Made available in DSpace on 2016-06-02T19:50:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4007.pdf: 5351648 bytes, checksum: f688a838fb228d477779e8dd808eed22 (MD5) Previous issue date: 2011-08-26 / Embrapa Instrumentação Agropecuária / The global need to ensure food quality and safety has always been a concern of primary producers, processors, distributors, consumers and governmental bodies. On the other hand, notified cases of food borne disease still cause a wide range of negative social and economic impacts worldwide. Current technology for production of Minimally Processed Vegetables (MPV) entails a series of critical steps, which can lead to product contamination by biological, chemical or physical hazards if adequate controls are not observed, and yielding potentially unsafe food products. Such concerns become even more important given that MPV`s production chains involve mostly small producers and/or enterprises in rural settings, which typically lack qualified training and specific skills. To address this challenge, the present work proposes a customized quality and safety management system for MPVs. Initially, an integrative literature search was conducted to cover topics such as quality management theory, food safety systems, MPV technology, and supply chain management as an initial step to direct a multiple case study. Field work was then performed for two MPV chains, involving a total of 18 observation units composed of rural producers, processors, shippers and distributors for retail or institutional markets, so that the system could be developed to meet the actual needs and requirements of MPV chains. Its guiding principle is the management of quality attributes of MPVs, as demanded by consumers, via the operational implications of these attributes throughout the production chain. The system also includes a performance evaluation protocol to ensure continuous process optimization. As a result, the system´s structure operates at a simple managing level, triggering systemic process vision and effective cooperation among stakeholders, while empowering them by their direct leadership and coordination of the system and ensuing processes. Finally, a working model for the proposed system is applied to minimally processed lettuce. In addition to being a tool to plan the implementation of quality and safety management protocols in this specific MPV chain, the system can also be used by MPV processors as a mainframe to guide their internal and supplier´s audits, as well as by retail and institutional companies. / A necessidade mundial de se garantir a qualidade e a segurança dos alimentos sempre foi uma preocupação de produtores primários, processadores e distribuidores de alimentos, além dos próprios consumidores e organismos governamentais. Por outro lado, os casos notificados de toxi-infecções alimentares no mundo continuam a impactar a saúde pública com conseqüencias sociais e econômicas significativas e negativas. A tecnologia de processamento mínimo de vegetais (PMV) compreende uma série de etapas críticas que, em caso de desvio de controles necessários, pode favorecer a contaminação dos produtos ao longo da cadeia por perigos químicos, físicos e microbiológicos, resultando em produtos finais potencialmente inseguros para a saúde do consumidor. Estas questões se tornam ainda mais importantes considerando que esta cadeia de produção é composta de pequenos produtores rurais e pequenas empresas, em sua maioria, com baixa tecnificação e com o emprego de mão-de-obra não qualificada. Este trabalho teve por objetivo propor um sistema customizado de gestão da qualidade e da segurança para vegetais minimamente processados. Para isto, foi realizada uma pesquisa bibliográfica baseada na teoria de gestão da qualidade, de segurança de alimentos, da tecnologia de PMV, de gestão da cadeia de suprimentos e de custos de transação no intuito de reunir elementos para guiar o estudo de casos múltiplos. A pesquisa de campo foi realizada em duas cadeias de PMV, reunindo ao todo 18 unidades de análise compostas por produtores rurais, processadores, transportadores e distribuidores (mercados varejista e institucional) dos vegetais processados. O sistema proposto é focado na realidade desta cadeia agroindustrial, tendo como princípio a gestão pelos atributos da qualidade exigidos pelos clientes, por meio de seus desdobramentos ao longo da cadeia, e uma componente de avaliação de desempenho para melhoria contínua dos processos. Esta estrutura resulta em um nível de gestão simples, de visão sistêmica e de cooperação mútua entre os agentes desta cadeia, onde a empresa processadora lidera e coordena estas ações. Ao final do trabalho, o sistema é ilustrado utilizando-se o exemplo do processamento mínimo de alface americana. O sistema proposto, além de ser uma referência para planejar a implantação da gestão da qualidade e da segurança nesta cadeia, também pode pode ser utilizado como uma estrutura para guiar auditorias internas e em fornecedores para as processadoras de vegetais minimamente processados e para as empresas do mercado varejista/institucional, respectivamente.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-02-01T15:00:05Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1370224 bytes, checksum: 70866254562076b628edd3331cf9b3bc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T15:00:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1370224 bytes, checksum: 70866254562076b628edd3331cf9b3bc (MD5) Previous issue date: 2015-04-10 / Minimally processed vegetables are ready-to-eat products that undergo to a physical modification processes such as cutting, peeling and slicing, but preserve characteristics of a fresh food. When processed under unsatisfactory sanitary conditions, these products may represent microbiological risk and, therefore, sanitation becomes a critical step processing. In the present study the effects of the application of the essential oils (EOs) from Origanum vulgare L. – oregano (OVEO) and Rosmarinus officinalis L. – rosemary (ROEO), alone or combined at sub-inhibitory concentrations were assessed against the pathogenic bacteria contaminants of minimally processed vegetables, Listeria monocytogenes, Escherichia coli and Salmonella Enteritidis. The identification of the EOs’ constituents was performed by gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS). The inhibitory effects were evaluated by determination of minimum inhibitory concentration (MIC), fractional inhibitory concentration index (FICI) and assessment of viable cell counts in vegetable broth and artificially infected vegetable over time. Thymol and eucalyptol were the major compounds identified in OVEO and ROEO, respectively. MIC value of OVEO was 0.6 μL/mL against the test strains either in single and mixed inoculum. MIC value of ROEO was 5 μL/mL against L. monocytogenes and E. coli and 10 μL/mL against S. Enteritidis in single inocula, while it was 10 μL/mL against the mixed inoculum. FICI of the combined EOs was 0.5 against the mixed bacterial inoculum, suggesting synergic interaction. The incorporation of OVEO and ROEO alone (MIC) or at different sub-inhibitory concentrations in vegetable broth resulted in decrease of viable cell counts of all test strains along the 24 h. A ≥ 3 log cycles reduction in viable cell count of L. monocytogenes, E. coli and S. Enteritidis was observed after exposure to OVEO at MIC. When exposed to ROEO at MIC, the same reduction was observed for cells of L. monocytogenes and E. coli, while S. Enteritidis presented smaller decrease (up to 1.7 log cycles) in viable cell counts. The incorporation of OVEO and ROEO combined at sub-inhibitory concentrations resulted in a decrease in initial viable counts of all strains tested, although the time requested to stablish this decrease varied according to the strain and amount of each EO in combination. Likewise, the EOs applied alone or in combination reduced the viable cell counts of all test strains when essayed in artificially infected vegetables. However, the exposure of vegetables to EOs for 10 minutes caused a greater reduction in viable cell counts compared to results obtained after 5 minutes of exposure. In both essays was observed that the inhibitory effects of the EOs varied according to the time and strain. These findings reinforce the rational use of OVEO and ROEO combined at sub-inhibitory concentrations to guarantee the safety and extend the shelf-life of fresh vegetables. It is also suggested carrying out scientific researches aimed to study the toxicity in animals and /or human cells, in order to ensure the health safety of these oils when used in food. / Hortaliças minimamente processadas são produtos prontos para consumo que foram submetidos a processos de modificação física como corte, descascamento e fatiamento, mas que preservam as características de um alimento fresco. Quando processados sob condições higiênico-sanitárias insatisfatórias, esses produtos podem representar risco microbiológico e, portanto, a sanitização é uma etapa crítica do processamento. No presente estudo foi avaliado o efeito da aplicação dos óleos essenciais de Origanum vulgare L. - orégano (OEOV) e Rosmarinus officinalis L. - alecrim (OERO), isolados e combinados em concentrações sub-inibitórias, contra as bactérias patogênicas contaminantes de hortaliças minimamente processadas Listeria monocytogenes, Escherichia coli e Salmonella Enteritidis. A identificação dos constituintes dos óleos essenciais (OEs) foi realizada por meio de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-MS). Os efeitos inibitórios foram avaliados pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM), índice de concentração inibitória fracional (FICI) e avaliação de contagens de células viáveis em caldo vegetal e em vegetais frescos artificialmente contaminados. Timol e eucaliptol foram os compostos majoritários detectados no OEOV e OERO, respectivamente. O valor da CIM do OEOV foi de 0,6 μL/mL frente às cepas teste em inóculo simples e misto, enquanto o valor da CIM do OERO foi de 5μL/mL frente L. monocytogenes e E. coli e 10 μL/mL frente S. Enteritidis em inóculo simples e 10 μL/mL contra o inóculo misto. O ICIF dos OEs combinados foi de 0,5 frente o inóculo bacteriano misto, sugerindo interação sinérgica. A incorporação do OEOV e OERO isolados (CIM) ou em diferentes concentrações sub-inibitórias no caldo vegetal resultou em diminuição de contagens de células viáveis de todas as cepas de teste ao longo de 24 h. Uma redução ≥ 3 ciclos log na contagem de células viáveis de L. monocytogenes, E. coli e S. Enteritidis foi observada após a exposição a CIM do OEOV. Quando expostas a CIM do OERO, essa redução foi observada para as células de L. monocytogenes e E. coli, enquanto S. Enteritidis apresentou menor redução (até 1,7 ciclos log) na contagem de células viáveis. A incorporação de OEOV e OERO combinados em concentrações sub-inibitórias resultou em redução da contagem inicial de células viáveis de todas as cepas ensaiadas, embora o tempo necessário para estabelecer esta diminuição variou de acordo com a cepa e quantidade de cada OE na combinação. Da mesma forma, OEs aplicados isoladamente ou em combinação reduziram as contagens de células viáveis de todas as cepas teste quando ensaiadas em vegetais frescos artificialmente infectados. No entanto, a exposição dos vegetais aos OEs isolados e em combinação durante 10 minutos causou uma maior redução nas contagens de células viáveis quando comparado aos resultados obtidos após 5 minutos de exposição. Em ambos os ensaios observou-se que os efeitos inibitórios dos OEs variaram de acordo com o tempo e o tipo de cepa. Esses achados reforçam a utilização racional dos OEOV e OERO combinados em concentrações sub-inibitórias para garantir a segurança e prolongar a vida de prateleira de vegetais frescos. Sugere-se ainda a realização de pesquisas científicas voltadas para o estudo da toxicidade em animais e/ou com células humanas, de modo a assegurar a inocuidade destes OEs quando aplicados em alimentos.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1319855 bytes, checksum: c9da3a0b2d2daa085371bfaec1a3a590 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The demand for fresh foods, with lower calories, high nutritional values and easily prepared has been increased the consumption of minimally processed vegetables. However, because the intense handling these products has been considered a potential problem to the microbiological safety, related mainly to the presence of psychrotrophic pathogenic and spoilage bacteria. The sanitization is considered a critical processing step for minimally processed vegetables, although some of the synthetic sanitizers allowed for the use in vegetables are cited as responsible for undesirable effects to consumers. In this context, as alternative to the synthetic sanitizers arise the essential oils, whose antimicrobial action mechanism is attributed, many times, to their majority compounds. Regarding these aspects, this study aimed to evaluate the potential application of carvacrol and 1,8-cineole against some strains of minimally processed vegetables contaminant bacteria (Listeria monocytogenes ATCC 7644, Aeromonas hydrophila INCQS 7966 and Pseudomonas fluorescens ATCC 11253), in mixed culture, by determining the values of Minimum Inhibitory Concentration (MIC), the index of Fractional Inhibitory Concentration (FIC), as well as by assessing the efficacy of the application of these compounds in inhibiting the growth and survival of the mixed bacterial inoculum in vegetable broth and in leafy vegetables. Moreover, it was performed the assessment of possible damage caused by the tested compounds in the morphology of the bacterial cells by the analysis of confocal microscopy and scanning electronic microscopy. MIC values of carvacrol and 1,8-cineole ranged from 1.25 e 40μL/mL, respectively. The FIC index against the mixed bacterial inoculum was 0.25, suggesting a synergic interaction between the tested compounds. The application of the compounds alone or combined in sub-inhibitory concentrations in vegetable broth caused a significant decrease (p <0.05) in counts (CFU/mL) of the tested bacteria over 24 h. The exposure of vegetables to the compounds for only 5 min also caused a significant reduction (p < 0.05) in counts of the tested bacteria. The observations of bacterial cell morphology suggest that the compounds carvacrol and 1,8-cineole alone or combined in sub-inhibitory concentrations, cause damage to the cell viability, and change the permeability of the cytoplasmic membrane and the cell surface, with the appearance of roughness appearance and like-vesicles structures. These results show that carvacrol and 1,8-cineole possess strong inhibitory effect of the growth and survival of bacteria associated with minimally processed vegetables when tested in mixed culture. Still, these data confirm that constituents of essential oils, with different molecular structures, when applied in combination can replace traditional synthetic sanitizing used in minimally processed vegetables allowing reaching the balance between the demand for microbiological safety and sensory acceptability of these products. / A demanda por alimentos frescos, de baixo teor calórico, elevados valores nutricionais e de fácil preparo, tem elevado o consumo de hortaliças minimamente processadas. Entretanto, devido a sua intensa manipulação estes produtos têm sido considerados um potencial problema de segurança microbiológica, envolvendo principalmente bactérias psicrotróficas patogênicas e deteriorantes. A sanitização é considerada uma etapa crítica do processamento deste de hortaliças minimamente processadas, embora alguns dos sanitizantes sintéticos permitidos para uso em vegetais sejam citados como responsáveis por efeitos indesejáveis para o consumidor. Neste sentido, como alternativa aos sanitizantes sintéticos, surgem os óleos essenciais, cujo potencial antimicrobiano é atribuído, muitas vezes, aos seus compostos majoritários. Diante deste contexto, este estudo objetivou avaliar o potencial da aplicação dos constituintes carvacrol e 1,8-cineol na inibição de cepas de bactérias contaminantes de vegetais minimamente processados (Listeria monocytogenes ATCC 7644, Aeromonas hydrophila ATCC 7966 e Pseudomonas fluorescens ATCC 11253), em inóculo misto, através da determinação dos valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM), do índice de Concentração Inibitória Fracionada (CIF), bem como da influência da aplicação desses compostos na inibição do crescimento e sobrevivência do inóculo misto bacteriano em caldo vegetal e em vegetais folhosos. Além disso, foi realizada a avaliação dos possíveis danos causados pelos compostos testados à morfologia das células bacterianas através de análises de microscopia confocal e microscopia eletrônica de varredura. Os valores de CIM do carvacrol e do 1,8-cineol foram 1,25 e 40 μL/mL, respectivamente. O índice de CIF frente ao inóculo bacteriano misto foi 0,25, sugerindo uma interação sinérgica entre os compostos testados. A aplicação dos compostos isolados ou combinados em concentrações sub-inibitórias em caldo vegetal causou uma diminuição significativa (p < 0,05) na contagem das bactérias ensaiadas (UFC/mL) ao longo de 24 h. A exposição das hortaliças aos constituintes por apenas 5 min também causou uma redução significativa (p < 0,05) nas contagens dos micro-organismos testados. As observações morfológicas das células bacterianas sugerem ainda que os compostos carvacrol e 1,8-cineol, isolados ou combinados em concentrações sub-inibitórias, ocasionam danos à viabilidade celular, bem como alteração da permeabilidade da membrana citoplasmática e da superfície celular, com o aparecimento de rugosidades e estruturas semelhantes a vesículas. Estes resultados mostram que carvacrol e 1,8-cineol possuem considerável poder de inibição do crescimento e sobrevivência de bactérias contaminantes de hortaliças minimamente processadas, quando ensaiadas em inóculo misto. Ainda, confirmam que constituintes de óleos essenciais, com diferentes estruturas moleculares, quando aplicados em combinação podem substituir sanitizantes sintéticos clássicos utilizados em vegetais, possibilitando o alcance do equilíbrio entre a demanda pela segurança microbiológica e a aceitabilidade sensorial destes produtos.

A vida moderna tem gerado mudanças importantes nos hábitos alimentares em todo o mundo e observa-se um aumento da demanda por alimentos prontos para o consumo, tais como frutas e hortaliças minimamente processadas. As condições de embalagem e armazenamento destes produtos podem favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas, destacando-se o patógeno Listeria monocytogenes. Para estudos de avaliação de riscos microbiológicos relativos a L. monocytogenes, dados quantitativos são fundamentais, mas, os métodos para enumeração disponíveis atualmente são trabalhosos e morosos. Há grande interesse no desenvolvimento de métodos rápidos para a determinação das populações de L. monocytogenes, o que pode reduzir significativamente o tempo de análise. Neste trabalho, foram analisadas 162 amostras de hortaliças minimamente processadas adquiridas no comércio varejista de Ribeirão Preto/SP, no período de setembro de 2007 a agosto de 2008. Foram realizados ensaios convencionais para enumeração de coliformes totais e termotolerantes, Escherichia coli e bactérias aeróbias psicrotróficas. Foi realizada a detecção de Listeria sp. por imunoensaio (Oxoid Listeria Rapid Test) e de Salmonella por método convencional. Alíquotas congeladas de amostras positivas para L. monocytogenes e Salmonella sp. foram também avaliadas quantitativamente empregando-se métodos convencionais. Para quantificação de L. monocytogenes foi utilizado o método da Reação de Polimerase em Cadeia (PCR) em tempo real, com primers de DNA baseados em 16S rRNA. Para a comparação do método de PCR em tempo real e método convencional de cultivo, foram inoculadas seis amostras de hortaliças minimamente processadas (alface, cheiro-verde, couve, almeirão, repolho e acelga) com três níveis de inoculação. Dentre as 162 amostras de hortaliças analisadas, L. monocytogenes foi detectada em uma amostra de couve e uma de cheiro-verde, com populações de 1,5 x 103 e 0,43 NMP/g, respectivamente. Salmonella sp. foi isolada de duas amostras de almeirão, com populações de 0,09 e 4,6 NMP/g. Contaminação por coliformes totais foi detectada em 132 (81,5%) amostras e por coliformes termotolerantes em 107 (66%) amostras. Escherichia coli foi confirmada em 86 (53,1%) amostras, enquanto que 158 (96,7%) amostras apresentaram população de bactérias psicrotróficas maior que 5 log UFC/g. Os resultados obtidos entre os dois métodos desenvolvidos apresentaram pouca variação e todos os resultados foram concordantes considerando-se o intervalo de confiança de 95% da técnica do NMP (SWANSON; PETRAN; HANLIN, 2001). A PCR em tempo real foi otimizada com a preparação comercial ABSOLUTETM QPCR SYBR® Green Mix (ABgene, Reino Unido) e os primers utilizados mostraram ser específicos para L. monocytogenes. As populações de microrganismos encontradas nestes alimentos indicaram a baixa qualidade microbiológica e evidenciaram a importância da implantação de programas para garantia da inocuidade de alimentos na cadeia produtiva das hortaliças minimamente processadas. A PCR em tempo real mostrou ser de fácil execução e diminuiu o tempo de obtenção de resultados para pouco mais que 48 horas em comparação com o tempo gasto (7 dias) quando as hortaliças foram analisadas por meio do método convencional de cultivo. / Modern lifestyles have deeply changed eating habits worldwide, with an increasing demand for ready-to-eat foods, including minimally processed fruits and leafy greens. Packaging and storage conditions of these products may favor the growth of psychrotrophic bacteria, such as the pathogen Listeria monocytogenes. For microbiological risk assessment, it is crucial to generate quantitative data on foodborne pathogens, but the enumeration methods currently available are labor and time consuming. There is great interest in the development of reliable and fast methods for enumeration of L. monocytogenes, in order to shorten the time needed to obtain quantitative results. In this study 162, samples of leafy vegetables minimally processed were acquired at retail market in Ribeirão Preto from September, 2007 to August 2008 and they were analysed by conventional enumerating methods for total and thermophilic coliforms, Escherichia coli and psychrotrophic aerobic bacteria. Presence or absence of Listeria spp. was evaluated by immunoassay (Oxoid Listeria Rapid test) and detection of Salmonella was performed by conventional methods. Frozen aliquots of Salmonella spp. and L. monocytogenes positive samples were quantitatively evaluated by conventional methods and L. monocytogenes was also enumerated by real-time Polymerase Chain Reaction (PCR) with DNA primers based on 16S rRNA. Real-time PCR method was applied to analyze six artificially contaminated vegetables and the results obtained with this methodology were similar to the ones obtained with conventional most probably number (MPN) technique with a confidence interval of 95% (SWANSON; PETRAN; HANLIN, 2001). Of the 162 samples analyzed, L. monocytogenes was detected in one sample of collard green and in one mixed bunch of parsley plus spring onion (1.5x103 and 0.43 MPN/g, respectively). Salmonella sp was detected in two samples of common chicory with populations of 0.09 and 4.6 MPN/g. One hundred and thirty two samples (81.5%) showed contamination by total coliforms and 107 (66%) by thermophilics coliforms. Escherichia coli was confirmed in 86 (53.1%) samples while 156 (96.7%) showed populations of psychrotrophic bacteria above of 5 log CFU/g. PCR was optimized with a commercial preparation ABSOLUTE TM QPCR SYBRÒ Green Mix (ABgene, UK) and the primers utilized were specific for L. monocytogenes. These results showed the low microbiologic quality of minimally processed vegetables samples studied and indicate an urge for implementation of quality programs from producer to processors of these ready-to-eat foods. Realtime In comparison with the conventional culture method, real-time PCR was more easily performed and the time required to obtain the results was reduced to ca. 48 hours, in comparison with 7 days for conventional method.