Estágio realizado na UNICER-Bebidas de Portugal, SGPS, SA sob orientação na empresa do Eng.º Luís Carlos Matos / Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-04T17:22:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 287490 bytes, checksum: 6275dbc10b29b964ca88a6fa7d78b9a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T17:22:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 287490 bytes, checksum: 6275dbc10b29b964ca88a6fa7d78b9a9 (MD5) Previous issue date: 1999-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O cDNA da proteína S-64, homóloga à proteína de ligação à sacarose (SBP), foi previamente isolado de uma biblioteca de expressão de cotilédones de soja. A seqüência de aminoácidos deduzida da proteína S-64 apresenta 85% de identidade com a proteína de ligação à sacarose (SBP), um provável sinal, um sítio consenso de glicosilação e um sítio consenso de ligação à ATP/GTP. Nessa investigação, uma versão truncada da proteína S-64 foi expressa em E. coli e a proteína recombinante purificada, utilizada em ensaios de caracterização bioquímica. Além da alta conservação de seqüência com SBP, o fracionamento subcelular de cotilédones demonstrou que a proteína S-64 está associada a membranas. Consistente com sua localização subcelular, o terminal amino hidrofóbico da proteína parece ter função de Peptídeo sinal, uma vez que a proteína intacta não foi acumulada em E. coli, ao passo que a proteína S-64 isenta do Peptídeo sinal foi eficientemente sintetizada em bactéria. Provavelmente, o sistema de secreção da E. coli reconheceu o terminal hidrofóbico da proteína intacta, e a proteína recombinante foi secretada e degradada. No entanto, tradução in vitro do RNA sintético de S-64 usando reticulócitos de coelho, na presença de membranas microssomais pancreáticas caninas, demonstrou que o Peptídeo sinal de S-64 não é clivado. Tal resultado indicou que a proteína S-64 é uma proteína de membrana do tipo II, e o seu terminal amino apresenta as funções de Peptídeo sinal, endereçando a proteína para o retículo endoplasmático; e domínio transmembrana, fixando a proteína na membrana plasmática. A capacidade de S-64 oligomerizar foi avaliada em géis semidesnaturantes e o seu domínio de oligomerização mapeado, correspondente aos aminoácidos 36 a 343, usando-se versões truncadas da proteína. A possibilidade de a proteína ligar-se à GTP por meio do seu sítio consenso de ligação a nucleotídeos foi determinada por “GTP dot blot”. A proteína S-64 liga-se à GTP, preferencialmente à ATP, uma vez que uma versão de S-64 produzida em E. coli foi marcada radioativamente por [ 32 Pα]-GTP, na presença de ATP não marcado como competidor. O sítio de ligação à GTP foi delimitado pelo teste de perda de função a partir de mutação dirigida in situ. De fato, mutação no putativo sítio de ligação a ATP/GTP bloqueia a referida atividade da proteína. Tais resultados estabelecem que a proteína S-64 é, de fato, uma proteína de ligação à GTP associada à membrana. A atividade de ligação à GTP da proteína pode estar envolvida na regulação da função da proteína como transportadora de sacarose. / A sucrose binding protein (SBP) homologue, named S-64 protein, was previously identified by cloning its cDNA from a soybean cotyledon expression library. The deduced aminoacid sequence for S-64 shares 85% identity with the sucrose-binding protein (SBP), possesses a putative peptide signal, a potential site for N-linked glycosylation and a nucleotide (ATP/GTP)-binding consensus sequence. In this investigation, the S-64 gene and truncated versions of the cDNA were expressed in E. coli and the purified recombinant proteins were used in biochemical characterization assays. In addition to high sequence conservation with SBP, subcellular fractionation of cotyledon cells demonstrated that the S-64 protein is a membrane-associated protein. Consistent with its subcellular localization, the hydrophobic amino terminus of the protein seems to function as a signal peptide because an intact protein failed to accumulate in E. coli, whereas a peptide signal free-protein was efficiently produced in E. coli. Probably the secretion system of E. coli recognized the hydrophobic stretch of aminoacids and the heterologous protein was secreted and degraded. Nevertheless, in vitro translation of synthetic S-64 RNA using a cell-free system in the presence of microsomal membranes demonstrated that the S-64 signal peptide was not cleaved. These results suggest that the S-64 is a type II membrane protein and its peptide signal may serve as dual function. It may address the synthesis of the protein to the endoplasmic reticulum (ER) and may target the protein to membranes. The ability of the protein to undergo oligomerization was analyzed in native gels. The S-64 oligomerization domain was mapped to an internal region of the protein, aminoacids 36 a 343, by assaying the ability of truncated versions of the proteins to oligomerize in native gels. The ability of the protein to associate with nucleotides thought its conserved binding sequence was determined by a GTP-binding blot assay. The S-64 protein binds GTP, rather than ATP, because the E. coli produced S-64 was radiolabeled by [ 32 Pα]- GTP in the presence of large excess of unlabeled ATP competitor. The GTP binding site was delimited by loss of function assays in which the ability of site directed mutants to retain the GTP binding activity was evaluated. In fact, mutation in the putative GTP/ATP binding site blocked GTP binding. These results established that the S-64 protein is, in fact, a GTP-binding membrane-associated protein. The GTP binding activity of S-64 may be involved in the regulation of the protein function. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-10T11:33:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 573801 bytes, checksum: 587f1d93c743be98a585e04486290b99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T11:33:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 573801 bytes, checksum: 587f1d93c743be98a585e04486290b99 (MD5) Previous issue date: 2003-12-17 / Os efeitos do déficit hídrico no metabolismo dos carboidratos, foram investigados em quatro clones de Coffea canephora Pierre cv. Conilon, com tolerância diferencial à seca. Quando o potencial hídrico foliar na antemanhã (Ψ w ) decresceu para valores em torno de -2 e -3 MPa, estresse hídrico moderado e severo, respectivamente, houve redução na fotossíntese líquida, provocada principalmente pelo fechamento dos estômatos, visto que, não houve fotoinibição nem alteração nos teores de clorofilas a e b. Sob estresse hídrico severo houve aumento na concentração foliar de sacarose nos clones tolerantes à seca (120 e 14). Porém, com exceção do clone 120, todos apresentaram redução na atividade da sintase da sacarose-fosfato, que ficou mais bem evidenciada no ensaio seletivo, principalmente sob estresse hídrico severo. O clone 120 foi o único também em que foi verificado estímulo da fosfatase da frutose-1,6-bisfosfato, sob estresse hídrico. Uma tendência geral de estímulo na atividade da invertase ácida foi verificada, principalmente sob estresse hídrico severo, sendo que somente no clone 14, nesse nível de estresse houve aumento na atividade da invertase alcalina. Entretanto, não se verificaram grandes alterações nos níveis de hexoses. A sintase da sacarose não teve sua atividade alterada. Tanto sob estresse hídrico moderado quanto severo, verificou-se redução no conteúdo de amido, em todos os clones. No entanto, apenas nos clones 14 e 46, houve redução na atividade da pirofosforilase da ADP-glicose. Os clones 120 e 109A também apresentaram uma tendência de aumento na concentração de aminoácidos, que ficou mais bem evidenciada sob estresse hídrico severo. A atividade da cinase da frutose-6-fosfato, não foi alterada em resposta ao déficit hídrico, sugerindo que não houve alteração no fluxo glicolítico. Apesar da complexidade apresentada com relação a atividade das enzimas de metabolismo dos carboidratos, esses resultados permitem sugerir que os clones mais tolerantes acumulam mais açúcares solúveis sob estresse hídrico, indicando maior eficiência fotossintética. / The effects of water deficit on carbohydrate metabolism were investigated in four clones of Coffea canephora Pierre cv. Conilon, with differential drought tolerance. When the leaf predawn water potential (Ψ w ) decreased for values around -2 and -3 MPa, moderate and severe water stress, respectively, there was reduction in the net photosynthesis, provoked mainly by the closing of the stomata, because, there probably were not photoinhibition nor alteration in the levels of chlorophylls a and b. Under severe water stress there was increase in the leaf concentration of sucrose in the drought tolerant clones (120 and 14). However, except for the clone 120, all presented reduction in the activity of the sucrose-phosphate sintase, that was better evidenced in the selective assay, under severe water stress. The clone 120 was also the only in that increase in the activity of fructose-1,6-bisphosphate phosphatase was verified under water stress. A general tendency of increase in the activity of acid invertase was verified, mainly under severe water stress, and only in the clone 14, in that stress level, there was increase in the activity of the alkaline invertase. However, great alterations were not verified in the hexoses levels. There was not alteration in the activity of sucrose sintase. Under moderate and severe water stress, reduction was verified in the levels of starch, in all the clones. However, only in the clones 14 and 46, there was reduction in the activity of the ADP-glucose pirophosphorilase. The clones 120 and 109A also presented a tendency to increase the concentration of amino acids, that was better evidenced under severe water stress. The activity of fructose-6-phosphate kinase was not altered in response to water déficit, suggesting that there was not alteration in the glicolitic path. In spite of the complexity presented with relationship the activity of the enzymes of carbohydrate metabolism, those results allow us to suggest that the most tolerant clones accumulate more soluble sugars under water stress, indicating better photosynthetic efficiency. / Dissertação importada do Alexandria

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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:34:45Z : No. of bitstreams: 1 matter_uf_me_jabo.pdf: 745361 bytes, checksum: 93aa125f7dc4d4b2f32ce23443fc2730 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Avaliou-se os efeitos de diferentes proporções de folhas e grãos sobre o metabolismo glicídico de milho. As principais características produtivas, o acúmulo de matéria seca, os teores de açúcares redutores, sacarose e amido nas folhas, colmos e endospermas bem como as atividades de: invertase nas folhas e colmos; invertase e sacarose sintetase nos endospermas, foram determinados. O experimento foi conduzido na FCAV/Unesp-Jaboticabal, em delineamento de blocos casualizados com quatro repetições, com o híbrido Agromen 3050. Os tratamentos foram: 1) testemunha (100 % de folhas e grãos); 2) retirada de 100% das folhas, mantendo-se 100% de grãos; 3) retirada de 33% das folhas, mantendo-se 100% de grãos; 4) retirada de 66% das folhas, mantendo-se 100% de grãos; 5) sem polinização da espiga mantendo-se as folhas; 6) polinização de 25% da espiga mantendo-se as folhas; 7) polinização de 50% da espiga mantendo-se as folhas. O menor número de estigmas polinizados resultou em maior acúmulo de matéria seca no caule e folhas, acúmulo de sacarose nos colmos, acúmulo de açúcares redutores, sacarose e amido nas folhas. O desfolhamento e a polinização parciais não afetaram a concentração de açúcares redutores e sacarose nos endospermas, e açúcares redutores nos colmos. A desfolha parcial acarretou menor matéria seca na espiga, principalmente pelo menor número de grãos; menor concentração de amido nos endospermas, colmos e folhas; menor concentração de sacarose nos colmos. Plantas sem grãos tiveram acúmulo de amido nos colmos. A atividade enzimática no endosperma e nas folhas não foi afetada pelos tratamentos. / The development and dry matter accumulation in stem, leaves and ear, the concentrations of reducing sugars, sucrose and starch in leaves, stems and endosperms besides the activities of: invertase in leaves and stems; invertase and sucrose synthase in endosperms of corn plants submitted to defoliation and partial pollination were evaluated. A completely randomized block design with four replications was used. The treatments were constituted by the control (100% of leaves and grains), three variations of the source size (0%, 33% and 66% of leaves) with 100% of grains, and three variations in the sink size (0%, 25% and 50% of grains) keeping 100% of leaves. Leaf number reduction resulted in smaller ear dry matter, due to smaller grain number, but the 100 kernels weight was not altered. Grain number reduction increased stem and leaf dry matter, but increase in the remaining weight was not significant. There was no ear and grain development when plants were completely defoliated. Defoliation and partial pollination did not affect the concentration of reducing sugars and sucrose in the endosperms, and reducing sugars in the stems. Partial defoliation did not result in smaller starch concentration in the endosperm and stalks; but induced lower sucrose levels. The reduction of grain number caused sucrose accumulation in the stems. Plants without grains had starch accumulation in leaves. Leaf soluble invertase activity was much higher than that from the particulate form. Leaf and endosperm enzyme activities were not altered by treatments.

Orientador: Luis Henrique de Souza Guimarães / Banca: José Roberto Ernandes / Banca: Rubens Monti / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Wanderley Pereira Oliveira / Resumo: As β-D-frutofuranosidases, também conhecidas como invertases, são hidrolases que catalisam a hidrólise da sacarose em uma mistura equimolar de β-D-glicose e β-D-frutose que recebe o nome de açúcar invertido. Estas enzimas podem ser encontradas em diversos organismos, como vegetais, animais, bactérias, leveduras e em fungos filamentosos, sendo que os últimos merecem destaque pela alta produção enzimática e estabilidade. O objetivo deste trabalho foi estudar a β-D-frutofuranosidase produzida por Fusarium graminearum em Fermentação Submersa (FSbm) e Fermentação em Substrato Sólido (FSS) purificando-a e caracterizando-a bioquimicamente, além de submeter esta enzima a secagem em Spray dryer e imobilização em suportes de baixo custo. O fungo F. graminearum foi selecionado como bom produtor da enzima, com maiores níveis de produção encontrados quando cultivado em substrato sólido com farelo de trigo umidificado com água de torneira (1:1; m/v) por 9 dias (150 U/g substrato). A β-D-frutofuranosidase extracelular obtida foi purificada 8,41 vezes com recuperação de 14%, obtendo-se em PAGE 7% uma única banda protéica, e em SDS-PAGE 12%, 2 bandas proteicas (94 kDa e 70 kDa) supondo-se um heterodímero, uma vez que a enzima nativa, estimada pela coluna de filtração Sephacryl S200, apresentou 159 kDa. A temperatura ótima de atividade ficou na faixa de 55-60ºC e o pH ótimo 4,5. Foi totalmente estável em temperaturas entre 30oC e 50oC por 1 hora, e com atividade residual acima de 80% entre pH 3,0 e 8,0 por 30 minutos. A β-D-frutofuranosidase extracelular foi ativada pelos íons Mn2+ e K+. A enzima foi capaz de hidrolisar sacarose e rafinose, mas não a inulina, com maior afinidade para a rafinose, com Km de 21,16 mM e Vmax maior quando utilizada a sacarose como substrato... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The β-D-fructofuranosidases, also known as invertase, are hydrolases which catalyze the hydrolysis of sucrose in an equimolar mixture of β-D-glucose and β-D-fructose that is called invert sugar. These enzymes can be found in many organisms, such as plants, animals, bacteria, yeasts and filamentous fungi, and the latter must be highlighted for high enzyme production and stability. The objective of this work was to study the β-D-fructofuranosidase produced by Fusarium graminearum in Submerged Fermentation (SbmF) and Solid Substrate Fermentation (SSF) purifying and characterizing them biochemically, and submit this enzyme to drying using Spray dryer and immobilization on low cost supports. The F. graminearum was selected as a good enzyme producing strain, with higher production levels found when the fungus was grown on wheat bran as solid substrate moistened with tap water (1:1, w/v) for 9 days (150 U/g substrate). The extracellular β-D-fructofuranosidase obtained was purified 8.41-fold with recovery of 14%. A single protein band was obtained in 7% PAGE, and two protein bands (94 kDa and 70 kDa) in 12% SDS-PAGE indicating a heterodimeric structure, since the native enzyme, estimated by gel filtration using Sephacryl S200 column presented 159 kDa. The optimum temperature for activity was 55-60°C and optimum pH 4.5. It was completely stable at temperatures between 30oC and 50oC for 1 hour, and residual activity above 80% between pH 3.0 and 8.0 for 30 minutes was observed. This β-D-fructofuranosidase was activated by Mn2+ and K+. The enzyme was able to hydrolize sucrose and raffinose, but not inulin, with a higher affinity for raffinose, with a Km of 21.16 mM and Vmax was higher when sucrose was used as substrate (1639.34 U/mg protein). The crude extract containing the extracellular enzyme was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Jairo Oswaldo Cazetta / Banca: Antônio Álvaro Corsetti Purcino / Banca: Marcelo Murad Magalhães / Resumo: Avaliou-se os efeitos de diferentes proporções de folhas e grãos sobre o metabolismo glicídico de milho. As principais características produtivas, o acúmulo de matéria seca, os teores de açúcares redutores, sacarose e amido nas folhas, colmos e endospermas bem como as atividades de: invertase nas folhas e colmos; invertase e sacarose sintetase nos endospermas, foram determinados. O experimento foi conduzido na FCAV/Unesp-Jaboticabal, em delineamento de blocos casualizados com quatro repetições, com o híbrido Agromen 3050. Os tratamentos foram: 1) testemunha (100 % de folhas e grãos); 2) retirada de 100% das folhas, mantendo-se 100% de grãos; 3) retirada de 33% das folhas, mantendo-se 100% de grãos; 4) retirada de 66% das folhas, mantendo-se 100% de grãos; 5) sem polinização da espiga mantendo-se as folhas; 6) polinização de 25% da espiga mantendo-se as folhas; 7) polinização de 50% da espiga mantendo-se as folhas. O menor número de estigmas polinizados resultou em maior acúmulo de matéria seca no caule e folhas, acúmulo de sacarose nos colmos, acúmulo de açúcares redutores, sacarose e amido nas folhas. O desfolhamento e a polinização parciais não afetaram a concentração de açúcares redutores e sacarose nos endospermas, e açúcares redutores nos colmos. A desfolha parcial acarretou menor matéria seca na espiga, principalmente pelo menor número de grãos; menor concentração de amido nos endospermas, colmos e folhas; menor concentração de sacarose nos colmos. Plantas sem grãos tiveram acúmulo de amido nos colmos. A atividade enzimática no endosperma e nas folhas não foi afetada pelos tratamentos. / Abstract: The development and dry matter accumulation in stem, leaves and ear, the concentrations of reducing sugars, sucrose and starch in leaves, stems and endosperms besides the activities of: invertase in leaves and stems; invertase and sucrose synthase in endosperms of corn plants submitted to defoliation and partial pollination were evaluated. A completely randomized block design with four replications was used. The treatments were constituted by the control (100% of leaves and grains), three variations of the source size (0%, 33% and 66% of leaves) with 100% of grains, and three variations in the sink size (0%, 25% and 50% of grains) keeping 100% of leaves. Leaf number reduction resulted in smaller ear dry matter, due to smaller grain number, but the 100 kernels weight was not altered. Grain number reduction increased stem and leaf dry matter, but increase in the remaining weight was not significant. There was no ear and grain development when plants were completely defoliated. Defoliation and partial pollination did not affect the concentration of reducing sugars and sucrose in the endosperms, and reducing sugars in the stems. Partial defoliation did not result in smaller starch concentration in the endosperm and stalks; but induced lower sucrose levels. The reduction of grain number caused sucrose accumulation in the stems. Plants without grains had starch accumulation in leaves. Leaf soluble invertase activity was much higher than that from the particulate form. Leaf and endosperm enzyme activities were not altered by treatments. / Mestre

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Orientadores: Lívia Maria Andaló Tenuta, Jaime Aparecido Cury / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T11:14:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_JulianadeKassiaBraga_M.pdf: 1468971 bytes, checksum: b69a8db4f9c99d75424124a9bd67e50a (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Depósitos minerais do tipo fluoreto de cálcio ("CaF2") são formados no esmalte após aplicação tópica profissional de flúor (ATPF). Esses depósitos atuam como um reservatório de íons flúor para o fluido do biofilme, os quais reduzem a desmineralização no esmalte. Neste trabalho, a hipótese de que o "CaF2" seja dissolvido mais rapidamente mediante desafios cariogênicos foi testada, assim como a influência do uso de dentifrício fluoretado nessa dissolução. Para isso, foi conduzido um estudo in situ, cruzado e duplo-cego com duas fases de 14 dias cada, nas quais 12 voluntários utilizaram um dispositivo intrabucal palatino contendo 12 blocos de esmalte tratados com flúor fosfato gel acidulado (12.300 ppm F, pH 3,6-3,9) no primeiro dia de cada fase experimental. Adicionalmente, dois blocos foram fixados com cera na porção anterior do dispositivo e 30 minutos após a ATPF foram retirados para a determinação do "CaF2" formado logo após o tratamento com fluoreto. Durante o período experimental, foi gotejada solução de sacarose a 20% sobre os blocos de esmalte nas freqüências de 2 ou 8X ao dia. Três vezes ao dia, os voluntários utilizaram dentifrício fluoretado (1100 µg F/g, NaF) ou não fluoretado. Após 2, 7 e 14 dias de uso do dispositivo, os blocos de esmalte foram coletados para a determinação do "CaF2" remanescente. A extração do "CaF2" foi feita com solução de KOH M, em duas extrações seqüenciais por 24 e 6 horas. Para análise estatística, os voluntários foram considerados blocos estatísticos (n=12) e o nível de significância adotado foi de 5%. A concentração do "CaF2" formado sobre os blocos de esmalte após a ATPF diminuiu em função do tempo (p<0,0001), embora 2 semanas após a ATPF continuasse mais alta do que blocos de esmalte não tratados com ATPF. Sob uso de dentifrício fluoretado, a dissolução do "CaF2" foi reduzida (p=0,0115), porém a freqüência de consumo de sacarose não parece ter interferido nessa dissolução (p=0,226). Os resultados sugerem que a dissolução do "CaF2" parece não ter sido influenciada pela freqüência de consumo de sacarose e que sua manutenção é favorecida pelo uso concomitante de dentifrício fluoretado. / Abstract: Calcium fluoride-like ("CaF2") deposits are formed on enamel after professional topical fluoride application, and they can serve as a reservoir of fluoride ions to the biofilm fluid, to reduce enamel demineralization. In the present study, the hypothesis that "CaF2" is more readily dissolved during a higher cariogenic challenge was tested. Also, the effect of exposure to fluoride dentifrices on "CaF2" dissolution was evaluated. Thus, a crossover, double-blind and in situ study was conducted in 2 phases of 14 days each. In each phase, 12 volunteers used intraoral palatal appliances containing 12 enamel blocks treated with acidulated phosphate fluoride, APF (12,300 ppm F, pH 3,6-3,9) on the first day of each phase. Additionally, two blocks were fixed with wax on the palatal appliance and removed 30 minutes after treatment with APF to determine the concentration of "CaF2" formed. During the experimental period, the enamel blocks were exposed to 20% sucrose solution 2X or 8X/day. Three times a day, the volunteers used fluoride dentifrice (1100 µg F/g, NaF) or non-fluoride dentifrice. On the 2th, 7th e 14th day of each phase, enamel blocks were collected and the remaining "CaF2" concentration was determined. For "CaF2" determination, blocks were immersed in 1.0 M KOH, for 24 and 6 h. Data was statistically analyzed considering the volunteers as statistical blocks (n=12) and the significance limit was set at 5%. "CaF2" concentration decrease with time (p<0.0001), but was still higher than enamel blocks not treated with APF 2 weeks after APF application. Under fluoride dentifrice use, "CaF2" dissolution was reduced (p=0.0115), but the frequency of sucrose exposure did not seem to have affected it (p=0.226). The findings suggest that the frequencies of sucrose exposure did not influence the "CaF2" dissolution; and that its maintenance is facilitated by the concurrent use of fluoride dentifrice. / Mestrado / Cariologia / Mestre em Odontologia

Orientador: Francisco Maugeri Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-22T08:37:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AnaMaria_M.pdf: 5275772 bytes, checksum: 8c57b353e75a9efd61d781733aab67f5 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A dextrana é uni-polissacarídeo levemente ramificado, composto exclusivamente de unidades monoméricas de glucose unidas na posição linear por ligações a-1,6-glieosídicas. O emprego da dextrana depende do seu peso molecular e a sua maior aplicação é como plasma sanguíneo, com peso molecular entre 50000 e 100000. Oligodextranas, com peso molecular entre 2000 e 5000, também têm grande potencial industrial no uso em rações animais, em cosméticos e produção de feno-dextrana. Neste trabalho, teve-se como objetivo o estudo do efeito da adição da glicose no meio de reação da enzima dextrana-saearase com a sacarose para formação da dextrana. A glicose foi usada como açúcar receptor. A função do receptor foi alterar o mecanismo de crescimento da cadeia poliménca, restringindo o seu tamanho. Além de estudai o efeito deste receptor, analisou-se também a influência da temperatura e da concentração de sacarose no processo de síntese. Adotou-se como metodologia de trabalho, a análise por superfície de resposta. A dextrana-sacarase, usada na síntese, foi isolada de um meio de cultura contendo Leuconosfoc mesemerokks NRRL B532F e submetida a um processo de purificação através de ultrafiltração e precipitação com polietilenogJicol e água. A enzima purificada foi .então, colocada no meio de reação contendo o substrato, sacarose, e o receptor glicose, para sintetizar a dextrana. Todos os ensaios foram feitos a partir das condições experimentais definidas através do planejamento experimental. Três parâmetros experimentais foram estudados paia obter informações sobre a influência no rendimento e peso molecular dos compostos formados: concentração de sacarose (75g/l - 125g/l). razão entre concentração de glicose e concentração de sacarose (0,05 - 0,15) e temperatura (15ºC ¿ 25ºC). Os produtos sintetizados foram analisados por cromatografia de permeação em gel, de alta eficiência (HPLC). A reação da dexhana-sacaiase com a sacarose mostrou que a glicose introduzida no meio alterou o curso normal da reação. Foi detectada a presença de oligossacarídeos ( PM entre 2000-3800) em todos os experimentos realizados juntamente com dextranas de alto peso molecular (acima de 2 x IO6), foi mostrado que o rendimento de oligossacarídeos pode ser maximizado, o rendimento de dextrana de alto peso molecular minimizado, e o peso molecular de oligossacarídeos pode ser controlado de acordo com a temperatura usada na síntese. Valores mais elevados da razão glicose/1sacarose e altos valores da concentração de sacarose dão altos rendimentos de oligossacarídeos e baixos rendimentos de dextrana de alto peso molecular. No entanto, se o peso molecular de oligossacarídeos tem que ser controlado, o efeito da temperatura é importante. Para obter oligossacarídeos com pesos moleculares mais elevados, por exemplo, deve-se usar altas concentrações de sacarose e baixas temperaturas ou razões (glicose/sacarose) baixas e temperaturas baixas / Abstract: Dextran is a slightly branched polysaccharide composed exclusively of the monomeric unit D-glucose linked in the linear parts with a-l,6-glucosidic bonds. The use of dextran depends on its molecular weight. With molecular weight between 50000 and 100000. dextrans has its major application as artificial blood plasma. Oligodextrans. with molecular weight between 2000 and 5000, has also important industrial application as animal ration, cosmetics and iron-dextran. In this work, the main goal was to study the effect of glucose addition in the reaction medium for dextran production from sucrose using dextransucrase enzyme. The glucose was used as acceptor. The function of the acceptor was to modify the mechanism of the growing polymeric chain in order to restrict the ienght of dextran.. Besides to study the glucose addition effect the effects of temperature and sucrose concentration were also studied. The methodology of Catena! design and analyses of surface response were adopted in this work. Dextransucrase was isolated from culture broth containing Leuconostoc mescnieroides NRRL B512F, and purified by ultrafiltration and precipitation with polyethyleneglycol and water. The purified enzyme was used in the medium of reaction containing sucrose and glucose in order to form dextran. Several assays were earned out according to the experimental conditions determined by experimental design. Three experimental parameters, sucrose concentration (75g/l - !2.5g/l), glucose/sucrose ratio (0,05 - 0,15) and temperature (15ºC - 25ºC), were studied in order to obtain in formations about the effect in both yield and molecular weight of the synthetised oligossaebarides and high-molecular-weight dextrans. The synthetized products were analysed by gel permeation chromatography of high efficiency (HPLC). The reaction of dextransucrase and sucrose showed that the glucose introduced in the medium, changed normal course of reaction. Ohgossacharides and high-molecular-weight dextran was detected in all experiments. It was shown that the yield of ohgossacharides can be maximised, whereas both the yield of high molecular weight dextrans can be minimised, and the oligossacarides molecular weight controled according to the use of a suitable reaction temperature. High values for the glucose/sucrose ratio and high sucrose concentration lead to high yields of oligossacarides. However, if the molecular weight of the oligossacarides has to be tailored, than the temperature has an important effect. Low temperatures tend to give oligossacarides with higher molecular weight, either with high sucrose concentration or low glucose/sucrose ratios / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos