Vibrio cholerae é uma bactéria autóctone do ambiente aquático e pode causar sérios riscos à saúde quando cepas patogênicas são acidentalmente consumidas. V. cholerae se encontra associada aos copépodes em concentrações que podem alcançar mais de 1000 vezes a densidade das bactérias livres na água. Se ingerido, um único copépode pode conter a dose mínima de bactérias necessária para a manifestação da doença. Verificar a presença e a distribuição dos sorogrupos O1 e O139 no complexo estuarino de Santos-Bertioga e plataforma continental adjacente em associação com o zooplâncton e seus distintos grupos taxonômicos foi o objetivo desse trabalho. O zooplâncton (>330 µm) foi coletado e a detecção dos sorogrupos O1 e O139 realizada nas amostras totais e nos táxons mais abundantes através das técnicas DVC-DFA e DFA (Contagem direta de bactérias viáveis e ensaio de imunofluorescência direta). Amostras fixadas em formol foram maceradas e preservadas numa solução tampão estéril, previamente aos experimentos. Para o DVC-DFA, animais vivos foram selecionados, lavados, macerados e uma alíquota transferida para meio de cultura. A presença da bactéria no zooplâncton foi correlacionada a parâmetros abióticos e bióticos. O sorogrupo O1 foi detectado em 88% e O139 em 77% das amostras de plâncton no complexo estuarino de Santos-Bertioga, valores mais altos do que os publicados na literatura mundial para outros estuários. Para a plataforma, a presença dos sorogrupos foi menor devido à salinidade mais elevada. Foram testados isoladamente 43 táxons, pertencentes a 9 filos. Dados inéditos da associação entre Vibrio cholerae e quetognatos, estágios larvas de equinodermos, urocordados e ovos de peixes foram registrados. Este trabalho sugere a existência de um gradiente costa-oceano para V. cholerae aderido ao zooplâncton de águas costeiras e ampla capacidade de V. cholerae O1 e O139 em aderir a diversos táxons do zooplâncton marinho. / Vibrio cholerae is an autochthonous bacterium in the sea and may cause serious health problems when pathogenic strains are accidentally ingested. V. cholerae are found associated with copepods in concentrations up to a thousand times higher than the free bacteria in the water. If ingested, a single copepod may have enough bacteria necessary for human infection. The objective of this study was to verify the presence and distribution of Vibrio cholerae O1 and O139 serogroups over Santos-Bertioga estuarine complex and adjacent continental shelf in association with zooplankton and over its distinct taxa. Zooplankton (>330 µm) sampling was carried out and detection of V. cholerae O1 and O139 assessed in whole samples and on most abundant taxa by the DFA and DVC-DFA (Direct Viable Count and Direct Fluorescence Assay) methods. Briefly, formalin-fixed samples were grinded and preserved in a sterilized buffer solution previously to the experiments. Live animals were selected, washed and grinded and an aliquot transferred to culture media for the DVC-DFA assay. Presence of these bacteria on zooplankton was correlated with physical and biological parameters of the seawater. Serogroup O1 was found on 88% while O139 on 77% of the samples from Santos-Bertioga estuarine complex, values higher than the ones found in other estuaries in global literature. For the adjacent shelf, detection was smaller due to higher salinity. 43 taxa, belonging from 9 phyla were individually tested. Inedited data from the association of V. cholerae and chaetognaths, Urochordata, larval stages of Polychaeta, Echinodermata, and fish eggs were documented. This study suggests the existence of an inshore-offshore gradient in V. cholerae attached to zooplankton from coastal waters and the high ability of V. cholerae O1 and O139 to adhere on diverse marine zooplanktonic taxa.

Vibrio cholerae é uma bactéria autóctone do ambiente aquático e pode causar sérios riscos à saúde quando cepas patogênicas são acidentalmente consumidas. V. cholerae se encontra associada aos copépodes em concentrações que podem alcançar mais de 1000 vezes a densidade das bactérias livres na água. Se ingerido, um único copépode pode conter a dose mínima de bactérias necessária para a manifestação da doença. Verificar a presença e a distribuição dos sorogrupos O1 e O139 no complexo estuarino de Santos-Bertioga e plataforma continental adjacente em associação com o zooplâncton e seus distintos grupos taxonômicos foi o objetivo desse trabalho. O zooplâncton (>330 µm) foi coletado e a detecção dos sorogrupos O1 e O139 realizada nas amostras totais e nos táxons mais abundantes através das técnicas DVC-DFA e DFA (Contagem direta de bactérias viáveis e ensaio de imunofluorescência direta). Amostras fixadas em formol foram maceradas e preservadas numa solução tampão estéril, previamente aos experimentos. Para o DVC-DFA, animais vivos foram selecionados, lavados, macerados e uma alíquota transferida para meio de cultura. A presença da bactéria no zooplâncton foi correlacionada a parâmetros abióticos e bióticos. O sorogrupo O1 foi detectado em 88% e O139 em 77% das amostras de plâncton no complexo estuarino de Santos-Bertioga, valores mais altos do que os publicados na literatura mundial para outros estuários. Para a plataforma, a presença dos sorogrupos foi menor devido à salinidade mais elevada. Foram testados isoladamente 43 táxons, pertencentes a 9 filos. Dados inéditos da associação entre Vibrio cholerae e quetognatos, estágios larvas de equinodermos, urocordados e ovos de peixes foram registrados. Este trabalho sugere a existência de um gradiente costa-oceano para V. cholerae aderido ao zooplâncton de águas costeiras e ampla capacidade de V. cholerae O1 e O139 em aderir a diversos táxons do zooplâncton marinho. / Vibrio cholerae is an autochthonous bacterium in the sea and may cause serious health problems when pathogenic strains are accidentally ingested. V. cholerae are found associated with copepods in concentrations up to a thousand times higher than the free bacteria in the water. If ingested, a single copepod may have enough bacteria necessary for human infection. The objective of this study was to verify the presence and distribution of Vibrio cholerae O1 and O139 serogroups over Santos-Bertioga estuarine complex and adjacent continental shelf in association with zooplankton and over its distinct taxa. Zooplankton (>330 µm) sampling was carried out and detection of V. cholerae O1 and O139 assessed in whole samples and on most abundant taxa by the DFA and DVC-DFA (Direct Viable Count and Direct Fluorescence Assay) methods. Briefly, formalin-fixed samples were grinded and preserved in a sterilized buffer solution previously to the experiments. Live animals were selected, washed and grinded and an aliquot transferred to culture media for the DVC-DFA assay. Presence of these bacteria on zooplankton was correlated with physical and biological parameters of the seawater. Serogroup O1 was found on 88% while O139 on 77% of the samples from Santos-Bertioga estuarine complex, values higher than the ones found in other estuaries in global literature. For the adjacent shelf, detection was smaller due to higher salinity. 43 taxa, belonging from 9 phyla were individually tested. Inedited data from the association of V. cholerae and chaetognaths, Urochordata, larval stages of Polychaeta, Echinodermata, and fish eggs were documented. This study suggests the existence of an inshore-offshore gradient in V. cholerae attached to zooplankton from coastal waters and the high ability of V. cholerae O1 and O139 to adhere on diverse marine zooplanktonic taxa.

Vibrio cholerae, the causal agent of cholera typically encodes two critical virulence factors: cholera toxin (CT), which is primarily responsible for the diarrhoeal purge, and toxin-co-regulated pilus (TCP), an essential colonisation factor. Nontoxigenic strains expressing TCP can efficiently acquire the CT gene through lysogenic conversion with CTXΦ, a filamentous phage that encodes CT and uses TCP as a receptor.  V. cholerae is a Gram-negative bacterium and a natural inhabitant of estuarine and coastal waters throughout both temperate and tropical regions of the world. In the aquatic environment, V. cholerae encounters several environmental stresses, such as change in salinity, UV stress, nutrient limitation, temperature fluctuations, viral infections and protozoan predation. To fully understand the pathogenic and virulence potential of V. cholerae, knowledge is required of its interactions with, not only human, but also environmental factors. By using the nematode Caenorhabditis elegans as host model, we were able to identify a previously uncharacterised protein, the extracellular protease PrtV. PrtV was shown to be required for the killing of. elegans and also necessary for survival from grazing by the ciliate Tetrahymena pyriformis and the flagellate Cafeteria roenbergensis. The PrtV protein, which belongs to a M6 family of metallopeptidases was cloned and purified for further characterisations. The purified PrtV was cytotoxic against the human intestinal cell line HCT8. By using human blood plasma, fibrinogen, fibronectin and plasminogen were identified as candidate substrates for the PrtV protease. Outer membrane vesicles (OMVs) are released to the surroundings by most Gram-negative bacteria through “bulging and pinching” of the outer membrane.  OMVs have been shown to contain many virulence factors important in pathogenesis. Therefore, we investigated the association of PrtV with OMVs. PrtV was not associated with OMVs from the wild type O1 strain. In contrast, in an LPS mutant lacking two sugar chains in the core oligosaccharide PrtV was found to be associated with the OMVs. The OMV-associated PrtV was shown to be proteolytically and cytotoxically active. V. cholerae strains are grouped into >200 serogroups. Only the O1 and O139 serogroups have been associated with pandemic cholera, a severe diarrhoeal disease.  All other serogroups are collectively referred to as non-O1 non-O139 V. cholerae. Non-O1 non-O139 V. cholerae can cause gastroenteritis and extraintestinal infections, but unlike O1 and O139 strains of V. cholerae, little is known about the virulence gene content and their potential to become human pathogens. We analysed clinical and environmental non-O1 non-O139 isolates for their putative virulence traits. None of them carry the genes encoding CT or the TCP, but other putative virulence factors were present in these isolates. The incidence of serum resistance was found to vary considerably and was independent of encapsulation. Three strains were strongly serum-resistant, and these same strains could also kill C. elegans.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:03:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3705_1.pdf: 1739643 bytes, checksum: d5c033b4b7bcbc4ee46e7a8e20bbe0df (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A emergência do Vibrio cholerae sorogrupo O139 como um segundo agente etiológico da cólera serviu de alerta para o surgimento de outros clones epidêmicos que possam passar despercebidos pelos métodos tradicionais de diagnóstico da cólera, geralmente baseados no uso de antissoro contra o sorogrupo O1 tradicional. Em estudos prévios, a partir da análise de 179 cepas de V. cholerae não-O1/não-O139 isoladas de casos clínicos de cólera no Brasil, foram selecionadas sete cepas de V. cholerae O26, e outra cepa de sorogrupo não tipável (17155), que possuíam genes de virulência associados ao desenvolvimento desta enfermidade. Destas, duas cepas (4756 e 17155) possuíam o gene rfb, específico do sorogrupo O1, sugerindo serem genotipicamente deste sorogrupo, e também expressaram a toxina colérica (CT) em cultura. Este trabalho buscou uma análise genética mais detalhada destas oito cepas comparando a classificação sorológica com outros marcadores moleculares. Neste sentido foi realizada a amplificação, clonagem e seqüenciamento da região espaçadora ribossomal 16S-23S (ISR) de diferentes operons de V. cholerae. A partir da análise da seqüência de cinco grupos de operons distintos (de um total de 210 clones seqüenciados), foram construídas três árvores filogenéticas em que as cepas 4756 e 17155 ficaram agrupadas no mesmo clado com cepas O1 controle, e as demais cepas O26 foram agrupadas separadamente. Conclui-se, desta forma, que as cepas 4756 e 17155 são filogeneticamente do sorogrupo O1 e a diferença nos resultados de sorologia pode ser uma conseqüência de soroconversão provocada por mudanças em genes de biossíntese do antígeno O