Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-06-15T14:23:55Z No. of bitstreams: 1 2015_AndrielleThainarMendesCunha.pdf: 1263718 bytes, checksum: d3e361eee393e655519a6623e0bb6ce0 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-06-15T14:24:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AndrielleThainarMendesCunha.pdf: 1263718 bytes, checksum: d3e361eee393e655519a6623e0bb6ce0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-15T14:24:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AndrielleThainarMendesCunha.pdf: 1263718 bytes, checksum: d3e361eee393e655519a6623e0bb6ce0 (MD5) / A utilização de espermatozoides do epidídimo (EP) em técnicas de reprodução assistida tem um papel importante na multiplicação e armazenamento de material genético. Entretanto, melhor conhecimento sobre o comportamento fisiológico destes espermatozoides é necessário para otimizar a sua utilização. Objetivou-se avaliar a viabilidade, resistência e longevidade de EP de sete touros da raça Gir, durante e após a criopreservação, usando os espermatozoides do ejaculado (EJ) como controle. O ejaculado foi coletado através de eletroestimulação, posteriormente os animais foram castrados e os espermatozoides da cauda do epidídimo foram coletados pelo método de extravasamento. Primeiramente, verificou-se a resistência dos EJ e EP diante à criopreservação, as células foram avaliadas logo após a recuperação, após quatro horas de refrigeração e após o descongelamento. Em uma segundo etapa, foi avaliada a longevidade após a criopreservação. Foram utilizados três grupos de espermatozoides do EJ, do EP e um grupo em que EP foram incubados com plasma seminal (EPP). Após o descongelamento amostras dos três grupos foram incubadas por zero, três, seis e 24 horas. Em cada momento foi avaliada a motilidade total e progressiva, integridade de membrana plasmática, integridade acrossomal, morfologia espermática capacitação. Finalmente foi avaliada a capacidade dos espermatozoides do epidídimo de se ligarem às células da tuba uterina (CTU). Para isso foram utilizados os grupos EJ, EP e EPP, foram co-incubados, com CTU por zero, três, seis e 24 horas. Devido ao resultado obtido, um segundo teste foi realizado utilizando testículos de quatro touros, coletados em abatedouro. Um testículo de cada animal foi utilizado para o grupo de EP criopreservado (EP-C) e o outro para o grupo de EP fresco (EP-F). Os dados foram analisados usando procedimento GLIMMIX do programa SAS (P≤0,05). Os EP apresentaram características de qualidade semelhantes aos do EJ frescos e após a criopreservação (P>0,05). Entretanto, foram mais resistentes à refrigeração do que os do EJ, apresentado maior MT (79,8±4,5 e 56,8±5,6), maior MP (46,1±3,5 e 29,2±3,2) e maior porcentagem de acrossoma íntegro (68,7±5,8 e 48,5±6,1). Após o descongelamento, e 6h de incubação os grupos EP e EPP comparados com o EJ apresentaram maior porcentagem de membrana plasmática íntegra (29±4,3, 28,2±4,2 e 16,4±3,4), maior porcentagem de espermatozoides com acrossoma intacto (31,6±3,8, 31,6±3,8 e 19,9±3,2) e maior porcentagem de espermatozoides não capacitados (81±3,5, 80,9±3,5 e 70,3±3,7). O número de espermatozoides ligados após a co-incubação das CTU com EJ, EP ou EPP não diferiu (P>0,05) em nenhum grupo, a análise dentro de cada grupo mostrou que ambos apresentaram queda gradativa no número de espermatozoides ligados às CTU, sendo que o menor número foi observado às 24 h para todos os grupos. No segundo teste de ligação, o grupo EP-F apresentou maior numero de células ligadas aos 30 min (130,9±21,2) e às 24 horas (131,7±21,2) de incubação do que o grupo EP-C aos 30 min (88±21,2) e 24 h (20,4±21,2). Pode-se concluir que EP são mais resistentes à refrigeração dos que os do EJ, apresentam maior longevidade e características de capacitação tardia, quando comparados ao EJ. Além disso, os EP se ligam às CTU da mesma forma que os EJ, no entanto a criopreservação pode afetar esta ligação. / The use of epididymal sperm (ES) in assisted reproductive technologies is an important tool form multiplication and conservation of genetic material. However, a better understanding of several aspects of those sperm physiology is needed to optimize its use. The aim of this study was to evaluate the strength, the post thawed viability, longevity and sperm characteristics behavior of ES from 7 Gir bulls, during and after cryopreservation, using ejaculated sperm (EJ) as a control. After ejaculated sperm was collected the testis were removed and sperm from the cauda epididymis were recovered First we evaluate the resistance of ES and EJ to cryopreservation, sperm were evaluated just after recovering, after 4 h of cooling and after freezing. Then, we evaluate the post thawing longevity by examining the sperm after different periods of incubation. Three groups were used ES, EJ, and a third group, in which ES was incubated with seminal plasm for 10 min after thawed (ESS). After thawing, samples from the 3 groups were incubated for 0, 3, 6 e 24 h. In each moment they were evaluated for total motility and progressive motility, plasm membrane integrity. acrosome integrity, morphology and capacitation. Finally, we evaluated the ability of ES, EJ and ESS to bind to oviduct epithelium cells (OEC), Samples from EJ, EP e EPP groups were co-incubated with OEC for 0, 3, 6 e 24 h. Due to the results obtained, another test had to be done to evaluated if the cryopreservation process was affecting ES binding. To do that we used testis form 4 bulls collected at slaughter house. From each animal one testis was used for the fresh sperm (ES-F) and the other for the frozen sperm (EP-C). Data analysis was performed using GLIMMIX from SAS (P≤0.05). Fresh and cryopreserved ES presented all quality parameters similar (P>0.05) to the EJ However, after cooling at 4°C, ES showed to be more resistance to cold than the EJ presenting greater TM (79.8±4.5 and 56.8±5.6), greater PM (46.1±3.5 and 29.2±3.2) and higher percentage of cells with intact acrosome (68.7±5.8 and 48.5±6.1) than EJ. After thawed at 6 h of incubation ES and ESS compared to EJ had a higher percentage of intact membranes (29±4.3, 28.2±4.2 and 16.4±3.4), higher percentage of cells with intact acrosome (31.6±3.8 31.6±3.8 and 19.9±3.2) and higher percentage of non-capacitated sperm (81±3.5, 80.9±3.5 and 70.3±3.7). The number of bounded sperm after co-incubation with OEC was similar (P>0.05) for EJ, ES and ESS groups. The analysis within the group showed that all had a decreased on the number of bounded sperm, with the lowest number of bounded sperm found at 24 h of incubation. In the second biding test the group EF had a higher number of bounded sperm at 30 min (130.9±21.2) and at 24 h (131.7±21.2) of incubation than the EC (30 min=88±21.2 and 24 h=20.4±21.2). It can be concluded that ES are more resistant to cooling than the EJ, presenting a greater longevity and a delay on capacitation process than the EJ. In addition, ES binds to OEC similarly to EJ; however cryopreservation can affect that binding.

Submitted by Felipe Lapenda (felipe.lapenda@ufpe.br) on 2015-03-05T12:31:38Z No. of bitstreams: 2 Dissertação LEANDRO.pdf: 8294148 bytes, checksum: 3e40a2ca9bb26eaf8e94fce590c8fbb6 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:31:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação LEANDRO.pdf: 8294148 bytes, checksum: 3e40a2ca9bb26eaf8e94fce590c8fbb6 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / A evolução da restinga do bairro do Recife Antigo pode ser divida em dois momentos um onde a dinâmica dos processos de âmbito natural ocorreu de maneira plena. Isto é, não houve a interferência humana de maneira a modificar a morfodinâmica natural da restinga. A posteriori ocorreu à ocupação e povoamento da capitania de Pernambuco, iniciando na cidade do Recife no século XVI, desta forma inicia a intervenção do novo agente geológico, o antrópico. Este conseguiu moldar a morfologia da restinga a partir da necessidade humana em obter mais espaço para o crescimento urbano. Partindo deste contexto, o objetivo norteador da pesquisa é analisar a evolução morfodinâmica da unidade geomorfológica restinga do bairro do Recife Antigo e correlacionar com as modificações antrópicas que levaram a mudanças na configuração natural da restinga. Foi realizado para alcançar este fim a reconstrução da evolução geomorfológica da restinga e as alterações sofridas pelos processos formativos. A pesquisa teve seu desenvolvimento contíguo à teoria dos sistemas, na qual, a mesma busca compreender o funcionamento da superfície terrestre como um todo, ou seja, explicar a dinâmica da perda, ganho e trocas de matéria e energia no planeta. Isso implica na análise complexa e integrada dos elementos naturais e antrópicos para um melhor entendimento da relação homem e natureza. E através dos sistemas pode inferir o processo de evolução da morfodinâmica da unidade geomorfológica restinga do Recife no progresso da paisagem. Christofoletti (1979 e 1999) assevera que os sistemas são estabelecidos por: elementos ou unidades, relações, atributos, input e output. Os elementos são as partes que têm inter-relações entre si, os atributos seriam as características do sistema, e estas ocorrem por uma entrada (energia e/ou matéria). A saída constituirá em tudo o que já foi transformado nas ligações dos elementos no sistema, saindo um produto diferente de acordo com o desenvolvimento do sistema, desde os elementos até as entradas e as relações. Prontamente, a morfodinâmica da restinga do bairro do Recife teve no se desenvolvimento as três fases propostas por Tricart (1977) para definir o grau de estabilidade da paisagem em relação ao equilíbrio entre a morfogênese e a pedogênese. A estável no século XVI e XVII, a intergrade no XVIII e fortemente instável no XIX e XX. Sendo a restinga atualmente moldada num morfologia estável do ponto de vista da forma e processos e se comportando como uma ilha fluvial. Deste modo, a ação antrópica é um agente geológico de alta competência na alteração da paisagem numa escala de tempo histórico.

O objetivo do presente estudo foi avaliar, quantitativa e qualitativamente, por meio de microtomografia computadorizada, o percentual de volume e de redução de debris dentinários acumulados (DDA) no sistema de canais radiculares com istmos de raízes mesiais de molares inferiores submetidos à: irrigação por pressão apical positiva; irrigação ultrassônica passiva; finalização do preparo com Self-Adjusting File e finalização do preparo com XP-endo Finisher. Quarenta raízes mesiais de molares inferiores, com curvatura moderada, e presença de dois canais mesiais com istmo único e contínuo verificada por escaneamento em microtomográfo, foram selecionadas. Os canais foram preparados pela técnica de instrumentação reciprocante (WaveOne Small e Primary). Em seguida, a composição dos grupos experimentais foi realizada por meio da técnica de amostragem estratificada, de acordo com o protocolo de irrigação final ou de finalização de preparo biomecânico, em quatro grupos (n=10): Pressão Apical Positiva (PAP), Irrigação Ultrassônica Ativa (IUP), Self-Adjusting File (SAF), e a XP-endo Finisher (XPF). Os protocolos foram realizados durante 2 minutos com 5,5 mL de hipoclorito de sódio a 2,5%. Os espécimes foram submetidos aos exames microtomográfico inicial, após o preparo e após os protocolos de irrigação final ou de finalização do preparo para análise de DDA. A porcentagem de volume e redução de DDA após os protocolos de irrigação final ou de finalização do preparo biomecânico foram comparados estatisticamente entre os grupos por meio de ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Foi possível observar redução de DDA após os protocolos de irrigação final e de finalização do preparo biomecânico em todos os grupos avaliados. Os grupos IUP e XPF apresentaram as menores médias de volume e de percentual de volume (%vol) de DDA (0,05±0,06mm³ e 0,61±0,75%; e 0,08±0,09mm³ e 0,81±1,03%, respectivamente) comparados aos grupos PAP e SAF (0,36±0,13mm³ e 3,73±1,59%; e 0,47±0,23mm³ e 4,31±1,87%, respectivamente) (p<0,05). Ainda, o percentual de redução de DDA foi maior nos grupos IUP e XPF (94,05±7,21% e 89,67±10,96%, respectivamente) quando comparados aos grupos PAP e SAF (45,74±15,76% e 41,26±9,96%, respectivamente) (p<0,05). Não houve diferença estatística entre os grupos IUP e XPF; e entre os grupos PAP e SAF (p>0,05). Qualitativamente, os DDA remanescentes foram localizados principalmente no terço apical após o protocolo com IUP; no terço cervical após protocolo com XPF e nos terços médio e apical após protocolos com PAP e SAF. Conclui-se que os protocolos de irrigação ultrassônica passiva e de finalização do preparo com XP-endo Finisher apresentaram maiores remoções de debris dentinários do sistema de canais radiculares com istmos comparados aos protocolos de irrigação por pressão apical positiva e de finalização de preparo com SAF. / The aim of this study was to evaluate, quantitatively and qualitatively, the percent volume and percent reduction of accumulated hard-tissue debris (AHTD) from root canal system with isthmuses of mesial roots of mandibular molars subjected to different final irrigation and final shaping protocols, using micro-computed tomography (micro-CT) analysis. Forty mesial roots of mandibular molars with moderate curvature and two mesial canals with a single and continuous isthmus detected by micro-CT scanning were selected. The canals were prepared by reciprocating instrumentation technique (WaveOne Small and Primary). Then, the composition of the experimental groups was performed by a stratified sampling method, resulting in four groups (n=10), according to the final irrigation or final shaping protocol: Apical Positive Pressure (APP), Passive Ultrasonic Irrigation (PUI), Self-adjusting File (SAF) and XP-endo Finisher (XPF). The protocols were performed with 5.5 mL of 2.5% NaOCl per canal during 2 minutes. The specimens were subjected to preoperative and following preparation, final irrigation or final shaping micro-CT scanning for AHTD analysis. The percent volume and percent reduction of AHTD after final irrigation or final shaping were statistically compared among groups using ANOVA and post hoc Tukey test with a 5% significance level. It was observed a reduction in the percentage of AHTD after final irrigation or final shaping in all groups. The PUI and XPF groups showed the lowest mean of volume and percent volume (%vol) of AHTD (0.05±0.06mm³ and 0.61±0.75%; and 0.08±0.09mm³ and 0.81±1.03%, respectively) when compared with APP and SAF groups (0.36±0.13mm³ and 3.73±1.59%; and 0.47±0.23mm³ and 4.31±1.87%, respectively) (p<0.05). Furthermore, the percent reduction of AHTD was greater in PUI and XPF groups (94.05±7.21% and 89.67±10.96%, respectively) compared with APP and SAF groups (45.74±15.76% and 41.26±9.96%, respectively) (p<0.05). No statistically significant differences were found when comparing PUI and XPF groups or APP and SAF groups (p>0.05). Qualitatively, the remaining DDA were mainly located in the apical third after the protocol with IUP; the cervical third after protocol XPF and in the middle and apical thirds after protocols PAP and SAF. It may be concluded that the passive ultrasound irrigation and final shaping with XP-endo Finisher protocols showed greater AHTD reduction from root canal system with isthmuses of mesial roots of mandibular molars than apical positive pressure and final shaping with SAF.

In cattle, the oviduct plays an important role in the reproductive process. Oviductal secretions characterize the environment where storage and sperm capacitation, fertilization, and early embryo development take place. Because molecular control of bovine oviduct receptivity is poorly understood, this Thesis proposed a model of receptivity based on the manipulation of pre-ovulatory follicle growth (POF) used to study the effects of periovulatory endocrine profile on oviductal physiology. Growth of POF in Nelore cows (Bos indicus) was manipulated to produce two groups: cows with large POF and large corpus luteum (LF-LCL; higher fertility) and cows with small POF and small CL (SF-SCL; Lower fertility). Ampulla and isthmus samples were collected on day 4 after induction of ovulation with GnRH. In the first study, the transcriptome of the ipsilateral to CL ampulla and isthmus was determined by RNAseq, the regional expression of genes was studied by qPCR, and the distribution of the PGR and ER proteins was assessed by immunohistochemistry. Greater abundance of PGR and ER was found in the oviduct of the LF-LCL animals indicating that there is a greater availability of receptors and, possibly, of signaling-mechanisms stimulated by steroids in both oviductal regions. The transcripts profile showed enriched oviductal functional characteristics that could affect its embryo receptivity. These characteristics include changes in morphology i.e. branching morphogenesis, and changes in cell functioning i.e. cell secretion, that were enriched in the LF-LCL group. In the second study, after morphological analyses, it was concluded that the ampulla of the LF-LCL animals presented more primary folds, a larger perimeter of the luminal epithelium, and a higher proportion of secretory and proliferating cells, when compared to SF-SCL group. There was no difference in isthmus morphology between groups. In the third study, the extracellular matrix remodeling was reserched. It was concluded that in the isthmus region of the LF-LCL animals, there is less type 1 collagen fibers and greater abundance of proteins involved in extracellular matrix remodeling. In the fourth study, it was determined that the periovulatory endocrine milieu affects the expression of components of the microRNAs biosynthesis pathway and the microRNAs profile, both different between groups. Finally, in the fifth study, 205 metabolites were quantified in the oviductal fluid and 37 were found to be in different concentrations when both groups were compared. It was concluded that oviduct of cows of higher fertility presents a profile of transcripts, proteins, and metabolites that is associated with morphological and functional characteristics favorable to the survival and development of the embryo. / Em fêmeas bovinas, o oviduto apresenta um importante papel no processo reprodutivo. As secreções ovidutais representam o ambiente onde ocorrem o armazenamento e a capacitação espermática, a fecundação e o desenvolvimento embrionário inicial. O controle molecular da receptividade do oviduto em bovinos é pouco conhecido. Na presente tese, empregou-se um modelo de receptividade baseado na manipulação do crescimento do folículo pré-ovulatório (FPO) para o estudo dos efeitos do perfil endócrino periovulatório na fisiologia do oviduto. O crescimento do FPO de vacas Nelore (Bos indicus) foi manipulado com o objetivo de produzir dois grupos: vacas com FPO e corpo lúteo (CL) grandes (FG-CLG; maior fertilidade) e vacas com FPO e CL pequenos (FP-CLP; menor fertilidade). Amostras da ampola e istmo foram coletadas no dia 4 após da indução da ovulação com GnRH. No primeiro estudo, o transcriptoma da ampola e istmo do lado ipsolateral ao CL foi determinado por RNAseq, à expressão gênica regional e a distribuição das proteínas PGR e ER foram analisadas por qPCR e imunohistoquímica, respectivamente. Houve maior abundância de PGR e ER no oviduto dos animais do grupo FG-CLG, o que indica uma maior disponibilidade de receptores e possivelmente, de mecanismos intracelulares de sinalização estimulados pelos esteroides em ambas as regiões. O perfil global de transcritos mostrou enriquecimento de características funcionais do oviduto que poderiam afetar sua receptividade ao embrião. Tais características incluem mudanças morfológicas, como a ramificação morfogênica, e celulares, como a secreção, que foram aumentadas no grupo FG-CLG. No segundo estudo, após analisarem-se características morfológicas dos tecidos, concluiu-se que a ampola dos animais FG-CLG apresentou maior número de pregas primárias, maior perímetro do epitélio luminal, e maior proporção de células secretoras e de células em proliferação quando comparado aos animais do grupo FP-CLP. Não houve diferença na morfologia do istmo entre os grupos. No terceiro estudo, foi analisado o processo de remodelamento de matriz extracelular. Concluiu-se que no istmo dos animais do grupo FG-CLG existe menor quantidade de fibras de colágeno tipo 1 e maior abundância de proteínas envolvidas no remodelamento de matriz. No quarto estudo, determinou-se que o perfil endócrino periovulatório afeta a expressão de componentes da via de biossíntese e o perfil de microRNAs, que são diferentes entre os grupos. Finalmente, no quinto estudo, foram quantificados 205 metabólitos no fluido ovidutal dos animais. Destes, 37 encontram-se em concentrações diferentes entre os grupos. Concluiu-se que o oviduto de vacas de maior fertilidade apresenta um perfil de transcritos, proteínas e metabólitos que está associado a características morfológicas e funcionais favoráveis à sobrevivência e desenvolvimento do embrião.

Proefschrift ter verkrijging van de graad van doctor--Nijmegen--Katholieke universiteit, 1992.

O objetivo do presente estudo foi avaliar, quantitativa e qualitativamente, por meio de microtomografia computadorizada, o percentual de volume e de redução de debris dentinários acumulados (DDA) no sistema de canais radiculares com istmos de raízes mesiais de molares inferiores submetidos à: irrigação por pressão apical positiva; irrigação ultrassônica passiva; finalização do preparo com Self-Adjusting File e finalização do preparo com XP-endo Finisher. Quarenta raízes mesiais de molares inferiores, com curvatura moderada, e presença de dois canais mesiais com istmo único e contínuo verificada por escaneamento em microtomográfo, foram selecionadas. Os canais foram preparados pela técnica de instrumentação reciprocante (WaveOne Small e Primary). Em seguida, a composição dos grupos experimentais foi realizada por meio da técnica de amostragem estratificada, de acordo com o protocolo de irrigação final ou de finalização de preparo biomecânico, em quatro grupos (n=10): Pressão Apical Positiva (PAP), Irrigação Ultrassônica Ativa (IUP), Self-Adjusting File (SAF), e a XP-endo Finisher (XPF). Os protocolos foram realizados durante 2 minutos com 5,5 mL de hipoclorito de sódio a 2,5%. Os espécimes foram submetidos aos exames microtomográfico inicial, após o preparo e após os protocolos de irrigação final ou de finalização do preparo para análise de DDA. A porcentagem de volume e redução de DDA após os protocolos de irrigação final ou de finalização do preparo biomecânico foram comparados estatisticamente entre os grupos por meio de ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Foi possível observar redução de DDA após os protocolos de irrigação final e de finalização do preparo biomecânico em todos os grupos avaliados. Os grupos IUP e XPF apresentaram as menores médias de volume e de percentual de volume (%vol) de DDA (0,05±0,06mm³ e 0,61±0,75%; e 0,08±0,09mm³ e 0,81±1,03%, respectivamente) comparados aos grupos PAP e SAF (0,36±0,13mm³ e 3,73±1,59%; e 0,47±0,23mm³ e 4,31±1,87%, respectivamente) (p<0,05). Ainda, o percentual de redução de DDA foi maior nos grupos IUP e XPF (94,05±7,21% e 89,67±10,96%, respectivamente) quando comparados aos grupos PAP e SAF (45,74±15,76% e 41,26±9,96%, respectivamente) (p<0,05). Não houve diferença estatística entre os grupos IUP e XPF; e entre os grupos PAP e SAF (p>0,05). Qualitativamente, os DDA remanescentes foram localizados principalmente no terço apical após o protocolo com IUP; no terço cervical após protocolo com XPF e nos terços médio e apical após protocolos com PAP e SAF. Conclui-se que os protocolos de irrigação ultrassônica passiva e de finalização do preparo com XP-endo Finisher apresentaram maiores remoções de debris dentinários do sistema de canais radiculares com istmos comparados aos protocolos de irrigação por pressão apical positiva e de finalização de preparo com SAF. / The aim of this study was to evaluate, quantitatively and qualitatively, the percent volume and percent reduction of accumulated hard-tissue debris (AHTD) from root canal system with isthmuses of mesial roots of mandibular molars subjected to different final irrigation and final shaping protocols, using micro-computed tomography (micro-CT) analysis. Forty mesial roots of mandibular molars with moderate curvature and two mesial canals with a single and continuous isthmus detected by micro-CT scanning were selected. The canals were prepared by reciprocating instrumentation technique (WaveOne Small and Primary). Then, the composition of the experimental groups was performed by a stratified sampling method, resulting in four groups (n=10), according to the final irrigation or final shaping protocol: Apical Positive Pressure (APP), Passive Ultrasonic Irrigation (PUI), Self-adjusting File (SAF) and XP-endo Finisher (XPF). The protocols were performed with 5.5 mL of 2.5% NaOCl per canal during 2 minutes. The specimens were subjected to preoperative and following preparation, final irrigation or final shaping micro-CT scanning for AHTD analysis. The percent volume and percent reduction of AHTD after final irrigation or final shaping were statistically compared among groups using ANOVA and post hoc Tukey test with a 5% significance level. It was observed a reduction in the percentage of AHTD after final irrigation or final shaping in all groups. The PUI and XPF groups showed the lowest mean of volume and percent volume (%vol) of AHTD (0.05±0.06mm³ and 0.61±0.75%; and 0.08±0.09mm³ and 0.81±1.03%, respectively) when compared with APP and SAF groups (0.36±0.13mm³ and 3.73±1.59%; and 0.47±0.23mm³ and 4.31±1.87%, respectively) (p<0.05). Furthermore, the percent reduction of AHTD was greater in PUI and XPF groups (94.05±7.21% and 89.67±10.96%, respectively) compared with APP and SAF groups (45.74±15.76% and 41.26±9.96%, respectively) (p<0.05). No statistically significant differences were found when comparing PUI and XPF groups or APP and SAF groups (p>0.05). Qualitatively, the remaining DDA were mainly located in the apical third after the protocol with IUP; the cervical third after protocol XPF and in the middle and apical thirds after protocols PAP and SAF. It may be concluded that the passive ultrasound irrigation and final shaping with XP-endo Finisher protocols showed greater AHTD reduction from root canal system with isthmuses of mesial roots of mandibular molars than apical positive pressure and final shaping with SAF.

In cattle, the oviduct plays an important role in the reproductive process. Oviductal secretions characterize the environment where storage and sperm capacitation, fertilization, and early embryo development take place. Because molecular control of bovine oviduct receptivity is poorly understood, this Thesis proposed a model of receptivity based on the manipulation of pre-ovulatory follicle growth (POF) used to study the effects of periovulatory endocrine profile on oviductal physiology. Growth of POF in Nelore cows (Bos indicus) was manipulated to produce two groups: cows with large POF and large corpus luteum (LF-LCL; higher fertility) and cows with small POF and small CL (SF-SCL; Lower fertility). Ampulla and isthmus samples were collected on day 4 after induction of ovulation with GnRH. In the first study, the transcriptome of the ipsilateral to CL ampulla and isthmus was determined by RNAseq, the regional expression of genes was studied by qPCR, and the distribution of the PGR and ER proteins was assessed by immunohistochemistry. Greater abundance of PGR and ER was found in the oviduct of the LF-LCL animals indicating that there is a greater availability of receptors and, possibly, of signaling-mechanisms stimulated by steroids in both oviductal regions. The transcripts profile showed enriched oviductal functional characteristics that could affect its embryo receptivity. These characteristics include changes in morphology i.e. branching morphogenesis, and changes in cell functioning i.e. cell secretion, that were enriched in the LF-LCL group. In the second study, after morphological analyses, it was concluded that the ampulla of the LF-LCL animals presented more primary folds, a larger perimeter of the luminal epithelium, and a higher proportion of secretory and proliferating cells, when compared to SF-SCL group. There was no difference in isthmus morphology between groups. In the third study, the extracellular matrix remodeling was reserched. It was concluded that in the isthmus region of the LF-LCL animals, there is less type 1 collagen fibers and greater abundance of proteins involved in extracellular matrix remodeling. In the fourth study, it was determined that the periovulatory endocrine milieu affects the expression of components of the microRNAs biosynthesis pathway and the microRNAs profile, both different between groups. Finally, in the fifth study, 205 metabolites were quantified in the oviductal fluid and 37 were found to be in different concentrations when both groups were compared. It was concluded that oviduct of cows of higher fertility presents a profile of transcripts, proteins, and metabolites that is associated with morphological and functional characteristics favorable to the survival and development of the embryo. / Em fêmeas bovinas, o oviduto apresenta um importante papel no processo reprodutivo. As secreções ovidutais representam o ambiente onde ocorrem o armazenamento e a capacitação espermática, a fecundação e o desenvolvimento embrionário inicial. O controle molecular da receptividade do oviduto em bovinos é pouco conhecido. Na presente tese, empregou-se um modelo de receptividade baseado na manipulação do crescimento do folículo pré-ovulatório (FPO) para o estudo dos efeitos do perfil endócrino periovulatório na fisiologia do oviduto. O crescimento do FPO de vacas Nelore (Bos indicus) foi manipulado com o objetivo de produzir dois grupos: vacas com FPO e corpo lúteo (CL) grandes (FG-CLG; maior fertilidade) e vacas com FPO e CL pequenos (FP-CLP; menor fertilidade). Amostras da ampola e istmo foram coletadas no dia 4 após da indução da ovulação com GnRH. No primeiro estudo, o transcriptoma da ampola e istmo do lado ipsolateral ao CL foi determinado por RNAseq, à expressão gênica regional e a distribuição das proteínas PGR e ER foram analisadas por qPCR e imunohistoquímica, respectivamente. Houve maior abundância de PGR e ER no oviduto dos animais do grupo FG-CLG, o que indica uma maior disponibilidade de receptores e possivelmente, de mecanismos intracelulares de sinalização estimulados pelos esteroides em ambas as regiões. O perfil global de transcritos mostrou enriquecimento de características funcionais do oviduto que poderiam afetar sua receptividade ao embrião. Tais características incluem mudanças morfológicas, como a ramificação morfogênica, e celulares, como a secreção, que foram aumentadas no grupo FG-CLG. No segundo estudo, após analisarem-se características morfológicas dos tecidos, concluiu-se que a ampola dos animais FG-CLG apresentou maior número de pregas primárias, maior perímetro do epitélio luminal, e maior proporção de células secretoras e de células em proliferação quando comparado aos animais do grupo FP-CLP. Não houve diferença na morfologia do istmo entre os grupos. No terceiro estudo, foi analisado o processo de remodelamento de matriz extracelular. Concluiu-se que no istmo dos animais do grupo FG-CLG existe menor quantidade de fibras de colágeno tipo 1 e maior abundância de proteínas envolvidas no remodelamento de matriz. No quarto estudo, determinou-se que o perfil endócrino periovulatório afeta a expressão de componentes da via de biossíntese e o perfil de microRNAs, que são diferentes entre os grupos. Finalmente, no quinto estudo, foram quantificados 205 metabólitos no fluido ovidutal dos animais. Destes, 37 encontram-se em concentrações diferentes entre os grupos. Concluiu-se que o oviduto de vacas de maior fertilidade apresenta um perfil de transcritos, proteínas e metabólitos que está associado a características morfológicas e funcionais favoráveis à sobrevivência e desenvolvimento do embrião.

Introdução: O istmo aórtico (IAo) fetal é um pequeno segmento vascular localizado entre a origem da artéria subclávia esquerda e a extremidade aórtica do canal arterial, que reflete o equilíbrio entre a impedância ao fluxo no território cerebral e na circulação fetal periférica. Considerado o único shunt arterial verdadeiro entre os sistemas vasculares direito e esquerdo, seu fluxo alterado se associa a resultados perinatais adversos, incluindo aumento da mortalidade fetal e morbidade neurológica, especialmente em fetos com insuficiência placentária e restrição de crescimento. Justificativa: Não há protocolo mundial estabelecido definindo conduta clínica baseada na avaliação Doppler do istmo aórtico fetal, havendo espaço para que sua análise seja incorporada como justificativa para indicação do parto e proteção contra injúrias perinatais. Entretanto, implementar novas medidas à prática clínica requer a demonstração de quão confiáveis e reprodutíveis são os resultados obtidos, o que contribui para a garantia de qualidade em sua utilização. Objetivos: Estimar a reprodutibilidade intra e interobservador do índice de pulsatilidade do istmo da aorta fetal (IAo-IP) no terceiro trimestre de gestação (32 a 36+6 semanas), e determinar qual das aquisições, longitudinal ou transversal, produz medidas com melhores confiabilidade e concordância. Métodos: Estudo observacional (transversal) para o qual foram convidadas a participar gestantes no terceiro trimestre de gestação (32 a 36+6 semanas) que preenchiam os critérios de elegibilidade. O IAo-IP foi obtido por dois observadores, que utilizaram os planos longitudinal e transversal para as aquisições, realizadas de forma completamente independente, sem que tivessem conhecimento dos valores das próprias medidas, tampouco das medidas do outro observador. Os dados foram apresentados como média ± DP (desvio-padrão), mediana, mínimo e máximo; A reprodutibilidade foi avaliada pelo coeficiente de correlação intraclasse (ICC). Resultados: As principais características das 49 gestantes foram: média de idade de 26.3 ± 4.7 anos, variando entre 18 e 40 anos, com média da idade gestacional de 33.6 ± 1.5 semanas e índice de massa corporal de 27.9 ± 4.5 Kg/m2. Os resultados dos IP obtidos do estudo Doppler espectral do istmo aórtico fetal pela via longitudinal, demonstraram uma média de 2.75 ± 0.46 para o observador A, 2.53 ± 0.38 para o observador B, e 2.74 ± 0.58 para a segunda medida do observador A. Para a via transversal, as médias foram de 2.75 ± 0.46 para o observador A, 2.53 ± 0.38 para o observador B, e 2.74 ± 0.58 para a segunda medida do observador A. A avaliação Doppler do istmo aórtico fetal no plano longitudinal apresentou ICC de 0.25 na comparação entre os observadores (interobservador), e de 0.42 para a análise intraobservador. No plano transversal, os coeficientes obtidos foram de 0.18 e 0.43 respectivamente para as análises inter-observador e intraobservador. Conclusões: Embora o papel do istmo aórtico na hemodinâmica fetal esteja bem estabelecido, o presente estudo demonstrou que sua reprodutibilidade no terceirotrimestre (32 a 36+6 semanas) é fraca, logo, a medida do IAo-IP deve ser interpretada com cautela, desencorajando seu emprego na prática clínica. Os estudos que examinam aperfeiçoamentos técnicos para melhorar a sua reprodutibilidade devem ser incentivados / Introduction: The fetal aortic isthmus (AoI) is a small vessel located between the origin of the left subclavian artery and the aortic extremity of the arterial ductus, which reflects the balance between the impedance of the brain and systemic circulation of the fetus. Known as the only arterial shunt regarding both right and left vascular systems, its abnormal flow is associated to adverse perinatal outcomes, including high fetal mortality and neurological morbidity, especially among placental insufficiency and growth-restricted fetuses. Rationale: There is no established global protocol defining clinical management based on the Doppler evaluation of the fetal aortic isthmus, allowing its analysis to be incorporated as a reason to indicate delivery and protection against perinatal injury. However, implementation of new methods to clinical practice requires demonstration of how reliable and reproducible the results are, which contributes to quality assurance in their use. Objectives: To estimate the intra and interobserver reproducibility of the fetal aortic isthmus pulsatility index (IAo-PI) in the third trimester of gestation (32 to 36+6 weeks), and to determine which of both longitudinal and transversal acquisitions show better reliability and agreement. Methods: Observational (cross-sectional) study in which were invited to participate pregnant women in the third trimester of gestation (32 to 36+6 weeks) who met the eligibility criteria. The AoI-PI was obtained by two observers, who used the longitudinal and transverse plans for the acquisitions, performing independent acquisitions and blinded analysis. Data were presented as mean ± SD (standard deviation), median, minimum and maximum. The reproducibility was evaluated by the intraclass correlation coefficient (ICC). Results: The main characteristics of the 49 pregnant women were: mean age of 26.3 ± 4.7 years, ranging from 18 to 40 years, with mean gestational age of 33.6 ± 1.5 weeks and body mass index of 27.9 ± 4.5 kg/m2. The results of the PI obtained from the spectral Doppler evaluation of the fetal aortic isthmus, regarding the longitudinal plane, have demonstrated an average of 2.75 ± 0.46 for observer A, 2.53 ± 0.38 for observer B, and 2.74 ± 0.58 for the second measurement of observer A. For the transversal plane the mean values were 2.75 ± 0.46 for the observer A, 2.53 ± 0.38 for the observer B, and 2.74 ± 0.58 for the second measurement of the observer A. The Doppler evaluation of the fetal aortic isthmus in the longitudinal plane has shown a ICC of 0.25 in the comparison between the observers (interobserver), and 0.42 for the intraobserver analysis. In the transversal plane, the coefficients obtained were 0.18 and 0.43 respectively for the interobserver and intraobserver analysis. Conclusions: Although the role of the aortic isthmus in fetal hemodynamics is well established, the present study have reported that its reproducibility in the third trimester (32 to 36+6 weeks) is very poor, so the measurement of the AoI-PI should be interpreted with caution, discouraging its use in clinical practice. Studiesexamining technical amendments to improve its reproducibility should be encouraged