ARAÚJO. I. V. Anemia falciforme: crises vaso-oclusivas parecem estar relacionadas à redução da concentração de proteínas na membrana eritrocitária. 2015. 75 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:39:18Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_ivaraujo.pdf: 2013061 bytes, checksum: 46f0a4a730017e6a50ea1794feb4d555 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_ivaraujo.pdf: 2013061 bytes, checksum: 46f0a4a730017e6a50ea1794feb4d555 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_ivaraujo.pdf: 2013061 bytes, checksum: 46f0a4a730017e6a50ea1794feb4d555 (MD5) Previous issue date: 2015 / Sickle cell anemia is a common genetic disorder resulting from a specific change in position six of the hemoglobin gene, which results in different alleles, which when transcribed, codes for hemoglobin S which leads to the formation of sickle erythrocytes. Red blood cells containing hemoglobin S acquire in hypoxic conditions, the sickle-shaped, causing vaso-occlusive crisis in patients. This study aimed to isolate erythrocyte membrane proteins of patients with sickle cell anemia (in symptomatic and asymptomatic stages) and to correlate changes identified in these periods, using High Performance Liquid Chromatography (HPLC - ion exchange), SDS-PAGE (1D and 2D) and Mass Spectrometry (MS-ESI)). Was performed proteomic analysis in erythrocyte membrane proteins obtained from peripheral blood samples from three patients, collected over two years, and separated according to the presence (PC) or absence of vaso-occlusive crisis (PSC) at the time of collection. The control group consisted of two individuals with no diagnosis of hemoglobinopathies. We identified the presence of a higher concentration of membrane proteins in sickle cell erythrocytes, particularly in CSP patients and showed that during attacks the amount of protein present in the erythrocyte membrane of patients undergoes reduction (20.7% -PC1; 34 2% - PC3 and 45.2% - PC2). Among the 159 membrane proteins extracted from sickle cell erythrocytes, 148 were identified and 11 were not identified, using as parameter the database ExPASy TagIdent. Among the proteins not identified, six were extracted from the plasma membrane of PC patients and five PSC patients. The identification of PRDX2 protein (peroxiredoxin with an apparent molecular mass of 41 kDa) with an apparent molecular weight below 30 kDa, suggesting the structural change of this protein. Failure to identify 11 proteins extracted membrane of sickle cell erythrocytes suggests quantitative changes in protein expression of these patients. Our results also suggest that the vaso-occlusive crises may be related to a reduction in total protein concentration of the erythrocyte membrane in patients. / A anemia falciforme é uma doença genética frequente, decorrente de uma modificação pontual na posição seis do gene da hemoglobina, que resulta em alelos diferentes, que quando transcrito, codifica a hemoglobina S, que leva a formação das hemácias falcêmicas. As hemácias contendo hemoglobina S adquirem, em condições de hipóxia, a forma de foice, causando crise vaso oclusiva nos portadores. O presente trabalho teve como objetivo isolar proteínas da membrana eritrocitária de pacientes com anemia falciforme (nas fases sintomática e assintomática) e correlacionar alterações identificadas nestes períodos, utilizando Cromatografia Líquida de Alta Pressão (HPLC)-Troca iônica, SDS-PAGE 1D e 2D e Espectrometria de Massa (MS). Foi realizada análise proteômica em proteínas de membrana eritrocitária obtidas de amostras de sangue periférico de três pacientes, colhidas ao longo de dois anos, e separadas de acordo com a presença (PC) ou ausência de crise vaso oclusiva (PSC) no momento da coleta. O grupo controle foi formado por dois indivíduos sem diagnóstico de hemoglobinopatia. Foi identificada a presença de maior concentração de proteínas na membrana de eritrócitos falcêmicos, em especial nos pacientes PSC e evidenciou-se que durante as crises a quantidade de proteína presente na membrana do eritrócito dos pacientes sofre redução (20,7% - PC1; 34,2% - PC3 e 45,2% - PC2). Dentre as 159 proteínas extraídas da membrana de eritrócitos falcêmicos, 148 foram identificadas, e 11 não foram identificadas, usando-se como parâmetro a base de dados TagIdent ExPASy. Dentre as proteínas não identificadas, seis foram extraídas da membrana eritrocitária de pacientes PC e cinco de pacientes PSC. A identificação da proteína PRDX2 (uma peroxirredoxina com massa molecular aparente de 41 kDa) com massa molecular aparente inferior a 30 kDa sugere a alteração estrutural desta proteína. A não identificação de 11 proteínas extraídas da membrana de eritrócitos falcêmicos sugere alteração quantitativa na expressão proteica destes pacientes. Nossos resultados sugerem ainda que as crises vaso-oclusivas podem estar relacionadas a uma redução na concentração total de proteínas da membrana eritrocitária nos pacientes.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-24T18:26:43Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-24T18:26:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-24T18:27:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-24T18:27:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2014-09-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Introduction The SLC4A1 gene responsible for the expression of the Band 3 (anion exchanger AE1 1), has the exons 4,5,6 involved in the expression of the band 3 Memphis and exons 18:19 linked to expression system erythrocyte polymorphisms presenting Diego very important anthropological and transfusion. Polymorphisms in this gene have also been described associated with changes in erythrocyte membrane as spherocytosis, hereditary and ovalocitose elliptocytosis. Given these associations, and the few studies in the Brazilian population, we studied associations between polymorphisms of SLC4A1 gene changes in erythrocyte membrane in hematological patients of the Hematology Foundation of Amazonas (FHEMOAM). Objective: To investigate polymorphism in exon 4, 5, 6, 18 and 19 of the SLC4A1 gene in patients with and without changes in the erythrocyte membrane. Materials and Methods: We performed AS-PCR and gene sequencing in 385 patients for hematological diagnosis. clinical and laboratory tests where associations were established with polymorphisms in the SLC4A1 gene were considered. Results: We collected 385 samples from patients and trainees 4 groups: Group A. anemic patients with poikilocytosis and / or anisocytosis Group B. anemic patients without poikilocytosis and / or anisocytosis Group C patients without anemia with poikilocytosis and / or anisocytosis and group D. healthy individuals who, on the various polymorphisms observed in our study, the SLC4A1 gene may be considered polymorphic, among them more than 5 nucleotide changes that cause changes in the sequence of amino acids that contituem protein band 3. in our studies They were also found through statistical correlations, two SNPs that are possibly associated with protection factor will anemia and 2 SNPs that are probably associated with the anemia risk factor. For exon 19 were sequenced, 302 samples, we found that the allele DI*A an incidence of 5.30%, and B*DI allele with a frequency of 94.70% and correlate the A166G (Band 3-Memphis) . Given the results, the allele was found DI * The correlated with 166A (Band 3 -Normal), so found a new variant of allele DI*A. / Introdução O gene SLC4A1, responsável pela expressão da Banda 3 (anion exchanger 1- AE1), tem os exons 4,5,6 envolvidos na expressão da banda 3 Memphis e os exons 18 e 19 ligados a expressão do sistema eritrocitário Diego apresentando polimorfismos de grande importância antropológica e transfusional. Polimorfismos envolvendo este gene já foram descritos também associados às alterações na membrana eritrocitária como esferocitose, ovalocitose e eliptocitose hereditária. Diante dessas associações, além dos poucos estudos realizados na população brasileira, estudamos associações entre polimorfismos do gene SLC4A1 com alterações da membrana eritrocitária em pacientes hematológicos da Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas (FHEMOAM). Objetivo: Investigar polimorfismo nos exon 4, 5, 6, 18 e 19 do gene SLC4A1, em pacientes com e sem alterações na membrana eritrocitária. Materiais e Métodos: Foram realizadas técnicas de AS-PCR e sequenciamento gênico em 385 pacientes hematológicos para esclarecimento diagnóstico. Foram consideradas as análises clínicas e laboratoriais onde foram estabelecidas as associações com os polimorfismos no gene SLC4A1. Resultados: Foram coletadas 385 amostras de pacientes sendo formandos 4 grupos: Grupo A. pacientes anêmicos com poiquilocitose e/ou anisocitose, Grupo B. pacientes anêmicos sem poiquilocitose e/ou anisocitose, Grupo C. pacientes sem anemia com poiquilocitose e/ou anisocitose e Grupo D. indivíduos saudáveis, que, diante dos vários polimorfismos observados em nosso estudo, o gene SLC4A1 pode ser considerado polimórfico, dentre eles, mais de 5 alterações nucleotídicas que causam alteração na sequencia de aminoácidos que contituem a proteína banda 3. Em nossos estudos foram encontrados também, através de correlações estatísticas, dois SNPs que possivelmente estejam associados ao fator de proteção á anemia e 2 SNPs que provavelmente estejam associados ao fator de risco da anemia. Para o exon 19 foram sequenciadas, 302 amostras, constatamos que o alelo DI* A ocorre numa incidência de 5,30% e o alelo DI*B com uma frequência de 94,70% e que correlacionamos o A166G (Banda 3-Memphis). Diante dos resultados, foi encontrado o alelo DI*A correlacionada com a 166A (Banda 3 –Normal),sendo assim constatado uma nova variante do alelo DI*A.