Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3639_1.pdf: 1283864 bytes, checksum: c19ef1285163584deb577abe247a01c6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os tripanosomatídeos, agentes causadores de enfermidades de impacto mundial, se destacam dos demais eucariotos por apresentarem um conjunto de processos moleculares únicos, inclusive a ausência de controle da sua transcrição. Dessa forma, o controle de sua expressão gênica deve ocorrer após a transcrição. Assim, um ponto importante de controle é a iniciação da tradução, um processo ainda pouco conhecido nos tripanosomatídeos. Em eucariotos, de forma geral, esta começa com a ligação ao mRNA do complexo eIF4F, formado pelos polipeptídeos: eIF4E, eIF4A e eIF4G. A subunidade eIF4G atua como proteína estruturadora do complexo se ligando às demais subunidades e a outros fatores de tradução. Em Trypanosoma brucei foram identificados cinco homólogos do eIF4G, conservados em Leishmania major, denominados de TbEIF4G1-5. Este trabalho buscou contribuir com a caracterização dos homólogos TbEIF4G1 e TbEIF4G2 a partir da amplficação e clonagem dos seus genes, completos e/ou fragmentos contendo seu domínio HEAT central, em vetor de expressão bacteriano. A análise das sequências clonadas apresentou divergências genéticas em relação às descritas na literatura, mas, a princípio, de baixo significado biológico. Em seguida, realizou-se a expressão das respectivas proteínas recombinantes e obtenção de soro policlonal em coelhos. Estes soros foram utilizados em ensaios de western-blot e imunocitoquímica para analisar a expressão das proteínas nativas e sua localização subcelular. Os mesmos genes foram também clonados em vetor plasmidial para superexpressão da proteína recombinante fusionada à EYFP em T. brucei. Observou-se que o TbEIF4G1 é expresso na fase procíclica, mas é raro ou ausente na sanguínea. Já o TbEIF4G2 é expresso raramente ou ausente em ambas as fases. Ambas as proteínas se mostraram exclusivamente citoplasmáticas, o que reforça um papel na tradução que merece ser melhor estudado com as ferramentas, proteínas e anticorpos, produzidos neste estudo

Não existe um consenso do efeito da suplementação de glutamina sobre a síntese protéica. No entanto, sugere-se que em animais desnutridos submetidos a trauma orgânico ou não, a glutamina além de seu papel no metabolismo energético, poderia ter efeito sobre a taxa de reciclagem protéica, tornando-se um aminoácido, condicionalmente, essencial. O objetivo deste trabalho foi determinar a incorporação protéica do aminoácido marcado 13C leucina em proteínas do plasma e da mucosa intestinal em ratos portadores de desnutrição protéico-calórica, suplementados ou não com glutamina via oral. Os animais foram pareados pelo peso/idade e subdivididos em 5 grupos: grupo controle nutrido (grupo 1), grupo controle desnutrido (grupo 2), grupo realimentado (grupo 2 A), grupo realimentado e suplementado com proteína e glutamina (grupo 2B) e grupo realimentado e suplementado com glutamina, a suplementação de glutamina por via oral durante 14 dias (0,42g/kg/dia). O estudo não teve por objetivo avaliar a fisiopatologia da desnutrição, mas sim o efeito terapêutico da oferta de glutamina no tratamento de animais desnutridos e em analogia, ao que ocorreria com pacientes desnutridos e internados. O estudo cinético efetuou-se por meio de infusão contínua  620mol/h L-[1-13C]-leucina durante 4 horas. O grupo de animais desnutridos (grupo 2), que recebeu 50% da alimentação recomendada, perdeu peso continuamente durante o experimento. Os grupos que receberam tratamentos dietoterápicos recuperaram o peso corporal, independente do tipo de realimentação e/ou suplementação de glutamina. O nitrogênio urinário teve comportamento similar ao do peso, ratificando o efeito de um tratamento dietético, independente da fonte de suplementação glutâmica. Os resultados de concentração plasmática de aminoácidos não foram uniformes tanto para os aminoácidos essenciais quanto para os aminoácidos considerados não essenciais. Reforçando tanto o ganho de peso, como a excreção de nitrogênio, tiveram comportamento semelhante independente da suplementação de glutamina. Na concentração plasmática de glutamina a diferença foi 64912 vs 17114mol/l, no grupo controle nutrido (grupo 1) e grupo controle desnutrido (grupo 2), respectivamente. Houve diferença significativa de enriquecimento plasmático isotópico de 13C leucina 1,270,5 vs 3,21,2, e enriquecimento de 13C KIC 1,930,6 vs 4,040,9 MPE%, respectivamente nos grupos 1 e 2. O enriquecimento isotópico de 13C leucina na proteína da mucosa intestinal, mostrou-se significativo entre os grupos 1 e 2, respectivamente, 0,00240,0006 vs 0,00200,0001 MPE% e o enriquecimento isotópico de 13C leucina livre apresentou-se semelhante com diferença entre os grupos 1 e 2, respectivamente 0,00190,00030 vs 0,00280,0007 MPE%. A taxa de síntese fracionada (FSR) foi menor no grupo controle desnutrido (grupo 2) 0,00370,0007/h em comparação ao grupo controle nutrido (grupo 1) 0,00440,0005/h e similar nos grupos experimentais. Conclui-se que a oferta de glutamina não estimulou ou alterou a incorporação protéica de aminoácido marcado, sendo que os resultados obtidos nos grupos suplementados com glutamina assemelharam-se aos encontrados no grupo de animais tratados com dieta. Desta maneira, sugere-se que o uso de suplemento de glutamina via oral não seja necessário no tratamento de animais desnutridos. / Nutritional status recovery is thought more effective when there are amino acids, especially, glutamine supplementation. The aim of the study was to verify the effect of glutamine on duodenal mucosa protein synthesis in the nourished or malnourished rats. The experimental groups animals received oral diet glutamine supplementation (0.42g/kg/day) for 14 days while the control group did not. Thereafter, kinetic study with L-[1-13C]-leucine to 4-h and biopsies of duodenal mucosa were done. The malnourished groups showed 25% weight loss with increase urinary nitrogen. Amino acid concentration in the plasma of control group was not significantly different with from that of the experimental groups. The result showed that 13C enrichment in the plasma and biopsy sample of the malnourished group is higher than that of the nourished group, but that of the fractional synthetic rate (FSR) is inverse; FSR of the nourished group is higher 0.00440.0005/h than that of the malnourished group 0.00370.0007/h.We conclude that oral supplementation glutamine does not acutely stimulate duodenal protein incorporation in malnourished rats, regardless the refilling protocol, with or without glutamine.

Não existe um consenso do efeito da suplementação de glutamina sobre a síntese protéica. No entanto, sugere-se que em animais desnutridos submetidos a trauma orgânico ou não, a glutamina além de seu papel no metabolismo energético, poderia ter efeito sobre a taxa de reciclagem protéica, tornando-se um aminoácido, condicionalmente, essencial. O objetivo deste trabalho foi determinar a incorporação protéica do aminoácido marcado 13C leucina em proteínas do plasma e da mucosa intestinal em ratos portadores de desnutrição protéico-calórica, suplementados ou não com glutamina via oral. Os animais foram pareados pelo peso/idade e subdivididos em 5 grupos: grupo controle nutrido (grupo 1), grupo controle desnutrido (grupo 2), grupo realimentado (grupo 2 A), grupo realimentado e suplementado com proteína e glutamina (grupo 2B) e grupo realimentado e suplementado com glutamina, a suplementação de glutamina por via oral durante 14 dias (0,42g/kg/dia). O estudo não teve por objetivo avaliar a fisiopatologia da desnutrição, mas sim o efeito terapêutico da oferta de glutamina no tratamento de animais desnutridos e em analogia, ao que ocorreria com pacientes desnutridos e internados. O estudo cinético efetuou-se por meio de infusão contínua  620mol/h L-[1-13C]-leucina durante 4 horas. O grupo de animais desnutridos (grupo 2), que recebeu 50% da alimentação recomendada, perdeu peso continuamente durante o experimento. Os grupos que receberam tratamentos dietoterápicos recuperaram o peso corporal, independente do tipo de realimentação e/ou suplementação de glutamina. O nitrogênio urinário teve comportamento similar ao do peso, ratificando o efeito de um tratamento dietético, independente da fonte de suplementação glutâmica. Os resultados de concentração plasmática de aminoácidos não foram uniformes tanto para os aminoácidos essenciais quanto para os aminoácidos considerados não essenciais. Reforçando tanto o ganho de peso, como a excreção de nitrogênio, tiveram comportamento semelhante independente da suplementação de glutamina. Na concentração plasmática de glutamina a diferença foi 64912 vs 17114mol/l, no grupo controle nutrido (grupo 1) e grupo controle desnutrido (grupo 2), respectivamente. Houve diferença significativa de enriquecimento plasmático isotópico de 13C leucina 1,270,5 vs 3,21,2, e enriquecimento de 13C KIC 1,930,6 vs 4,040,9 MPE%, respectivamente nos grupos 1 e 2. O enriquecimento isotópico de 13C leucina na proteína da mucosa intestinal, mostrou-se significativo entre os grupos 1 e 2, respectivamente, 0,00240,0006 vs 0,00200,0001 MPE% e o enriquecimento isotópico de 13C leucina livre apresentou-se semelhante com diferença entre os grupos 1 e 2, respectivamente 0,00190,00030 vs 0,00280,0007 MPE%. A taxa de síntese fracionada (FSR) foi menor no grupo controle desnutrido (grupo 2) 0,00370,0007/h em comparação ao grupo controle nutrido (grupo 1) 0,00440,0005/h e similar nos grupos experimentais. Conclui-se que a oferta de glutamina não estimulou ou alterou a incorporação protéica de aminoácido marcado, sendo que os resultados obtidos nos grupos suplementados com glutamina assemelharam-se aos encontrados no grupo de animais tratados com dieta. Desta maneira, sugere-se que o uso de suplemento de glutamina via oral não seja necessário no tratamento de animais desnutridos. / Nutritional status recovery is thought more effective when there are amino acids, especially, glutamine supplementation. The aim of the study was to verify the effect of glutamine on duodenal mucosa protein synthesis in the nourished or malnourished rats. The experimental groups animals received oral diet glutamine supplementation (0.42g/kg/day) for 14 days while the control group did not. Thereafter, kinetic study with L-[1-13C]-leucine to 4-h and biopsies of duodenal mucosa were done. The malnourished groups showed 25% weight loss with increase urinary nitrogen. Amino acid concentration in the plasma of control group was not significantly different with from that of the experimental groups. The result showed that 13C enrichment in the plasma and biopsy sample of the malnourished group is higher than that of the nourished group, but that of the fractional synthetic rate (FSR) is inverse; FSR of the nourished group is higher 0.00440.0005/h than that of the malnourished group 0.00370.0007/h.We conclude that oral supplementation glutamine does not acutely stimulate duodenal protein incorporation in malnourished rats, regardless the refilling protocol, with or without glutamine.