El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del momento de adición del glicerol durante la curva de enfriamiento sobre la calidad espermática del semen canino. Para esto se utilizaron 15 eyaculados de 4 perros adultos. Se evaluó la motilidad, volumen, concentración espermática e integridad funcional de membrana de cada eyaculado. Cada muestra de semen fue sometida a 3 métodos de adición del glicerol (Tratamiento 1, Tratamiento 2 y Tratamiento 3) los cuales se diferenciaron por la concentración de glicerol presente en el dilutor durante la curva de enfriamiento. En el Tratamiento 1 el total del glicerol se adicionó al inicio de la curva de enfriamiento, en el Tratamiento 2 se adicionó una fracción del glicerol total al inicio de la curva de enfriamiento y la fracción restante al final de la curva, finalmente en el Tratamiento 3 el glicerol se añadió al final de la curva de enfriamiento. Finalizada la curva de enfriamiento el semen se envaso en pajillas de 0.5 mL para proceder al congelamiento en nitrógeno liquido. La motilidad progresiva y la integridad funcional de membrana fueron los parámetros utilizados para evaluar la calidad seminal al descongelamiento. No se encontró diferencia estadística entre ninguno de los 3 métodos de adición del glicerol, a pesar de esto el Tratamiento 1 mantenía ligeramente mejor la motilidad y la integridad funcional de membrana (44% y 46%) en comparación con el Tratamiento 2 (37% y 36%) y el Tratamiento 3 (38% y 37%). Esto nos demuestra que el momento de adición del glicerol no influye de manera diferencial sobre la motilidad progresiva y la integridad funcional de membrana pudiéndose gracias a esto simplificar el proceso de criopreservación al añadir el glicerol al inicio de la curva de enfriamiento pues ya no se manipularía el semen hasta el envasado. / The objetive of this experiment was to evaluate the effect of the moment of addition of the glycerol during the curve of cooling on the spermatic quality of the canine semen. For this there were used 15 ejaculated of 4 adult dogs. There was evaluated the motility, volume, spermatic concentration and functional integrity of membrane of every ejaculated. Every sample of semen was submitted to 3 methods of addition of the glycerol (Treatment 1, Treatment 2 and Treatment 3) which differentiated for the concentration of glicerol present in the dilutor during the curve of cooling. In the Treatment 1 the whole of the glycerol was added to the beginning of the curve of cooling, in the Treatment 2 added to himself a fraction of the entire glycerol to the beginning of the curve of cooling and the remaining fraction at the end of the curve, finally in the Treatment 3 the glycerol was added at the end of the curve of cooling. Finished the curve of cooling the semen was packed in straw hats of 0.5 ml to proceed to the freezing in liquid nitrogen. The progressive motility and the functional integrity of membrane were the parameters used to evaluate the seminal quality to the post-thawing. There was not statistical difference between any of 3 methods of addition of the glicerol, in spite of this the Treatment 1 was keeping lightly better the motility and the functional integrity of membrane (44 % and 46 %) compared to the Treatment 2 (37 % and 36 %) and the Treatment 3 (38 % and 37 %). This demonstrates us that the moment of addition of the glycerol does not influence in a distinguishing way the progressive motility and the functional integrity of membrane being able thanks to this to simplify the process of criopreservación after the glycerol to add to the beginning of the curve of cooling since the semen would not be already manipulated up to the stiff one.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del momento de adición del glicerol durante la curva de enfriamiento sobre la calidad espermática del semen canino. Para esto se utilizaron 15 eyaculados de 4 perros adultos. Se evaluó la motilidad, volumen, concentración espermática e integridad funcional de membrana de cada eyaculado. Cada muestra de semen fue sometida a 3 métodos de adición del glicerol (Tratamiento 1, Tratamiento 2 y Tratamiento 3) los cuales se diferenciaron por la concentración de glicerol presente en el dilutor durante la curva de enfriamiento. En el Tratamiento 1 el total del glicerol se adicionó al inicio de la curva de enfriamiento, en el Tratamiento 2 se adicionó una fracción del glicerol total al inicio de la curva de enfriamiento y la fracción restante al final de la curva, finalmente en el Tratamiento 3 el glicerol se añadió al final de la curva de enfriamiento. Finalizada la curva de enfriamiento el semen se envaso en pajillas de 0.5 mL para proceder al congelamiento en nitrógeno liquido. La motilidad progresiva y la integridad funcional de membrana fueron los parámetros utilizados para evaluar la calidad seminal al descongelamiento. No se encontró diferencia estadística entre ninguno de los 3 métodos de adición del glicerol, a pesar de esto el Tratamiento 1 mantenía ligeramente mejor la motilidad y la integridad funcional de membrana (44% y 46%) en comparación con el Tratamiento 2 (37% y 36%) y el Tratamiento 3 (38% y 37%). Esto nos demuestra que el momento de adición del glicerol no influye de manera diferencial sobre la motilidad progresiva y la integridad funcional de membrana pudiéndose gracias a esto simplificar el proceso de criopreservación al añadir el glicerol al inicio de la curva de enfriamiento pues ya no se manipularía el semen hasta el envasado. / --- The objetive of this experiment was to evaluate the effect of the moment of addition of the glycerol during the curve of cooling on the spermatic quality of the canine semen. For this there were used 15 ejaculated of 4 adult dogs. There was evaluated the motility, volume, spermatic concentration and functional integrity of membrane of every ejaculated. Every sample of semen was submitted to 3 methods of addition of the glycerol (Treatment 1, Treatment 2 and Treatment 3) which differentiated for the concentration of glicerol present in the dilutor during the curve of cooling. In the Treatment 1 the whole of the glycerol was added to the beginning of the curve of cooling, in the Treatment 2 added to himself a fraction of the entire glycerol to the beginning of the curve of cooling and the remaining fraction at the end of the curve, finally in the Treatment 3 the glycerol was added at the end of the curve of cooling. Finished the curve of cooling the semen was packed in straw hats of 0.5 ml to proceed to the freezing in liquid nitrogen. The progressive motility and the functional integrity of membrane were the parameters used to evaluate the seminal quality to the post-thawing. There was not statistical difference between any of 3 methods of addition of the glicerol, in spite of this the Treatment 1 was keeping lightly better the motility and the functional integrity of membrane (44 % and 46 %) compared to the Treatment 2 (37 % and 36 %) and the Treatment 3 (38 % and 37 %). This demonstrates us that the moment of addition of the glycerol does not influence in a distinguishing way the progressive motility and the functional integrity of membrane being able thanks to this to simplify the process of criopreservación after the glycerol to add to the beginning of the curve of cooling since the semen would not be already manipulated up to the stiff one. / Tesis

El objetivo del presente estudio fue determinar el tiempo máximo para recuperar y criopreservar espermatozoides obtenidos de la cola del epidídimo de caninos post orquiectomía. Los testículos/epidídimos fueron obtenidos después de la orquiectomía de 20 caninos adultos aparentemente saludables con edades entre 1 y 8 años. Los testículos/epidídimos fueron colocados en cloruro de sodio al 0.9% y almacenados a 5ºC durante 0, 24, 48 y 72 horas. Los espermatozoides fueron recuperados al cortar la cola del epidídimo suspendido en dilutor Tris-citrato-fructosa. Para el proceso de criopreservación, a la muestra diluida (espermatozoides + dilutor) se le añadió yema de huevo (20%) y glicerol (5%). La nueva dilución fue envasada en pajillas de 0.5ml, las cuales fueron sometidas a una curva de enfriamiento para luego ser colocadas en nitrógeno líquido. Los parámetros evaluados fueron: Motilidad total, motilidad progresiva e integridad funcional de membrana; parámetros que fueron analizados antes y después de la criopreservación. Adicionalmente se obtuvieron datos sobre morfología y concentración, evaluadas sólo antes de la criopreservación. Todos los parámetros evaluados disminuyeron gradualmente a medida que aumentó el tiempo de almacenamiento, los cuales al ser evaluados a las 48 horas de almacenamiento, antes y después del proceso de criopreservación, no variaron significativamente con respecto a los evaluados a las 0 horas. Sin embargo, cabe resaltar que todos los valores obtenidos después del proceso de criopreservación fueron marcadamente inferiores a los obtenidos antes del proceso. / --- The aim of this study was to determine the maximum time to recover and cryopreserve sperm from the tail of the epididymis of canine post-orchiectomy. The testes/epididymides were obtained by orchiectomy of 20 apparently healthy adult dogs between 1 to 8 years old. The testes/epididymides were placed in sodium chloride 0.9% and stored at 5 ° C for 0, 24, 48 and 72 hours. Sperm were recovered by cutting the tail of the epididymis dilutor suspended in Tris-citrate-fructose. For the cryopreservation process, the diluted sample (sperm + dilutor) was added egg yolk (20%) and glycerol (5%). The new dilution was packaged in 0.5ml straws, which were subjected to a cooling curve to be later placed in liquid nitrogen. The parameters evaluated were: Total motility, progressive motility and membrane functional integrity; parameters were analyzed before and after cryopreservation. Additionally, data were obtained on morphology and concentration, evaluated just before the cryopreservation. All evaluated parameters decreased gradually when the storage time increased. Such parameters to be evaluated at 48 hours of storage, before and after the cryopreservation process, did not differ significantly from those evaluated at 0 hours. However, it is noted that all values obtained after the cryopreservation process were markedly lower than those obtained before process.

El objetivo del presente estudio fue determinar el tiempo máximo para recuperar y criopreservar espermatozoides obtenidos de la cola del epidídimo de caninos post orquiectomía. Los testículos/epidídimos fueron obtenidos después de la orquiectomía de 20 caninos adultos aparentemente saludables con edades entre 1 y 8 años. Los testículos/epidídimos fueron colocados en cloruro de sodio al 0.9% y almacenados a 5ºC durante 0, 24, 48 y 72 horas. Los espermatozoides fueron recuperados al cortar la cola del epidídimo suspendido en dilutor Tris-citrato-fructosa. Para el proceso de criopreservación, a la muestra diluida (espermatozoides + dilutor) se le añadió yema de huevo (20%) y glicerol (5%). La nueva dilución fue envasada en pajillas de 0.5ml, las cuales fueron sometidas a una curva de enfriamiento para luego ser colocadas en nitrógeno líquido. Los parámetros evaluados fueron: Motilidad total, motilidad progresiva e integridad funcional de membrana; parámetros que fueron analizados antes y después de la criopreservación. Adicionalmente se obtuvieron datos sobre morfología y concentración, evaluadas sólo antes de la criopreservación. Todos los parámetros evaluados disminuyeron gradualmente a medida que aumentó el tiempo de almacenamiento, los cuales al ser evaluados a las 48 horas de almacenamiento, antes y después del proceso de criopreservación, no variaron significativamente con respecto a los evaluados a las 0 horas. Sin embargo, cabe resaltar que todos los valores obtenidos después del proceso de criopreservación fueron marcadamente inferiores a los obtenidos antes del proceso. / The aim of this study was to determine the maximum time to recover and cryopreserve sperm from the tail of the epididymis of canine post-orchiectomy. The testes/epididymides were obtained by orchiectomy of 20 apparently healthy adult dogs between 1 to 8 years old. The testes/epididymides were placed in sodium chloride 0.9% and stored at 5 ° C for 0, 24, 48 and 72 hours. Sperm were recovered by cutting the tail of the epididymis dilutor suspended in Tris-citrate-fructose. For the cryopreservation process, the diluted sample (sperm + dilutor) was added egg yolk (20%) and glycerol (5%). The new dilution was packaged in 0.5ml straws, which were subjected to a cooling curve to be later placed in liquid nitrogen. The parameters evaluated were: Total motility, progressive motility and membrane functional integrity; parameters were analyzed before and after cryopreservation. Additionally, data were obtained on morphology and concentration, evaluated just before the cryopreservation. All evaluated parameters decreased gradually when the storage time increased. Such parameters to be evaluated at 48 hours of storage, before and after the cryopreservation process, did not differ significantly from those evaluated at 0 hours. However, it is noted that all values obtained after the cryopreservation process were markedly lower than those obtained before process.