Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El presente estudio evaluó la hipótesis de que la gestación mellicera y la subnutrición materna en la preñez ovina generan hipoxia fetal y estrés oxidativo, afectando el normal crecimiento fetal, lo cual podría ser prevenido mediante la administración diaria de vitaminas antioxidantes, C y E. Se ocuparon ovejas de preñez única y doble, a la mitad de cada tipo de gestación se les manejó únicamente bajo pastoreo, supliendo aproximadamente un 70% de sus requerimientos nutricionales, mientras que a la otra mitad se les suplementó con un concentrado comercial para alcanzar el total de sus requerimientos nutricionales. A su vez, dentro de cada nivel nutricional, a la mitad de los animales se les administró diariamente una dosis oral de vitaminas C y E, iniciándose todos los manejos desde el día 30 de gestación. Al día 100 de gestación se midieron características de oxigenación en la sangre arterial materna y venosa umbilical, además de biomarcadores de estrés oxidativo en sangre fetal y características biométricas fetales. La gestación mellicera y la subnutrición materna afectó negativamente la oxigenación fetal y su combinación genera condiciones francamente hipóxicas a nivel fetal. Por su parte, la administración diaria de vitaminas antioxidantes mejoró el aporte de O2 a los fetos. No se evidenció modificación en los biomarcadores de estrés oxidativo (MDA y CAT fetal), por lo cual probablemente el grado de hipoxia fetal fue leve a esta edad gestacional, o bien el estatus antioxidante endógeno fue suficiente para contrarrestar los efectos de la hipoxia como inductor de estrés oxidativo. La subnutrición y la gestación mellicera disminuyeron el tamaño y el peso fetal, con máximo efecto en gestaciones melliceras bajo subnutrición. En conclusión, a los 100 días de preñez la gestación mellicera, la subnutrición y su combinación conducen a una restricción del crecimiento intrauterino, la cual se podría deber a la disminución del traspaso de otros nutrientes por sobre el efecto de la hipoxia y estrés oxidativo, razón por la cual no existiría un claro efecto benéfico de la administración de vitaminas C y E. / The present study evaluated the hypothesis that twin pregnancies and undernutrition in the sheep pregnancy generates fetal hypoxia and oxidative stress, affecting the normal fetal growth, which can be prevented by the daily administration of antioxidant vitamins, C and E. Single and twin sheep pregnancies were used, half of each type of gestation were handled only under grazing, supplying about 70% of their nutritional requirements, while the other half were supplemented with a commercial concentrate to reach the total of their nutritional requirements. Additionally, within each nutritional level, half of the animals were given a daily oral dose of vitamins C and E, starting from day 30 of gestation. At day 100 of gestation, oxygenation characteristics in maternal arterial and venous umbilical blood were measured, as well as biomarkers of oxidative stress in the fetal blood and fetal biometric characteristics. Twin pregnancy and undernutrition negatively affects the conditions of fetal oxygenation, and their combination actually generates fetal hypoxia. On the other hand, the daily administration of antioxidant vitamins improve the O2 supply to the fetuses. There was no increase of oxidative stress biomarkers (MDA and fetal TAC), thus the degree of fetal hypoxia is probably slight at this gestational age, or the endogenous antioxidant status is enough to counteract the effects of hypoxia as inducer of oxidative stress. Undernutrition and twin pregnancy decreased fetal size and weight, with the maximum effect in twin pregnancies with undernutrition. In conclusion, at 100 days of gestation twin pregnancies, undernutrition and their combination lead to intrauterine growth restriction, which would be explained due to the decrease in the transfer of other nutrients over the effect of hypoxia and oxidative stress, therefore a clear beneficial effect of the vitamins C and E administration was not detected at this gestational period / Proyecto Fondecy 1160892

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los efectos de un ambiente hipóxico sobre la gestación son conocidos. Sin embargo, existe poca información sobre como el ambiente normóxico afectaría la gestación de individuos adaptados a la vida en altura. Este estudio se basa en la consideración que individuos adaptados a un ambiente hipóxico han desarrollado mecanismos que les permite transportar y utilizar el oxígeno más eficientemente en esas condiciones, por lo que frente a un aumento de la presión parcial de oxígeno ambiental éstos pueden desarrollar estrés oxidativo, tal como se observa en hiperoxia. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del ambiente normóxico y de la administración de vitaminas C y E sobre las características placentarias, en ovejas originarias de la altura que cursan su gestación a nivel del mar. Se utilizaron 10 ovejas provenientes de la altura (HL) y 10 del nivel del mar (LL), las que desarrollaron su gestación a 500 msnm. La mitad de cada grupo fue suplementado diariamente con 500 mg de vitamina C y 350 UI de vitamina E. Entre los 96 y 100 días de gestación se evaluaron las características placentarias y la presencia de los factores angiogénicos VEGF y leptina, mediante la técnica de Western Blot. El peso de la placenta fue mayor en el grupo LL en comparación con HL. Las características número de placentomas y superficie de placentomas no mostraron diferencias significativas, mientras que la suplementación con antioxidantes no evidenció cambios significativos para las características antes mencionadas. La expresión de VEGF no reflejó cambios significativos entre los grupos, sin embargo en la porción fetal del placentoma, la expresión de VEGF en los animales LL, tiende a ser mayor. La terapia antioxidante pareció disminuir la expresión de VEGF, aunque esta diferencia no fue significativa. La expresión de leptina disminuyó en los grupos suplementados con vitaminas, siendo esta diferencia significativa en la porción fetal del placentoma. El HL muestra la mayor superficie vascular por placentoma, la que disminuyó al suplementar con vitaminas. De los resultados obtenidos se desprende que la exposición a la normoxia en ovejas gestantes adaptadas a la vida en altura, no produciría cambios placentarios compatibles con un estado de estrés oxidativo. Sin embargo, quedan muchas preguntas sin responder que requerirán estudios posteriores

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de los antioxidantes, vitamina C y E, sobre variables sanguíneas y endocrinas fetales, en ovejas que gestaron a gran altura. Se utilizaron 12 ovejas preñadas, seis originarias de la altura (grupo HH+V) y seis originarias del nivel del mar que fueron llevadas a la altura (grupo LH+V), las cuales fueron suplementadas diariamente con vitamina C (500 mg /animal/ día) y vitamina E (350 UI/ animal/ día), durante el encaste y toda la gestación desarrollada a 3600 m.s.n.m. Las ovejas y los fetos se operaron para la implantación de catéteres crónicos arteriales y venosos. Se tomaron muestras de sangre arterial y venosa tanto de madres y fetos cada tres días hasta la fecha de parto para la determinación de las variables sanguíneas: presión parcial de oxígeno (PaO2), presión parcial de dióxido de carbono (PaCO2), pH, concentración de hemoglobina (Hb), saturación de hemoglobina (Sat Hb), volumen globular aglomerado (V.G.A.) y endocrinas: cortisol, insulina, además de glicemia. Como resultado, las variables sanguíneas se igualaron entre fetos de altura y subidos, mejorando positivamente respecto de lo reportado para fetos sin administración de antioxidantes, incrementando la PaO2, Sat Hb, pH y disminuyendo la PaCO2. A su vez, se incrementaron las concentraciones plasmáticas de insulina y glucosa fetal, sin exhibir mayores cambios en el cortisol. En el caso de las madres, las variables sanguíneas también se asemejaron entre grupos de altura y subidos. La insulina y glicemia se incrementaron y el cortisol se redujo respecto de ovejas sin administración de vitaminas. Se concluye que, las mejoras observadas en las variables sanguíneas y endocrinas fetales pueden atribuirse al efecto que tiene la suplementación con antioxidantes sobre el organismo al combatir el estrés oxidativo, lo que contribuyó a una mejora en la respuesta adaptativa a la gestación a gran altura, expresándose en un aumento del peso al nacimiento en ambos grupos. / Proyecto Fondecyt No. 1020706

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La vida en altura se ve afectada debido a la presencia de un continuo estrés ambiental producido por la existencia de la llamada hipoxia hipobárica, la cual aumenta su severidad a mayor altura, debido a la caída de la presión parcial de oxígeno. Este estudio se basa en que el efecto directo de la hipoxia hipobárica sobre la gestación en ovinos es mediado por un estado de estrés oxidativo, que podría afectar la normal expresión y localización de los principales factores angiogénicos encargados del normal desarrollo placentario y fetal. Esto llevaría a la presencia de bajos pesos al nacimiento, mayor peso de placenta con modificaciones en el desarrollo vascular, número y tamaño de los placentomas, entre otras. A partir de esto evaluamos el efecto de la terapia con vitaminas antioxidantes sobre la expresión y localización del Factor de Crecimiento Vascular Endotelial (VEGF), hormona Leptina, enzimas eNOS, iNOS y nNOS, y su influencia sobre el desarrollo placentario y fetal. Para el estudio se utilizaron 10 ovejas pertenecientes a la altura (HH) y 10 al nivel de mar (LH), que fueron mantenidas durante todo su periodo de gestación a 3580 msnm. La mitad de cada grupo fue suplementado diariamente con 500 mg de vitamina C y 350 UI de vitamina E. A los 100 días de gestación se midieron gases sanguíneos y concentración plasmática de las vitaminas antioxidantes, se evaluaron características fetales y placentarias y fueron extraídos los placentomas para la evaluación mediante la técnica de inmunohistoquímica de los factores angiogénicos. No se evidenció presencia de las enzimas iNOS y nNOS. La expresión de los demás factores aumentó debido al estado de hipoxia, y mostró una disminución significativa gracias a la terapia antioxidante, sin modificar en ningún caso la localización de éstos. Los gases sanguíneos evidenciaron la presencia de un estado hipoxémico. Las concentraciones sanguíneas de vitaminas C y E fueron significativamente mayores en los animales suplementados. El peso fetal aumentó en los animales suplementados junto con la disminución del peso de la placenta y aumento del número de placentomas, además se observó una disminución en la superficie vascular, logrando, con todo esto, una similitud a aquellas características observadas en ovejas preñadas a nivel del mar. Por lo tanto, la mayor expresión de estos factores angiogénicos en condiciones de hipoxia hipobárica produce alteraciones tanto a nivel fetal como placentario debido a la presencia de un estado de estrés oxidativo, que pueden ser prevenidas por el uso de terapia antioxidante, logrando un desarrollo gestacional equivalente al de una preñez ovina a nivel de mar

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / En la producción ovina, la obtención de mellizos es una estrategia clave para mejorar la productividad predial. Sin embargo, los corderos mellizos nacen con menor peso que las crías gestadas individualmente, lo cual está asociado a mayor mortalidad perinatal, y en consecuencia se podría afectar negativamente la rentabilidad del sistema productivo. El desarrollo intrauterino de las crías depende principalmente de su potencial genético y de la disponibilidad de nutrientes y oxígeno. La transferencia de nutrientes y gases entre los compartimentos materno-fetal responde al flujo sanguíneo útero-placentario y a la capacidad (suficiencia) placentaria, por lo que la subnutrición materna y la insuficiencia placentaria pueden perjudicar el desarrollo de las crías al comprometerse el influjo de nutrientes y/o oxígeno. Este estudio se realizó utilizando 64 ovejas de la raza Corriedale, categorizadas por gestación (única o mellicera). Las ovejas fueron sometidas a dos planos nutricionales desde el día 30 hasta el término de la gestación; uno cubre el ∼70% y otro el ∼100% de los requerimientos energético-proteicos de la oveja gestante. Además se evaluó el peso y la condición corporal de las ovejas cada 30 días. A los 100 y 140 días de gestación se realizaron cesáreas y se tomaron muestras sanguíneas desde la vena umbilical de cada feto, para evaluar variables asociadas a la oxigenación fetal (PO2, PCO2, saturación de hemoglobina con oxígeno, hematocrito y pH) y de la morfometría fetal (longitud cabeza-cola, perímetro toráxico, largo de mano y largo de pata). Adicionalmente, a los 140 días de gestación se evaluó el peso y la morfología placentaria. Los resultados se analizaron mediante análisis de varianza (ANOVA), donde los factores fijos fueron el número de fetos en gestación (único o mellizos) y el plano nutricional (~70 ó ~100% de los requerimientos establecidos por el National Research Council, NRC), seguido del test post-hoc de Duncan para detección de diferencias entre grupos. Se consideraron diferencias significativas cuando p≤0,05. A los 100 días de gestación, no se evidenciaron diferencias estadísticamente significativas en ninguna de las variables estudiadas. A los 140 días de gestación el peso de las ovejas alimentadas con dieta control (~100% NRC) fueron mayores que el de las ovejas alimentadas con dieta de restricción (~70% NRC). Las ovejas del grupo control gestación única (CU) presentaron la mayor condición corporal al compararse con los demás grupos. Las ovejas de gestación mellicera presentaron mayores valores de peso placentario total por oveja y mayor número de placentomas por oveja que las de gestación única. Las ovejas de gestación única presentaron mayores valores de peso placentario total por feto y mayor número de placentomas por feto que las de gestación mellicera. Los tipos de placentomas predominantes en todos los grupos fueron los de tipo A y B, presentándose en menor proporción los C y D. Las concentraciones de oxígeno fetal fueron mayores en el grupo dieta control gestación única (CU) en comparación con los demás grupos experimentales. Además, se evidenció una correlación positiva, moderada (r=0.459) y estadísticamente significativa (p=0.013) entre la PO2 de la vena umbilical y peso fetal a los 140 días de gestación. Los fetos gestados individualmente presentaron mayor peso que los obtenidos por gestación mellicera / In sheep production, obtaining twins is a key strategy to improve farm productivity. However, twin lambs are born lighter and smaller than singletons, which is associated with higher perinatal mortality, therefore the profitability of the productive system can be reduced. The intrauterine development of the offspring depends mainly on their genetic potential and the availability of nutrients and oxygen. The transfer of nutrients and gases between the maternal-fetal compartments responds to utero-placental blood flow and placental capacity (sufficiency), so that maternal undernourishment and placental insufficiency can adversely affect the development of the offspring by compromising the nutrient and/or oxygen influx. This study was conducted on 60 corriedale bred sheep, separated by pregnancy rank (singleton or twin bearing). The sheep in this study underwent two nutritional plans from day 30 until the end of gestation, one that covered ~70% and another ~ 100% of the energetic-protein requirements of the pregnant sheep. The weight and body condition score of the sheep were evaluated every 30 days. At 100 and 140 days of gestation, caesarean sections were performed. Blood samples were collected from the umbilical vein of each fetus to evaluate variables associated with fetal oxygenation (PO2, PCO2, hemoglobin saturation with oxygen, hematocrit and pH). Fetal morphometric parameters were also measured (crown-rump length, thoracic perimeter, arm and leg length). Additionally, at 140 days of gestation, an evaluation of placental weight and morphology was performed. The results were evaluated by analysis of variance (ANOVA), where the fixed factors were the number of fetuses in gestation (single or twins) and the nutritional level (~70 or ~100% of the requirements established by the NRC), followed by the post-hoc Duncan test. Significant differences were considered at p≤0.05. At 100 days of gestation, no differences were evident in any of the variables studied. At 140 days of gestation the weight of the ewes fed with the control diet (~100% NRC) was greater than that of the ewes fed with the restriction diet (~70% NRC). The ewes from the single gestation control group (SC) had the highest body condition score when compared with the other groups. Twin-bearing ewes had higher values of total placental weight per sheep and a greater number of placentomes per sheep than those of single-gestation ewes. The single-gestation ewes had higher values of total placental weight per fetus and more placentomes per fetus than twin-bearing ewes. The predominant type of placentome in all groups were A and B, with a lower proportion of C and D. Fetal oxygen concentrations were higher in the single gestation control group (SC) compared to the other experimental groups. In addition, there was a positive correlation (r = 0.459) and statistically significant (p = 0.013) between the PO2 obtained from the umbilical vein and fetal weight at 140 days of gestation. All singletons were heavier than the twins / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1160892.