Hoy en día, la estética dental se ha convertido en un área de gran repercusión, debido a la importancia que los individuos atribuyen a su sonrisa, por eso, realizar tratamientos que causen el mínimo impacto sobre la estética del paciente es esencial para dar por exitoso un tratamiento odontológico. La endodoncia regenerativa es uno de los desarrollos más interesantes en la odontología actual constituyendo una nueva frontera en la especialidad de la endodoncia. Mediante ella, se pretende reponer tejidos perdidos aplicando principios de ingeniería tisular, siendo la “revascularización pulpar”, la técnica más usada. Ésta, que se realiza en piezas dentales que han sufrido necrosis y aún no han completado su formación, consiste en revascularizar el conducto con sangre procedente de la papila dental apical para que las células madre recolonicen el conducto, regeneren la pulpa y, con ello, completen la maduración de la raíz. El principal problema recae en que ciertos materiales usados durante esta técnica pueden generar tinción en el diente. Por un lado, están los preparados antibióticos inyectados dentro del conducto para controlar la infección y, por otro, los cementos utilizados como barrera cervical que permanecen en contacto con la dentina y la sangre. Atendiendo a estas dos situaciones, el principal objetivo de la presente investigación es evaluar la capacidad de tinción, sobre dientes anteriores, que tiene, por un lado, el preparado de pasta triantibiótica (TAP) más utilizado para esta técnica (compuesto principalmente de Ciprofloxacino, Metronidazol y Minociclina) y, por otro lado, el Biodentine (un cemento a base de silicato de calcio de reciente aparición) utilizado como barrera cervical en contacto con sangre. Como objetivo secundario se propuso la aplicación de un agente blanqueador con el fin de evaluar el efecto de recuperación del color según la procedencia de la tinción. Para realizar los experimentos, se utilizaron treinta dientes intactos de origen humano a los cuales se les cortaron los ápices y se les ensanchó el conducto, para reproducir dientes inmaduros con ápice abierto. Tras realizar la preparación, éstos se dividieron en 3 grupos, de diez especímenes cada uno y se conservaron hasta el inicio de los ensayos en cámara de humedad 100% y 37ºC, para simular el entorno bucal. Los experimentos se dividieron en dos fases: la primera de ellas comprendió la etapa en la que los especímenes recibieron tratamientos de revascularización pulpar y la segunda, la etapa en la que los especímenes recibían blanqueamientos dentales. Durante la fase l al grupo 1 se le inoculó sangre de origen humano, como grupo control, por un total de 3 semanas, durante las cuales se tomaron registros colorimétricos en la semana 1,2 y 3. Al grupo 2 se le aplicó TAP durante 3 semanas para después removerla e inocular sangre hasta completar los 3 meses. En este grupo se tomaron registros colorimétricos en la semana 2, 3, 4, 6, 8 y 12. Al grupo 3 se le inoculó sangre y se realizó un sellado cervical con Biodentine durante 3 meses, durante los cuales se tomaron registros colorimétricos en la semana 2, 4, 8 y 12. En la fase 2 se realizaron tres sesiones de blanqueamiento a los grupos 2 y 3, por un total de 3 semanas, durante las cuales se tomaron registros colorimétricos en la semana 1, 2 y 3. Para las mediciones de color se utilizó un Telespectroradiómetro (CS-2000 Minolta) y los especímenes fueron colocados en una cabina de luz Verivide CAC 150 bajo luz fluorescente simuladora de luz diurna D65. El dispositivo registró los valores de reflectancia espectral de cada uno y, tras realizar la división entre el estímulo espectral correspondiente a la muestra por el estímulo espectral del blanco patrón, los datos se analizaron en CIE-L*a*b* y CIEDE2000. Los resultados mostraron variación de color perceptible ( 3,7) durante la primera fase en todos los grupos, siendo el grupo 2 el que más tinción mostró ( 26,12), seguido del grupo 1 ( 15,49) y por último el grupo 3, con un valor dos veces menor que el alcanzado en el grupo 3 ( 13,48). El atributo que más influyó al cambio de color fue el cambio de claridad y después el del croma ( ), siendo la variación tonal ( ) prácticamente constante durante todo el proceso. Durante la segunda fase, los grupos 2 y 3 lograron recuperar gran parte del color perdido ( 8,31 y 7,26 respectivamente), siendo ligeramente mejores los resultados del grupo 3. Hay que reseñar que el grupo 2, partiendo con cierta desventaja frente al grupo 3 ya que al finalizar el tratamiento sus especímenes estaban más teñidos, consiguió reducir de forma considerable su tinción y acercarse a cifras parecidas a las del grupo 3. Con todo, algunos especímenes del grupo 2 conservaban un halo de tinción en la zona del tercio incisal más gingival. De estos resultados se puede concluir que el uso de TAP produce tinción en la dentina y que el empleo de Biodentine como material sellador, aunque en menor medida, no impide que exista tinción. Por otro lado, el uso de agentes blanqueadores a base de peróxido de hidrógeno al 50%, hidróxido amónico al 0,4% y perborato de sodio monohidratado al 15% puede ayudar a devolver gran parte del color perdido en revascularización pulpar, pero no su totalidad. Se requieren más estudios que investiguen sobre otras formas de controlar la infección sin que generen tinción en la dentina, al igual que otros donde se comprueben nuevos CSC para poder usar en revascularización pulpar y que sean estables en presencia de sangre.

Substâncias contendo clorexidina (CHX) ou associação de antibióticos têm sido pesquisadas como medicações intracanal. Os objetivos do presente estudo foram: Capítulo 1- Caracterizar a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos à pasta triantibiótica (Trimix), por microscopia óptica convencional e por RT-PCR em tempo real; e Capítulo 2 - Comparar a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos a medicações intracanal contendo CHX por microscopia óptica convencional. No Capítulo 1, a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos foi avaliada por meio da implantação de tubos de polietilieno vazios ou contendo uma das substâncias avaliadas: Trimix ou Calen. Como controle adicional, foram utilizados animais que não receberam a implantação dos tubos. Para a avaliação histopatológica, decorridos os períodos experimentais de 7, 21 e 63 dias, os implantes (n=10) contendo Trimix ou Calen foram removidos juntamente com o tecido conjuntivo subcutâneo e a pele adjacente e submetidos ao processamento histotécnico, sendo os cortes corados pelo método de hematoxilina e eosina e picrosírius vermelho. Foram efetuadas análises qualitativa, determinando os parâmetros de resposta biológica e quantitativa, onde foram avaliados o número de células inflamatórias e de vasos, a área e a densidade vascular, além do percentual relativo de colágeno. As reações de RT-PCR em tempo real foram realizadas nos grupos tubo vazio, pasta Calen, Trimix e controle adicional nos períodos experimentais de 7 e 21 dias. Foi realizada a detecção e quantificação das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, TNF-α e IL- 17) e anti-inflamatória (TGF-β), fator crescimento endotelial vascular (VEGF), fator induzido por hipóxia (HIF-1α), metaloproteinases (MMP-2 e -9) e inibidores de metaloproteinases (TIMP-1 e - 2). Os resultados foram comparados empregando teste t de Student e ANOVA, seguida do pósteste de Tukey. No Capítulo 2, foi efetuada a comparação da resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos às pastas Calen+CHX a 0,5%, Calen+CHX a 2,0%, ao gel de CHX a 2,0% e à pasta Calen (controle) utilizando metodologia semelhante à empregada para avaliação histopatológica no Capítulo 1. Os resultados obtidos foram analisados por meio da ANOVA, seguida do pós-teste de Tukey. O nível de significancia adotado em todas as análises estatísticas foi de 5%. Com base nos resultados obtidos, pôde-se concluir que: 1) A resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos à pasta Trimix caracterizou-se por reação inflamatória aguda persistente e ausência de reparo no período estudado de 63 dias, o que foi suportado pela maior expressão gênica dos biomarcadores relacionados à resposta inflamatória e angiogênica, comparado à pasta Calen; 2) Quando comparadas as medicações contendo CHX, os resultados evidenciaram que a Calen+CHX a 0,5% exibiu resposta tecidual reparativa, em contraste com a Calen+CHX a 2,0% e o gel de CHX a 2,0% que propiciaram resposta inflamatória persistente, apontando para agressividade destes materiais. Considerando a Calen+CHX a 2,0% e o gel de CHX a 2,0%, este apresentou resposta inflamatória de maior intensidade. Desse modo, o presente estudo fornece indícios que as pastas Trimix, Calen+CHX a 2,0% e o gel de CHX a 2,0% não deveriam ser empregadas como medicação intracanal. / Substances containing chlorhexidine (CHX) or combination of antibiotics have been investigated as intracanal dressings. The aim of this study were: Chapter 1 - To characterize the response of mice subcutaneous connective tissue to triantibiotic paste (Trimix), by conventional optical microscopy and real-time RT-PCR; and Chapter 2 - Compare the response of mice subcutaneous connective tissue to intracanal dressings containing CHX by conventional optical microscopy. In Chapter 1, the response of mice subcutaneous connective tissue was assessed by implantation of polyethylene tubes empty or containing one of the substances evaluated: Trimix or Calen. As additional control, animals that not received implantation of the tubes were used. For histopathological evaluation, after the experimental periods of 7, 21 and 63 days, the implants (n=10) containing Trimix or Calen were removed along with the subcutaneous connective tissue and adjacent skin and subjected to processing histotechnical, and the sections were stained with hematoxylin and eosin or picrosirius red. It was carried out a qualitative analysis, determining the biological parameters and a quantitative response, assessing the number of inflammatory cells and vessels, the area and vascular density, and the relative percentage of collagen. The real-time RT-PCR reactions were performed in the empty tube group, pastes Calen, Trimix and additional control at the experimental periods of 7 and 21 days. The detection and quantification of proinflammatory (IL-1β, TNF-α and IL-17) and antiinflammatory cytokines (TGF-β), vascular endothelial growth factor (VEGF), hypoxia-induced factor (HIF-1α), metalloproteinases (MMP-2 and -9) and metalloproteinases inhibitors (TIMP-1 and -2) were performed. The results were compared using Student\'s t test and ANOVA followed by Tukey test. In Chapter 2, it was compared the response of mice subcutaneous connective tissue to Calen+0.5% CHX, Calen+2.0% CHX, 2.0% CHX gel and paste Calen (control) using methodology similar to that one used for histopathologic evaluation in Chapter 1. The results were analyzed by ANOVA followed by Tukey test. The significance level for all statistical analysis was 5%. It was concluded: 1) The response of mice subcutaneous connective tissue to Trimix paste was characterized by persistent acute inflammatory reaction with no repair during the studied period of 63 days, which was supported by the higher gene expression of biomarkers related to inflammation and angiogenesis, compared to Calen paste; 2) The Calen+0.5% CHX showed reparative tissue response, in contrast to Calen+2.0% CHX and 2.0% CHX gel that have led to persistent inflammatory response, indicating aggressiveness of these materials. Considering the Calen+2.0% CHX and CHX 2.0% gel, this induced more intense inflammatory response. Thus, this study provides evidence that the pastes Trimix, Calen+2.0% CHX and 2.0% CHX gel should not be used as intracanal dressing.

Substâncias contendo clorexidina (CHX) ou associação de antibióticos têm sido pesquisadas como medicações intracanal. Os objetivos do presente estudo foram: Capítulo 1- Caracterizar a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos à pasta triantibiótica (Trimix), por microscopia óptica convencional e por RT-PCR em tempo real; e Capítulo 2 - Comparar a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos a medicações intracanal contendo CHX por microscopia óptica convencional. No Capítulo 1, a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos foi avaliada por meio da implantação de tubos de polietilieno vazios ou contendo uma das substâncias avaliadas: Trimix ou Calen. Como controle adicional, foram utilizados animais que não receberam a implantação dos tubos. Para a avaliação histopatológica, decorridos os períodos experimentais de 7, 21 e 63 dias, os implantes (n=10) contendo Trimix ou Calen foram removidos juntamente com o tecido conjuntivo subcutâneo e a pele adjacente e submetidos ao processamento histotécnico, sendo os cortes corados pelo método de hematoxilina e eosina e picrosírius vermelho. Foram efetuadas análises qualitativa, determinando os parâmetros de resposta biológica e quantitativa, onde foram avaliados o número de células inflamatórias e de vasos, a área e a densidade vascular, além do percentual relativo de colágeno. As reações de RT-PCR em tempo real foram realizadas nos grupos tubo vazio, pasta Calen, Trimix e controle adicional nos períodos experimentais de 7 e 21 dias. Foi realizada a detecção e quantificação das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, TNF-α e IL- 17) e anti-inflamatória (TGF-β), fator crescimento endotelial vascular (VEGF), fator induzido por hipóxia (HIF-1α), metaloproteinases (MMP-2 e -9) e inibidores de metaloproteinases (TIMP-1 e - 2). Os resultados foram comparados empregando teste t de Student e ANOVA, seguida do pósteste de Tukey. No Capítulo 2, foi efetuada a comparação da resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos às pastas Calen+CHX a 0,5%, Calen+CHX a 2,0%, ao gel de CHX a 2,0% e à pasta Calen (controle) utilizando metodologia semelhante à empregada para avaliação histopatológica no Capítulo 1. Os resultados obtidos foram analisados por meio da ANOVA, seguida do pós-teste de Tukey. O nível de significancia adotado em todas as análises estatísticas foi de 5%. Com base nos resultados obtidos, pôde-se concluir que: 1) A resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos à pasta Trimix caracterizou-se por reação inflamatória aguda persistente e ausência de reparo no período estudado de 63 dias, o que foi suportado pela maior expressão gênica dos biomarcadores relacionados à resposta inflamatória e angiogênica, comparado à pasta Calen; 2) Quando comparadas as medicações contendo CHX, os resultados evidenciaram que a Calen+CHX a 0,5% exibiu resposta tecidual reparativa, em contraste com a Calen+CHX a 2,0% e o gel de CHX a 2,0% que propiciaram resposta inflamatória persistente, apontando para agressividade destes materiais. Considerando a Calen+CHX a 2,0% e o gel de CHX a 2,0%, este apresentou resposta inflamatória de maior intensidade. Desse modo, o presente estudo fornece indícios que as pastas Trimix, Calen+CHX a 2,0% e o gel de CHX a 2,0% não deveriam ser empregadas como medicação intracanal. / Substances containing chlorhexidine (CHX) or combination of antibiotics have been investigated as intracanal dressings. The aim of this study were: Chapter 1 - To characterize the response of mice subcutaneous connective tissue to triantibiotic paste (Trimix), by conventional optical microscopy and real-time RT-PCR; and Chapter 2 - Compare the response of mice subcutaneous connective tissue to intracanal dressings containing CHX by conventional optical microscopy. In Chapter 1, the response of mice subcutaneous connective tissue was assessed by implantation of polyethylene tubes empty or containing one of the substances evaluated: Trimix or Calen. As additional control, animals that not received implantation of the tubes were used. For histopathological evaluation, after the experimental periods of 7, 21 and 63 days, the implants (n=10) containing Trimix or Calen were removed along with the subcutaneous connective tissue and adjacent skin and subjected to processing histotechnical, and the sections were stained with hematoxylin and eosin or picrosirius red. It was carried out a qualitative analysis, determining the biological parameters and a quantitative response, assessing the number of inflammatory cells and vessels, the area and vascular density, and the relative percentage of collagen. The real-time RT-PCR reactions were performed in the empty tube group, pastes Calen, Trimix and additional control at the experimental periods of 7 and 21 days. The detection and quantification of proinflammatory (IL-1β, TNF-α and IL-17) and antiinflammatory cytokines (TGF-β), vascular endothelial growth factor (VEGF), hypoxia-induced factor (HIF-1α), metalloproteinases (MMP-2 and -9) and metalloproteinases inhibitors (TIMP-1 and -2) were performed. The results were compared using Student\'s t test and ANOVA followed by Tukey test. In Chapter 2, it was compared the response of mice subcutaneous connective tissue to Calen+0.5% CHX, Calen+2.0% CHX, 2.0% CHX gel and paste Calen (control) using methodology similar to that one used for histopathologic evaluation in Chapter 1. The results were analyzed by ANOVA followed by Tukey test. The significance level for all statistical analysis was 5%. It was concluded: 1) The response of mice subcutaneous connective tissue to Trimix paste was characterized by persistent acute inflammatory reaction with no repair during the studied period of 63 days, which was supported by the higher gene expression of biomarkers related to inflammation and angiogenesis, compared to Calen paste; 2) The Calen+0.5% CHX showed reparative tissue response, in contrast to Calen+2.0% CHX and 2.0% CHX gel that have led to persistent inflammatory response, indicating aggressiveness of these materials. Considering the Calen+2.0% CHX and CHX 2.0% gel, this induced more intense inflammatory response. Thus, this study provides evidence that the pastes Trimix, Calen+2.0% CHX and 2.0% CHX gel should not be used as intracanal dressing.