Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Esta memoria se desarrolló con el fin de contribuir al conocimiento químico y farmacológico del quillay. El quillay (Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae) es un árbol autóctono de Chile que se encuentra mayormente entre la IV y IX región, desarrollándose principalmente en terrenos asoleados. Su corteza, hojas y ramas presentan un alto contenido de saponinas triterpénicas. Estos compuestos tienen la propiedad de tensoactivos, por lo que poseen un amplio uso en la industria cosmética y alimentaria. Se utilizó un extracto comercial rico en saponinas del quillay, el cual se sometió a hidrólisis ácida para obtener el producto de hidrólisis (H-100Q) rico en sapogeninas. Este hidrolizado fue fraccionado mediante sucesivas CC con relleno de sílica gel 60, con la finalidad de separar las sapogeninas por su polaridad. De acuerdo a este procedimiento se formaron 5 grupos denominados Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4 y Pol-5. Se trabajó con la fracción de polaridad media alta Pol4, la cual se sometió a la técnica de separación analítica CLAE asociada a detección UV y IES-EM. Fue analizado tanto el cromatograma obtenido como los espectros de masa, de los cuales se determinó la presencia de ácido quillaico como sapogenina mayoritaria, ácido fitolacagénico y ácido 22-OH quillaico. Para estas tres sapogeninas se propuso una ruta de fragmentación molecular, con el fin de identificar futuros compuestos de núcleos triterpénicos pentacíclicos. Se evaluó el efecto del ácido quillaico sobre la expresión de la COX-2 y la producción de nitrito en el medio de cultivo con la línea celular de macrófago de ratón RAW 264.7. En consecuencia se montó y estandarizó la metodología de cultivo celular, viabilidad celular e inmunowetern blot. Los resultados demuestran que no hay efecto inhibitorio del ácido quillaico sobre la expresión de la COX-2, así mismo para la cuantificación de nitritos en el medio de cultivo, comparado con las células estimuladas con y sin LPS. / This research was developed in order to contribute to the chemical and pharmacological knowledge of the quillaja. The quillaja (Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae family) is a tree native to Chile which is mostly found between the IV and IX región, developed mainly in sunny areas. Its bark, leaves and braches have a high content of triterpene saponins. These compounds have the property of surfactants, therefore widely used in the cosmetics and alimentary industry. We used a commercial extract rich in quillaja saponins, which was subjected to acid hydrolysis to obtain hydrolysis product (H-100Q) rich in sapogenins. This hydrolizated was fractionated by successive sílica gel 60 chromatographic columns, with the purpose of separating the sapogenins by polarities. According to this procedure were formed groups called Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4 and Pol-5. We worked with the high medium polarity fraction called Pol-4, which was subjected to analytical technique HPLC associated to the UV and ESI-MS. Was analyzed both the cromatogram and mass spectra, which indicated the presence of saponins as mainly quillaic acid, phytolacagenic acid and 22- hydroxy quillaic acid. For these three sapogenins proposed a molecular fragmentation route in order to identify further compounds of pentacyclic triterpene aglycone. We evaluated the effects of the quillaic acid on COX-2 expression and the production of nitric oxide on LPS-induced murine macrophages cell line RAW 264.7, thus we mounted and standardized cell culture, assessment of cell viability and western blot analysis. Quillaic acid did not exhibit inhibitory effect both COX-2 expression and concentration of nitrite in culture supernatants on presence or absence of LPS.

Memoria para optar al Título de Químico Farmacéutico / El quillay, Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae, es un árbol de la zona central de Chile usado desde tiempos precolombinos como detergente. Sus saponinas crudas se utilizan como agentes espumantes y emulsificantes; y en forma más purificada, para la preparación de vacunas y otros productos medicinales. Las saponinas del quillay han sido caracterizadas como una mezcla compleja de glicósidos y ésteres azucarados de ácido quillaico; y ocasionalmente, de ácido equinocístico, 22β- hidroxi-quillaico o fitolacagénico. En el presente trabajo, se utilizó un extracto acuoso de corteza de quillay el cual se hidrolizó con HCl al 18% y calentamiento a reflujo para obtener un producto de hidrólisis al que se le purificó mediante sucesivas columnas cromatográficas de sílica gel G y Sephadex® LH-20. Se aislaron 6 sapogeninas triterpénicas denominadas Qy1, Qy2, Qy3, Qy4, Qy5 y Qy6. Qy1 fue identificada como ácido quillaico, Qy5 como ácido fitolacagénico, mientras que Qy6 se caracterizó como el isómero olean-13(18)-eno del ácido quillaico, un artefacto formado a partir de Qy1 en medio ácido. El resto de las sapogeninas, en tanto, aún no han sido completamente identificadas. La caracterización de los compuestos se realizó mediante espectrometría de masas y espectroscopía de resonancia magnética nuclear unidimensional y bidimensional. En el caso de la valoración por HPLC, el ácido quillaico demostró ser la sapogenina mayoritaria dentro del extracto acuoso (68,9% dentro del producto de hidrólisis, mientras que ácido fitolacagénico estuvo presente en un 5,0%). En el ensayo de inhibición de la glicógeno fosforilasa a (GPa), una enzima implicada en la biosíntesis de glucosa cuya actividad se incrementa en la diabetes; fueron evaluados Qy1, Qy3, Qy5, Qy6 y el producto de hidrólisis. Los resultados demostraron que todos los compuestos fueron menos potentes que la cafeína, el compuesto de referencia. Sin embargo, Qy3 demostró ser el único triterpenoide más eficaz que la cafeína (81,5% versus 68,4%), indicando que al menos una sapogenina de la corteza de quillay presentó una significativa actividad inhibitoria de la GPa. Es importante recalcar que si bien Qy3 fue el compuesto más activo, tanto en potencia como en eficacia, el producto de hidrólisis presentó una potencia casi nula y una eficacia de 16,8%. Estos resultados podrían ser explicados por el hecho de que Qy3 se encontró en baja concentración dentro de éste, o bien, otros constituyentes del producto de hidrólisis pudieron tener efectos antagonistas. En síntesis, esta memoria contribuyó a ampliar el conocimiento de la composición química de este árbol autóctono y se pudo evaluar su efecto sobre la GPa, demostrando que Qy3 es el triterpenoide más eficaz / Quillay, Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae, is a chilean central zone tree, used since precolumbian times as a detergent agent. Its raw saponins are employed as foaming and emulsifiers agents; and most purified form, in the elaboration of vaccines and other medicinal products. Quillay saponins have been characterized as a complex mixture of quillaic acid with glycosides and esters, and occasionally, of echynocystic acid, 22β- hydroxy-quillaic acid or phytolaccagenic acid. In the present work, an aqueous quillay bark extract was hydrolyzed with HCl 18% and warmed to reflux in order to get a hydrolysis product, which was later purified consecutively into G silica gel and Sephadex® LH-20 columns. Six triterpenic sapogenins were isolated, called Qy1, Qy2, Qy3, Qy4, Qy5 and Qy6. Qy1 was identified as quillaic acid, Qy5 as phytolaccagenic acid, while Qy6 was characterized as the olean-13(18)-en isomer of quillaic acid, an artifact formed from Qy1 in acid media. Other sapogenins haven’t been completely identified yet. The structural characterization of compounds was made by mass spectrometry and mono and bidimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy. In the case of HPLC quantification, quillaic acid demonstrated to be the most abundant sapogenin obtained from the aqueous extract (68,9% on the hydrolysis product, while phytolaccagenic acid was present in a 5,0%). In the glycogen phosphorylase a (GPa) inhibition assay, an enzyme involved in the glucose biosynthesis which shows an increased activity in diabetes; Qy1, Qy3, Qy5, Qy6 and the hydrolysis product were evaluated. The results demonstrated that all the compounds were much less potent than caffeine, the reference compound. However, Qy3 was as far as the only triterpenoid more efficacious than caffeine (81,5% versus 68,4%). These issues indicated that at least one quillay cortex sapogenin performed a significative GPa inhibitory activity. It’s important to remark that although Qy3 was the most active compound in potency and efficacy, the hydrolysis product showed almost null potency and efficacy near to 16,8%. These results could be explained by the fact that Qy3 was in low concentration, or other constituents of the hydrolysis product could have an antagonist effects. In summary, this thesis contributed to increase the knowledge of the chemical composition of this autochthon tree and its effect on GPa could be evaluated, demonstrating that Qy3 was the most efficacious triterpenoid

Doctora en Ciencias Farmacéuticas / El quillay (Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae) es una especie autóctona, de amplia distribución geográfica. Su corteza, hojas y ramas presentan un alto contenido de saponinas triterpénicas, cuya sapogenina mayoritaria es el ácido quillaico. Por medio del presente trabajo se logró optimizar el rendimiento del producto de hidrólisis obtenido desde el extracto acuoso rico en saponinas, obteniéndose un rendimiento de 39 %, con una disminución total del tiempo de hidrólisis de 1 h. Desde el producto de hidrólisis y por repetidas CC con silicagel 60 y Sephadex LH-20 fue aislado e identificado por completos estudios espectroscópicos el ácido quillaico (ácido 3ß,16α-dihidroxi-23-oxoolean-12-en-28-oico). Se demostró por CLAE que el ácido quillaico está presente en un 68,9 % en el extracto acuoso de Q. saponaria. Se sintetizaron derivados del ácido quillaico, identificados como metil 3ß,16α-dihidroxi-23-oxoolean-12-en-28-oato (ME) y metil 4-nor-3,16-dioxoolean-12-en-28-oato (MO). A través del estudio de toxicidad aguda vía oral del ácido quillaico y de su éster metilado (ambos a 1 g/kg) se demostró la seguridad de estos triterpenoides en ratones. Se determinó la actividad antinociceptiva del extracto acuoso rico en saponinas, ácido quillaico y dos de sus derivados (ME y MO) usando 2 modelos de dolor agudo térmico en ratones (plancha caliente y latigazo de la cola). En ambos modelos, las diferencias entre las latencias basales y experimentales entre los animales controles y tratados, permitió determinar el % de efecto máximo posible (% MPE). Todas las muestras presentaron actividad en ambos ensayos algesiométricos de forma dosis dependiente. El más activo frente al latigazo de la cola fue el extracto acuoso rico en saponinas, obteniéndose una EC50 de 27,9 mg % p/v, siendo la potencia de este extracto acuoso mayor que la del fármaco de referencia (ibuprofeno sódico). Los resultados del extracto acuoso frente al latigazo de la cola, nos permiten plantear la hipótesis que el o los componente (s) activo (s) de dicho extracto actuaría (n) principalmente por vía periférica. Sin embargo, en la plancha caliente, el derivado oxidado del éster metílico del ácido quillaico (MO), fue el más potente y el más eficaz, con una DE50 de 12,2 mg/kg, potencia mayor que ibuprofeno sódico, estos resultados permiten plantear que uno de los posibles mecanismos de acción inhibitoria el dolor de MO sería de origen central. Con respecto de la prueba plancha caliente/ CFA en el dolor agudo y crónico (24 h y 7 días respectivamente), todas las muestras fueron activas, sin embargo el MO fue el más potente y eficaz como analgésico. Las modificaciones estructurales realizadas al ácido quillaico mejoraron levemente el efecto antiedematoso sólo en el ensayo crónico, sin embargo, no se observaron efectos inhibitorios de la extravasación frente a las muestras estudiadas en esta tesis. Los resultados de la evaluación del efecto antiedematoso fueron leves tanto para el ME (18 % a 10 mg/kg) como para el MO (26,7 % a 50 mg/kg), ambos resultados se observaron en el ensayo crónico de 7 días. El derivado metilado del ácido quillaico tuvo que ser evaluado a dosis inferiores de 30 mg/kg por su toxicidad neurológica en el modelo PC/CFA de 7 días. Con el fin de determinar la permeabilidad a través de membranas biológicas (BHE), se determinó el coeficiente de partición del ácido quillaico (Log P), cuyo valor final fue de 1,65, valor experimental comparable con el valor teórico (1,68) obtenido con el Programa Chemaxon ®. En lo que respecta al éster metilado del ácido quillaico y su derivado oxidado, ambos resultaron ser altamente liposolubles y utilizando Chemaxon ®, se pudo obtener el Log D, teórico para ambos derivados, para ME fue de 4,54 y para MO de 5,67, respectivamente / The Quillaja (Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae) is a native species of a wide geographic distribution. Its bark leaves and branches have a high content of triterpene saponins, which is the quillaic acid the majority sapogenin. Through this thesis we managed to optimize the performance of the hydrolysis product obtained from the aqueous extract rich in saponins, obtaining a yield of 39%, with a total decrease of hydrolysis time of 1 h. Since the hydrolysis product and with repeated CC silica gel 60 and Sephadex LH-20 was isolated and identified by complete spectroscopic studies, the quillaic acid (acid 3, 16 -dihydroxy-23-oxoolean-12-en- 28-oic acid). It was demonstrated by HPLC that the quillaic acid is present in 68.9% in the aqueous extract. Were synthesized quillaic acid derivatives and identified as methyl 3, 16 - dihydroxy-23-oxoolean-12-en-28-oate (ME) and methyl 4-nor-3, 16-dioxoolean-12-en-28- oate (MO). Through the acute oral quillaic acid toxicity study and its methyl ester (both 1 g / kg) was showed the safety use of these triterpenoids in mice. Antinociceptive activities were determined in the aqueous extract rich in saponins, quillaic acid and two of its derivatives using 2 thermal acute pain models in mice (hot plate and tail flick tests). In both models, the differences between baseline and experimental latencies time between controls and treated animals, allowed to determined the % maximum possible effect (% MPE). All samples showed activity in both algesiometer assays in a dose-dependent manner. The most active against the tail flick test was the aqueous extract rich in saponins, yielding an EC50 of 27.9 mg% w / v, where the potency of this aqueous extract was higher than the reference drug (ibuprofen sodium). The results of the aqueous extract against the tail flick assay, allow us to hypothesize that the activity (s) of the component (s) of the aqueous extract is mainly by the peripheral route. However, in the hot plate test, the oxidized quillaic acid methyl ester (MO), was the most potent and most effective, with an ED50 of 12.2 mg / kg, presented a higher power comparing with ibuprofen sodium, these results allow argue that one of the possible mechanisms of pain inhibitory action of MO would be of central origin. With respect to the hot plate test / CFA in acute and chronic pain (24 h and 7 days respectively), all samples were active, but the MO was the most potent as an analgesic. Structural modifications made quillaic acid improved slightly inhibitory effects of edema only in the chronic test, however, no significant inhibitory effects of extravasation compared to the samples studied in this thesis. The results of the evaluation of the antiedematous effect were mild for both quillaic acid methyl ester (18% at 10 mg / kg) for MO (26.7% at 50 mg / kg), both results were observed at chronic assay. The methylated derivative quillaic acid had to be evaluated at lower doses of 30 mg / kg for neurological toxicity in the model PC / CFA (7 days). In order to determine the permeability through biological membranes (BBB), we determined the partition coefficient of the quillaic acid (log P), whose final value was 1.65, comparing them to experimental value theory (1.68) ® using the Chemaxon program. In regard to quillaic acid methyl ester and its derivative oxidized, both were highly soluble and using Chemaxon ®, we could get the theoretical Log D, from both, ME and MO, was 4.54 and 5.67, respectively

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Forestal / Quillay (Quillaja saponaria Mol.) y Litre (Lithraea caustica Mol.), corresponden a especies endémicas, que crecen en la zona de clima mediterráneo de Chile. Este clima, genera altos niveles de estrés hídrico en los períodos estivales en las especies, lo que provoca modificaciones en las tasas de crecimiento y respuestas fisiológicas. El objetivo del estudio fue caracterizar las respuestas morfofisiológicas de plantaciones frente a la eliminación paulatina del riego, en dos sectores de Cerro El Roble durante tres períodos estivales. El primer sector (S1) posee una exposición noreste y el segundo sector (S2) una exposición suroeste. Para ello se utilizaron especímenes del bosque esclerófilo (Quillaja saponaria Mol. y Lithraea caustica Mol.), a las que se les evaluó principalmente el efecto de la eliminación paulatina del riego en períodos de restricción de agua a través de mediciones de potencial hídrico (ΨPD) y contenido hídrico relativo (CHR%) a pre-alba. El crecimiento de las especies fue evaluado a través del diámetro a la altura del cuello (DAC) y la altura de las plantas, tanto al inicio como término de cada período estival. Además, se evaluó la sobrevivencia de las especies durante todo el período de déficit hídrico.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Forestal / Quillay (Quillaja saponaria Mol.) y Litre (Lithraea caustica Mol.), corresponden a especies endémicas, que crecen en la zona de clima mediterráneo de Chile. Este clima, genera altos niveles de estrés hídrico en los períodos estivales en las especies, lo que provoca modificaciones en las tasas de crecimiento y respuestas fisiológicas. El objetivo del estudio fue caracterizar las respuestas morfofisiológicas de plantaciones frente a la eliminación paulatina del riego, en dos sectores de Cerro El Roble durante tres períodos estivales. El primer sector (S1) posee una exposición noreste y el segundo sector (S2) una exposición suroeste. Para ello se utilizaron especímenes del bosque esclerófilo (Quillaja saponaria Mol. y Lithraea caustica Mol.), a las que se les evaluó principalmente el efecto de la eliminación paulatina del riego en períodos de restricción de agua a través de mediciones de potencial hídrico (ΨPD) y contenido hídrico relativo (CHR%) a pre-alba. El crecimiento de las especies fue evaluado a través del diámetro a la altura del cuello (DAC) y la altura de las plantas, tanto al inicio como término de cada período estival. Además, se evaluó la sobrevivencia de las especies durante todo el período de déficit hídrico.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En este estudio se evaluó la incorporación de extracto de Quillaja saponaria (Quillay) sola y combinada con extracto de Yucca schidigera (Yucca), en dietas comerciales para perros. Se determinó su efecto en el primer consumo, en el consumo total, la digestibilidad de los principales nutrientes de las dietas ofrecidas y el score fecal. Se trabajó con 22 perros adultos de ambos sexos, de las razas Boxer, Labrador y Beagle, entrenados para este tipo de estudios, los que estaban alojados en caniles individuales y recibieron agua a libre disposición durante todo el periodo de estudio. Se utilizaron tres dietas balanceadas para perros adultos, las que fueron identificadas como: Dieta Control (sin Quillaja saponaria y Yucca schidigera); Dieta A (con extracto de Quillaja saponaria) y Dieta B (con extracto de Quillaja saponaria y de Yucca schidigera). Se realizaron 3 estudios de palatabilidad donde se enfrentaron en pares de dietas: Dieta Control/Dieta A, Dieta Control/Dieta B y Dieta A/Dieta B; con una duración de 6 días cada uno. Adicionalmente se realizó un ensayo de digestibilidad de las tres dietas, cada uno con una duración total de 12 días. No se registraron alteraciones significativas (p ≤ 0,05) de la palatabilidad de las Dietas A y B en relación a la Dieta Control, si se encontró diferencias significativas entre la Dieta A y Dieta B, siendo la primera más aceptada por los individuos evaluados. La digestibilidad de las tres principales fracciones de la dieta: proteína cruda, carbohidratos no estructurales y grasa cruda, no se vieron afectadas, siendo muy similares a la Dieta Control; y la adición de extractos de Quillaja saponaria (Quillay) y de Yucca schidigera (Yucca) en las dietas ofrecidas no afectó el score fecal de los individuos evaluados. Se concluyó que la adición de extractos de Quillaja saponaria (Quillay) sola y adicionada de Yucca schidigera (Yucca) no tiene efectos sobre la palatabilidad y digestibilidad de dietas comerciales para perros. / In this study the incorporation of Quillaja saponaria extract (Quillay) alone and combined with extract of Yucca schidigera (Yucca), in commercial dog diets was evaluated. Its effect was determined in the first consumption, in the total consumption, the digestibility of the main nutrients of the offered diets and the fecal score. We worked with 22 adult dogs of both sexes, of the breeds Boxer, Labrador and Beagle, trained for this type of studies, those that were housed in individual dogs and received water freely available during the entire study period. Three balanced diets were used for adult dogs, which were identified as: Control Diet (without Quillaja saponaria and Yucca schidigera); Diet A (with extract of Quillaja saponaria) and Diet B (with extract of Quillaja saponaria and Yucca schidigera). Three palatability studies were conducted where they were faced in pairs of diets: Diet Control / Diet A, Diet Control / Diet B and Diet A / Diet B; with a duration of 6 days each. Additionally, a digestibility test of the three diets was carried out, each with a total duration of 12 days. There were no significant alterations (p ≤0.05) of the palatability of Diets A and B in relation to the Control Diet, if significant differences were found between Diet A and Diet B, being the first one more accepted by the evaluated individuals. The digestibility of the three main fractions of the diet: crude protein, non-structural carbohydrates and crude fat, were not affected, being very similar to the Control Diet; and the addition of extracts of Quillaja saponaria (Quillay) and Yucca schidigera (Yucca) in the offered diets did not affect the fecal score of the evaluated individuals. It was concluded that the addition of extracts of Quillaja saponaria (Quillay) alone and added Yucca schidigera (Yucca) has no effect on the palatability and digestibility of commercial dog diets.

Thesis (doctoral)--Swedish University of Agricultural Sciences, 2000. / Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Swedish University of Agricultural Sciences, 2000. / Includes bibliographical references.

Memoria para optar al Título de Químico Farmacéutico / El quillay, Quillaja saponaria Mol., perteneciente a la familia Quillajaceae, es un árbol que crece en gran parte de la zona central de Chile tanto en el litoral como en el valle. Este árbol sido usado desde la época precolombina como detergente, debido a su gran cantidad de saponinas. El producto de hidrólisis del extracto acuoso obtenido de la biomasa de quillay, es rico en sapogeninas. Estudios anteriores han reportado la presencia de algunas geninas tales como ácido quillaico, ácido fitolagénico, ácido equinocístico y gipsogenina entre otras. Las sapogeninas triterpénicas pentacíclicas han demostrado tener efecto inhibitorio sobre la enzima glicógeno fosforilasa a. Para el presente trabajo se sometió a hidrólisis el extracto acuoso obtenido desde la biomasa de quillay con HCl al 18 % y calentamiento a reflujo. El producto de hidrólisis obtenido se lavó sucesivamente con dos porciones de 10 ml de NaOH 0,05 M para eliminar las trazas de compuestos fenólicos que pudiesen quedar en el producto de hidrólisis. Éste fue fraccionado mediante sucesivas columnas cromatográficas con relleno sílica gel 60, de las cuales se obtuvo 5 grupos de fracciones denominadas Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4, Pol-5. Los 5 grupos de fracciones obtenidos y el producto de hidrólisis fueron evaluados mediante el ensayo de inhibición de la enzima glicógeno fosforilasa a. Los porcentajes de inhibición obtenidos demuestran que estos grupos de fracciones no inhiben la enzima glicógeno fosforilasa a. La identificación de las geninas minoritarias del producto de hidrólisis, se realizó mediante la metodología CLAE-UV-IES-MS. Los resultados nos permiten postular la presencia de ácido quillaico y otras sapogeninas no reportadas anteriormente, como es el caso de la arjungenina y la fitolacagenina. Para estas tres sapogeninas identificadas se propuso una ruta de fragmentación, la cual al contener puntos comunes para estos núcleos triterpénicos, serían una herramienta útil en la identificación de otras sapogeninas triterpénicas pentacíclicas

Saponinas triterpênicas incluem uma ampla variedade de moléculas com diversas aplicações farmacológicas. As saponinas das folhas de Quillaja brasiliensis, espécie nativa do Sul do Brasil, são estrutural e funcionalmente semelhantes às encontradas nas cascas da espécie chilena Quillaja saponaria, as quais são utilizadas atualmente como adjuvantes em formulações comerciais de vacinas. O perfil de acúmulo da fração imunoadjuvante de saponinas triterpênicas de Q. brasiliensis (QB-90) foi avaliado em resposta a diferentes fatores de estresse. O conteúdo de QB-90 em discos foliares aumentou significativamente com a aplicação de diferentes agentes de estresse osmótico. Também pôde ser observado aumento nos teores de saponinas pela exposição de discos foliares a ácido salicílico, ácido jasmônico, ultrassom e luz ultravioleta C. Experimentos com plântulas indicaram um aumento significativo nos teores de QB-90 com o aumento moderado de irradiância luminosa e pela aplicação de dano mecânico nas folhas. Os resultados obtidos apoiam o papel de defesa induzida que estes metabólitos apresentam in planta. Com o objetivo de avançar os estudos de atividade adjuvante de Q. brasiliensis e ampliar a extensão de antígenos testados, uma vacina contra poliovírus foi avaliada em camundongos. Resultados demonstraram que as formulações de vacinas contendo saponinas da espécie brasileira aumentaram níveis de anticorpos específicos IgG, IgG1 e IgG2a, sugerindo um estímulo de ambos tipos de resposta imune (Th1 e Th2). A resposta celular foi confirmada por ensaios de DTH e pela avaliação dos níveis de mRNA das citocinas IL-2 e IFN- em esplenócitos murinos. A resposta imune de mucosas foi demonstrada pelos aumentos nos níveis de IgA em bile, fezes e lavados vaginais. O segundo objeto de estudo desta Tese é a espécie Centella asiatica (L.) Urban, que também apresenta saponinas triterpênicas bioativas em suas partes aéreas. Uma enzima responsável pela glicosilação de ácido asiático e ácido madecássico foi parcialmente purificada. Usando técnicas de proteômica e dados de sequências de cDNA, a sequência completa do clone que codifica uma glicosiltransferase foi obtida. O produto gênico recombinante, UGT73AD1, foi funcionalmente expresso em Escherichia coli, purificado por cromatografia de afinidade por metal imobilizado e funcionalmente caracterizado. UGT73AD1 foi identificada como sendo uma glicosiltransferase triterpênica de ácidos carboxílicos, provavelmente envolvida na biossíntese de monodesmosídeos da espécie. / Triterpene saponins include a large variety of molecules that find several applications in pharmacology. The saponins from leaves of Quillaja brasiliensis, a native species from Southern Brazil, show structural and functional similarities to those of Quillaja saponaria barks, which are currently used as adjuvants in vaccine formulations. The accumulation patterns of an immunoadjuvant fraction of leaf triterpene saponins (QB-90) in response to stress factors were examined. The content of QB-90 in leaf disks was significantly increased by application of different osmotic stress agents. Higher yields of bioactive saponins were also observed upon exposure to salicylic acid, jasmonic acid, ultrasound and UV-C light. Experiments with shoots indicated a significant increase in QB-90 yields with moderate increases in white light irradiance and by mechanical damage applied to leaves. These results support a general induced defense role for these metabolites in planta. Aiming at advancing the studies of Q. brasiliensis adjuvant activity and amplifying the range of antigens tested, an inactivated virus-based vaccine against poliovirus was evaluated in mice. Results demonstrated that saponin formulations were able to enhance poliovirus- specific total IgG, IgG1 and IgG2a, suggesting stimulation of both Th1 and Th2 immune responses. Cellular response stimulation was confirmed by DTH assays and by evaluating the enhancement of IL-2 and IFN-γ cytokine mRNA expression in mice splenocytes. Mucosal immune responses demonstrated that the QB-90-adjuvanted vaccine enhanced IgA titers in bile, feces and vaginal washings. Centella asiatica (L.) Urban, a species accumulating triterpene bioactive saponins in its shoots, was also subject of study in this Thesis. An enzyme capable of glucosylating asiatic and madecassic acids was partially purified. Using proteomic methods and cDNA sequence data, a full-length cDNA clone encoding the glucosyltransferase was obtained. The recombinant gene product, UGT73AD1, was functionally expressed in Escherichia coli, purified by immobilized metal-affinity chromatography and functionally characterized. UGT73AD1 was identified as a triterpene carboxylic acid glucosyltransferase, likely involved in monodesmoside biosynthesis in C. asiatica.