Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Livia Eidam.pdf: 4492366 bytes, checksum: 6f8d83617df523059e48fdad789c558f (MD5) Previous issue date: 2015-02-12 / Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns, also known as janauba, belonging to the Euphorbiaceae family and it is the nomenclature accepts for Synadenium grantii Hook. f and Synadenium umbellatum Pax, which are synonymies according to some bibliographical references. It is popularly an employed species for the treatment of several cancer types, being the latex the vegetable part used for this purpose. In way to identify the species correctly, to contribute with the quality control and to correlate scientific studies of evaluation anticancer with the use etnopharmacologic, the proposed objectives were: to explore the morphoanatomy of E. umbellata; to evaluate the toxicity for the cells HeLa, HRT-18 and Jurkat and to proceed the phytochemistry investigation in the search of active substances. For the analysis macro and microscopic, leaves and stems of specimens designated as Synadenium grantii Hook. F (in Ponta Grossa) and Synadenium umbellatum Pax (in Goiânia) were previously fixed fastened in FAA solution. The material was sectioned by hand in the transverse and longitudinal directions. Astra blue and basic fuchsin were employed for staining. The citotoxicity of the latex was studied through biological rehearsals, with methodologies of mitochondrial reduction for MTT, internalization of VN for lysosomes; morphology for May Grunwald and Giemsa; membrane integrity for trypan blue; calculation of IC50; quantification of the content of DNA for DPA and propidium iodide; morphology for acridine orange and flow citometry. The phytochemistry, accomplished by accompaniment of biological rehearsals (biomonitored) results, it was done with the fraction Hex. The results ethnobotanical proved that the two specimens evaluated treat of the same plant which should be correctly denominated Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns. These results elucidated the epicuticular wax, paracytic stomata and non-glandular trichomes; as well as laticifers; and they revealed chemical markers as the outstanding presence of the latex; composed lipophilic and phenolics compounds; starch and mucilage. The experimentation in vitro showed that the leukemic cells were firstly more responsive to the latex and later to the fraction Hex. IC50 calculated for the hexane fraction was of 1,87 μg/mL, value this that turns the composed phytocomplex of this fraction a promising antitumoral agents. After comparison with IC50 of non neolpasic cells, it was demonstrated IS of 5,98 and this corroborates the existence of selectivity action in relation to the analyzed cells. For flow citometry stop of cellular progression was verified, with substantial increase of the cells in phase G0/G1 and decrease of these in the phase G2/M. The phytochemistry study could contribute to the isolation of two identified triterpenes for techniques of nuclear magnetic resonance (RMN), being a pentacyclic denominated as germanicol acetate and for the first time isolated of this vegetable species and other tetracyclic designated euphol and already isolated of this Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns. / Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns, conhecida também por janaúba, pertencente a família Euphorbiaceae e é a nomenclatura aceita para Synadenium grantii Hook. f e Synadenium umbellatum Pax, as quais são sinonímias segundo algumas referências bibliográficas. É uma espécie empregada popularmente para o tratamento de diversos tipos de câncer, sendo o látex a parte vegetal utilizada para este fim. De forma a identificar corretamente a espécie, contribuir com o controle de qualidade e correlacionar estudos científicos de avaliação anticâncer com o uso etnofarmacológico, os objetivos propostos foram: explorar a morfoanatomia de E. umbellata; avaliar a toxicidade para as células HeLa, HRT-18 e Jurkat e proceder a investigação fitoquímica na busca de substâncias ativas. Para a análise macro e microscópica, folhas e caules de espécimes designados como Synadenium grantii Hook. F (em Ponta Grossa) e Synadenium umbellatum Pax (em Goiania) foram previamente fixados em solução FAA. O material foi cortado à mão nos sentidos transversal e longitudinal. Azul de astra e fucsina básica foram utilizados para a coloração. A citotoxicidade do látex foi estudada através de ensaios biológicos, com metodologias de redução mitocondrial por MTT, internalização de VN por lisossomos; morfologia por May Grunwald e Giemsa; integridade de membrana por azul de tripan; cálculo de IC50; quantificação do conteúdo de DNA por DPA e iodeto de propídio; morfologia por alaranjado de acridina e citometria de fluxo. A fitoquímica, realizada por acompanhamento dos resultados dos ensaios biológicos (biomonitorado), foi feita com a fração Hex. Os resultados etnobotânicos comprovaram que as duas espécimes avaliadas tratam da mesma planta a qual deve ser corretamente denominada Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns. Estes resultados elucidaram a existência de cêra epicuticular, estômatos paracíticos e tricomas tectores; assim como os tubos laticíferos; e revelaram marcadores químicos como a marcante presença do látex; compostos lipofílicos e fenólicos; amido e mucilagem. A xperimentação in vitro mostrou que as células leucêmicas foram primeiramente mais responsivas ao látex e posteriormente à fração Hex. O IC50 calculado para a fração hexânica foi de 1,87 μg/mL, valor este que torna o fitocomplexo constituidor desta fração um promissor agente antitumoral. Após comparação com o IC50 de células não neoplásicas, foi demonstrado IS de 5,98 e isso corrobora a existência de seletividade de ação em relação às células analisadas. Por citometria de fluxo verificou-se parada de progressão celular, com aumento substancial das células em fase G0/G1 e diminuição destas na fase G2/M. O estudo fitoquímico pôde contribuir para o isolamento de dois triterpenos identificados por técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN), sendo um pentacíclico denominado como acetato de germanicol e pela primeira vez isolado desta espécie vegetal e outro tetracíclico designado eufol e já isolado de Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nas Ãltimas dÃcadas, as lectinas vegetais tÃm atraÃdo grande interesse devido Ãs suas diversas atividades biolÃgicas das quais se destaca a aÃÃo antitumoral in vivo e in vitro que, em geral, causa a inibiÃÃo do crescimento celular e a induÃÃo da morte celular por apoptose. No presente estudo, foi investigado o efeito da lectina de Dioclea altissima (DAL), uma lectina de leguminosa, alfa-D-manose ligante, sobre as linhagens tumorais A549 (carcinoma pulmonar), OVCAR-8 (carcinoma de ovÃrio) e PC3M (carcinoma de prÃstata) e linhagem normal CMSP (cÃlulas do tecido sanguÃneo). DAL foi isolada e purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex G-50 e sua citotoxicidade foi avaliada atravÃs do ensaio do MTT. DAL foi seletivamente citotÃxica para as cÃlulas cancerÃgenas A549, PC3M, apÃs 48 e 72 horas de incubaÃÃo, e para OVCAR-8, apÃs 72 horas de tratamento apresentando valores de CI50 entre 23,0 e 55,7 μg/mL, promovendo aglutinaÃÃo celular a partir de 24 horas de incubaÃÃo. DAL nÃo se mostrou citotÃxica para cÃlulas normais. O teste do cometa revelou que DAL nÃo causa dano direto ao DNA. A linhagem PC3M foi selecionada para anÃlise proteÃmica por espectrometria de massas (nanoUPLC nanoESI-MSE) por apresentar maior sensibilidade à DAL. ApÃs tratamento das cÃlulas com diversas concentraÃÃes de DAL, por 24, 48 e 72 horas, foi identificado um total de 837 proteÃnas vÃlidas, 140 (24h), 321 (48h) e 376 (72h). O estudo das proteÃnas diferencialmente expressas das cÃlulas tratadas com a lectina em relaÃÃo ao controle definiu o efeito citotÃxico de DAL em PC3M como apoptÃtico gerado, principalmente, via estresse do retÃculo endoplasmÃtico. / Recently, plant lectins have attracted great interest due to their several biological activities of which stands out the antitumoral action in vivo and in vitro that in general result in inhibition of cell growth and induction of cell death by apoptosis. In the present study, it was investigated the effect of the Dioclea altissima (DAL) lectin, a legume alfa-D-mannose ligand lectin on A549 (lung cancer), OVCAR-8 (ovarian cancer) and PC3M (prostate cancer) and normal line PBMC (cell blood tissue). DAL was isolated and purified by affinity chromatography on a Sephadex G-50 column and its cytotoxicity was evaluated by MTT assay. DAL was selectively cytotoxic to cancer cells A549, PC3M after 48 and 72 hours of incubation, and OVCAR-8 after 72 hours of treatment with DAL (CI50 values between 23.0 e 55.7 μg/mL). Moreover, it was observed cell agglutination from 24 hours of incubation. Comet assay revealed DAL does not cause direct DNA damage. The line PC3M was selected for proteomic analysis by mass spectrometry (nanoUPLC nanoESI-MSE) to present the best evidence of sensitivity to DAL. PC3M line was treated with various concentrations of DAL during 24, 48 e 72 hours, it was identified a total of 837 proteins, 140 (24h), 321 (48h) e 376 (72h). The study of differential protein expression of the DAL-treated PC3M cells compared to control demonstrated apoptotic effect generated, mainly, via ER stressed-dependent.