Made available in DSpace on 2017-07-25T19:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcos Fernando Basso.pdf: 3822084 bytes, checksum: d2aa276083a740974a36a726bdce8dad (MD5) Previous issue date: 2010-07-06 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / The grapevine (Vitis spp.) being vegetatively propagated facilitates the spread of viruses. In general, viruses are able to induce disorders in plant cells including photosynthesis and metabolic changes, causing alterations in grape quality. The purpose of Chapter I was to identify and molecularly characterize the viruses present in vector mealybugs in two establised vineyards (Rio Grande do Sul, Brazil), one of cv. Cabernet Sauvignon (Vitis vinifera), cultivated since 1995, and the of cv. Isabel (V. labrusca), cultivated since 1971. Plants were checked serologically for six viruses detected. Fragments that comprise complete or partial viral genes were amplified by RT-PCR using 17 pairs of specific primers for detection of the following viruses: Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine fanleaf virus (GFLV), Arabis mosaic virus (ArMV), Grapevine chrome mosaic virus (GCMV), Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) and Grapevine leafroll-associated virus 1-4 (GLRaV-1 to - 4). Degenerate primers were used for detection of Closterovirus, Trichovirus and Vitivirus genera and Betaflexiviridae family. For each primer pair at least one amplicon was cloned and sequenced, identifying seven isolates of RSPaV, three isolates of GLRaV-2 and two isolates of GLRaV-3. The obtained sequences (submitted to GenBank) showed identities higher than 90% with the homologous viral isolates from the GenBank. GVA, GVB and GLRaV-3 were detected in three of five samples of mealybugs collected in Caxias do Sul (RS) and Petrolina (PE) vineyards. High genetic variability of RSPaV and unavailability of commercial antiserum have impaired the detection of this virus in grapevines. In Chapter II the objective was to produce polyclonal antiserum against the recombinant coat protein (CP) of RSPaV. The complete CP gene of this virus was amplified, cloned, sequenced and subcloned into expression vector pRSET-B, and the recombinant plasmid was used for expression in Escherichia coli cells (strain BL21:DE3). The yield of RSPaV CP, expressed per ml of culture, was 17.35 μg for rabbit immunization 2.55 mg were used. The antiserum showed a concentration of 1939 mg IgG/ml which was able to recognize the recombinant protein in Western blot and detect RSPaV in grapevine infected tissues using the indirect ELISA technique. In Chapter III physiological alterations of plant and enological quality changes of the grapes from infected grapevines GLRaV-2 and RSPaV infected were studied. For these evaluations the photosynthetic potential, total chlorophyll (a and b), total soluble sugars and starch were determined in leaves. Healthy or asymptomatic leaves showed favourable values for almost all characteristics. The saturation photosynthesis was 2.9 (C. Franc) and 2.25 (C. Sauvignon) times higher in healthy than in infected grapevines. Considering the grape quality significant differences between grapes from infected and non-infected grapevine were also observed in five from six characteristics studied. Healthy grapes showed 17.88 (cv. C. Franc) and 16.10 (cv. C. Sauvignon) oBrix values while infected showed 15.35 and 13.38, respectively. Therefore, these viruses can damage the productivity and quality production of these grape cultivars. / A videira (Vitis spp.), por ser propagada vegetativamente, facilita a disseminação dos vírus. O objetivo do Capítulo I foi identificar e caracterizar molecularmente os vírus presentes em dois vinhedos antigos: um da cv. Cabernet Sauvignon (CS) (Vitis vinifera) de 1995 e outro da cv. Isabel (V. labrusca) de 1971 além de detectar sorologicamente tais isolados. Foram amplificados, por RT-PCR, fragmentos que compreendem genes virais completos ou parciais, utilizando-se 17 pares de oligonucleotídeos específicos para a detecção dos seguintes vírus: rapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine leck virus (GFkV), Grapevine fanleaf virus (GFLV), Arabis mosaic virus (ArMV), Grapevine chrome mosaic virus (GCMV), Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 1 a 4 (GLRaV-1 a -4), além de oligonucleotídeos degenerados para a família Betaflexiviridae e os gêneros Closterovirus, Trichovirus e Vitivirus. Pelo menos um fragmento amplificado, para cada par de oligonucleotídeos, foi clonado e sequenciado, identificando-se sete isolados de RSPaV, três de GLRaV-2 e dois de GLRaV-3. As sequências obtidas e depositadas no GenBank apresentaram identidades superiores a 90% com os respectivos isolados virais do GenBank. Também GVA, GVB e GLRaV-3 foram detectados via RT-PCR, em três de cinco amostras de cochonilhas coletadas em vinhedos de Caxias do Sul (RS) e Petrolina (PE). A variabilidade genética do RSPaV e a indisponibilidade de antisoro comercial têm dificultado a detecção deste vírus em videiras. No Capítulo II o objetivo foi produzir anti-soro policlonal utilizando a proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV. O gene completo da CP deste vírus foi previamente amplificado, clonado e sequenciado e, posteriormente subclonado em vetor de expressão pRSET-B, sendo o plasmídeo recombinante utilizado para a expressão em Escherichia coli BL21:DE3. O rendimento foi de 17,35 μg de CP do RSPaV expressa por ml de cultura, sendo utilizados 2,55 mg para a imunização do coelho. O anti-soro produzido apresentou uma concentração de 1939 mg de IgG/ml, foi capaz de reconhecer a proteína recombinante em Western blot e detectar o RSPaV em tecidos infectados de videira em ELISA indireto. De forma geral, os vírus são capazes de induzir desordens na célula vegetal que incluem alterações fotossintéticas e metabólicas, refletindo na qualidade da uva. No Capítulo III estudaram-se as alterações fisiológicas e da qualidade enológica da uva produzida em videiras infectadas com os vírus GLRaV-2 e RSPaV. Foram determinados nas folhas: potencial fotossintético, clorofilas total (a e b), açúcares solúveis totais e amido. Quanto às variáveis de qualidade da uva, foram observadas diferenças significativas, em favor das uvas de plantas sadias, em 5 das 6 variáveis. Uvas sadias apresentaram 2,53 (C. Franc, CF) e 2,72 (CS) °Brix a mais do que as infectadas. Para as variáveis relacionadas às alterações fisiológicas foram observadas diferenças significativas, em favor das folhas sadias ou assintomáticas, para quase todas variáveis analisadas, sendo a fotossíntese de saturação 2,9 (CF) e 2,25 (CS) vezes superior em plantas sadias. Estes vírus podem comprometer a produtividade e a qualidade da produção destas cultivares.

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Therefore the objective of this study was to evaluate the development, the rate of decomposition and accumulation of nutrients in the shoots of ground cover grown intercropped with vine, besides the chemical characteristics of the soil and the nutritional status, growth and production of fruit species as well as the qualitative characteristics of the fruits. The experiment consisted of six treatments established in a randomized block design, in 3 x 2 factorial scheme, with five replicates. The first factor with three levels, was composed of the following plant species cover crops: bean-to-pig (Canavalia ensiformis L. DC), lab-lab (Dolichos lab lab L.) and weeds. The second factor, with two levels of pruning were carried out based on the seeding of cover crops. Ie, the first season pruning was done 25 days after sowing (DAS) of the cover crop and the second season of pruning performed at 55 DAS. Each plot of 9 m2 (2 x 4.5 m) contained two vine plants. Pruning times do not influence the rate of soil cover and biomass production by cover crops. The weeds provide the highest rates of soil cover. The bean-to-pig has higher production of plant biomass (dry and green). Plants have evaluated coverage rate similar decomposition, pruning times do not affect the decomposition of the cover crop. The fabaceae stand on the accumulation and release of nutrients, but it does not differ from wild plants, the change in the soil chemistry. Cover crops did not influence the nutritional status of the vine. The morphologic parameters of vine plants Isabel are not influenced by ground cover plants. Cover crops influence soil not the vine as productivity and related variables. Of pruning influencing productivity and related variables in vineyards. Qualitative characteristics of the grape plants are not affected by ground cover, pruning times can influence the composition of the wort. / O cultivo da videira no Estado de Goiás já é uma realidade e apresenta boas perspectivas de crescimento, porém são escassas as informações sobre o manejo do solo, principalmente quanto ao uso de plantas de cobertura do solo nos parreirais. O uso de técnicas de manejo visa à melhoria do sistema produtivo, nesse sentido o manejo adequado do solo e da copa da videira, podem influenciar a produção e a qualidade da uva. Portanto objetivou-se com este trabalho avaliar o desenvolvimento, a taxa de decomposição e o acúmulo de nutrientes pela parte aérea das plantas de cobertura do solo cultivadas em consórcio com videira, além das características químicas do solo e o estado nutricional, crescimento e a produção da espécie frutífera, bem como as características qualitativas dos frutos. O experimento consistiu em seis tratamentos estabelecidos em delineamento de blocos ao acaso, no esquema fatorial 3 x 2, em cinco repetições. O primeiro fator, com três níveis, foi composto pelas seguintes espécies de plantas cobertura do solo: feijão-de-porco (Canavalia ensiformis L. DC), lab-lab (Dolichos lab lab L.) e plantas espontâneas. O segundo fator, com dois níveis, foram épocas de poda, realizadas com base na semeadura das plantas de cobertura. Ou seja, a primeira época poda foi realizada 25 dias após a semeadura (DAS) das plantas de cobertura e a segunda época de poda realizada aos 55 DAS. Cada parcela de 9 m2 (2 x 4,5 m) continham duas plantas de videira. As épocas de poda não influenciam a taxa de cobertura do solo e produção de biomassa, pelas plantas de cobertura. As plantas espontâneas proporcionam as maiores taxas de cobertura do solo. O feijão-de-porco apresenta maiores produções de biomassa vegetal (seca e verde). As plantas de cobertura avaliadas apresentam de taxa decomposição similar, as épocas de poda não afetam a decomposição das plantas de cobertura. As fabaceas se destacam na acumulação e liberação dos nutrientes, porem não difere das plantas espontâneas, na alteração dos atributos químicos do solo. As plantas de cobertura não influenciam o estado nutricional da videira. As variáveis morfológicas das plantas de videira Isabel não são influenciadas pelas plantas de cobertura do solo. As plantas de cobertura do solo não influenciam a videira quanto a produtividade e as variáveis associadas. Diferentes épocas de poda influenciam a produtividade e as variáveis associadas na cultura da videira. As características qualitativas da uva não são influenciadas pelas plantas de cobertura do solo, as épocas de poda podem influenciar a composição do mosto.