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Isolamento e caracterizaÃÃo parcial dos Genes beta-actina e miosina de cadeia pesada do CamarÃo rosa Farfantepenaeus subtilis / Isolation and partial characterization of genes beta-actin and myosin heavy chain shrimp Farfantepenaeus subtilisEliana Matos Ribeiro 04 March 2009 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O camarÃo peneÃdeo Farfantepenaeus subtilis à uma importante espÃcie
nativa do litoral nordestino que possui uma grande ocorrÃncia na pesca. Dentre
os camarÃes marinhos de importÃncia comercial, os peneÃdeos se destacam
por constituÃrem um valioso recurso para pesca e aqÃicultura em regiÃes
tropicais e subtropicais. Entretanto, a disponibilidade de informaÃÃes sobre
essas espÃcies à bastante escassa, principalmente em relaÃÃo à estrutura
genÃtica que atua no crescimento muscular desses animais. Tendo como
objetivo identificar genes envolvidos na contraÃÃo muscular de camarÃes,
neste trabalho foram parcialmente isolados e seqÃenciados os genes de betaactina
e miosina de cadeia pesada do camarÃo rosa F. subtilis, a partir do
cDNA do mÃsculo abdominal. Para tanto, camarÃes coletados no estuÃrio do
rio Pacoti, estado do CearÃ, foram inicialmente identificados taxonomicamente
e, depois atravÃs de amplificaÃÃo de DNA seguida por sequenciamento das
regiÃes citocromo oxidase subunidade I (COI) e 16S. Utilizando-se os tecidos
frescos dos camarÃes, foi extraÃdo o RNA total e foram obtidos os respectivos
DNAs complementares (cDNAs). Baseado na construÃÃo de primers
especÃficos a partir do alinhamento entre sequÃncias descritas no
Genbank/NCBI, os genes foram isolados por meio de RT-PCR (ReaÃÃo em
Cadeia da Polimerase atravÃs da transcriptase reversa) e seqÃenciados. Foi
obtido um fragmento parcial de 760 pares de base para o cDNA de beta-actina
e para o cDNA de miosina de cadeia pesada foi obtido um fragmento de 570
pares de base. AnÃlises das sequÃncias realizadas pela ferramenta BLAST
(Basic Local Alignment Search Tool) revelaram alta similaridade com outras
beta-actinas e miosinas de camarÃes, confirmando a identidade das
sequÃncias genÃticas isoladas. Como resultado do alinhamento pareado entre
as sequÃncias desses genes obtidos no trabalho com as de outras espÃcies
presentes no GenBank, pÃde-se observar que as maiores similaridades foram
com Penaeus monodon (93%) e com Farfantepenaeus paulensis (88%). Os
resultados obtidos neste estudo demonstraram a viabilidade da metodologia
utilizada na identificaÃÃo de genes relacionados com caracterÃsticas
importantes. Esses dados irÃo facilitar o isolamento completo das sequÃncias
desses genes, alÃm de contribuir para incentivar a identificaÃÃo de outros
genes importantes em camarÃes, principalmente os nativos do Brasil. AnÃlise
de genes que atuam desenvolvimento do tecido muscular do animal poderÃ
fornecer informaÃÃes genÃticas importantes acerca de uma espÃcie nativa que
està sendo superexplorada e que poderà ser viÃvel para cultivo. Outrossim,
esses dados beneficiarÃo a comunidade cientÃfica, servindo como base para
estudos de fisiologia, filogenia e evoluÃÃo em peneÃdeos / The penaeid shrimp Farfantepenaeus subtilis is an important native
species for fisheries industry in Brazil. Among marine shrimps of commercial
importance, penaeids are recognized as a valuable resource for fishery and
aquaculture in tropical and subtropical regions. However, data on these species
is extremely reduced, especially concerning genetic elements involved in animal
muscle growth. Therefore, aiming at identifying shrimp genes directly
associated with muscle contraction in this research, beta-actin and myosin
heavy chain genes of the pink shrimp F. subtilis were isolated from its muscular
abdominal and partially sequenced. Shrimps collected from Pacoti estuary,
CearÃ, were first identified through taxonomy and, then, through DNA
amplification followed by sequencing of Cytochrome Oxidase subunit I (COI)
and 16S. From fresh shrimp tissues, total RNA was extracted and
complementary cDNA was obtained. Based on specific primers designed after
sequence alignments performed against sequences at GenBank/NCBI, genes
were amplified from RT-PCR (reverse transcriptase - polimerase chain reaction)
and sequenced. A 760bp partial F. subtilis beta-actin cDNA fragment was
obtained, while the partial F. subtilis myosin heavy chain cDNA was 570bp long.
Sequence analyses using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)
program indicated that F. subtilis beta-actin gene product is very similar to betaactin
of other species of shrimps, while the myosin heavy chain protein is highly
homologous to crustacean myosins heavy chain, confirming the identity of the
isolated gene sequences. Alignment of these gene sequences with other
sequences in GenBank showed high similarity with Penaeus monodon (93%)
and Farfantepenaeus paulensis (88%). Results have showed the feasibility of
partial gene identification as a means to identify genes of strategic interest.
These data would help further attempts to elucidate the complete isolation of
these genes, as well as the detection of other important genes, especially from
shrimp species occurring at the Brazilian coast. Genes analyses involved with
muscle growth might provide important genetic information on native species
that are overexploited and may be viable for the shrimp cultivation. In addition,
these data might also benefit the scientific community, improving a range of
research areas such as physiology, phylogeny and evolution of penaeids
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