Made available in DSpace on 2014-12-05T18:34:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 127.pdf: 3534270 bytes, checksum: c1bdf88f61d63bd01129d24067de8c0d (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O óleo de andiroba é um produto natural extraído das sementes de Carapa guianensis Aubl. que é conhecida por ser repelente de insetos e de ter uma ação antiinflamatória. Trabalhos indicam que os tetranortriterpenóides presentes no óleo são responsáveis por estas ações. Uma metodologia analítica para a quantificação de tetranortriterpenóides em óleo de andiroba foi desenvolvida. Para tanto foi elaborado um método de preparo de amostra com extração em fase sólida e duas metodologias cromatográficas, uma por cromatografia líquida de alta eficiência e outra por cromatografia a gás de alta resolução. Para ovdesenvolvimento do método cromatográfico de CLAE utilizou-se um desenho experimental. O método de extração em fase sólida foi realizado com um suporte de sílica, utilizando clorofórmio para eluir os glicerídeos e uma mistura clorofórmio acetonitrila para eluir os tetranortriterpenóides. O método de cromatogradia líquida foi realizado em modo isocrático com fase móvel composta de água/acetonitrila/metanol 35:35:30, coluna C18 e detecção a 210 nm. O método de cromatografia em fase gasosa foi realizado em coluna de 95 por cento metil silicone com 5 por cento de fenil silicone e detecção em detector de ionização de chama. Para uso como referência na quantificação de tetranortriterpenóides, a 7- desacetoxi-7-oxogedunina, um tetranortriterpenóide, foi isolado através de técnicas diversas como a extração sólido-líquido e extração em fase sólida. A 7-desacetoxi-7- oxogedunina foi caracterizado por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, ressonância magnética nuclear e calorimetria exploratória diferencial. Com a 7-desacetoxi-7-oxogedunina como referência os dois métodos foram pré-validados, ambos apresentando bons resultados para os parâmetros de validação estudados. Este trabalho contribui para a vigilância sanitária do óleo de andiroba e de produtos derivados na medida que fornece uma metodologia de análise, para as substâncias tidas como responsáveis pelas ações farmacológicas deste óleo. / Crabwood oil is a natural product extracted from Carapa guianensis Aubl. seeds, its antiinflammatory and repellent properties must be due to the presence of tetranortriterpenoids in this oil.An analytical methodology for the determination of tetranortriterpenoids in crabwood oil was developed and a sample preparation method involving solid-phase extraction was also developed along with two chromatographic methods, one by high resolution gas chromatography and the other by high performance liquid chromatography. For the development of the HPLC method an experimental design was carried out.The solid-phase extraction method used silica as support, chloroform to elute glycerides and a mixture of chloroform and acetonitrile to elute tetranortriterpenoids. The liquid chromatography was carried out in isocratic mode with mobile ohase composition of water/acetonitrile/methanol 35:35:30, a C18 column and detection at 210 nm. Gas chromatography was carried out with a 95% methyl silicone 5% phenyl silicone column and flame ionization detection.7-desacetoxy-7-oxogedunin was isolated through methods such as solid-liquid extraction and solid-phase extraction, to be used as reference for the determination of tetranortriterpenoids by the analytical methods. 7-desacetoxy-7-oxogedunin was characterized by Gas Chromatography-Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance and Differential Scanning Calorimetry.The use of 7-desacetoxy-7-oxogedunin as reference allowed the prevalidation of the two chromatographic methods developed. Both methods showed good performances in the validation parameters studied.This work contributes to the sanitary surveillance of the crabwood oil and related products since it presents analytical procedures for the determination of the class of substances considered to be responsible for this oil's pharmacological properties.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-01T21:48:23Z No. of bitstreams: 1 Fausto Klabund Ferraris.pdf: 38480448 bytes, checksum: a28eecf79e0cd57527404faee9aba556 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-01T21:48:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fausto Klabund Ferraris.pdf: 38480448 bytes, checksum: a28eecf79e0cd57527404faee9aba556 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Carapa guianensis Aublet é u um membro da família das Meliaceae amplamen nte utilizada na medicina popular no Brasil e em outro os países que abrangem a floresta Amazônica. Nosso grupo descreveu previamente a atividade ant ti-inflamatória e antialérgica de um conjunto dde tetranortriterpenoides (TNTPs) contendo: 6a-acetooxigedunina, 7-deacetoxi-7-oxogedunina, andir robina, angolensato de metila e gedunina, isolados ddas sementes de C. guianensis. No presente e estudo, foram realizados estudos in vitro e in vivo na te entativa de elucidar os mecanismos pelo quais oss TNTPs apresentam os efeitos anti-inflamatório e anti ialérgico, identificando assim as substâncias bioa ativas presentes no óleo. Nós mostramos que a incuba ação in vitro de esplenócitos com o conjunto de TNTPs, bem como com cada um dos TNTPs isolados s foi capaz de inibir a ativação, proliferação e a p produção in vitro de IL-2, CCL11/Eotaxina e CCL5/RAN NTES em linfócitos T através do bloqueio da tran nslocação do fator NF.B. Além disso, a incubação in v vitro de eosinófilos com o conjunto de TNTPs, b bem como com cada um dos cinco TNTPs isolados, inibiu a adesão e quimiotaxia destas células. Consistente com estes dados, nós demonstramos qque a gedunina apresenta uma importante at ividade antialérgica em modelos in vivo de inflamaçãão alérgica (pleurisia alérgica e inflamação aguuda pulmonar alérgica). Descobrimos que a pleuris sia alérgica induzida por ovalbumina (OVA) eem camundongos pré- sensibilizados foi significativa amente reduzida com o pré-tratamento com geddunina; esta inibição foi principalmente devido ao blo oqueio do influxo de eosinófilos e de linfócitos T T. O pré-tratamento com gedunina diminuiu os níveis d de CCL2, CCL3, CCL5, CCL11, IL-5 e LTB4 na ccavidade pleural. O pré- tratamento in vivo com gedun nina reduziu o número de linfócitos T ativados n na pleura e no linfonodo torácico após 24 h do desafioo com OVA. O tratamento in vitro de linfócitos T T com gedunina inibiu a ativação, proliferação, produç ção de IL-2 e translocação de NF.B e de NFAT in nduzido por a-CD3 mAb. Notavelmente, o pós-tratme ento com gedunina reverteu a inflamação ag guda pulmonar alérgica induzida por OVA, diminuind do as contagens de linfócitos T e eosinófilos; e e níveis de mediadores eosinofilotáticos no lavado brroncoalveolar. Nosso grupo previamente demon nstrou que a endotelina (ET)-1 desempenha importan nte papel pró-inflamatório na resposta inflamatóri ia articular aguda. Desta forma, nós avaliamos os efeiittos anti-inflamatório e –nociceptivos da geduninaa na artrite induzida por zymosan e seu efeito biológic co na expressão de ET-1. A injeção intra-articula ar com zymosan induz a expressão de RNAm para ppreproET-1, levando a produção de TNF-a, LTBB4 e IL-6 resultando no influxo de neutrófilos, forma ação de edema e hiperalgesia. Pré-e pós-tra atamento com gedunina diminuiram o acúmulo de ne eutrófilos, inchaço na articulação do joelho, exp pressão de RNAm para preproET-1 e produção de mediadores inflamatórios. Além disso, o pré-ttratamento in vitro com gedunina inibiu a ativação e quimiotaxia de neutrófilos induzida por ET-1. Em m conclusão, o presente estudo mostrou que os TNTP Ps apresentam notável atividade anti-inflamatória e antialérgica inibindo a ativação e migração de leucóccitos; e bloqueando diferentes mediadores pró-in nflamatórios. / Carapa guianensis Aublet is aa member of the Meliaceae family widely used i n folk medicine in Brazil and other countries encompa assing the Amazon rainforest. Our group has p previously described the anti-inflammatory and anti-alllergic activities of a pooled fraction of tetran nortriterpenoids (TNTPs) containing: 6a-acetoxygedun nin, 7-deacetoxy-7-oxogedunin, andirobin, me ethyl angolensate and gedunin, isolated from the se eeds of C. guianensis. In the present study, we p performed in vitro and in vivo studies in order to elucidaate the mechanisms by which TNTPs present the eir anti-inflammatory and anti-allergic effects and to ide entify the bioactive compound(s) present in such fraction. Here, we show that in vitro incubation of espllenocytes with the pooled TNTP fraction, as well as with each one of the five isolated TNTPs were able e to inhibit T lymphocyte activation, proliferation a and in vitro production of IL-2, CCL11/Eotaxin and CCLL5/RANTES by impaired NF.B nuclear transloc ation. Moreover, in vitro incubation of eosinophils with h the pooled TNTP fraction, as well as with each h one of the five isolated TNTPs, inhibited the adhesio on and chemotaxis of eosinophils. In accordan nce with these data, we demonstrate that gedunin pr resents an important anti-allergic activity in in vivo models of allergic inflammation (allergic pleurisyy and acute lung allergic inflammation). We fou und that allergic pleurisy induced by ovalbumin (OVA) in presensitized mice was significantly diminish hed by the pre-treatment with gedunin; this inhibition w was primarily due to the impairment of eosinophil aand T lymphocyte influx. Pre-treatment with gedunin diiminished the levels of CCL2, CCL3, CCL5, CCL L11, IL-5 and LTB4 at the pleural cavity. In vivo pre-trea atment with gedunin reduced the numbers of act tivated T lymphocytes in the pleura and in the thorac cic lymph nodes 24 h after OVA -challenge. In vitro treatment of T lymphocytes with gedunin inh hibited a-CD3 mAb-induced activation, proliferatiion, IL-2 production and nuclear translocation of NF.BB and NFAT. Notably, post-treatment of mice with h gedunin reverted OVA- induced lung allergic inflamm mation by decreasing the T lymphocyte and eos sinophil counts; and the levels of eosinophilotactic mmediators in bronchoalveolar lavage fluid. Our group have previously demonstrated that endothellin (ET)-1 plays a pivotal pro-inflammatory role in acute articular inflammatory response. Thus,, we evaluated the anti-inflammatory and –nocice eptive effects of gedunin in zymosan-induced arthritis aand its effects on ET-1 expression and biologica al function. Intra-articular zymosan stimulation induced d preproET-1 mRNA expression, production of TNF-a, LTB4 and IL-6 resulting in neutrophil influx, , oedema formation and hyperalgesia. Gedunin n pre-or post-treatment decreased zymosan-induced d neutrophil accumulation, knee joint swellin ng, preproET-1 mRNA expression and production of inflammatory mediators. Moreover, in vitro gedunin pre-treatment inhibited neutrophil activation and chemotaxis ET-1-induced. In conclusion, thhe current results reveal that TNTPs presents remark kable anti-inflammatory and anti-allergic activity y by inhibiting leukocyte activation and migratio on; and blocking different pro-infla ammatory mediators.