Las terapias utilizadas actualmente para el tratamiento de infecciones fúngicas invasoras causadas por hongos filamentosos oportunistas están lejos de ser las óptimas. Estas infecciones se clasifican según su localización anatomoclínica en superficiales, cutáneas, subcutáneas y sistémicas. El objetivo de la presente tesis es contribuir al desarrollo experimental de nuevos tratamientos o a la mejora de los tratamientos ya existentes de un tipo de micosis subcutánea, la cromoblastomicosis, y de micosis sistémicas tales como las feohifomicosis y la aspergilosis. Para ello, se han realizado estudios in vitro e in vivo en modelos animales adecuados que han permitido comprobar la eficacia de diferentes fármacos. / The conventional antifungal therapies commonly used for the treatment of fungal infections due to filamentous fungi are far to be the optimal. These infections can be classified according to their anatomical location in superficial, cutaneous, subcutaneous and systemic. The main objective of this thesis was to evaluate both in vitro and in murine models, the efficacy of new therapeutical strategies against a subcutaneous infection such as chromoblastomycosis, and systemic infections such as phaeohyphomycoses and aspergillosis. Posaconazole was the most effective drug in treating experimental infections caused by dematiaceous fungi, i.e. chromoblastomycoses caused by Fonsecaea pedrosoi or Cladophialophora carrionii, and systemic phaeohypomycoses caused by Fonsecaea monophora or Exophiala spp. Anidulafungin, alone and in combination with voriconazole, showed a high efficacy in the treatment of aspergillosis caused by emerging species of the genus Aspergillus, such as Aspergillus flavus and Aspergillus niger.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La restricción del crecimiento intrauterino (RCIU) es una causa importante de mortalidad y morbilidad perinatal. Una interacción compleja y dinámica del ambiente materno, la placenta y el feto está involucrado en asegurar el crecimiento normal del feto. Por lo tanto, un desequilibrio en este complejo sistema puede llevar a un retraso del crecimiento intrauterino y condicionar la salud en la vida posnatal del animal que padece esta condición. Esta memoria de título se ha enfocado en describir el crecimiento fetal intrauterino y la función vascular umbilical en un novedoso modelo de RCIU en cobayos. La inducción de RCIU se realizó de manera quirúrgica a través de la implantación de oclusores ameroides que disminuyen progresivamente el flujo uterino durante la segunda mitad de la gestación. El seguimiento del crecimiento fetal y la función umbilical se realizó mediante ultrasonografía Doppler que asociado a estudios post mortem permitieron describir las características de una gestación normal y de una con marcada restricción de crecimiento (46%). Este menor peso de los fetos de término se asoció a una caída de 29% de la eficiencia placentaria. Finalmente, se observaron cambios significativos en la función vascular umbilical, tanto in vivo como ex vivo, lo que deja de manifiesto una menor función vasodilatadora en los animales RCIU. Este estudio demuestra que los fetos que presentan una disminución de la perfusión útero-placentaria tienen una marcada restricción de crecimiento asimétrica y una disfunción endotelial umbilical / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1130801

El consumo de carne de porcino en el mundo se encuentra en una relevante posición frente a otras especies, con promedios per cápita de 14 kg/año. Según las estadísticas del Ministerio de Agricultura, la población nacional de porcinos esta en el orden de los 2.900.000 cerdos que producen anualmente 90.000 TM de carne; en tanto que la producción porcina nacional constituye el 2.5% del PBI agropecuario (Camacho, 2003). Estos datos evidencian la importancia de la industria porcina en la economía de nuestro país, ya que representa una alternativa económica y de alto valor proteico con gran aceptación por el consumidor. En ese sentido; consideramos que las enfermedades que atacan al ganado porcino deben ser objeto de una mayor investigación, porque afectan a la industria porcina en general en las diferentes etapas de producción. Dentro de las enfermedades infecciosas, las de tipo bacteriano son las causantes de grandes pérdidas económicas en la industria porcina nacional, provocando un alto índice de mortalidad, significativos gastos en tratamientos y un retraso en el tiempo del retorno esperado de la inversión.

El objetivo del presente estudio fue determinar la expresión de péptidos antimicrobianos (α y β defensinas) en el epitelio intestinal de crías de Alpaca con enteropatías, de cero a 45 días de edad, mediante la cuantificación de ARN mensajeros (ARNm) de las α (defa 8) y β (β def alp) defensinas, utilizándose oligoneuclótidos diseñados por Patil y col. (2004) y a partir de secuencias publicadas en el Banco de Genes (GenBank) para bovinos (Acceso: AF016539.1), respectivamente. Se tomaron porciones de yeyuno, de 2 cm de longitud, de crías de Alpaca con signos de diarrea (n=29); además, se realizó el análisis histopatológico del tejido utilizando la tinción Hematoxilina-Eosina para determinar la enteropatía. Se obtuvo el ARNm total de los raspados yeyunales, que sirvió de molde para la síntesis de cDNA mediante transcripción reversa (RT), seguido de un PCR en Tiempo Real, para la amplificación y detección de las defensinas. La cuantificación relativa de ARNm, se realizó mediante el método 2-ΔΔCt . Las crías enfermas mostraron una expresión de Defa 8 correspondiente a 18.15 veces lo expresado por el animal recién nacido o calibrador. Similarmente, se observó que la expresión de β-def alp correspondiente a 258.29 veces lo expresado por el calibrador, encontrando diferencia significativa (p<0.05), tanto en Defa 8 y β-def alp mediante la prueba T de Student, al compararlos con un grupo de crías de Alpacas sanas criadas en similares condiciones de un estudio previo. Los resultados demuestran que las α y β-defensinas entéricas son inducidas de manera significativa durante cuadros entéricos en las alpacas. Palabras claves: alpacas, péptidos antimicrobianos, defensinas, PCR, RT-PCR tiempo real, cuantificación relativa / --- The aim of this study was to determine the expression of antimicrobial peptides (α and β Defensins) in the intestinal epithelium of newborn alpacas from zero to 45 days old suffering enteropathy signs. We quantified messenger RNA (mRNA) of α (DEFA 8) and β (β def alp) defensins, using primers designed by Patil et al. (2004) and from published sequences in the gene bank (GenBank) for cattle complete mRNA (Access: AF016539.1), respectively. This was done by taking portions of jejunum, 2 cm long, from young alpacas with diarrhea (n = 29) and performed histopathological analysis of this tissue using hematoxylin-eosin staining to corroborate enteropathy cases. Total mRNA was obtained from jejunal scrapings, which served as template for cDNA synthesis by reverse transcription (RT), followed by Real-Time PCR for amplification and detection of defensins. Relative quantitation of mRNA was performed using 2-ΔΔCt method. Expression of Defa8 in young alpacas suffering enteropathy was of 18.15 fold times was expressed by newborn animals or calibrators. Similarly, we observed that expression of β-def alp was 258.29 times fold what is expressed by the same calibrators, finding statistical difference (p <0.05) of both, Defa8 and β-Defa def alp, by means of Student's T test when compared to a group of young healthy young alpacas raised in similar conditions of a previous study. The results conclude that enteric α and β-defensins are induced significantly during enteric disease in alpacas. Keywords: alpacas, antimicrobial peptides, defensins, PCR, real-time RT-PCR, relative quantification

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los streptococos patógenos para los equinos incluyen S. equi subsp. equi (S. equi), S. equi subsp. zooepidemicus, S. dysgalactiae subsp. equisimilis y S. pneumoniae cápsula Tipo III. S. equi causa gurma, una linfoadenitis purulenta altamente contagiosa que afecta a los miembros de la familia Equidae. Rápidos progresos se han realizado para la identificación de factores de virulencia y proteínas de S. equi. La mayoría de éstas son expresadas en la superficie bacteriana o son secretadas. Se ha demostrado la presencia de una proteína homóloga a la pneumococcal surface adhesin A (PsaA) de S. pneumoniae, en S. zooepidemicus y S. equi. La PsaA de S. pneumoniae, como otras proteínas, es inmunogénica y protege animales de laboratorio ante un desafío con neumococos. El objetivo de esta memoria fue obtener desde un aislado clínico de S. pneumoniae, una PsaA recombinante purificada desde E. coli BL21DE3. La metodología consistió en amplificar el gen PsaA por PCR y ligarlo al plasmidio de clonamiento (pETBlue-1), luego con la mezcla de ligación PsaA/pSTBlue-1 se transformó la cepa E. coli DH5; de las colonias transformadas, se purificó el plasmidio (PsaA/pSTBlue-1) por lisis alcalina, el cual fue sometido a digestión doble y, el fragmento liberado, fue ligado finalmente a un vector de expresión (pET-15b). Con la mezcla de ligación PsaA/pET-15b, se transformó la cepa E. coli BL21DE3, que expresó una proteína fusionada a una cola de histidina; la proteína fusionada, a su vez, se purificó en una columna con afinidad por histidina (Ni-Nta). La presencia de rPsaA fue analizada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y por Western blot, observándose la presencia de una proteína de 37 kDa., con la que reaccionó específicamente el anticuerpo policlonal de conejo anti His-tag. La secuencia nucleotídica del fragmento fue comparada en la base de datos BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov), encontrándose un 98% de identidad con la cepa S. pneumoniae R6. Además se identificaron cuatro regiones, con identidades superiores al 80%, similares a las del gen parcial mba de la proteína ligadora de metal/adhesina de S. equi, homóloga a PsaA de S. pneumoniae. El producto obtenido permitirá realizar estudios de formulación y evaluación, en modelo animal, de un prototipo de vacuna contra el gurma, basado en la proteína PsaA de S. pneumoniae.

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El objetivo del presente estudio de tipo experimental, transversal con diseño de casos y controles fue determinar los cambios histológicos que produce la aplicación tópica del peróxido de hidrógeno en diferentes concentraciones sobre la mucosa oral del hámster. La muestra fue constituida por 60 hámsteres dorados de aproximadamente un mes y medio de edad asignados aleatoriamente a uno de los tres grupos de H2O2 al 30%, al 3% y agua destilada. La duración del experimento fue de 6 meses con aplicaciones mediante una micropipeta en la mejilla derecha del hámster 3 veces semanales. Al cabo de ello se sacrificaron los especimenes y se hicieron cortes histológicos y coloración con H.E. Se utilizaron pruebas estadísticas no paramétricas como Kolmogorov – Smirnov, Kruskal Wallis, Mann Whitney, Test de Wilcoxon de rangos con signo y Chi cuadrada para analizar las diferencias entre las condiciones experimentales. El análisis estadístico se realizó con el paquete estadístico SPSS versión 13. Se compararon los grupos, encontrando diferencias significativas produciéndose aumento del grosor del epitelio debido a hiperqueratosis y acantosis en los grupos con aplicacación de peróxido de hidrógeno; también en estos grupos hubo mayor porcentaje, de células hiperplásicas, y crestas epiteliales pronunciados. Todos los cambios producidos se expresaron con mayor intensidad en el grupo con peróxido de hidrógeno al 30%. Es también en este grupo donde se produjo el desarrollo de displasias de diferente grado y carcinoma epidermoide con interrupción de la membrana basal. La conclusión fue que en dosis altas y uso por tiempo prolongado el peróxido de hidrógeno puede expresar su potencial carcinogénico. / The aim of this experimental, cross- sectional study was to evaluate the histologic changes in buccal mucosa of male Syrian golden hamsters with three weekly topical applications of different concentrations of hydrogen peroxide for six months. The 60 animals were randomly assigned to one of the three groups with 30% H2O2, 3% H2O2 and destilate water. Hydrogen peroxide was applicated with micopipets (0.1ml) in the right cheek pouch. Animals were sacrificated and histologic slides and H.E. stainings were made. The statistical analysis was performed using the statistical program SPSS 13. Nonparametric tests as Kruskal – Wallis, Mann – Whitney, Wilcoxon signed rank test an Chi square were used to test for differences between experimental conditions. 30%H2O2 group showed significantly greater number of cells with hyperkeratosis, squamous hyperplasia, hypercromatism and deep epithelial crests than 3% H2O2 group. In 30% H2O2 group there were 11/20 (65%) cases of displasia and 3/20 (15%) of animals developed epidermoid carcinoma. While in 3% H2O2 group 6/20 (30%) of animals developed mild displasia and carcinoma were not observed. These findings suggest that hydrogen peroxide used in high dosis for large time can be carcinogenic. In another hand use of 3% H2O2 need for more observations in longitudinal studies. Finally it is necessary epidemiological monitoring on use of dental products containing hydrogen peroxide.

El objetivo de esta tesis fue obtener un cultivo primario de condrocitos de Equus caballus post-mortem, aislados de cartílago hialino articular esternocostal. Se colectaron un total de 24 de cajas torácicas de caballos beneficiados para consumo humano y animal, obtenidos del Camal de Equinos Casablanca ubicado en el distrito de Pachacamac, Lima; de cada una de ellas se obtuvieron 4 muestras de cartílago de forma semiovalada irregular de 0.8 cm de ancho, 0.6 cm de largo y 0.2 cm de alto aproximadamente. El aislamiento de condrocitos se realizó de forma mecánica, con la técnica de cuchillas cruzadas de Freshney (2005), y de forma enzimática con solución de tripsina 0.05 % con 0.5 g de EDTA, solución de colagenasa 0.2% y 0.04 %. Luego las células fueron cultivados en Basal Medium Eagle (BME) + 10% Suero Bovino Fetal (SBF), BME + 5%SBF, Tissue Culture Medium-199 (TCM-199) + 10%SBF y TCM-199 + 5%SBF; por un periodo de 10 días a 37 °C, 5% de CO 2 y 5% de humedad. Posteriormente, las células fueron resuspendidas de las placas en solución de tripsina (tripsina 0.05%, EDTA 0.2 g.), para contarlas en una cámara de Neubauer y así determinar la tasa de proliferación y la tasa de supervivencia. Se observó un incremento en la proliferación celular tanto en BME como en TCM-199 con 10% de SBF, siendo la tasa de proliferación obtenida para BME+10%SBF de 4,550+/-1,366, para TCM-199+10%SBF de 3,709+/-1,183, para BME+5%SBF de 0,438+/-0,095 y para TCM-199+5%SBF de 0,388+/-0,093; por tanto, el medio de cultivo que obtuvo la mejor tasa de proliferación fue BME + 10%SBF. La tasa de supervivencia no superó el valor de 1 en todos los medios; sin embargo, la que se acercó más a este valor fue la obtenida con BME + 10%SBF (0.987+/-0.025). En conclusión, se logró obtener un cultivo primario de condrocitos a partir de cartílago hialino articular esternocostal de Equus caballus post-mortem, siendo BME + 10% SBF el medio que presentó los mejores resultados. / --- The objective of this thesis was to obtain a primary culture of chondrocytes from postmortem Equus caballus, isolated from hyaline articular sternocostal cartilage. We collected a total of 24 rib cages of benefit horses for human and animal consumption, obtained from Casablanca Equine Camal located in the district of Pachacamac, Lima; from each one we obtained 4 irregular semi-oval samples of 0.8 cm width, 0.6 cm long and 0.2 cm tall. The isolation of chondrocytes was performed mechanically, with the technique of cross blades from Freshney (2005), and so enzymatically with 0.05% trypsin solution with 0.5 g of EDTA, 0.2% and 0.04% collagenase solution. Then they were grown in Basal Medium Eagle (BME) + 10% Fetal Bovine Serum (FBS), BME + 5% FBS, Tissue Culture Medium-199 (TCM-199) + 10% FCS and TCM-199 + 5% FBS; for a period of 10 days at 37 ° C, 5% CO2 and 5% humidity. Subsequently, cells were resuspended from the plates in trypsin solution (trypsin 0.05%, EDTA 0.2 g.), to count them in a Neubauer chamber and to determine the proliferation rate and survival rate, respectively. We observed an increase in cell proliferation in both BME and in TCM-199 with 10% FBS, the proliferation rate obtained for BME +10% FBS was 4.550 + / -1.366, for TCM-199 +10% FBS was 3.709 + / -1.183, for BME +5% FBS was 0.438 + / -0.095 and for TCM-199 + 5 % SBF was 0.388 + / -0.093, therefore the culture medium that obtained the best proliferation rate was BME + 10% FBS. The survival rate did not exceed the value of 1 in all media, but the one closer to this value was the obtained with BME + 10% FBS (0987 + / -0025). In conclusion, it was possible to obtain a primary culture of chondrocytes from hyaline articular sternocostal cartilage of Equus caballus post-mortem, being BME + 10% FBS the medium which had the best results.

Se ha estudiado el efecto del ketoprofeno, un antiprostaglandínico bloqueador de la enzima ciclooxigenasa, sobre la presión arterial pulmonar media (PAPm) en 10 terneros Jersey, machos, de 1 a 2 meses de edad, nacidos a nivel del mar y expuestos durante 3 días a una hipoxia ambiental de 3 320m. de altitud; los cuales fueron divididos en 2 grupos de 5 animales cada uno: Grupo Control que recibió placebo y Grupo Tratamiento al que se le suministró ketoprofeno, en dosis de 3mg/kg de peso vivo, por 5 días consecutivos, durante su estadía a nivel del mar. La PAPm se determinó mediante la técnica de cateterismo cardiaco a nivel del mar y al tercer día de su arribo a dicha altitud. Los valores promedio de la PAPm (mmHg) a nivel del mar fueron de 19,00 ± 0,94 para el Grupo Control y 21,00 ± 3,39 para el Grupo Tratamiento, y en la altura de 39,50 ± 6,00 para el Grupo Control y 31,25 ± 5,70 para el Grupo tratamiento. Al no existir diferencia por efecto del ketoprofeno, se analizaron ambos grupos en conjunto obteniéndose los siguientes resultados de la PAPm: A nivel del mar 20,00 ± 2,68 y al tercer día de exposición a la altura 35,28 ± 7,16. Estos resultados nos inducen a sugerir que el ketoprofeno no tuvo efecto significativo (p>0.05) sobre la PAPm en los terneros Jersey sometidos durante 3 días a la hipoxia de la altura; sin embargo sólo la exposición a dicha hipoxia incrementó significativamente (p≤0.05) la PAPm. / The effect of ketoprofen, an antiprostaglandin sustance that inhibits the enzyme ciclooxigenase, had been studied on the mean pulmonary arterial pressure (mPAP) in 10 Jersey, male calves, from 1 to 2 months old. They were born at sea level and exposed during 3 days to a environmental hypoxia of 3 320m. of altitude and were divided in 2 groups of 5 animals each: Control Group which received destiled water as placebo, and Treatment Group which received ketoprofen in dose of 3mg/kg body weight for 5 consecutive days during its permanence at sea level. The mPAP was determinated by cardiac cateterism at sea level and 3 days after arriving to altitude. The mean values of mPAP (mmHg) at sea level were: Control Group 19,00 ± 0,94 and Treatment Group 21,00 ± 3,39; whereas at the altitude were: Control Group 39,50 ± 6,00 and Treatment Group 31,25 ± 5,70. Since there was not significative effect due to ketoprofen, the two groups were joined and analysed together, obtaining the following values for mPAP: At sea level 20,00 ± 2,68 and at day 3 of exposition to altitude 35,28 ± 7,16. These results induce us to sugest that ketoprofen have not significative effect (p>0.05) on the mPAP in Jersey calves exposed during 3 days at altitude hypoxia, however just the effect of this hypoxia increased significatively (p≤0.05) the mPAP.

Determina el rol de la vitamina E en los parámetros bioquímicos y antioxidantes en ratas diabéticas. La diabetes es inducida experimentalmente con estreptozotocina (35 mg/kg de peso por v.i.p.). Los animales (n= 24) son divididos en cuatro grupos: Grupo I: Control, Grupo II: Control + Vitamina E (25 mg/día), Grupo III: Diabética y Grupo IV: Diabética + Vitamina E (25 mg/día), durante 8 semanas. Parámetros bioquímicos como glucosa, la hemoglobina glicada y perfil lipídico son evaluados, así mismo se determinan marcadores de daño oxidativo como antioxidantes totales, lipoperoxidación (TBARS) y niveles de ácido úrico. La administración de vitamina E a los animales diabéticos, muestra una reducción estadísticamente significativa (p < 0,05) para la glicemia, hemoglobina glicada y el perfil lipídico, así como también disminuyen los niveles de TBARS en suero. Concluye que el tratamiento de los animales diabéticos con vitamina E redujo la glicemia, hemoglobina glicada y el perfil lipídico, y ejerce un efecto protector contra el daño oxidativo al elevar sus niveles de antioxidantes totales.