A fototerapia laser (FTL) tem sido usada clinicamente para auxiliar na cicatrização de inúmeras doenças bucais, especialmente no tratamento de lesões ulceradas. Os mecanismos celulares através dos quais o laser é capaz de promover a bioestimulação não são completamente compreendidos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito da FTL no comportamento de queratinócitos bucais no processo de cicatrização. Células epiteliais bucais (NOK-SI) foram cultivadas sob duas condições nutricionais: suplementadas com 10% de soro fetal bovino (FBS) e sob déficit nutricional (2% FBS) seguido de irradiação com laser de diodo InGaAlP (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s), através da técnica pontual e em contato. Foram realizados ensaio de viabilidade celular (MTT), migração celular (cicatrização) e análise proteica (Western Blotting e Fluorescência). Os resultados obtidos indicaram que a FTL influencia diretamente a migração epitelial evidenciado pelo fechamento acelerado das feridas irradiadas e polarização do citoesqueleto celular (F-actina). Conclui-se que os efeitos clínicos da FTL estão associados, entre outros fatores, ao aumento da migração epitelial. / Laser phototherapy (LPT) has been used clinically to accelerate wound healing in a variety of oral diseases. The cell mechanisms by which LPT can promote biostimulation have not yet been fully elucidated. Epithelial cells play an important role in the reparative process since it proliferation and migration from the wound margin is crucial for restore epithelial continuity. It is unclear whether LPT has an effect on epithelial cell migration. Based on this, the aim of this study was to investigate the effect of LPT in oral wound healing process using oral keratinocytes. Oral keratinocytes were maintained under two nutritional conditions supplemented with 10% of fetal bovine serum (FBS) and in nutritional deficit (2% FBS). Laser irradiation was delivered with InGaAlP laser (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s). Irradiations were performed in contact, using the punctual irradiation mode. The following tests were performed cell viability, cell migration and protein analysis. Results obtained suggest that LPT influences epithelial migration and cytoskeleton polarization. Interestingly, LPT effect under epithelial cell migration occurs independently of cell viability. In conclusion, clinical LPT effects are associated with an increase in epithelial cell migration.

A fototerapia laser (FTL) tem sido usada clinicamente para auxiliar na cicatrização de inúmeras doenças bucais, especialmente no tratamento de lesões ulceradas. Os mecanismos celulares através dos quais o laser é capaz de promover a bioestimulação não são completamente compreendidos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito da FTL no comportamento de queratinócitos bucais no processo de cicatrização. Células epiteliais bucais (NOK-SI) foram cultivadas sob duas condições nutricionais: suplementadas com 10% de soro fetal bovino (FBS) e sob déficit nutricional (2% FBS) seguido de irradiação com laser de diodo InGaAlP (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s), através da técnica pontual e em contato. Foram realizados ensaio de viabilidade celular (MTT), migração celular (cicatrização) e análise proteica (Western Blotting e Fluorescência). Os resultados obtidos indicaram que a FTL influencia diretamente a migração epitelial evidenciado pelo fechamento acelerado das feridas irradiadas e polarização do citoesqueleto celular (F-actina). Conclui-se que os efeitos clínicos da FTL estão associados, entre outros fatores, ao aumento da migração epitelial. / Laser phototherapy (LPT) has been used clinically to accelerate wound healing in a variety of oral diseases. The cell mechanisms by which LPT can promote biostimulation have not yet been fully elucidated. Epithelial cells play an important role in the reparative process since it proliferation and migration from the wound margin is crucial for restore epithelial continuity. It is unclear whether LPT has an effect on epithelial cell migration. Based on this, the aim of this study was to investigate the effect of LPT in oral wound healing process using oral keratinocytes. Oral keratinocytes were maintained under two nutritional conditions supplemented with 10% of fetal bovine serum (FBS) and in nutritional deficit (2% FBS). Laser irradiation was delivered with InGaAlP laser (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s). Irradiations were performed in contact, using the punctual irradiation mode. The following tests were performed cell viability, cell migration and protein analysis. Results obtained suggest that LPT influences epithelial migration and cytoskeleton polarization. Interestingly, LPT effect under epithelial cell migration occurs independently of cell viability. In conclusion, clinical LPT effects are associated with an increase in epithelial cell migration.

A fototerapia laser (FTL) tem sido usada clinicamente para auxiliar na cicatrização de inúmeras doenças bucais, especialmente no tratamento de lesões ulceradas. Os mecanismos celulares através dos quais o laser é capaz de promover a bioestimulação não são completamente compreendidos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito da FTL no comportamento de queratinócitos bucais no processo de cicatrização. Células epiteliais bucais (NOK-SI) foram cultivadas sob duas condições nutricionais: suplementadas com 10% de soro fetal bovino (FBS) e sob déficit nutricional (2% FBS) seguido de irradiação com laser de diodo InGaAlP (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s), através da técnica pontual e em contato. Foram realizados ensaio de viabilidade celular (MTT), migração celular (cicatrização) e análise proteica (Western Blotting e Fluorescência). Os resultados obtidos indicaram que a FTL influencia diretamente a migração epitelial evidenciado pelo fechamento acelerado das feridas irradiadas e polarização do citoesqueleto celular (F-actina). Conclui-se que os efeitos clínicos da FTL estão associados, entre outros fatores, ao aumento da migração epitelial. / Laser phototherapy (LPT) has been used clinically to accelerate wound healing in a variety of oral diseases. The cell mechanisms by which LPT can promote biostimulation have not yet been fully elucidated. Epithelial cells play an important role in the reparative process since it proliferation and migration from the wound margin is crucial for restore epithelial continuity. It is unclear whether LPT has an effect on epithelial cell migration. Based on this, the aim of this study was to investigate the effect of LPT in oral wound healing process using oral keratinocytes. Oral keratinocytes were maintained under two nutritional conditions supplemented with 10% of fetal bovine serum (FBS) and in nutritional deficit (2% FBS). Laser irradiation was delivered with InGaAlP laser (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s). Irradiations were performed in contact, using the punctual irradiation mode. The following tests were performed cell viability, cell migration and protein analysis. Results obtained suggest that LPT influences epithelial migration and cytoskeleton polarization. Interestingly, LPT effect under epithelial cell migration occurs independently of cell viability. In conclusion, clinical LPT effects are associated with an increase in epithelial cell migration.

A incidência da hipersensibilidade dentinária (HD) tem aumentado. Agentes dessensibilizantes como o Gluma Desensitizer® (Heraeus), ou os Biovidros, bem como tratamentos considerados bioestimuladores como a laser fototerapia (LPT) tem sido aplicados de forma isolada. Porém, esses tratamentos, embora produzam efeitos positivos, ainda não apresentam resultados duradouros. Objetivo: Investigar os efeitos de substâncias liberadas por materiais utilizados no tratamento da HD (Gluma e Biovidro), associadas ou não à LPT, sobre a sobrevivência, proliferação e diferenciação de células mesenquimais indiferenciadas de polpa dentária humana. Material e Métodos: O Gluma e o Biovidro foram aplicados às culturas celulares na forma de meios condicionados, segundo os grupos experimentais: Grupo 1 (G1) Controle; Grupo 2 (G2) Gluma; Grupo 3 (G3) Biovidro; Grupo 4 (G4) Gluma + LPT; Grupo 5 (G5) Biovidro + LPT. A LPT foi realizada com laser de diodo semi-condutor (InGaAlP, 660 nm, área do feixe de 0,028 cm2) no modo pontual e em contato, nos seguintes parâmetros: 20 mW, 5 J/cm2, 7 s, 0,14 J por ponto. No ensaio de sobrevivência e no de proliferação celular as culturas foram irradiadas ou não por duas vezes (uma imediatamente e outra 6 horas depois). A viabilidade celular foi acessada pelo ensaio de atividade mitocondrial (MTT) em 24, 48 e 72 horas após a aplicação dos meios experimentais. Para a análise de diferenciação celular as culturas foram tratadas da mesma forma, e foram irradiadas por 4 vezes (uma imediatamente e as demais em intervalos de 48 horas até 7 dias). A diferenciação foi observada pelo ensaio do Vermelho de Alizarina em 21 dias. Os dados de viabilidade celular, obtidos no mínimo em triplicata, foram tratados por ANOVA complementado pelo teste de Tukey (p 0,05). As imagens obtidas pelo ensaio de Vermelho de Alizarina foram analisadas qualitativamente. Resultados: Sobrevivência celular foi observada em todos os grupos experimentais. Culturas controle (G1) apresentaram crescimento significativo (p<0,05). Culturas tratadas com o Gluma (G2) diminuíram o número de células viáveis e quando irradiadas (G4) mantiveram esse número. Culturas tratadas com Biovidro (G3) mantiveram o número de células viáveis e apresentaram crescimento significativo quando irradiadas (G5; p<0,05). Culturas controle (G1), e aquelas tratadas com Biovidro (G3) e Biovidro seguido de irradiação (G5) apresentaram diferenciação com formação de nódulos mineralizados. Conclusão: Substâncias liberadas pelo agente dessensibilizante (Gluma) são citotóxicas e em longo prazo a LPT é capaz de minimizar estes efeitos citotóxicos. O Biovidro libera substâncias biocompatíveis que não interferem na diferenciação das células mesenquimais indiferenciadas da polpa dentária humana permitindo a mineralização da matriz extracelular. A LPT melhora a proliferação celular e a resposta dessas células ao Biovidro. / The incidence of Dentine Hypersensitivity (HD) has increased. Desensitizing agents such as Gluma Desensitizer® (Heraeus), or the Bioglasses, as well those considered biostimulatory treatments as the laser phototherapy (LPT) have been applied in an isolated manner. However, these treatments, although producing positive effects, do not have lasting results. Objective: To investigate the effects of substances leached from materials used in the treatment of HD (Gluma and Bioglass), associated or not to LPT, on the survival, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells from human dental pulp. Material and Methods: The Gluma and Bioglass were applied to cell cultures in the form of conditional medium, according to the experimental groups: Group 1 (G1) - Control; Group 2 (G2) - Gluma; Group 3 (G3) - Bioglass; Group 4 (G4) - Gluma + LPT; Group 5 (G5) - Bioglass + LPT. The LPT was performed with diode laser semi-conductor (InGAlP, 660 nm, spot beam size of 0.028 cm2) in punctual and contact mode, in the following parameters: 20 mW, 5 J/cm2, 7 s, 0.14 J per point. In the survival and in the cell proliferation assays the cell cultures were irradiated twice (an immediately and another 6 hours after) or not. The cell viability was assessed by mitochondrial activity (MTT) assay of in 24, 48 and 72 hours after the application of experimental culture medium. For the analysis of cell differentiation the cell cultures were treated in the same way, and were irradiated by 4 times (one immediately and the other one at intervals of 48 hours up to 7 days). The differentiation was observed by testing the alizarin red in 21 days. The data of cellular viability, obtained at least in triplicate, were treated by ANOVA followed by the Tukey test (p 0.05). The images obtained by testing of Alizarin Red were qualitatively analyzed. Results: cell survival was observed in all experimental groups. Control cultures (G1) showed significant growth (p< 0.05). Cultures treated with Gluma (G2) decreased the number of viable cells and when irradiated (G4) maintained this number. Cultures treated with Bioglass (G3) maintained the number of viable cells and showed significant growth when irradiated (G5; p< 0.05). Control cultures (G1) and those treated with Bioglass (G3) and Bioglass followed by irradiation (G5) showed differentiation with formation of mineralized nodules. Conclusion: Substances leached from the desensitizing agent (Gluma) are cytotoxic and the LPT is able to minimize these cytotoxic effects. The Bioglass releases biocompatible substances that do not disturb the differentiation of mesenchymal cells allowing the mineralization of the extracellular matrix. The LPT improves the proliferation of these cells in response of these cells to this material.

A incidência da hipersensibilidade dentinária (HD) tem aumentado. Agentes dessensibilizantes como o Gluma Desensitizer® (Heraeus), ou os Biovidros, bem como tratamentos considerados bioestimuladores como a laser fototerapia (LPT) tem sido aplicados de forma isolada. Porém, esses tratamentos, embora produzam efeitos positivos, ainda não apresentam resultados duradouros. Objetivo: Investigar os efeitos de substâncias liberadas por materiais utilizados no tratamento da HD (Gluma e Biovidro), associadas ou não à LPT, sobre a sobrevivência, proliferação e diferenciação de células mesenquimais indiferenciadas de polpa dentária humana. Material e Métodos: O Gluma e o Biovidro foram aplicados às culturas celulares na forma de meios condicionados, segundo os grupos experimentais: Grupo 1 (G1) Controle; Grupo 2 (G2) Gluma; Grupo 3 (G3) Biovidro; Grupo 4 (G4) Gluma + LPT; Grupo 5 (G5) Biovidro + LPT. A LPT foi realizada com laser de diodo semi-condutor (InGaAlP, 660 nm, área do feixe de 0,028 cm2) no modo pontual e em contato, nos seguintes parâmetros: 20 mW, 5 J/cm2, 7 s, 0,14 J por ponto. No ensaio de sobrevivência e no de proliferação celular as culturas foram irradiadas ou não por duas vezes (uma imediatamente e outra 6 horas depois). A viabilidade celular foi acessada pelo ensaio de atividade mitocondrial (MTT) em 24, 48 e 72 horas após a aplicação dos meios experimentais. Para a análise de diferenciação celular as culturas foram tratadas da mesma forma, e foram irradiadas por 4 vezes (uma imediatamente e as demais em intervalos de 48 horas até 7 dias). A diferenciação foi observada pelo ensaio do Vermelho de Alizarina em 21 dias. Os dados de viabilidade celular, obtidos no mínimo em triplicata, foram tratados por ANOVA complementado pelo teste de Tukey (p 0,05). As imagens obtidas pelo ensaio de Vermelho de Alizarina foram analisadas qualitativamente. Resultados: Sobrevivência celular foi observada em todos os grupos experimentais. Culturas controle (G1) apresentaram crescimento significativo (p<0,05). Culturas tratadas com o Gluma (G2) diminuíram o número de células viáveis e quando irradiadas (G4) mantiveram esse número. Culturas tratadas com Biovidro (G3) mantiveram o número de células viáveis e apresentaram crescimento significativo quando irradiadas (G5; p<0,05). Culturas controle (G1), e aquelas tratadas com Biovidro (G3) e Biovidro seguido de irradiação (G5) apresentaram diferenciação com formação de nódulos mineralizados. Conclusão: Substâncias liberadas pelo agente dessensibilizante (Gluma) são citotóxicas e em longo prazo a LPT é capaz de minimizar estes efeitos citotóxicos. O Biovidro libera substâncias biocompatíveis que não interferem na diferenciação das células mesenquimais indiferenciadas da polpa dentária humana permitindo a mineralização da matriz extracelular. A LPT melhora a proliferação celular e a resposta dessas células ao Biovidro. / The incidence of Dentine Hypersensitivity (HD) has increased. Desensitizing agents such as Gluma Desensitizer® (Heraeus), or the Bioglasses, as well those considered biostimulatory treatments as the laser phototherapy (LPT) have been applied in an isolated manner. However, these treatments, although producing positive effects, do not have lasting results. Objective: To investigate the effects of substances leached from materials used in the treatment of HD (Gluma and Bioglass), associated or not to LPT, on the survival, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells from human dental pulp. Material and Methods: The Gluma and Bioglass were applied to cell cultures in the form of conditional medium, according to the experimental groups: Group 1 (G1) - Control; Group 2 (G2) - Gluma; Group 3 (G3) - Bioglass; Group 4 (G4) - Gluma + LPT; Group 5 (G5) - Bioglass + LPT. The LPT was performed with diode laser semi-conductor (InGAlP, 660 nm, spot beam size of 0.028 cm2) in punctual and contact mode, in the following parameters: 20 mW, 5 J/cm2, 7 s, 0.14 J per point. In the survival and in the cell proliferation assays the cell cultures were irradiated twice (an immediately and another 6 hours after) or not. The cell viability was assessed by mitochondrial activity (MTT) assay of in 24, 48 and 72 hours after the application of experimental culture medium. For the analysis of cell differentiation the cell cultures were treated in the same way, and were irradiated by 4 times (one immediately and the other one at intervals of 48 hours up to 7 days). The differentiation was observed by testing the alizarin red in 21 days. The data of cellular viability, obtained at least in triplicate, were treated by ANOVA followed by the Tukey test (p 0.05). The images obtained by testing of Alizarin Red were qualitatively analyzed. Results: cell survival was observed in all experimental groups. Control cultures (G1) showed significant growth (p< 0.05). Cultures treated with Gluma (G2) decreased the number of viable cells and when irradiated (G4) maintained this number. Cultures treated with Bioglass (G3) maintained the number of viable cells and showed significant growth when irradiated (G5; p< 0.05). Control cultures (G1) and those treated with Bioglass (G3) and Bioglass followed by irradiation (G5) showed differentiation with formation of mineralized nodules. Conclusion: Substances leached from the desensitizing agent (Gluma) are cytotoxic and the LPT is able to minimize these cytotoxic effects. The Bioglass releases biocompatible substances that do not disturb the differentiation of mesenchymal cells allowing the mineralization of the extracellular matrix. The LPT improves the proliferation of these cells in response of these cells to this material.