A presença de Salmonella é uma das mais importantes barreiras sanitárias à exportação de alimentos. A ração contaminada representa potencial fonte de introdução de Salmonella nos rebanhos suínos, além do risco indireto de infecção ao consumidor. Um estudo transversal conduzido em quatro fábricas de ração teve como objetivos avaliar a frequência de isolamento de Salmonella e coliformes totais nestas unidades, verificar a presença desses agentes nas diversas etapas do processo de produção, correlacionar grupos clonais de Salmonella sp. obtidos pela análise de macrorestrição associada à eletroforese em campo pulsado (PFGE), além de avaliar a concordância entre o escore obtido na aplicação de roteiro de inspeção da Instrução Normativa (IN) 4 do Ministério da Agricultura e Abastecimento e os níveis de coliformes totais encontrados. De 1.269 amostras analisadas, sessenta e três (4,96%) apresentaram Salmonella sp. e 38,53% (n=489) apresentaram presença de enterobactérias. As freqüências de contaminação por Salmonella nas quatro fábricas avaliadas (A, B, C e D) foram, respectivamente, 3,5% (n=11/317), 1,7% (n=5/289), 7,1% (n=23/308) e 7% (n=25/355). Já para coliformes totais foram, respectivamente, 40,7% (129/317), 30,1% (87/289), 52,6% (162/308) e 31,3% (111/355). Nas fábricas A e D, Salmonella foi detectada em amostras de produto final. Estirpes apresentando genótipos semelhantes foram identificadas nos sorovares Orion, Montevideo, Worthington e Agona. Foi possível verificar que o sorovar Montevideo obteve o maior número de grupos clonais, apresentando pulsotipos distribuídos entre ingredientes, poeira, equipamentos e ração. O isolamento de Salmonella foi significativamente mais frequente (p =0,002) em amostras com a presença (36/489; 7,36%) do que com ausência de coliformes totais (27/780; 3,46%). As contagens logarítmicas médias encontradas de coliformes totais, considerando todas as amostras analisadas por fábrica, foram: A: 0,97 (IC 95%: 0,81-1,13); B: 0,78 (IC 95%: 0,61-0,94); C: 1,32 (IC 95%: 1,16-1,49) e D: 0,91 (IC 95%: 0,75-1,06). Constatou-se elevada variabilidade no número de coliformes totais em todos os pontos amostrados nas quatro fábricas, e não houve diferenças significativas entre os pontos amostrados e entre as fábricas (p=0,174). A regressão logística tendo como variável resposta a presença de coliformes totais apontou maiores razão de chance (OR) de isolamento no transportador (OR=3,67; IC 95%: 2,28-5,89), dosagem (OR=9,51, IC 95%: 4,43-20,41), moagem (OR=7,1; IC 95%: 3,27-15,40), mistura (OR=4,08; IC 95%: 2,04-8,17), poeira (OR=3,50; IC 95%:2,10-5,84), resíduos (OR=6,22; IC 95%: 3,88-9,95) e fábrica C (OR=2,43; IC 95%: 1,68-3,53). Da mesma forma, o transportador (OR= 4,43; IC95%: 2,43-8,09) foi o local com maior probabilidade de isolamento de Salmonella, seguidos da poeira coletada nas dependências da fábrica (OR=2,88; IC95%: 1,41-5,88). Comparadas à fábrica B, as unidades C e D apresentaram, respectivamente, 2,74 e 2,83 mais chances de isolamento de Salmonella. Ao analisar os 128 itens necessários no Roteiro de Inspeção da IN4, a fábrica B obteve o menor número de não conformidades. Nas demais fábricas, as maiores inconformidades foram encontradas quanto à estrutura da área interna e externa das fábricas. As fábricas A e D foram as que apresentaram o maior número de itens não conformes relacionados à limpeza e higienização de equipamentos. Entre os 29 itens imprescindíveis na Avaliação de Estabelecimento e Procedimentos Operacionais Padrão, oito não foram cumpridos em pelo menos uma das fábricas. A fábrica B apresentou todos os itens em conformidade, ao passo que as fábricas A e D não cumpriram os oito itens. A fábrica C apresentou três itens não conformes, relacionados à limpeza de piso e parede, recepção e armazenamento de matérias-primas. Não houve concordância entre os escores obtidos no roteiro de avaliação e a média de coliformes totais encontrada nas fábricas, demonstrando que apenas a adequação à legislação pode não garantir a inocuidade do alimento produzido. A partir disso, conclui-se que é necessário implantar programas de monitoramento e controle microbiológico ao longo da linha de produção, independente da situação da fábrica em relação à legislação vigente. A elaboração e produção de equipamentos de fácil limpeza e com mínimo acúmulo de poeira e resíduos deve ser incluída nos programas de controle de Salmonella concomitante às demais medidas de controle preconizadas. / The presence of Salmonella is one of the most important sanitary barriers to food exports. The contaminated feed is a potential source of introduction of Salmonella in pig herds, and may also represent a risk to the consumer. A cross-sectional study conducted in four feed mills was carried out to evaluate the frequency of isolation of enterobacteria and Salmonella at various stages of feed production, to identify clonal groups of Salmonella sp. Obtained by macrorestriction analysis associated with pulsed field gel electrophoresis (PFGE), and to verify the association between the score obtained by feed mills after the application of the checklist of the Normative 4 (IN4) of the Ministry of Agriculture and Food Supply and the mean of total coliforms found in the unit. Among 1,269 samples analysed, sixty-three (4.96%) showed the presence of Salmonella. The four feeds mills evaluated (A, B, C and D) presented, respectively, 3,5% (n=11/317), 1.7% (n=5/289), 7,1% (n=23/308), and 7% (n=25/355) of positive samples. Total coliforms were isolated from 40.7% (129/317), 30.1% (87/289), 52.6% (162/308) e 31.3% (111/355) samples taken at unit A, B, C and D, respectively. In the units A and D, Salmonella was detected in samples of feed. Strains showing similar genotypes have been identified as Serovar Orion, Montevideo, Worthington and Agona. Serovar Montevideo presented the highest number of clonal groups, with common pulsotypes distributed among ingredients, dust, equipment and feed. The isolation of Salmonella was significantly higher (p=0,002) in samples with the presence of total coliforms (36/489; 7.36%) than in the negative ones (27/780; 3.46%). The mean logarithmic counts of total coliforms considering all samples were determined for each plant: A: 0.97 (95% CI: 0.81 to 1.13), B: 0.78 (95% CI: 0.61 to 0.94), C: 1.32 (95% CI: 1.16 to 1.49) and D: 0.91 (95% CI: 0.75 to 1.06). A high variability on the number of total coliforms in all the sampled points was found in all feed mills, and there was no statistical diference between the sampling sites and units (p=0.174). The logistic regression, with isolation of total coliforms as the response variable, showed a high odds ratio (OR) of isolation from conveyors (OR = 3.67, 95% CI: 2.28 to 5.89), dosing (OR = 9.51, 95% CI: 4.43 to 20.41), grinding (OR = 7.10, 95% CI = 3.27 to 15.40), mixing (OR = 4.08, 95 % CI: 2.04 to 8.17), dust (OR = 3.50, 95% CI: 2.10 to 5.84), crusts (OR = 6.22, 95% CI: 3.88 to 9.95) and unit C (OR = 2.43, 95% CI: 1.68 to 3.53). The conveyors (OR = 4.43, 95% CI: 2.43-8.09) were the most likely sites of isolation of Salmonella, followed by the dust collected on the premises of the plant (OR = 2.88, 95% CI: 1.41-5.88). Feed mills C and D showed, respectively, 2.74 and 2.83 higher odds for Salmonella isolation than feed mill B. The verification of the 128 items addressed on the Guidelines for Inspection of Normative 4 (IN 4) of the Brazilian Ministry of Agriculture and Food Supply pointed out that factory B had the lowest number of nonconformities. The other three feed mills, presented most faults related to the physical structure of the facilities. Feed mills A and D presented the largest number of nonconformities related to cleaning and sanitizing of equipment. Among the 29 mandatory items in IN4, eight were not met in at least one of the factories. Feed mill B presented all items accordingly, while plants A and D did not meet any of the eight items. Feed mill C had three non-compliant items related to the floor and wall cleaning, reception and storage of raw materials. There was no association between the score obtained on the inspection checklist and the level of total coliforms found in the sampled units, demonstrating that only the compliance to the legislation cannot guarantee the safety of feed produced. It was concluded that programs for monitoring and control microbial contamination throughout the production line are needed, regardless of the status of the plant in the relation to the current legislation.The design of equipment that allow easy cleaning and with minimal accumulation of dust and debris should be added to other measures in Salmonella control programs.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar o tempo necessário para que carcaças de frango de diferentes pesos (1.200 g e 2.100g), que ao sair do tanque de resfriamento se encontravam com a temperatura acima de 7ºC, alcançassem 4°C e traçar o perfil microbiológico destas, realizado através do estudo de presença e multiplicação dos indicadores: microrganismos mesófilos aeróbios, coliformes totais, coliformes termotolerantes, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positivo, Clostridium perfringens, Salmonella spp. e Listeria spp. a fim de auxiliar as medidas e os limites críticos de um plano APPCC para a indústria de carne de ave. A pesquisa foi realizada em um matadouro localizado no Estado do Rio Grande do Sul. No total foram coletadas aleatoriamente 100 carcaças de frangos, 50 amostras para cada peso, com temperatura acima de 7°C, na esteira na saída dos tanques de resfriamento. Todas as carcaças foram colocadas em caixa plásticas e encaminhadas à câmara de resfriamento (tempo zero). De hora em hora foi realizada a aferição de temperatura no músculo peitoral profundo de 15 unidades amostrais de cada peso. As carcaças com peso de 1.200 g levaram de 2 a 4 horas para alcançarem a temperatura de 4ºC na musculatura profunda e as carcaças com peso médio de 2.100 g, chegaram a temperatura de 4ºC entre 5 e 8 horas de resfriamento. No momento da coleta das amostras e a cada hora, foram coletadas 5 unidades amostrais, de cada grupo, para análise microbiológica, totalizando 25 amostras para carcaças de frango de 1.200 g e 43 amostras para carcaças de frango de 2.100 g. A contagem de bactérias mesófilas aeróbias não apresentou declínio significativo (P> 0,05) ao longo do tempo de resfriamento, tanto em carcaças de 1.200 g quanto nas carcaças com peso de 2.100 g. A contagem de Staphylococcus coagulase positivo manteve-se, durante todo o experimento, para os dois tipos de amostras (1.200 e 2.100 g) dentro do limite estipulado pela legislação, todos os frangos analisados apresentaram resultados menores que 2,0 log10 UFC/g. Não houve o crescimento de Clostridium perfringens em nenhuma das análises realizadas, tanto em carcaças de frango com 1.200 g quanto naquelas com 2.100g. Para coliformes totais, a queda da temperatura foi significativa no declínio da contagem microbiana somente para carcaças de 2.100g. Já para coliformes termotolerantes e E. coli foi possível identificar declínio na contagem bacteriana ao longo do tempo de resfriamento para carcaças de 1.200g e para carcaças de 2.100g (P 0,05). Foi observada a presença de Salmonella spp. e Listeria spp. em temperaturas de refrigeração. Para carcaças de 1.200g, foi isolado Salmonella spp. em uma amostra que se encontrava na temperatura de 4,6°C e, em uma amostra, para carcaças de 2.100g, que se encontrava na temperatura de 7,2°C. Listeria spp. apenas foi detectada em carcaças de 2.100g, sendo uma amostra com temperatura de 6,2°C e em 04 amostras com temperatura de 4,6°. Verificou-se correlação inversa entre temperatura da carcaça e presença do microrganismo, isto é, a detecção de Listeria spp. ocorreu quando houve a queda da temperatura, isolando-a em temperaturas de refrigeração. / The present work aimed to evaluating the time necessary for broiler meat of different weights (1.200g e 2.100g, that after chiller had the temperature over 7°C), to be raised 4°C in temperature and to perform a microbiological profile through the study of the presence of indicators (mesophilic aerobes pathogens, total coliform, thermotolerant coliform, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positive, Clostridium perfringens, Salmonella spp. e Listeria spp.) and their multiplication, in order to help measuring critical limits in a HACCP plan to be applied to a broiler meat industry. The research was performed in a slaughterhouse located in the State of Rio Grande do Sul, Southern Brazil. One hundred broiler carcasses were collected, being 50 samples of each weight (1.200g e 2.100g), which showed temperatures above 7°C, at the end of the chiller. All carcasses were put in plastic boxes and placed in a freezing chamber (time zero). The temperature was then measured every hour in the profound pectoral muscle of 15 samples of each weight. The carcasses weighting 1.200g took 2 to 4 hours to raise 4°C in the profound musculature while the carcasses weighting 2.100g raised 4°C in 5 to 8 hours of freezing. The counting of mesophilic microorganisms did not show any significant reduction (P>0,05) during the freezing period, for both carcasses with 1.200g and the ones with 2.100g. The counting of coagulase positive Staphylococcus maintained, during the whole experiment, within the legislation limits, with all samples showing results below 2,0 log10 UFC/g. The study did not show any growth of Clostridium perfringens in all the samples collected. Regarding total coliforms, the temperature reduction was significantly connected to the reduction of bacterial counting in carcasses with 2.100g. On the other hand, in terms of thermotolerant coliform and E. coli, it was possible to detect a reduction of bacterial counting during the freezing time in carcasses of 1.200g as well as 2.100g (P 0,05). The presence of Salmonella spp. and Listeria spp. in refrigeration temperatures were also observed. In carcasses with 1.200g, Salmonella spp. was isolated in one sample in the temperature of 4,6°C and also in carcasses with 2.100g, in one sample that was in the temperature of 7,2°C. Listeria spp. was only detected in carcasses with 2.100g in one sample with the temperature 6,2°C and in four samples with temperature 4,6°C. A negative correlation between carcass temperature and microorganism presence was detected, that is, the detection of Listeria spp. occurred at refrigeration temperatures, when the temperature was reduced.

Orientador: Karin Werther / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Nilce Maria Soares Queiroz Gama / Resumo: Aves selvagens podem ser consideradas portadores/carreadores de agentes etiológicos patogênicos para galinhas de produção. O objetivo desse trabalho foi verificar, em aves selvagens, a presença de anticorpo contra: Mycoplasma gallisepticum (MG), Mycoplasma sinoviae (MS), Salmonella Pullorum (SP), Salmonella Gallinarum (SG), Vírus da Doença de Newcastle e Vírus da Bronquite Infecciosa; bem como a presença de Salmonella sp. Foram utilizadas 82 aves selvagens, e todas foram negativas na detecção de anticorpo anti-vírus da Doença de Newcastle e Bronquite Infecciosa, usando as técnicas de Inibição de Hemaglutinação e Soroneutralização, respectivamente. Para o diagnóstico de anticorpo anti Mycoplasma (MG e MS) foi utilizado inicialmente a técnica de Soroaglutinação Rápida em Placa, sendo sete aves positivas para MS e duas para MG. Amostras biológicas dessas aves foram posteriormente submetidas a técnicas de HI e/ou PCR, sendo todas negativas. Quanto ao diagnóstico de Salmonella sp., foi isolado Salmonella Muenchen da cultura de suabe de cloaca de uma curicaca; de uma seriema, foi isolado Salmonella Muenchen e Salmonella Saintpaul da cultura de órgãos e conteúdo intestinal, respectivamente; e do conteúdo intestinal de uma pomba foi isolado Salmonella Enteritidis. Apenas com os resultados dessa pesquisa, não foi possível concluir que as aves selvagens possam representar um risco sanitário para a avicultura. São necessários mais estudos envolvendo um número maior de aves e locais para elucidar o real potencial de transmissão e portador são das aves selvagens para os respectivos agentes pesquisados. / Abstract: Wild birds can be considered carrier/transmitter of patogenic etiologic agents for chickens. The objective of this work was to verify in wild birds the presence of antibody Mycoplasma gallisepticum (MG), Mycoplasma sinoviae (MS), Salmonella Pullorum (SP), Salmonella Gallinarum (SG), Newcastle Disease Virus, and Infectious Bronchitis Virus; as well as the presence of Salmonella sp. Eighty-two wild birds were sampled, and all was negative for antibody anti-virus Newcastle Disease and Infectious Bronchitis, using the techniques of Hemagglutination Inhibition and Seroneutralization, respectively. For the detection of antibodies anti Mycoplasma (MG e MS) were used initially the Fast Serum Agglutination on Plate method, seven birds were positive for MS and two for MG. Subsequently the positive sera and/or traqueal swab were submitted for HI and/or PCR techniques being all exams negative. Regarding the diagnosis of Salmonella sp., Salmonella Muenchen was isolated from a culture of cloacal swab of a buff-necked Ibis; from a red-legged seriema, Salmonella Muenchen and Salmonella Saintpaul were isolated from culture of organs and intestinal content, respectively; and Salmonella Enteritidis was isolated of intestinal content from a dove. It was not possible to conclude that the wild birds can represent a sanitary risk for aviculture considering only these results. More studies are necessary to elucidate the real potential of transmission and carrier of wild birds for the researched agents. / Mestre

O presente trabalho teve como objetivo avaliar o tempo necessário para que carcaças de frango de diferentes pesos (1.200 g e 2.100g), que ao sair do tanque de resfriamento se encontravam com a temperatura acima de 7ºC, alcançassem 4°C e traçar o perfil microbiológico destas, realizado através do estudo de presença e multiplicação dos indicadores: microrganismos mesófilos aeróbios, coliformes totais, coliformes termotolerantes, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positivo, Clostridium perfringens, Salmonella spp. e Listeria spp. a fim de auxiliar as medidas e os limites críticos de um plano APPCC para a indústria de carne de ave. A pesquisa foi realizada em um matadouro localizado no Estado do Rio Grande do Sul. No total foram coletadas aleatoriamente 100 carcaças de frangos, 50 amostras para cada peso, com temperatura acima de 7°C, na esteira na saída dos tanques de resfriamento. Todas as carcaças foram colocadas em caixa plásticas e encaminhadas à câmara de resfriamento (tempo zero). De hora em hora foi realizada a aferição de temperatura no músculo peitoral profundo de 15 unidades amostrais de cada peso. As carcaças com peso de 1.200 g levaram de 2 a 4 horas para alcançarem a temperatura de 4ºC na musculatura profunda e as carcaças com peso médio de 2.100 g, chegaram a temperatura de 4ºC entre 5 e 8 horas de resfriamento. No momento da coleta das amostras e a cada hora, foram coletadas 5 unidades amostrais, de cada grupo, para análise microbiológica, totalizando 25 amostras para carcaças de frango de 1.200 g e 43 amostras para carcaças de frango de 2.100 g. A contagem de bactérias mesófilas aeróbias não apresentou declínio significativo (P> 0,05) ao longo do tempo de resfriamento, tanto em carcaças de 1.200 g quanto nas carcaças com peso de 2.100 g. A contagem de Staphylococcus coagulase positivo manteve-se, durante todo o experimento, para os dois tipos de amostras (1.200 e 2.100 g) dentro do limite estipulado pela legislação, todos os frangos analisados apresentaram resultados menores que 2,0 log10 UFC/g. Não houve o crescimento de Clostridium perfringens em nenhuma das análises realizadas, tanto em carcaças de frango com 1.200 g quanto naquelas com 2.100g. Para coliformes totais, a queda da temperatura foi significativa no declínio da contagem microbiana somente para carcaças de 2.100g. Já para coliformes termotolerantes e E. coli foi possível identificar declínio na contagem bacteriana ao longo do tempo de resfriamento para carcaças de 1.200g e para carcaças de 2.100g (P 0,05). Foi observada a presença de Salmonella spp. e Listeria spp. em temperaturas de refrigeração. Para carcaças de 1.200g, foi isolado Salmonella spp. em uma amostra que se encontrava na temperatura de 4,6°C e, em uma amostra, para carcaças de 2.100g, que se encontrava na temperatura de 7,2°C. Listeria spp. apenas foi detectada em carcaças de 2.100g, sendo uma amostra com temperatura de 6,2°C e em 04 amostras com temperatura de 4,6°. Verificou-se correlação inversa entre temperatura da carcaça e presença do microrganismo, isto é, a detecção de Listeria spp. ocorreu quando houve a queda da temperatura, isolando-a em temperaturas de refrigeração. / The present work aimed to evaluating the time necessary for broiler meat of different weights (1.200g e 2.100g, that after chiller had the temperature over 7°C), to be raised 4°C in temperature and to perform a microbiological profile through the study of the presence of indicators (mesophilic aerobes pathogens, total coliform, thermotolerant coliform, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positive, Clostridium perfringens, Salmonella spp. e Listeria spp.) and their multiplication, in order to help measuring critical limits in a HACCP plan to be applied to a broiler meat industry. The research was performed in a slaughterhouse located in the State of Rio Grande do Sul, Southern Brazil. One hundred broiler carcasses were collected, being 50 samples of each weight (1.200g e 2.100g), which showed temperatures above 7°C, at the end of the chiller. All carcasses were put in plastic boxes and placed in a freezing chamber (time zero). The temperature was then measured every hour in the profound pectoral muscle of 15 samples of each weight. The carcasses weighting 1.200g took 2 to 4 hours to raise 4°C in the profound musculature while the carcasses weighting 2.100g raised 4°C in 5 to 8 hours of freezing. The counting of mesophilic microorganisms did not show any significant reduction (P>0,05) during the freezing period, for both carcasses with 1.200g and the ones with 2.100g. The counting of coagulase positive Staphylococcus maintained, during the whole experiment, within the legislation limits, with all samples showing results below 2,0 log10 UFC/g. The study did not show any growth of Clostridium perfringens in all the samples collected. Regarding total coliforms, the temperature reduction was significantly connected to the reduction of bacterial counting in carcasses with 2.100g. On the other hand, in terms of thermotolerant coliform and E. coli, it was possible to detect a reduction of bacterial counting during the freezing time in carcasses of 1.200g as well as 2.100g (P 0,05). The presence of Salmonella spp. and Listeria spp. in refrigeration temperatures were also observed. In carcasses with 1.200g, Salmonella spp. was isolated in one sample in the temperature of 4,6°C and also in carcasses with 2.100g, in one sample that was in the temperature of 7,2°C. Listeria spp. was only detected in carcasses with 2.100g in one sample with the temperature 6,2°C and in four samples with temperature 4,6°C. A negative correlation between carcass temperature and microorganism presence was detected, that is, the detection of Listeria spp. occurred at refrigeration temperatures, when the temperature was reduced.

A presença de Salmonella é uma das mais importantes barreiras sanitárias à exportação de alimentos. A ração contaminada representa potencial fonte de introdução de Salmonella nos rebanhos suínos, além do risco indireto de infecção ao consumidor. Um estudo transversal conduzido em quatro fábricas de ração teve como objetivos avaliar a frequência de isolamento de Salmonella e coliformes totais nestas unidades, verificar a presença desses agentes nas diversas etapas do processo de produção, correlacionar grupos clonais de Salmonella sp. obtidos pela análise de macrorestrição associada à eletroforese em campo pulsado (PFGE), além de avaliar a concordância entre o escore obtido na aplicação de roteiro de inspeção da Instrução Normativa (IN) 4 do Ministério da Agricultura e Abastecimento e os níveis de coliformes totais encontrados. De 1.269 amostras analisadas, sessenta e três (4,96%) apresentaram Salmonella sp. e 38,53% (n=489) apresentaram presença de enterobactérias. As freqüências de contaminação por Salmonella nas quatro fábricas avaliadas (A, B, C e D) foram, respectivamente, 3,5% (n=11/317), 1,7% (n=5/289), 7,1% (n=23/308) e 7% (n=25/355). Já para coliformes totais foram, respectivamente, 40,7% (129/317), 30,1% (87/289), 52,6% (162/308) e 31,3% (111/355). Nas fábricas A e D, Salmonella foi detectada em amostras de produto final. Estirpes apresentando genótipos semelhantes foram identificadas nos sorovares Orion, Montevideo, Worthington e Agona. Foi possível verificar que o sorovar Montevideo obteve o maior número de grupos clonais, apresentando pulsotipos distribuídos entre ingredientes, poeira, equipamentos e ração. O isolamento de Salmonella foi significativamente mais frequente (p =0,002) em amostras com a presença (36/489; 7,36%) do que com ausência de coliformes totais (27/780; 3,46%). As contagens logarítmicas médias encontradas de coliformes totais, considerando todas as amostras analisadas por fábrica, foram: A: 0,97 (IC 95%: 0,81-1,13); B: 0,78 (IC 95%: 0,61-0,94); C: 1,32 (IC 95%: 1,16-1,49) e D: 0,91 (IC 95%: 0,75-1,06). Constatou-se elevada variabilidade no número de coliformes totais em todos os pontos amostrados nas quatro fábricas, e não houve diferenças significativas entre os pontos amostrados e entre as fábricas (p=0,174). A regressão logística tendo como variável resposta a presença de coliformes totais apontou maiores razão de chance (OR) de isolamento no transportador (OR=3,67; IC 95%: 2,28-5,89), dosagem (OR=9,51, IC 95%: 4,43-20,41), moagem (OR=7,1; IC 95%: 3,27-15,40), mistura (OR=4,08; IC 95%: 2,04-8,17), poeira (OR=3,50; IC 95%:2,10-5,84), resíduos (OR=6,22; IC 95%: 3,88-9,95) e fábrica C (OR=2,43; IC 95%: 1,68-3,53). Da mesma forma, o transportador (OR= 4,43; IC95%: 2,43-8,09) foi o local com maior probabilidade de isolamento de Salmonella, seguidos da poeira coletada nas dependências da fábrica (OR=2,88; IC95%: 1,41-5,88). Comparadas à fábrica B, as unidades C e D apresentaram, respectivamente, 2,74 e 2,83 mais chances de isolamento de Salmonella. Ao analisar os 128 itens necessários no Roteiro de Inspeção da IN4, a fábrica B obteve o menor número de não conformidades. Nas demais fábricas, as maiores inconformidades foram encontradas quanto à estrutura da área interna e externa das fábricas. As fábricas A e D foram as que apresentaram o maior número de itens não conformes relacionados à limpeza e higienização de equipamentos. Entre os 29 itens imprescindíveis na Avaliação de Estabelecimento e Procedimentos Operacionais Padrão, oito não foram cumpridos em pelo menos uma das fábricas. A fábrica B apresentou todos os itens em conformidade, ao passo que as fábricas A e D não cumpriram os oito itens. A fábrica C apresentou três itens não conformes, relacionados à limpeza de piso e parede, recepção e armazenamento de matérias-primas. Não houve concordância entre os escores obtidos no roteiro de avaliação e a média de coliformes totais encontrada nas fábricas, demonstrando que apenas a adequação à legislação pode não garantir a inocuidade do alimento produzido. A partir disso, conclui-se que é necessário implantar programas de monitoramento e controle microbiológico ao longo da linha de produção, independente da situação da fábrica em relação à legislação vigente. A elaboração e produção de equipamentos de fácil limpeza e com mínimo acúmulo de poeira e resíduos deve ser incluída nos programas de controle de Salmonella concomitante às demais medidas de controle preconizadas. / The presence of Salmonella is one of the most important sanitary barriers to food exports. The contaminated feed is a potential source of introduction of Salmonella in pig herds, and may also represent a risk to the consumer. A cross-sectional study conducted in four feed mills was carried out to evaluate the frequency of isolation of enterobacteria and Salmonella at various stages of feed production, to identify clonal groups of Salmonella sp. Obtained by macrorestriction analysis associated with pulsed field gel electrophoresis (PFGE), and to verify the association between the score obtained by feed mills after the application of the checklist of the Normative 4 (IN4) of the Ministry of Agriculture and Food Supply and the mean of total coliforms found in the unit. Among 1,269 samples analysed, sixty-three (4.96%) showed the presence of Salmonella. The four feeds mills evaluated (A, B, C and D) presented, respectively, 3,5% (n=11/317), 1.7% (n=5/289), 7,1% (n=23/308), and 7% (n=25/355) of positive samples. Total coliforms were isolated from 40.7% (129/317), 30.1% (87/289), 52.6% (162/308) e 31.3% (111/355) samples taken at unit A, B, C and D, respectively. In the units A and D, Salmonella was detected in samples of feed. Strains showing similar genotypes have been identified as Serovar Orion, Montevideo, Worthington and Agona. Serovar Montevideo presented the highest number of clonal groups, with common pulsotypes distributed among ingredients, dust, equipment and feed. The isolation of Salmonella was significantly higher (p=0,002) in samples with the presence of total coliforms (36/489; 7.36%) than in the negative ones (27/780; 3.46%). The mean logarithmic counts of total coliforms considering all samples were determined for each plant: A: 0.97 (95% CI: 0.81 to 1.13), B: 0.78 (95% CI: 0.61 to 0.94), C: 1.32 (95% CI: 1.16 to 1.49) and D: 0.91 (95% CI: 0.75 to 1.06). A high variability on the number of total coliforms in all the sampled points was found in all feed mills, and there was no statistical diference between the sampling sites and units (p=0.174). The logistic regression, with isolation of total coliforms as the response variable, showed a high odds ratio (OR) of isolation from conveyors (OR = 3.67, 95% CI: 2.28 to 5.89), dosing (OR = 9.51, 95% CI: 4.43 to 20.41), grinding (OR = 7.10, 95% CI = 3.27 to 15.40), mixing (OR = 4.08, 95 % CI: 2.04 to 8.17), dust (OR = 3.50, 95% CI: 2.10 to 5.84), crusts (OR = 6.22, 95% CI: 3.88 to 9.95) and unit C (OR = 2.43, 95% CI: 1.68 to 3.53). The conveyors (OR = 4.43, 95% CI: 2.43-8.09) were the most likely sites of isolation of Salmonella, followed by the dust collected on the premises of the plant (OR = 2.88, 95% CI: 1.41-5.88). Feed mills C and D showed, respectively, 2.74 and 2.83 higher odds for Salmonella isolation than feed mill B. The verification of the 128 items addressed on the Guidelines for Inspection of Normative 4 (IN 4) of the Brazilian Ministry of Agriculture and Food Supply pointed out that factory B had the lowest number of nonconformities. The other three feed mills, presented most faults related to the physical structure of the facilities. Feed mills A and D presented the largest number of nonconformities related to cleaning and sanitizing of equipment. Among the 29 mandatory items in IN4, eight were not met in at least one of the factories. Feed mill B presented all items accordingly, while plants A and D did not meet any of the eight items. Feed mill C had three non-compliant items related to the floor and wall cleaning, reception and storage of raw materials. There was no association between the score obtained on the inspection checklist and the level of total coliforms found in the sampled units, demonstrating that only the compliance to the legislation cannot guarantee the safety of feed produced. It was concluded that programs for monitoring and control microbial contamination throughout the production line are needed, regardless of the status of the plant in the relation to the current legislation.The design of equipment that allow easy cleaning and with minimal accumulation of dust and debris should be added to other measures in Salmonella control programs.

A presença de Salmonella é uma das mais importantes barreiras sanitárias à exportação de alimentos. A ração contaminada representa potencial fonte de introdução de Salmonella nos rebanhos suínos, além do risco indireto de infecção ao consumidor. Um estudo transversal conduzido em quatro fábricas de ração teve como objetivos avaliar a frequência de isolamento de Salmonella e coliformes totais nestas unidades, verificar a presença desses agentes nas diversas etapas do processo de produção, correlacionar grupos clonais de Salmonella sp. obtidos pela análise de macrorestrição associada à eletroforese em campo pulsado (PFGE), além de avaliar a concordância entre o escore obtido na aplicação de roteiro de inspeção da Instrução Normativa (IN) 4 do Ministério da Agricultura e Abastecimento e os níveis de coliformes totais encontrados. De 1.269 amostras analisadas, sessenta e três (4,96%) apresentaram Salmonella sp. e 38,53% (n=489) apresentaram presença de enterobactérias. As freqüências de contaminação por Salmonella nas quatro fábricas avaliadas (A, B, C e D) foram, respectivamente, 3,5% (n=11/317), 1,7% (n=5/289), 7,1% (n=23/308) e 7% (n=25/355). Já para coliformes totais foram, respectivamente, 40,7% (129/317), 30,1% (87/289), 52,6% (162/308) e 31,3% (111/355). Nas fábricas A e D, Salmonella foi detectada em amostras de produto final. Estirpes apresentando genótipos semelhantes foram identificadas nos sorovares Orion, Montevideo, Worthington e Agona. Foi possível verificar que o sorovar Montevideo obteve o maior número de grupos clonais, apresentando pulsotipos distribuídos entre ingredientes, poeira, equipamentos e ração. O isolamento de Salmonella foi significativamente mais frequente (p =0,002) em amostras com a presença (36/489; 7,36%) do que com ausência de coliformes totais (27/780; 3,46%). As contagens logarítmicas médias encontradas de coliformes totais, considerando todas as amostras analisadas por fábrica, foram: A: 0,97 (IC 95%: 0,81-1,13); B: 0,78 (IC 95%: 0,61-0,94); C: 1,32 (IC 95%: 1,16-1,49) e D: 0,91 (IC 95%: 0,75-1,06). Constatou-se elevada variabilidade no número de coliformes totais em todos os pontos amostrados nas quatro fábricas, e não houve diferenças significativas entre os pontos amostrados e entre as fábricas (p=0,174). A regressão logística tendo como variável resposta a presença de coliformes totais apontou maiores razão de chance (OR) de isolamento no transportador (OR=3,67; IC 95%: 2,28-5,89), dosagem (OR=9,51, IC 95%: 4,43-20,41), moagem (OR=7,1; IC 95%: 3,27-15,40), mistura (OR=4,08; IC 95%: 2,04-8,17), poeira (OR=3,50; IC 95%:2,10-5,84), resíduos (OR=6,22; IC 95%: 3,88-9,95) e fábrica C (OR=2,43; IC 95%: 1,68-3,53). Da mesma forma, o transportador (OR= 4,43; IC95%: 2,43-8,09) foi o local com maior probabilidade de isolamento de Salmonella, seguidos da poeira coletada nas dependências da fábrica (OR=2,88; IC95%: 1,41-5,88). Comparadas à fábrica B, as unidades C e D apresentaram, respectivamente, 2,74 e 2,83 mais chances de isolamento de Salmonella. Ao analisar os 128 itens necessários no Roteiro de Inspeção da IN4, a fábrica B obteve o menor número de não conformidades. Nas demais fábricas, as maiores inconformidades foram encontradas quanto à estrutura da área interna e externa das fábricas. As fábricas A e D foram as que apresentaram o maior número de itens não conformes relacionados à limpeza e higienização de equipamentos. Entre os 29 itens imprescindíveis na Avaliação de Estabelecimento e Procedimentos Operacionais Padrão, oito não foram cumpridos em pelo menos uma das fábricas. A fábrica B apresentou todos os itens em conformidade, ao passo que as fábricas A e D não cumpriram os oito itens. A fábrica C apresentou três itens não conformes, relacionados à limpeza de piso e parede, recepção e armazenamento de matérias-primas. Não houve concordância entre os escores obtidos no roteiro de avaliação e a média de coliformes totais encontrada nas fábricas, demonstrando que apenas a adequação à legislação pode não garantir a inocuidade do alimento produzido. A partir disso, conclui-se que é necessário implantar programas de monitoramento e controle microbiológico ao longo da linha de produção, independente da situação da fábrica em relação à legislação vigente. A elaboração e produção de equipamentos de fácil limpeza e com mínimo acúmulo de poeira e resíduos deve ser incluída nos programas de controle de Salmonella concomitante às demais medidas de controle preconizadas. / The presence of Salmonella is one of the most important sanitary barriers to food exports. The contaminated feed is a potential source of introduction of Salmonella in pig herds, and may also represent a risk to the consumer. A cross-sectional study conducted in four feed mills was carried out to evaluate the frequency of isolation of enterobacteria and Salmonella at various stages of feed production, to identify clonal groups of Salmonella sp. Obtained by macrorestriction analysis associated with pulsed field gel electrophoresis (PFGE), and to verify the association between the score obtained by feed mills after the application of the checklist of the Normative 4 (IN4) of the Ministry of Agriculture and Food Supply and the mean of total coliforms found in the unit. Among 1,269 samples analysed, sixty-three (4.96%) showed the presence of Salmonella. The four feeds mills evaluated (A, B, C and D) presented, respectively, 3,5% (n=11/317), 1.7% (n=5/289), 7,1% (n=23/308), and 7% (n=25/355) of positive samples. Total coliforms were isolated from 40.7% (129/317), 30.1% (87/289), 52.6% (162/308) e 31.3% (111/355) samples taken at unit A, B, C and D, respectively. In the units A and D, Salmonella was detected in samples of feed. Strains showing similar genotypes have been identified as Serovar Orion, Montevideo, Worthington and Agona. Serovar Montevideo presented the highest number of clonal groups, with common pulsotypes distributed among ingredients, dust, equipment and feed. The isolation of Salmonella was significantly higher (p=0,002) in samples with the presence of total coliforms (36/489; 7.36%) than in the negative ones (27/780; 3.46%). The mean logarithmic counts of total coliforms considering all samples were determined for each plant: A: 0.97 (95% CI: 0.81 to 1.13), B: 0.78 (95% CI: 0.61 to 0.94), C: 1.32 (95% CI: 1.16 to 1.49) and D: 0.91 (95% CI: 0.75 to 1.06). A high variability on the number of total coliforms in all the sampled points was found in all feed mills, and there was no statistical diference between the sampling sites and units (p=0.174). The logistic regression, with isolation of total coliforms as the response variable, showed a high odds ratio (OR) of isolation from conveyors (OR = 3.67, 95% CI: 2.28 to 5.89), dosing (OR = 9.51, 95% CI: 4.43 to 20.41), grinding (OR = 7.10, 95% CI = 3.27 to 15.40), mixing (OR = 4.08, 95 % CI: 2.04 to 8.17), dust (OR = 3.50, 95% CI: 2.10 to 5.84), crusts (OR = 6.22, 95% CI: 3.88 to 9.95) and unit C (OR = 2.43, 95% CI: 1.68 to 3.53). The conveyors (OR = 4.43, 95% CI: 2.43-8.09) were the most likely sites of isolation of Salmonella, followed by the dust collected on the premises of the plant (OR = 2.88, 95% CI: 1.41-5.88). Feed mills C and D showed, respectively, 2.74 and 2.83 higher odds for Salmonella isolation than feed mill B. The verification of the 128 items addressed on the Guidelines for Inspection of Normative 4 (IN 4) of the Brazilian Ministry of Agriculture and Food Supply pointed out that factory B had the lowest number of nonconformities. The other three feed mills, presented most faults related to the physical structure of the facilities. Feed mills A and D presented the largest number of nonconformities related to cleaning and sanitizing of equipment. Among the 29 mandatory items in IN4, eight were not met in at least one of the factories. Feed mill B presented all items accordingly, while plants A and D did not meet any of the eight items. Feed mill C had three non-compliant items related to the floor and wall cleaning, reception and storage of raw materials. There was no association between the score obtained on the inspection checklist and the level of total coliforms found in the sampled units, demonstrating that only the compliance to the legislation cannot guarantee the safety of feed produced. It was concluded that programs for monitoring and control microbial contamination throughout the production line are needed, regardless of the status of the plant in the relation to the current legislation.The design of equipment that allow easy cleaning and with minimal accumulation of dust and debris should be added to other measures in Salmonella control programs.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar o tempo necessário para que carcaças de frango de diferentes pesos (1.200 g e 2.100g), que ao sair do tanque de resfriamento se encontravam com a temperatura acima de 7ºC, alcançassem 4°C e traçar o perfil microbiológico destas, realizado através do estudo de presença e multiplicação dos indicadores: microrganismos mesófilos aeróbios, coliformes totais, coliformes termotolerantes, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positivo, Clostridium perfringens, Salmonella spp. e Listeria spp. a fim de auxiliar as medidas e os limites críticos de um plano APPCC para a indústria de carne de ave. A pesquisa foi realizada em um matadouro localizado no Estado do Rio Grande do Sul. No total foram coletadas aleatoriamente 100 carcaças de frangos, 50 amostras para cada peso, com temperatura acima de 7°C, na esteira na saída dos tanques de resfriamento. Todas as carcaças foram colocadas em caixa plásticas e encaminhadas à câmara de resfriamento (tempo zero). De hora em hora foi realizada a aferição de temperatura no músculo peitoral profundo de 15 unidades amostrais de cada peso. As carcaças com peso de 1.200 g levaram de 2 a 4 horas para alcançarem a temperatura de 4ºC na musculatura profunda e as carcaças com peso médio de 2.100 g, chegaram a temperatura de 4ºC entre 5 e 8 horas de resfriamento. No momento da coleta das amostras e a cada hora, foram coletadas 5 unidades amostrais, de cada grupo, para análise microbiológica, totalizando 25 amostras para carcaças de frango de 1.200 g e 43 amostras para carcaças de frango de 2.100 g. A contagem de bactérias mesófilas aeróbias não apresentou declínio significativo (P> 0,05) ao longo do tempo de resfriamento, tanto em carcaças de 1.200 g quanto nas carcaças com peso de 2.100 g. A contagem de Staphylococcus coagulase positivo manteve-se, durante todo o experimento, para os dois tipos de amostras (1.200 e 2.100 g) dentro do limite estipulado pela legislação, todos os frangos analisados apresentaram resultados menores que 2,0 log10 UFC/g. Não houve o crescimento de Clostridium perfringens em nenhuma das análises realizadas, tanto em carcaças de frango com 1.200 g quanto naquelas com 2.100g. Para coliformes totais, a queda da temperatura foi significativa no declínio da contagem microbiana somente para carcaças de 2.100g. Já para coliformes termotolerantes e E. coli foi possível identificar declínio na contagem bacteriana ao longo do tempo de resfriamento para carcaças de 1.200g e para carcaças de 2.100g (P 0,05). Foi observada a presença de Salmonella spp. e Listeria spp. em temperaturas de refrigeração. Para carcaças de 1.200g, foi isolado Salmonella spp. em uma amostra que se encontrava na temperatura de 4,6°C e, em uma amostra, para carcaças de 2.100g, que se encontrava na temperatura de 7,2°C. Listeria spp. apenas foi detectada em carcaças de 2.100g, sendo uma amostra com temperatura de 6,2°C e em 04 amostras com temperatura de 4,6°. Verificou-se correlação inversa entre temperatura da carcaça e presença do microrganismo, isto é, a detecção de Listeria spp. ocorreu quando houve a queda da temperatura, isolando-a em temperaturas de refrigeração. / The present work aimed to evaluating the time necessary for broiler meat of different weights (1.200g e 2.100g, that after chiller had the temperature over 7°C), to be raised 4°C in temperature and to perform a microbiological profile through the study of the presence of indicators (mesophilic aerobes pathogens, total coliform, thermotolerant coliform, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positive, Clostridium perfringens, Salmonella spp. e Listeria spp.) and their multiplication, in order to help measuring critical limits in a HACCP plan to be applied to a broiler meat industry. The research was performed in a slaughterhouse located in the State of Rio Grande do Sul, Southern Brazil. One hundred broiler carcasses were collected, being 50 samples of each weight (1.200g e 2.100g), which showed temperatures above 7°C, at the end of the chiller. All carcasses were put in plastic boxes and placed in a freezing chamber (time zero). The temperature was then measured every hour in the profound pectoral muscle of 15 samples of each weight. The carcasses weighting 1.200g took 2 to 4 hours to raise 4°C in the profound musculature while the carcasses weighting 2.100g raised 4°C in 5 to 8 hours of freezing. The counting of mesophilic microorganisms did not show any significant reduction (P>0,05) during the freezing period, for both carcasses with 1.200g and the ones with 2.100g. The counting of coagulase positive Staphylococcus maintained, during the whole experiment, within the legislation limits, with all samples showing results below 2,0 log10 UFC/g. The study did not show any growth of Clostridium perfringens in all the samples collected. Regarding total coliforms, the temperature reduction was significantly connected to the reduction of bacterial counting in carcasses with 2.100g. On the other hand, in terms of thermotolerant coliform and E. coli, it was possible to detect a reduction of bacterial counting during the freezing time in carcasses of 1.200g as well as 2.100g (P 0,05). The presence of Salmonella spp. and Listeria spp. in refrigeration temperatures were also observed. In carcasses with 1.200g, Salmonella spp. was isolated in one sample in the temperature of 4,6°C and also in carcasses with 2.100g, in one sample that was in the temperature of 7,2°C. Listeria spp. was only detected in carcasses with 2.100g in one sample with the temperature 6,2°C and in four samples with temperature 4,6°C. A negative correlation between carcass temperature and microorganism presence was detected, that is, the detection of Listeria spp. occurred at refrigeration temperatures, when the temperature was reduced.

Para obter resultados rápidos e confiáveis que permitam o monitoramento da segurança microbiológica de alimentos, seja pela indústria ou pelos órgãos de fiscalização, diversos métodos alternativos têm sido desenvolvidos para a detecção e quantificação de Salmonella. Os propósitos do estudo foram avaliar a viabilidade de emprego do QIAamp® DNA Stool Mini Kit para extração e purificação de DNA de Salmonella; validar ensaios baseados em PCR-tempo real (PCR-RT) para quantificar o DNA de Salmonella empregando ttr ou tuf e desenvolver um ensaio para quantificar Salmonella baseado na transcriptase reversa-PCR-tempo real (RT-PCR-RT). Para avaliação do QIAamp® DNA Stool Mini Kit empregaram-se fezes coletadas diretamente do reto de animais infectados ou não, sendo estas últimas artificialmente contaminadas e submetidas à extração segundo protocolo do fabricante. As amostras de DNA isoladas foram quantificadas empregando um ensaio Salmonella-específico PCR-RT utilizando como alvo o lócus ttr. O mesmo ensaio foi utilizado para células de Salmonella provenientes de meio de cultura. O ensaio PCR-RT baseado no alvo tuf foi validado empregando-se primeiramente cepas de diferentes sorotipos de Salmonella e de outras Enterobacteriaceae. A seguir sua eficiência foi avaliada para alimentos-modelo (ave e suíno) artificialmente contaminadas com elevada (≈ 6 log UFC/mL) e baixa (≈ 2 log UFC/mL) população de Salmonella Typhimurium DT 104. A validação do método quantitativo de Salmonella por RT-PCR-RT foi realizada primeiramente com células em meio de cultura e posteriormente nos mesmos alimentos-modelo utilizados para PCR-RT. Em ambos os métodos, alíquotas dos alimentos-modelo foram mantidas a 20 ºC e a 8 ºC, sendo examinadas em diferentes tempos pós-inoculação. Como controle empregou-se a enumeração de microrganismos mesófilos totais e de Salmonella por técnicas convencionais. A taxa de recuperação de Salmonella em fezes suínas artificialmente inoculadas, após tratamento com QIAamp® DNA Stool Kit, variou entre 25% a 50%, dependendo da quantidade inicial de células. Empregando o DNA extraído e submetendo-o à PCR-RT para o ttr obteve-se limite de detecção de 2,8 log UFC eq/g de fezes; método que foi menos sensível que o convencional. A quantificação de Salmonella por PCR-RT empregando tuf apresentou limite de detecção menor que 1 log UFC eq. Os resultados obtidos com este método, empregando-se células em meio de cultura ou alimentos-modelo, foram, de maneira geral, ligeiramente inferiores aos do método convencional. A eficiência de amplificação para PCR-RT e tuf foi de 94%. O método RT-PCR-RT apresentou limite de detecção semelhante ao obtido com o ttr (2 log UFC eq) e sua eficiência de amplificação foi de 100%. Observou-se que tuf é expresso na fase logarítmica de multiplicação bacteriana, o que o torna um bom indicador da viabilidade de Salmonella. / In order to get fast and trustworthy results that allow monitoring the microbiological food safety either by industries or governmental agencies, diverse alternative methods have been developed for Salmonella detection and quantification. The purposes of this study were to evaluate the viability of the use of QIAamp® DNA Stool Mini Kit for Salmonella DNA extraction and purification; to validate assays based on real time-PCR (PCR-RT) to quantify Salmonella DNA by using ttr or tuf, and to develop an assay to quantify Salmonella based on reverse transcriptase- PCR-real time (RT-PCR-RT). For QIAamp® DNA Stool Mini Kit evaluation feces taken directly from the rectum of infected or health animals were used, with the former being artificially contaminated. Samples were submitted to DNA extraction, according to manufacturers protocol. The isolated DNA were quantified using a Salmonella-specific PCR-RT targeting the ttr locus. The same assay was used for Salmonella cells originated from culture medium. The PCR-RT assay with tuf as target was first validated employing different Salmonella serovars and other Enterobacteriaceae strains. After, its efficiency was evaluated on food-models (chicken and swine) spiked with high (≈ 6 log CFU/mL) and low (≈ 2 log CFU/mL) Salmonella Typhimurium DT 104 populations. The validation of the quantitative RT-PCR-RT method was first conducted with cells grown in culture medium, and then in the same food-model used for PCR-RT. For both methods aliquots of foodmodels were maintained at 20 ºC and 8 ºC being evaluated at different incubation times. Enumeration of total mesophilic microorganisms and Salmonella based on conventional methods were used as controls. The DNA recovery rate in swine feces artificially inoculated, after QIAamp® DNA Stool Mini Kit treatment, was between 25% to 50% depending the initial amount of cells. Using the extracted DNA and submitting it to PCR-RT for ttr a detection level of 2,8 CFU eq/g of feces was obtained. This method showed lower sensitivity than the conventional. Salmonella quantification by PCR-RT employing tuf showed a detection level lower than 1 log CFU eq. The results obtained with this method and cells suspended in culture medium or in food-model systems were, in general slightly lower that those obtained with the conventional method. The efficiency of amplification for PCR-RT tuf was 94%. Detection limit of RT-PCR-RT was similar to that of ttr (2 log CFU eq) and efficiency of amplification was 100%. tuf was expressed in logarithmic phase of bacteria growth curve showing that it is a good viability indicator for Salmonella.

Para obter resultados rápidos e confiáveis que permitam o monitoramento da segurança microbiológica de alimentos, seja pela indústria ou pelos órgãos de fiscalização, diversos métodos alternativos têm sido desenvolvidos para a detecção e quantificação de Salmonella. Os propósitos do estudo foram avaliar a viabilidade de emprego do QIAamp® DNA Stool Mini Kit para extração e purificação de DNA de Salmonella; validar ensaios baseados em PCR-tempo real (PCR-RT) para quantificar o DNA de Salmonella empregando ttr ou tuf e desenvolver um ensaio para quantificar Salmonella baseado na transcriptase reversa-PCR-tempo real (RT-PCR-RT). Para avaliação do QIAamp® DNA Stool Mini Kit empregaram-se fezes coletadas diretamente do reto de animais infectados ou não, sendo estas últimas artificialmente contaminadas e submetidas à extração segundo protocolo do fabricante. As amostras de DNA isoladas foram quantificadas empregando um ensaio Salmonella-específico PCR-RT utilizando como alvo o lócus ttr. O mesmo ensaio foi utilizado para células de Salmonella provenientes de meio de cultura. O ensaio PCR-RT baseado no alvo tuf foi validado empregando-se primeiramente cepas de diferentes sorotipos de Salmonella e de outras Enterobacteriaceae. A seguir sua eficiência foi avaliada para alimentos-modelo (ave e suíno) artificialmente contaminadas com elevada (≈ 6 log UFC/mL) e baixa (≈ 2 log UFC/mL) população de Salmonella Typhimurium DT 104. A validação do método quantitativo de Salmonella por RT-PCR-RT foi realizada primeiramente com células em meio de cultura e posteriormente nos mesmos alimentos-modelo utilizados para PCR-RT. Em ambos os métodos, alíquotas dos alimentos-modelo foram mantidas a 20 ºC e a 8 ºC, sendo examinadas em diferentes tempos pós-inoculação. Como controle empregou-se a enumeração de microrganismos mesófilos totais e de Salmonella por técnicas convencionais. A taxa de recuperação de Salmonella em fezes suínas artificialmente inoculadas, após tratamento com QIAamp® DNA Stool Kit, variou entre 25% a 50%, dependendo da quantidade inicial de células. Empregando o DNA extraído e submetendo-o à PCR-RT para o ttr obteve-se limite de detecção de 2,8 log UFC eq/g de fezes; método que foi menos sensível que o convencional. A quantificação de Salmonella por PCR-RT empregando tuf apresentou limite de detecção menor que 1 log UFC eq. Os resultados obtidos com este método, empregando-se células em meio de cultura ou alimentos-modelo, foram, de maneira geral, ligeiramente inferiores aos do método convencional. A eficiência de amplificação para PCR-RT e tuf foi de 94%. O método RT-PCR-RT apresentou limite de detecção semelhante ao obtido com o ttr (2 log UFC eq) e sua eficiência de amplificação foi de 100%. Observou-se que tuf é expresso na fase logarítmica de multiplicação bacteriana, o que o torna um bom indicador da viabilidade de Salmonella. / In order to get fast and trustworthy results that allow monitoring the microbiological food safety either by industries or governmental agencies, diverse alternative methods have been developed for Salmonella detection and quantification. The purposes of this study were to evaluate the viability of the use of QIAamp® DNA Stool Mini Kit for Salmonella DNA extraction and purification; to validate assays based on real time-PCR (PCR-RT) to quantify Salmonella DNA by using ttr or tuf, and to develop an assay to quantify Salmonella based on reverse transcriptase- PCR-real time (RT-PCR-RT). For QIAamp® DNA Stool Mini Kit evaluation feces taken directly from the rectum of infected or health animals were used, with the former being artificially contaminated. Samples were submitted to DNA extraction, according to manufacturers protocol. The isolated DNA were quantified using a Salmonella-specific PCR-RT targeting the ttr locus. The same assay was used for Salmonella cells originated from culture medium. The PCR-RT assay with tuf as target was first validated employing different Salmonella serovars and other Enterobacteriaceae strains. After, its efficiency was evaluated on food-models (chicken and swine) spiked with high (≈ 6 log CFU/mL) and low (≈ 2 log CFU/mL) Salmonella Typhimurium DT 104 populations. The validation of the quantitative RT-PCR-RT method was first conducted with cells grown in culture medium, and then in the same food-model used for PCR-RT. For both methods aliquots of foodmodels were maintained at 20 ºC and 8 ºC being evaluated at different incubation times. Enumeration of total mesophilic microorganisms and Salmonella based on conventional methods were used as controls. The DNA recovery rate in swine feces artificially inoculated, after QIAamp® DNA Stool Mini Kit treatment, was between 25% to 50% depending the initial amount of cells. Using the extracted DNA and submitting it to PCR-RT for ttr a detection level of 2,8 CFU eq/g of feces was obtained. This method showed lower sensitivity than the conventional. Salmonella quantification by PCR-RT employing tuf showed a detection level lower than 1 log CFU eq. The results obtained with this method and cells suspended in culture medium or in food-model systems were, in general slightly lower that those obtained with the conventional method. The efficiency of amplification for PCR-RT tuf was 94%. Detection limit of RT-PCR-RT was similar to that of ttr (2 log CFU eq) and efficiency of amplification was 100%. tuf was expressed in logarithmic phase of bacteria growth curve showing that it is a good viability indicator for Salmonella.