Thesis (Ph. D.)--Michigan State University. Dept. of Chemistry, 2006. / Title from PDF t.p. (viewed on June 19, 2009) Includes bibliographical references (p. 229-249). Also issued in print.

Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2003. / Title from first page of PDF file. Document formatted into pages; contains xvii, 158 p.; also includes graphics (some col.) Includes bibliographical references (p. 146-158). Available online via OhioLINK's ETD Center

Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2004. / Document formatted into pages; contains 181 p. Includes bibliographical references. Abstract available online via OhioLINK's ETD Center; full text release delayed at author's request until 2005 Nov. 24.

Thesis (Ph. D.)--Virginia Commonwealth University, 2007. / Prepared for: Dept. of Human Genetics Bibliography: leaves 126 - 136. Available online via the internet.

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são consideradas o tipo de célula-tronco adulta mais plástico, além de possuírem uma localização perivascular e residirem em todos órgãos e tecidos adultos. Nos últimos anos, as MSCs isoladas do tecido adiposo (ADSCs) têm recebido grande atenção por parte da medicina regenerativa, por serem facilmente isoladas e compartilharem várias características com as MSCs de medula óssea. Vários aspectos básicos da biologia das ADSCs têm sido estudados, mas pouco ainda se sabe sobre os mecanismos envolvidos na resistência destas células à exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos, como quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer. Desta forma, este trabalho teve como objetivo investigar o potencial citotóxico e genotóxico de duas drogas comumente utilizadas em terapias anti-câncer, cisplatina (CIS) e paclitaxel (PAC) sobre ADSCs humanas, através dos ensaios MTT e cometa. Através do ensaio MTT confirmamos a já descrita resistência das ADSCs humanas aos agentes quimioterápicos e utilizando o ensaio cometa, mostramos que CIS e PAC não são capazes de induzir danos significativos ao DNA destas células. Assim, estes dados mostram que as ADSCs humanas não são sensíveis ao tratamento com os agentes testados. / As células-tronco mesenquimais (MSCs) são consideradas o tipo de célula-tronco adulta mais plástico, além de possuírem uma localização perivascular e residirem em todos órgãos e tecidos adultos. Nos últimos anos, as MSCs isoladas do tecido adiposo (ADSCs) têm recebido grande atenção por parte da medicina regenerativa, por serem facilmente isoladas e compartilharem várias características com as MSCs de medula óssea. Vários aspectos básicos da biologia das ADSCs têm sido estudados, mas pouco ainda se sabe sobre os mecanismos envolvidos na resistência destas células à exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos, como quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer. Desta forma, este trabalho teve como objetivo investigar o potencial citotóxico e genotóxico de duas drogas comumente utilizadas em terapias anti-câncer, cisplatina (CIS) e paclitaxel (PAC) sobre ADSCs humanas, através dos ensaios MTT e cometa. Através do ensaio MTT confirmamos a já descrita resistência das ADSCs humanas aos agentes quimioterápicos e utilizando o ensaio cometa, mostramos que CIS e PAC não são capazes de induzir danos significativos ao DNA destas células. Assim, estes dados mostram que as ADSCs humanas não são sensíveis ao tratamento com os agentes testados.

CARDOSO, Mirlane Guimarães de Melo. Paclitaxel potencia a hipernocicepção inflamatória : evidências da participação de citocinas e do receptor toll tipo 4 (TLR-4). 2009. 150 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-05T11:58:11Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_mgmcardoso.pdf: 7066623 bytes, checksum: ae7fba50c1dec79440b3f6d957ef3a7c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:24:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_mgmcardoso.pdf: 7066623 bytes, checksum: ae7fba50c1dec79440b3f6d957ef3a7c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:24:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_mgmcardoso.pdf: 7066623 bytes, checksum: ae7fba50c1dec79440b3f6d957ef3a7c (MD5) Previous issue date: 2009 / Paclitaxel (PCX) was the first effective antineoplastic medicine in the treatment of tumors that do not respond to conventional chemotherapy. Clinically, it induces incapacitating arthralgias and myalgias that interfere with the patient quality of life and limit the duration of the treatment. This is observed in up to 57% of the patients using the drug. Despite these clinical manifestations, nothing has been published that could explain the involvement of pro-inflammatory cytokines in the triggering of the hypernociceptive effect of PCX, even though it is known that the drug shares with LPS a signaling pathway started by Toll-like receptors (TLR-2 and TLR-4) that activates genes coding for TNF-α. The literature suggests that there is a crosstalk between these two members of the Toll family and that different agonists of TLR-2 and TLR-4 are able to induce the activation of NF-kB, AP1 and MAP kinase in the generation of TNF-α, a key cytokines in the cascade liberating the final inflammatory mediators that act directly on the nociceptor. Data obtained in laboratory show that the injection of zymozan into rat knee-joints produces a periarthritis characteristic of the hypernociception seen in the knee joint incapacitation test and that PCX (8mg/kg) amplified the response when ¼ of the zymozan (ZY) doses was injected. The amplification was inhibited when animals were pre-treated with inhibitors of cytokines and prostanoids. Objective: To study the role of TNF-α and TLR-4 on the initiation of the potentiating effect of PCX on the experimental arthralgia induced by ZY. Material and Methods: Rats were pre-treated Sc with thalidomide, pentoxifiline, dexametazone, indometacin and celecoxib and then stimulated with an intra-articular subdoses of ZY (250μg/animal). After the first measurement of the paw elevation time in the knee joint incapacitation test, the animals were treated with PCX (8mg/kg ip). On a second trial, rats were treated for three consecutive days with atorvastatin (3, 10, 30mg/kg/day; VO). The following parameters were evaluated: modulation of the effect on the knee joint incapacitation test (JIT), amount of cytokines in the rat’s knee lavage (TNF-α, IL-1 β, IL-6, KC and CINC) and immunohistochemistry for TNF-α, IL-1β and TLR-4 on synovial tissue. Results: It was shown that PCX (8mg/kg) potentiates the experimental arthralgia induced by ZY in the rats as evaluated by the significant increase in paw elevation time (p<0.001) at the 4th h of arthritis in relations to controls. Such effect was significantly inhibited by pre-treatment with thalidomide (45mg/kg) and the inhibition was associated with a decrease in the amount of TNF-α produced by synovial tissue cells and detected in the joint lavage and in the immunohistochemistry for TNF-α. Likewise the inhibition of the amplifying response to PCX was seen with pre-treatment with atorvastatin at the three doses used in the experiment, which was also associated with a lower TNF-α in the joint lavage and perceptible decrease in the immunohistochemistry for TNF-α, IL-1β and TLR-4. Conclusions: PCX potentiates the hypernociception induced by ZY through an indirect effect on synovial membrane resident cells that release TNF-α probably through activation of the NF-kB pathway by TLR-4/MD2, since the potentiating effect was inhibited by atorvastatin, a TLR-4 antagonist. Released TNF-α act starting the cascade of mediators involved in the inflammatory pain and this partially explains the arthralgia in patients treated with PCX. / Paclitaxel (PCX) foi o 1º antineoplásico efetivo no tratamento de cânceres refratários a quimioterapia convencional. Clinicamente, induz artralgias e mialgias de caráter incapacitante que comprometem a qualidade de vida e limitam o tempo de tratamento antitumoral, acometendo até 57% dos doentes. Apesar destas repercussões clínicas nada foi descrito até o momento, visando elucidar o envolvimento de citocinas pró-inflamatórias, na gênese da atividade hipernociceptiva do PCX, já que a droga compartilha com o LPS uma via de sinalização desencadeada por receptores Toll (TLR-4 e TLR-2) para geração de genes que codificam TNF-α. Dados da literatura sugerem que ocorra um “cross-talk” entre esses dois membros da família Toll e, que agonistas diferentes de TLR-2 e TLR-4 são capazes de induzir a ativação de NF-αB, AP1 e MAP kinase e a geração de TNF-α, citocina chave na cascata de liberação de mediadores inflamatórios finais que atuam diretamente no nociceptor. Dados do laboratório registraram que o zymosan (ZY) intrarticular em joelhos de ratos produz uma periartrite característica da hipernocicepção no teste de incapacitação articular (IA), e que PCX (8mg/kg) amplificou essa resposta quando se injetou ¼ da dose do ZY. Tal amplificação foi inibida com o pré-tratamento com inibidores de citocina e de prostanóides. Objetivo. Investigar a participação do TLR-4 e TNF-α na gênese do efeito potencializador do PCX na artralgia experimental induzida por ZY. Material e Métodos. Ratos foram pré-tratados Sc com talidomida (TLD), pentoxifilina, dexametasona, indometacina ou celecoxib e estimulados com subdose de ZY (250μg/animal; i-art). Após a 1ª medida do tempo de suspensão de pata (TSP) no teste de IA, os animais receberam PCX (8mg/kg; ip). Numa segunda etapa os ratos receberam durante três dias consecutivos o pré-tratamento com atorvastatina (3, 10, 30mg/kg/dia; VO). Os seguintes parâmetros foram avaliados: modulação da hipernocicepção no teste de incapacitação articular, dosagem de citocinas em lavado de joelho de ratos (TNF-α, IL-1α, Il-6, KC e CINC) e imunohistoquímica para TNF-α, IL-1α e TLR-4 no tecido sinovial. Resultados. Ficou demonstrado que PCX (8mg/kg) potencializa a artralgia experimental induzida por ZY em ratos avaliada pelo aumento significativo do TSP (p<0,001) na 4ªh de artrite em relação ao controle no teste de IA. Tal efeito foi inibido de maneira significativa pelo pré-tratamento com TLD (45mg/kg) e essa inibição foi associada à redução dos níveis de TNF-α produzido pelas células do tecido sinovial no lavado articular e da marcação imunohistoquímica para TNF-. Da mesma forma a inibição dessa resposta amplificadora do PCX foi ratificado pelo pré-tratamento com atorvastatina nas três doses utilizadas no modelo, também sendo associado à diminuição significativa dos níveis de TNF- no lavado articular e visível redução na marcação imunohistoquímica para TNF-, IL-1 e TLR-4, nas três doses utilizadas. Conclusões. PCX potencializa a hipernocicepção induzida por ZY por um mecanismo indireto sobre células residentes da membrana sinovial que liberam TNF- provavelmente pela ativação da NF-B via TLR-4/MD2, pois esse efeito potencializador foi inibido pela atorvastatina, um provável antagonista de TLR-4. O TNF- liberado age iniciando a cascata de mediadores envolvidos com a dor inflamatória, o que justifica em parte as artralgias dos pacientes em tratamento com PCX.

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são consideradas o tipo de célula-tronco adulta mais plástico, além de possuírem uma localização perivascular e residirem em todos órgãos e tecidos adultos. Nos últimos anos, as MSCs isoladas do tecido adiposo (ADSCs) têm recebido grande atenção por parte da medicina regenerativa, por serem facilmente isoladas e compartilharem várias características com as MSCs de medula óssea. Vários aspectos básicos da biologia das ADSCs têm sido estudados, mas pouco ainda se sabe sobre os mecanismos envolvidos na resistência destas células à exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos, como quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer. Desta forma, este trabalho teve como objetivo investigar o potencial citotóxico e genotóxico de duas drogas comumente utilizadas em terapias anti-câncer, cisplatina (CIS) e paclitaxel (PAC) sobre ADSCs humanas, através dos ensaios MTT e cometa. Através do ensaio MTT confirmamos a já descrita resistência das ADSCs humanas aos agentes quimioterápicos e utilizando o ensaio cometa, mostramos que CIS e PAC não são capazes de induzir danos significativos ao DNA destas células. Assim, estes dados mostram que as ADSCs humanas não são sensíveis ao tratamento com os agentes testados. / As células-tronco mesenquimais (MSCs) são consideradas o tipo de célula-tronco adulta mais plástico, além de possuírem uma localização perivascular e residirem em todos órgãos e tecidos adultos. Nos últimos anos, as MSCs isoladas do tecido adiposo (ADSCs) têm recebido grande atenção por parte da medicina regenerativa, por serem facilmente isoladas e compartilharem várias características com as MSCs de medula óssea. Vários aspectos básicos da biologia das ADSCs têm sido estudados, mas pouco ainda se sabe sobre os mecanismos envolvidos na resistência destas células à exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos, como quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer. Desta forma, este trabalho teve como objetivo investigar o potencial citotóxico e genotóxico de duas drogas comumente utilizadas em terapias anti-câncer, cisplatina (CIS) e paclitaxel (PAC) sobre ADSCs humanas, através dos ensaios MTT e cometa. Através do ensaio MTT confirmamos a já descrita resistência das ADSCs humanas aos agentes quimioterápicos e utilizando o ensaio cometa, mostramos que CIS e PAC não são capazes de induzir danos significativos ao DNA destas células. Assim, estes dados mostram que as ADSCs humanas não são sensíveis ao tratamento com os agentes testados.

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são consideradas o tipo de célula-tronco adulta mais plástico, além de possuírem uma localização perivascular e residirem em todos órgãos e tecidos adultos. Nos últimos anos, as MSCs isoladas do tecido adiposo (ADSCs) têm recebido grande atenção por parte da medicina regenerativa, por serem facilmente isoladas e compartilharem várias características com as MSCs de medula óssea. Vários aspectos básicos da biologia das ADSCs têm sido estudados, mas pouco ainda se sabe sobre os mecanismos envolvidos na resistência destas células à exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos, como quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer. Desta forma, este trabalho teve como objetivo investigar o potencial citotóxico e genotóxico de duas drogas comumente utilizadas em terapias anti-câncer, cisplatina (CIS) e paclitaxel (PAC) sobre ADSCs humanas, através dos ensaios MTT e cometa. Através do ensaio MTT confirmamos a já descrita resistência das ADSCs humanas aos agentes quimioterápicos e utilizando o ensaio cometa, mostramos que CIS e PAC não são capazes de induzir danos significativos ao DNA destas células. Assim, estes dados mostram que as ADSCs humanas não são sensíveis ao tratamento com os agentes testados. / As células-tronco mesenquimais (MSCs) são consideradas o tipo de célula-tronco adulta mais plástico, além de possuírem uma localização perivascular e residirem em todos órgãos e tecidos adultos. Nos últimos anos, as MSCs isoladas do tecido adiposo (ADSCs) têm recebido grande atenção por parte da medicina regenerativa, por serem facilmente isoladas e compartilharem várias características com as MSCs de medula óssea. Vários aspectos básicos da biologia das ADSCs têm sido estudados, mas pouco ainda se sabe sobre os mecanismos envolvidos na resistência destas células à exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos, como quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer. Desta forma, este trabalho teve como objetivo investigar o potencial citotóxico e genotóxico de duas drogas comumente utilizadas em terapias anti-câncer, cisplatina (CIS) e paclitaxel (PAC) sobre ADSCs humanas, através dos ensaios MTT e cometa. Através do ensaio MTT confirmamos a já descrita resistência das ADSCs humanas aos agentes quimioterápicos e utilizando o ensaio cometa, mostramos que CIS e PAC não são capazes de induzir danos significativos ao DNA destas células. Assim, estes dados mostram que as ADSCs humanas não são sensíveis ao tratamento com os agentes testados.

This study examined a new model of paclitaxel-induced neuropathic pain and the effects of systemic paclitaxel on the gap junction protein subunit Cx43 and potassium inwardly-rectifying channel Kir4.1 within the dorsal root ganglia. In the new neuropathic pain model, subplantar injections of paclitaxel resulted in decreased conduction velocities of A-beta fiber compound action potentials in the sciatic (5.9%) and tibial nerves (6.8%) as well as in M (10.6%) and H (10.2%) waves. By using repeated recordings it was found that following paclitaxel injection, conduction velocities in the contralateral plantar nerve increased (9.2%). Systemic injections of paclitaxel resulted in reduced Kir4.1 immunolabeling in the dorsal root ganglia compared to vehicle injections. This reduction was observed in total labeling (32.4%) as well as in areas of intense labeling (28.7%). Reductions in overall Cx43 immunolabeling (25%) and area (25%) following systemic paclitaxel injections were not statistically significant. The results of these studies suggest that subplantar injections of paclitaxel can result in reduced peripheral nerve conduction velocities. The results also show that a unilateral neuropathy can result in contralateral changes in conduction velocities. The effects of paclitaxel on reducing Kir4.1 levels suggest that neuropathic pain caused by paclitaxel may share mechanisms in common with other types of neuropathies which show similar changes in Kir4.1 levels.

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Šárka Havrlantová Supervisor: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Name of diploma thesis: Optimization of separation conditions for HPCCC of paclitaxel The aim of this work is a feasibility study of natural substances isolation (in my case it is paclitaxel and its intermediate 10-deacetylbaccatin) using modern technique called High performance countercurrent chromatography (HPCCC) available in Teva in Opava. For this basic research it was necessary to study the literature and test various solvent systems. Chosen solvent systems were then tested together with natural substance in HPCCC, results were processed and discussed. Countercurrent chromatography is considered a modern separation technique based on two immiscible liquids. One of them is called a stationary phase and is held inside the column by centrifugal force, the second liquid is called a mobile phase and is pumped through the column. Then the injected liquid sample is also pumped through the column and depending on distribution coefficients the sample components are either held in the stationary phase or pass through the column and detector into fraction collector. Advantages of this method are e.g. total...