Thesis (M.Sc.)--University of Adelaide, 1952. / Typewritten copy.

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Pasteurella multocida é um importante patógeno para suínos, causando rinite atrófica progressiva, pneumonia, pleurite, e septicemia. Para implantação de estratégias de controle e prevenção desta infecção, torna-se necessário o conhecimento a respeito do perfil de disseminação do agente em condições naturais e em diferentes tipos de sistema de produção. Tendo em vista a inexistência de técnicas sorológicas padronizadas para esta finalidade na espécie suína, o presente estudo teve por objetivos avaliar em um grupo de 90 animais a influência de diferentes sítios de coleta de amostra na detecção de animais portadores de P. multocida através da PCR e comparar estes dados a detecção de anticorpos na espécie suína através de um kit de ELISA comercial registrado para detecção de anticorpos contra P. multocida em aves. Foram coletados suabes de cavidade nasal, suabes de tonsila e sangue de 90 animais em idade de abate provenientes de dois sistemas de produção de suínos. Dentre os 90 animais, 14 (15,55%) foram positivos para detecção de P. multocida em suabes nasais e nenhum foi positivo em suabe de tonsila. Através do ELISA, 25 (27,77%) animais apresentaram anticorpos contra o agente. Através da análise de comparação de proporção, houve diferença significativa em relação à metodologia de diagnóstico nos diferentes testes realizados considerando-se valor de p < 0,0001 e intervalo de confiança de 95%. Ou seja, a freqüência de positivos foi significativamente maior no teste de ELISA, seguido pela reação em cadeia pela polimerase em suabes nasais, sugerindo que a cavidade nasal é o sitio primário de colonização dos animais por este agente e que o ELISA testado pode ser facilmente adaptado para avaliação do perfil sorológico do agente na espécie suína. / Pasteurella multocida is an important pathogen for pigs, causing progressive atrophic rhinitis, pneumonia, pleurisy, and septicemia. For implementation of strategies to control and prevent infections, it is necessary to know about the profile of agent spread in natural conditions and in different types of production system. Given the lack of standardized serological techniques for this purpose, this study aims to evaluate the influence of different methods and sites of sample collection in the detection of animals with P. multocida by polymerase chain reaction (PCR) and ELISA. We evaluated different pairs of primers specific for the agent and the reaction that have lower detection threshold will be used in the evaluation of the study sites. Swabs were collected from the nasal cavity, tonsil and also blood of 90 animals. Among these, 14 (15.55%) were positive for Pasteurella multocida by polymerase chain reaction (PCR), all of which were nasal swabs. There are no positive animals among the tonsil swabs. In the ELISA, 25 (27.77%) were positive, and of these, three (3.33%) were positive in both the polymerase chain reaction and the ELISA and the remaining 22 (24.44%) was positive by ELISA and negative by polymerase chain reaction. Using comparison of proportion analysis, was observed a significant differences in the methodology of diagnosis in different tests considering p-value <0.0001 and a confidence interval of 95%. Concluding, the frequency of positives was significantly higher in ELISA than by the polymerase chain reaction.

Pasteurella multocida é um importante patógeno para suínos, causando rinite atrófica progressiva, pneumonia, pleurite, e septicemia. Para implantação de estratégias de controle e prevenção desta infecção, torna-se necessário o conhecimento a respeito do perfil de disseminação do agente em condições naturais e em diferentes tipos de sistema de produção. Tendo em vista a inexistência de técnicas sorológicas padronizadas para esta finalidade na espécie suína, o presente estudo teve por objetivos avaliar em um grupo de 90 animais a influência de diferentes sítios de coleta de amostra na detecção de animais portadores de P. multocida através da PCR e comparar estes dados a detecção de anticorpos na espécie suína através de um kit de ELISA comercial registrado para detecção de anticorpos contra P. multocida em aves. Foram coletados suabes de cavidade nasal, suabes de tonsila e sangue de 90 animais em idade de abate provenientes de dois sistemas de produção de suínos. Dentre os 90 animais, 14 (15,55%) foram positivos para detecção de P. multocida em suabes nasais e nenhum foi positivo em suabe de tonsila. Através do ELISA, 25 (27,77%) animais apresentaram anticorpos contra o agente. Através da análise de comparação de proporção, houve diferença significativa em relação à metodologia de diagnóstico nos diferentes testes realizados considerando-se valor de p < 0,0001 e intervalo de confiança de 95%. Ou seja, a freqüência de positivos foi significativamente maior no teste de ELISA, seguido pela reação em cadeia pela polimerase em suabes nasais, sugerindo que a cavidade nasal é o sitio primário de colonização dos animais por este agente e que o ELISA testado pode ser facilmente adaptado para avaliação do perfil sorológico do agente na espécie suína. / Pasteurella multocida is an important pathogen for pigs, causing progressive atrophic rhinitis, pneumonia, pleurisy, and septicemia. For implementation of strategies to control and prevent infections, it is necessary to know about the profile of agent spread in natural conditions and in different types of production system. Given the lack of standardized serological techniques for this purpose, this study aims to evaluate the influence of different methods and sites of sample collection in the detection of animals with P. multocida by polymerase chain reaction (PCR) and ELISA. We evaluated different pairs of primers specific for the agent and the reaction that have lower detection threshold will be used in the evaluation of the study sites. Swabs were collected from the nasal cavity, tonsil and also blood of 90 animals. Among these, 14 (15.55%) were positive for Pasteurella multocida by polymerase chain reaction (PCR), all of which were nasal swabs. There are no positive animals among the tonsil swabs. In the ELISA, 25 (27.77%) were positive, and of these, three (3.33%) were positive in both the polymerase chain reaction and the ELISA and the remaining 22 (24.44%) was positive by ELISA and negative by polymerase chain reaction. Using comparison of proportion analysis, was observed a significant differences in the methodology of diagnosis in different tests considering p-value <0.0001 and a confidence interval of 95%. Concluding, the frequency of positives was significantly higher in ELISA than by the polymerase chain reaction.

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Caracteriza molecularmente 24 aislados de P. multocida provenientes de alpacas con neumonía, identificados por pruebas bioquímicas y mediante la prueba de PCR a travez de la amplificando del gen kmt1 presente solo en esta especie. Posteriormente se realizó la tipificación capsular mediante la técnica de PCR múltiple obteniéndose que todos los aislados pertenecen al tipo capsular A. La tipificación en base al antígeno LPS, el cual permite la clasificación de P. multocida en 16 serovares agrupados en 8 genotipos, resultó en que los aislados de este estudio pertenecieron al genotipo LPS L6, correspondiente a los serovares 10, 11, 12 y 15. Además, se analizó la presencia de 4 genes codificantes de factores de virulencia (toxA, tbpA, pfhA y hgbB), detectándose en todos los aislados los genes toxA (100%) y tbpA (100%). Para evaluar la diversidad entre los aislados, se emplearon las técnicas BOX-PCR y ERIC-PCR, los cuales fueron analizados por el programa NTSYSpc 2.10 para el desarrollo de los dendogramas mostrando baja diversad entre los aislados de alpaca, corroborado por el agrupamiento de 23/24 aislados en un único cluster.

Thesis (Ph. D.)--University of Melbourne, Dept. of Microbiology, 1998. / Includes bibliographical references.

A key bacterial virulence factor is the ability to acquire the micronutrient iron, required by a vast majority of micro-organisms for survival and proliferation within their hosts. The work described here focuses on acquisition of iron in Pasteurella multocida serotype A:3, a Gram-negative opportunistic pathogen that causes pneumonic pasteurellosis in cattle, a severe respiratory infection of significant economic burden and welfare concern. P. multocida A:3 acquires iron primarily from the host iron-chelating molecule transferrin through the expression of specific outer membrane receptors. The correlation between up-regulation of these receptors and of other iron-regulated outer membrane proteins (IROMPs) and an increase in bacterial virulence has been noted elsewhere. To date, there has been no systems analysis of the metabolic processes of iron acquisition published for any bacterial species. The work described here used a systems approach involving elementary flux modes analysis to derive a computational model of iron acquisition and reveal a number of key findings on the mechanisms of iron acquisition and links between iron uptake, glucose metabolism and protein synthesis. This in silico model was subjected to experimental validation through a range of in vitro experiments designed to investigate the links between iron restriction and growth and metabolism of P. multocida. This novel approach was only possible after the development and optimisation of a number of assays to measure key model parameters.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Compara los genomas de las cepas que infectan bovinos y alpacas (36950 y UNMSM, respectivamente) para conocer la genómica estructural de la cepa aislada de alpacas y dilucidar qué proteínas podrían estar relacionadas en la patogénesis en ambos hospederos (bovinos y alpacas). Por ello se secuencia el genoma de P. multocida que infecta alpaca; se realiza el análisis genómico estructural y funcional y posteriormente el análisis comparativo con P. multocida 36950. / Tesis