a higher frequency of large digestion vesicles.
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