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Desenvolvimento de teste rápido para detecção de rotavírus: imunoensaio de captura e aglutinação em látex

Silveira, Waldemir de Castro January 2005 (has links)
Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-13T12:18:47Z No. of bitstreams: 1 waldemir-de-castro-silveira.pdf: 669613 bytes, checksum: b8a4602ed033af1429638f26a5325f0d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-13T12:18:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 waldemir-de-castro-silveira.pdf: 669613 bytes, checksum: b8a4602ed033af1429638f26a5325f0d (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O rotavírus humano (RV) pode ser detectado prontamente pelo método de aglutinação do látex (LTE), com elevada sensibilidade e especificidade, através da reação cruzada com o anticorpo anti-rotavírus decarneiro. As partículas de látex revestidas com a imunoglobulina G anti-rotavírus, são especificamente aglutinadas na presença do RV, com resultados macroscopicamente evidentes dentro de poucos minutos. Para a sensibilidade e a especificidade do método de LTE proposto, comparou-se com outro método similar (Rota-Kit Slidex®; BioMérieuxl), um total de 81 amostras fecais de crianças até 5 anos com gastroenterite aguda. Com 36 amostras diarréicas RV-positivos e 45 RV-negativos, a ensibilidade analítica do teste de LTE proposto foi > 99,99%, e a especificidade analítica também foi > 99,99%. O LTE demonstrou ser capaz de detectar partículas de rotavírus em fezes diarréicas em concentrações 20 vezes menores que o limite de detecção do Rota-Kit Slidex®. A freqüência de testes positivos de LTE pareceu ser proporcionalà concentração de viríons na amostra fecal. O LTE demonstrou uma sensibilidade de 94,0% (34 de 36 positivos), e uma especificidade > 99,99% (45de 45 negativas) quando comparado com o Rotazyme II®, um ensaio imunoenzimático (Abbott Laboratories). O método do LTE é rápido, facilmenteutilizável para detectar o RV em amostra fecal de crianças e é apropriado para a aplicação como um teste diagnóstico simples, principalmente para triagem de grandes grupos de pacientes. O LTE é estável por pelo menos 2 anos searmazenado sob refrigeração (4°C) e se mostra útil para laboratórios de pequeno porte, para rotinas ambulatoriais, de emergências e de triagem e finalmente, para discriminar amostras negativas que poderão então ser testadas por testes mais sensíveis. / Human rotavírus (HRV) can readily be detected by the latex agglutination assay method (LTE), with raised sensitivity and specificity, based on crossed reaction with the anti-rotavirus sheep antibody. The latex particles coated with anti-rotavirus immunoglobulin G, agglutinates specifically when in contact with HRV in few minutes, with evident macroscopically results. The sensitivity and the specificity performance of the proposed method (LTE), was compared with another similar method (Rota-Kit Slidex®, BioMérieux), a total of 81 specimens from children with acute gastroenteritis were tested. With 36 HRV positive samples and 45 HRV negative samples, the analytical sensitivity of LTE was better than 99,99% and the analytical specificity, also, was better than 99,99%. The LTE demonstrated to be capable to detect particles of HRV in fecal samples in concentrations20 lesser times that the limit of detection of Rota-Kit Slidex®. The frequency of positive tests of LTE seemed to be proportional to the concentration of virions in the fecal sample. The LTE demonstrated a sensitivity of 94,0%(34 of 36 positives), and a specificity >99,99% (45 of 45 negatives) whencompared with Rotazyme II® (Abbott Laboratories). The method of the LTE is fast and easily usable to detect HRV in children fecal sample and is appropriate for application as a test of simple diagnosis, mainly for screening of great groups of patients. The LTE is stable per at least 2 yearsif stored under refrigeration (4°C) and it shows useful for small laboratories, clinic routines, emergence rooms and screenings and finally to discriminate negative samples that could then be tested by more sensible tests.

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