Introdução: A complexidade das populações de células do sistema imunológico infiltrando tumores humanos com seus efeitos sinérgicos ou antagônicos pode influenciar os tumores de forma diferente. Embora as células do sistema imunológico sejam encontradas dentro do sítio tumoral, a razão para incapacidade do sistema imunológico em eliminar o tumor foram pouco elucidadas. Objetivo: Avaliar a importância das diferentes populações de células no sistema imunológico presentes no microambiente tumoral de glioblastoma e seus efeitos sobre as demais células em relação ao prognóstico dos pacientes. Metodologia: Foram utilizados dados de transcriptoma e dados clínicos gerados pelo The Cancer Genome Atlas (TCGA) e meta-assinaturas representando diferentes células do sistema imunológico previamente descritas. A relação entre as meta-assinaturas foi avaliada através de análises de mapa de calor e correlação de Pearson. As análises de sobrevida foram realizadas através de gráficos de Kaplan-Meier das meta-assinaturas individualmente, com dois e três elementos. Resultados e Discussão: Assinaturas transcricionais de diversas populações do sistema imunológico com papel imunossupressor foram encontradas infiltrando tumores de pacientes com glioblastoma, tais como macrófagos, células NK e NK T, MDSCs e Tregs e correlacionaram com um pior prognóstico dos pacientes. As meta-assinaturas T CD8+ e CD4+ não foram capazes de predizer o prognóstico dos pacientes sozinhas. No entanto, na ausência de elementos de imunossupressão, os pacientes com alta expressão da meta-assinatura de células T CD8+ mostraram melhor sobrevida em relação aos demais. Observamos uma divisão das meta-assinaturas em 4 conjuntos distintos, sendo um deles formado por Macrófagos, MDSCs e Tregs demonstrando pior prognóstico e outro cluster contendo CD4 e CD8 conferindo um melhor prognóstico, ambos quando altamente expressos. Esses resultados não se repetiram para gliomas de grau II e III. Conclusão: Se considerarmos as assinaturas transcricionais dos diferentes aspectos da resposta imunológica de forma integrada, teremos um impacto preditivo sobre a sobrevivência com papel positivo para a meta-assinatura referente a linfócitos CD8 e negativos para as meta-assinaturas de macrófagos, MDSC, Tregs, NK e NK T em pacientes com glioblastoma pacientes. A compreensão acerca desses diversos fatores reguladores e estimuladores do sistema imunológico no paciente, bem como no microambiente tumoral, é essencial para delinear uma estratégia eficaz com o objetivo de aumentar a resposta imune antitumoral e gerar benefícios clínicos reais. / Introduction: The complexity of immune cell populations infiltrating human tumors with their synergistic or antagonistic effects may influence tumors differently. Although immune cells are found within the tumor site, the reason for the incapacity of the immune system in eliminating the tumor has hardly been elucidated. Objective: To evaluate the importance of different immune cell populations present in the glioblastoma tumor microenvironment and its effects on the other immune cells. Methodology: Transcriptome and clinical data were generated by The Cancer Genome Atlas (TCGA) and meta-signatures representing different cells of the immune system previously described were used. The relationship between meta-signatures was evaluated through heat-map analysis and Pearson's correlation. Survival analysis were performed through Kaplan-Meier plots of meta-signatures individually, with two and with three elements. Results and discussion: Infiltrating immune cells with immunosuppressive role were found in patients with glioblastoma, such as macrophages, NK and NK T cells, MDSCs and Tregs, and were correlated with poorer prognosis of patients. The CD8 + and CD4 + T meta-signatures were not able to predict patients’ prognosis alone. However, in the absence of immunosuppressive elements, patients with higher levels of CD8 + T-cell meta-signatures showed better survival than the opposite expression profile. We observed a division of meta-signatures into four clusters. The cluster consisting of macrophages, MDSCs and Tregs demonstrated the worst prognosis and the cluster containing CD4 and CD8 conferred the best prognosis, when both meta-signatures were highly expressed. These results were not reproduced for grade II and III gliomas. Conclusion: If we consider the transcriptional signatures of the different response immunological aspects in an integrated way, they will have a predictive impact on survival with positive role for CD8 and negative roles for macrophages, MDSC, Tregs, NK and NK T meta-signatures in glioblastoma patients. Understanding these regulatory factors and stimulators of the patients' immune system, as well as the tumor microenvironment, is essential to delineate an effective strategy to increase the anti-tumor immune response and generate real clinical benefits.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-05-13T13:46:35Z No. of bitstreams: 1 2016_RonnyPettersonSantosAraujo.pdf: 1362154 bytes, checksum: f4231cced2ff5b8be7ef3e639674c8b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-27T14:14:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RonnyPettersonSantosAraujo.pdf: 1362154 bytes, checksum: f4231cced2ff5b8be7ef3e639674c8b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T14:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RonnyPettersonSantosAraujo.pdf: 1362154 bytes, checksum: f4231cced2ff5b8be7ef3e639674c8b0 (MD5) / Os anticorpos anti-ácidos nucleicos são importantes no desenvolvimento de doenças autoimunes como o lúpus eritematoso sistêmico (LES). Porém, muito pouco se sabe sobre a origem e manutenção desses anticorpos pelo organismo e das interações desses anticorpos com seus antígenos. Foi observado na literatura e em trabalhos anteriores do grupo de Imunologia Molecular (UnB), que as sequências anotadas em banco de dados da família VH10 formadora da região variável da cadeia pesada de anticorpos era composta em sua maioria de sequências formadoras de moléculas anti-DNA. Além disso, através de uma abordagem experimental observou-se que essa família apresenta uma certa independência da CDR H3 para esta afinidade. Baseando-se nesses achados, nós desenhamos quatro fragmentos de anticorpos, no formato scFv (single-chain fragment variable), fragmento que preserva o sítio de ligação ao antígeno, composto de uma cadeia pesada (VH) ligada a uma cadeia leve, conhecida surrogate light chain (SLC) na tentativa de simular o reconhecimento antigênico em momento específico do desenvolvimento dos linfócitos B, onde a auto-reatividade é usada em prol do desenvolvimento normal dessas células. Levando-se também em conta a independência da CDR H3 para a ligação ao antígeno, nós iremos avaliar também através dessas construções o papel da CDR H2 para a ligação. Após clonagem das sequências em plasmídeo para a expressão heteróloga, esses scFvs foram produzidos em cepas de Escherichia coli BL21(DE3) pLysS. Até o momento, após padronização das condições para a produção de scFvs solúveis, condições favoráveis de duas das quatro construções foram estabelecidas. Estas construções irão permitir a análise do papel do segmento gênico V, mais especificamente da CDR2, para a afinidade ao DNA por anticorpos originados do segmento germinal de VH10. Além disso, será possível simular a interação antigênica de cadeias pesadas auto-reativas e não auto-reativas em um momento específico do desenvolvimento dos linfócitos B, onde a auto-reatividade parece ser utilizada em prol do desenvolvimento dessas células. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / The anti-nucleic acids antibodies are important in the development of autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus (SLE). However, very little is known about the origin and maintenance of these antibodies by the body and interactions of these antibodies with their antigens. Studies in the literature and previous work of the Molecular Immunology team (UnB) show that the annotated sequences in database of the VH10 family that is part of the variable region of the heavy chain antibodies consisted mostly of sequences of anti-DNA molecules. Furthermore, through an experimental approach it was observed that this family has a certain independence from CDR H3 for this affinity. Based on these findings, we designed four antibody fragments in scFv format (single-chain fragment variable), this fragments preserves the antigen binding site that comprises a heavy chain (VH) connected to a light chain, known surrogate light chain (SLC) in an attempt to simulate the antigen recognition in a specific moment in the development of B lymphocytes, where autoreactivity is used to promote the normal development of these cells. Also taking into account the independence of the H3 CDR for binding to antigen, we will also access through such constructions the role of CDR H2 for binding. After cloning the sequences into a plasmid for heterologous expression, these four scFvs were produced in Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. To date, after standardization of the conditions for soluble scFv production, conditions favorable for two of the four constructs were established. These constructions will enable the analysis of the role of the V gene segment, more specifically CDR2, for affinity to DNA antibodies originating from the germline segment VH10. In addition, you can simulate the antigen interaction of autoreactive and not autoreactive heavy chains at a specific time of the development of B lymphocytes, where self-reactivity seems to be used for the development of these cells.

MOTA, Sâmia Macedo Queiroz. Parâmetros de normalidade do sistema imunológico no idoso em Fortaleza-Ceará. 2009. 74 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-02T13:37:03Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_smqmota.pdf: 497426 bytes, checksum: 50561f39fa5ec0f1182387feb2e1b39c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:27:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_smqmota.pdf: 497426 bytes, checksum: 50561f39fa5ec0f1182387feb2e1b39c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_smqmota.pdf: 497426 bytes, checksum: 50561f39fa5ec0f1182387feb2e1b39c (MD5) Previous issue date: 2009 / Worldwide, the number of individuals whose age is over 60 years will grow exponentially. Is provided an increase of 694 million in the number of older people in 2025. Ageing is a complex process that negatively impacts the development of the immune system and its ability to function. Immunosenescence is a multifactorial condition leading to many pathologically significant health problems in the aged population, it is becoming recognized that the immune system declines with age, a term known as immunosenescence, which leads to a higher incidence of infections, neoplasia and autoimmune diseases. This study attempts to describe the immunological profile of a population of healthy elderly. Thirty five elderly patients aged 60 years were subjected to a study and the same numbers of young volunteers aged between twenty and thirty eight were examinated like control group. Were investigated sixteen laboratorial exams to define the main changes in immunosenescence. The results showed changes in both innate immunity and adaptive immunity in the elderly body. The changes found in innate immunity were: increase the number of neutrophils in venous blood, increasing the concentration of C4 complement component, and increased levels of interleukin-6. Changes in adaptative immunity were: reduction in the number of lymphocytes (WBC) and lymphocyte subsets CD2 +, CD3 + and CD8 + (immunophenotyping) and increased concentration of immunoglobulin IgA and decreased IgM concentration. In cloncusion, this work was important to define the normal parameters of the immune system of a healthy elderly and improve our understanding of this system. Thus, it also constitutes a necessary step to identify how best to treat the underlying causes of immunosenescence and its consequence. / No mundo, o número de indivíduos cuja idade é superior a 60 anos crescerá exponencialmente e, em 2025, espera-se uma elevação de 694 milhões no número de pessoas mais velhas. O envelhecimento é um processo complexo que afeta uma variedade de funções, incluindo o desenvolvimento e a manutenção do sistema imunológico. Dessa forma, os idosos são mais freqüentemente acometidos por infecções e neoplasias do que os jovens. Essas patologias podem ser atribuídas, em parte, ao envelhecimento do sistema imunológico, chamado imunossenescência. O objetivo deste trabalho foi descrever o perfil imunológico de uma população de idosos saudáveis. Foram colhidas amostras de 35 voluntários com idade igual ou superior a 60 anos, de ambos os sexos, onde foi utilizado, como controle, o mesmo número de voluntários com idade entre 20 e 38 anos. Foram realizados 16 exames laboratoriais diferentes para definir as principais alterações na imunossenescência. Os resultados evidenciaram alterações tanto na imunidade inata, quanto na imunidade adaptativa no organismo idoso. As alterações encontradas na imunidade inata foram: aumento do número de neutrófilos no sangue venoso; aumento da concentração do componente C4 do complemento; e aumento da concentração de interleucina-6. As alterações da imunidade adaptativa foram: redução na quantidade dos linfócitos (leucograma) e das subpopulações linfocitárias CD2+, CD3+ e CD8+ (imunofenotipagem); e aumento na concentração da imunoglobulina IgA e diminuição da concentração de IgM. Podemos concluir, dessa forma, que este trabalho foi de grande relevância para definir os parâmetros normais do sistema imunológico de um indivíduo idoso saudável e aperfeiçoar a nossa compreensão deste sistema. Assim, também se constitui num passo necessário no sentido de identificar, no futuro, formas de melhor tratar as causas subjacentes da imunossenescência e suas conseqüências.

Introdução: A complexidade das populações de células do sistema imunológico infiltrando tumores humanos com seus efeitos sinérgicos ou antagônicos pode influenciar os tumores de forma diferente. Embora as células do sistema imunológico sejam encontradas dentro do sítio tumoral, a razão para incapacidade do sistema imunológico em eliminar o tumor foram pouco elucidadas. Objetivo: Avaliar a importância das diferentes populações de células no sistema imunológico presentes no microambiente tumoral de glioblastoma e seus efeitos sobre as demais células em relação ao prognóstico dos pacientes. Metodologia: Foram utilizados dados de transcriptoma e dados clínicos gerados pelo The Cancer Genome Atlas (TCGA) e meta-assinaturas representando diferentes células do sistema imunológico previamente descritas. A relação entre as meta-assinaturas foi avaliada através de análises de mapa de calor e correlação de Pearson. As análises de sobrevida foram realizadas através de gráficos de Kaplan-Meier das meta-assinaturas individualmente, com dois e três elementos. Resultados e Discussão: Assinaturas transcricionais de diversas populações do sistema imunológico com papel imunossupressor foram encontradas infiltrando tumores de pacientes com glioblastoma, tais como macrófagos, células NK e NK T, MDSCs e Tregs e correlacionaram com um pior prognóstico dos pacientes. As meta-assinaturas T CD8+ e CD4+ não foram capazes de predizer o prognóstico dos pacientes sozinhas. No entanto, na ausência de elementos de imunossupressão, os pacientes com alta expressão da meta-assinatura de células T CD8+ mostraram melhor sobrevida em relação aos demais. Observamos uma divisão das meta-assinaturas em 4 conjuntos distintos, sendo um deles formado por Macrófagos, MDSCs e Tregs demonstrando pior prognóstico e outro cluster contendo CD4 e CD8 conferindo um melhor prognóstico, ambos quando altamente expressos. Esses resultados não se repetiram para gliomas de grau II e III. Conclusão: Se considerarmos as assinaturas transcricionais dos diferentes aspectos da resposta imunológica de forma integrada, teremos um impacto preditivo sobre a sobrevivência com papel positivo para a meta-assinatura referente a linfócitos CD8 e negativos para as meta-assinaturas de macrófagos, MDSC, Tregs, NK e NK T em pacientes com glioblastoma pacientes. A compreensão acerca desses diversos fatores reguladores e estimuladores do sistema imunológico no paciente, bem como no microambiente tumoral, é essencial para delinear uma estratégia eficaz com o objetivo de aumentar a resposta imune antitumoral e gerar benefícios clínicos reais. / Introduction: The complexity of immune cell populations infiltrating human tumors with their synergistic or antagonistic effects may influence tumors differently. Although immune cells are found within the tumor site, the reason for the incapacity of the immune system in eliminating the tumor has hardly been elucidated. Objective: To evaluate the importance of different immune cell populations present in the glioblastoma tumor microenvironment and its effects on the other immune cells. Methodology: Transcriptome and clinical data were generated by The Cancer Genome Atlas (TCGA) and meta-signatures representing different cells of the immune system previously described were used. The relationship between meta-signatures was evaluated through heat-map analysis and Pearson's correlation. Survival analysis were performed through Kaplan-Meier plots of meta-signatures individually, with two and with three elements. Results and discussion: Infiltrating immune cells with immunosuppressive role were found in patients with glioblastoma, such as macrophages, NK and NK T cells, MDSCs and Tregs, and were correlated with poorer prognosis of patients. The CD8 + and CD4 + T meta-signatures were not able to predict patients’ prognosis alone. However, in the absence of immunosuppressive elements, patients with higher levels of CD8 + T-cell meta-signatures showed better survival than the opposite expression profile. We observed a division of meta-signatures into four clusters. The cluster consisting of macrophages, MDSCs and Tregs demonstrated the worst prognosis and the cluster containing CD4 and CD8 conferred the best prognosis, when both meta-signatures were highly expressed. These results were not reproduced for grade II and III gliomas. Conclusion: If we consider the transcriptional signatures of the different response immunological aspects in an integrated way, they will have a predictive impact on survival with positive role for CD8 and negative roles for macrophages, MDSC, Tregs, NK and NK T meta-signatures in glioblastoma patients. Understanding these regulatory factors and stimulators of the patients' immune system, as well as the tumor microenvironment, is essential to delineate an effective strategy to increase the anti-tumor immune response and generate real clinical benefits.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2015-11-11T13:38:30Z No. of bitstreams: 1 2015_DanielPaivaAgustinho.pdf: 4757903 bytes, checksum: 176be2c912f8463c991a719893a212c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-11-12T11:51:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_DanielPaivaAgustinho.pdf: 4757903 bytes, checksum: 176be2c912f8463c991a719893a212c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-12T11:51:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_DanielPaivaAgustinho.pdf: 4757903 bytes, checksum: 176be2c912f8463c991a719893a212c3 (MD5) / O fungo comensal Candida albicans pode causar doenças infecciosas sistêmicas letais em pacientes imussuprimidos. Um dos principais mecanismos de evasão ao sistema imune do hospedeiro e virulência é a mudança para a forma de hifa. Macrófagos e monócitos são as células do sistema imune inato que formam a primeira linha de defesa contra ainfecção de C. albicans, e essas células reconhecem patógenos através de Receptores de Reconhecimento de Padrão (PRR). A ativação desses PRRs induz uma cascata desinalização que culmina na produção de citocinas específicas, que orquestram a respostaimune. Micro RNAs (miRNAs) são considerados uma parte essencial da resposta imune a diversos patógenos, geralmente regulando a intensidade dessa resposta. miRNAs se ligam a sequências específicas de seus mRNAs alvo, geralmente silenciando-os através de degradação ou repressão traducional. Esse estudo focou em analisar os padrões moleculares de suscetibilidade à C. albicans, investigando as diferenças em expressão gênica em resposta a C. albicans em duas linhagens de Mus musculus, uma suscetível e outra resistente a esse fungo. Macrófagos derivados de medula óssea dessas duas linhagens (DBA/2J e BALB/c, respectivamente) foram co-cultivados com C. albicans e seus RNAs totais foram extraídos e sequenciados por RNA-seq. As análises preliminares dos dados de RNA-seq validam a qualidade das sequências obtidas e asseguram seu uso nas etapas subsequentes, voltadas à caracterização comparativa do transcritoma diferencial entre as linhagens suscetível e resistente de camundongo. Para tal, as etapas subsequentes envolverão a análise da expressão diferencial de genes e sua validação por qRT-PCR, bem como a interpretação destes dados com base nos genes expressos diferencialmente, como uma ferramenta para o melhor entendimento das bases moleculares da suscetibilidade a este patógeno de grande interesse médico. Assim, estas próximas análises determinarão genes diferencialmente expressos e que são chave na resposta imune durante a infecção de C. albicans. Neste trabalho, também avaliamos o impacto da morfologia de C. albicans sobre a modulação da expressão de miRNAs em células do hospedeiro. Assim, a modulação da expressão de nove diferentes miRNAs relacionados à resposta imune foi avaliada a partir da interação de macrófagos primários derivados de medula expostos a leveduras e hifas de C. albicans foi investigada. Neste estudo, foi mostrado que as diferentes tipos celulares deste fungo induzem padrões distintos de expressão de miRNAs em macrófagos. Além disso, esses dados mostram que a indução de miR155 por hifas em BMDMs é controlada no nível transcricional durante a fase inicial da interação patógeno-hospedeiro. É interessante ressaltar que o receptor Dectina-1 é um importante PRR que orquestra a expressão de miR155 de maneira dependente de Syk. Esses resultados sugerem que eventos de sinalização mediados por PRRs são importantes na regulação de miRNAs durante infecções fúngicas e descreve pela primeira vez a provável e principal via de sinalização envolvida nesse processo. / The commensal fungal pathogen Candida albicans can cause lethal systemic infections in immunocompromised patients. One of the main mechanisms of host immune evasion and virulence is the switch to hyphal growth morphologies. Macrophages and monocytes are the inate immune cells that represent the first line of defense against C. albicans infection, and they recognise pathogens via Pattern Recognition Receptors (PRRs). Activation of these receptors induces a signalling pathway that culminates in specific cytokine production, that orchestrates the immune response. Micro RNAs (miRNAs) are considered an essential part of the immune response to a wide variety of pathogens, generally regulating the intensity of this response. miRNAs bind to specific sequences of target mRNAs, thus generally silencing these targets through mRNA degradation or translational repression. This study focused on analyzing the molecular patterns of susceptibility to C. albicans by investigating the differences in gene expression response of two mouse strains, one susceptible and the other resistant to this fungus. Bone marrow-derived macrophages from these strains (DBA/2J and BALB/c, respectively) were co-cultured with C.albicans and their total RNA were extracted and sequenced by RNA-seq. Preliminary analysis of the RNA-seq data validated the quality of obtained sequences and support their use in subsequent steps of comparative characterization of differential transcriptome between resistant and susceptible strains. The next steps will involve the analyses of differentially expressed genes, and their validation by qRT-PCR, as well as interpretation of these data, as a tool for understanding the molecular bases of suceptibility of this medically important pathogen. The next analyses analysis will determine differentially expressed genes which are key to the immune response during the infection by C. albicans. In this work we also analyzed the impact of C. albicans cell morphology upon the modulation of the host miRNA expression. Modulation of the expression of nine different immune response-related miRNAs in primary murine bone marrow-derived macrophages (BMDMs) exposed to either yeast or hyphal forms of C. albicans was investigated. Different growth morphologies were shown to induce distinct miRNA expression patterns in BMDMs. Moreover, our data show that hyphal induction of miR155 in BMDMs is tightly regulated at the transcriptional level during early stages of the host-pathogen interaction. Interestingly, our data suggest that the C-Type lectin receptor Dectin-1 is a major PRR that orchestrates miR155 up regulation in a Syk-dependent manner. These results suggest that PRR-mediated signaling events are key drivers of miRNA-mediated gene regulation during fungal pathogenesis and describe for the first time the signaling pathway likely to be the most important in this process.

Orientadora: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Fabiana Pilarski / Banca: Júlio Herman Leonhardt / Resumo: Não disponível. / Abstract: Not available. / Mestre

Introdução: A complexidade das populações de células do sistema imunológico infiltrando tumores humanos com seus efeitos sinérgicos ou antagônicos pode influenciar os tumores de forma diferente. Embora as células do sistema imunológico sejam encontradas dentro do sítio tumoral, a razão para incapacidade do sistema imunológico em eliminar o tumor foram pouco elucidadas. Objetivo: Avaliar a importância das diferentes populações de células no sistema imunológico presentes no microambiente tumoral de glioblastoma e seus efeitos sobre as demais células em relação ao prognóstico dos pacientes. Metodologia: Foram utilizados dados de transcriptoma e dados clínicos gerados pelo The Cancer Genome Atlas (TCGA) e meta-assinaturas representando diferentes células do sistema imunológico previamente descritas. A relação entre as meta-assinaturas foi avaliada através de análises de mapa de calor e correlação de Pearson. As análises de sobrevida foram realizadas através de gráficos de Kaplan-Meier das meta-assinaturas individualmente, com dois e três elementos. Resultados e Discussão: Assinaturas transcricionais de diversas populações do sistema imunológico com papel imunossupressor foram encontradas infiltrando tumores de pacientes com glioblastoma, tais como macrófagos, células NK e NK T, MDSCs e Tregs e correlacionaram com um pior prognóstico dos pacientes. As meta-assinaturas T CD8+ e CD4+ não foram capazes de predizer o prognóstico dos pacientes sozinhas. No entanto, na ausência de elementos de imunossupressão, os pacientes com alta expressão da meta-assinatura de células T CD8+ mostraram melhor sobrevida em relação aos demais. Observamos uma divisão das meta-assinaturas em 4 conjuntos distintos, sendo um deles formado por Macrófagos, MDSCs e Tregs demonstrando pior prognóstico e outro cluster contendo CD4 e CD8 conferindo um melhor prognóstico, ambos quando altamente expressos. Esses resultados não se repetiram para gliomas de grau II e III. Conclusão: Se considerarmos as assinaturas transcricionais dos diferentes aspectos da resposta imunológica de forma integrada, teremos um impacto preditivo sobre a sobrevivência com papel positivo para a meta-assinatura referente a linfócitos CD8 e negativos para as meta-assinaturas de macrófagos, MDSC, Tregs, NK e NK T em pacientes com glioblastoma pacientes. A compreensão acerca desses diversos fatores reguladores e estimuladores do sistema imunológico no paciente, bem como no microambiente tumoral, é essencial para delinear uma estratégia eficaz com o objetivo de aumentar a resposta imune antitumoral e gerar benefícios clínicos reais. / Introduction: The complexity of immune cell populations infiltrating human tumors with their synergistic or antagonistic effects may influence tumors differently. Although immune cells are found within the tumor site, the reason for the incapacity of the immune system in eliminating the tumor has hardly been elucidated. Objective: To evaluate the importance of different immune cell populations present in the glioblastoma tumor microenvironment and its effects on the other immune cells. Methodology: Transcriptome and clinical data were generated by The Cancer Genome Atlas (TCGA) and meta-signatures representing different cells of the immune system previously described were used. The relationship between meta-signatures was evaluated through heat-map analysis and Pearson's correlation. Survival analysis were performed through Kaplan-Meier plots of meta-signatures individually, with two and with three elements. Results and discussion: Infiltrating immune cells with immunosuppressive role were found in patients with glioblastoma, such as macrophages, NK and NK T cells, MDSCs and Tregs, and were correlated with poorer prognosis of patients. The CD8 + and CD4 + T meta-signatures were not able to predict patients’ prognosis alone. However, in the absence of immunosuppressive elements, patients with higher levels of CD8 + T-cell meta-signatures showed better survival than the opposite expression profile. We observed a division of meta-signatures into four clusters. The cluster consisting of macrophages, MDSCs and Tregs demonstrated the worst prognosis and the cluster containing CD4 and CD8 conferred the best prognosis, when both meta-signatures were highly expressed. These results were not reproduced for grade II and III gliomas. Conclusion: If we consider the transcriptional signatures of the different response immunological aspects in an integrated way, they will have a predictive impact on survival with positive role for CD8 and negative roles for macrophages, MDSC, Tregs, NK and NK T meta-signatures in glioblastoma patients. Understanding these regulatory factors and stimulators of the patients' immune system, as well as the tumor microenvironment, is essential to delineate an effective strategy to increase the anti-tumor immune response and generate real clinical benefits.

Orientador: Antonio Condino Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T22:53:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leitao_MonicadeFreitas_M.pdf: 1378726 bytes, checksum: 7259245489e439eac92439e26848858c (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: As imunodeficiências do sistema complemento são condições raras, correspondendo a 2%-5% das imunodeficiências primárias. Quanto às deficiências do fator I, existem aproximadamente 27 indivíduos diagnosticados. O fator I é uma enzima que regula a atividade da via clássica e alternativa. Na deficiência do fator I ocorre redução da atividade de ambas as vias, mas principalmente da via alternativa, e diminuição nos níveis de C3, fator B, properdina e fator H, por consumo. A redução dos níveis de C3 prejudica a opsonização de microorganismos, predispondo a infecções de repetição nas vias aéreas superiores, meningites, septicemia, por bactérias do tipo Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae e Neisseria meningitidis. Neste trabalho foram diagnosticados 3 indivíduos (B4, B6, B7) de uma mesma família com deficiência do fator I (homozigotos). Os pais, que são primos de segundo grau, e três dos irmãos (B2, B3, B8) apresentam redução de 50% nos níveis de fator I (heterozigotos). O padrão de transmissão foi autossômico recessivo. A imunoeletroforese do fator H está alterada. Em todos os pacientes foi realizado hemograma, dosagem de ímunoglobulinas, contagem de linfócitos T, teste de hipersensibilidade retardada, com resultados normais. Também foi feito estudo dos fagócitos (estudo da migração, fagocitose, atividade do sistema NADPH oxidase). Nos deficientes do fator I, verificou-se comprometimento da migração espontânea de mononucleares e quimiotaxia de polimorfonucleares (sem reversão do defeito após adição de soro com níveis normais de C3). A fagocitose está diminuída nestes pacientes, entretanto há recuperação da função após adição de soro normal. A atividade da NADPH oxidase foi normal. O defeito de migração celular pode ser decorrente de um defeito intrínseco da célula, ou por comprometimento de receptores de membrana para o complemento / Abstract: Factor I deficiency causes a permanent, uncontrolled activation of the alternative pathway resulting in an increased turnover of C3 and consumption of factor B, factor H and properdin. Factor I deficiency is clinically associated with recurrent bacterial infections already in early infancy, mainly affecting the upper and lower respiratory tract, or presenting as meningitis or septicemia. We here report on a Brazilian family (n=9) with known consanguinity, where in 3/7 children, suffering from chronic otitis, meningitis, and respiratory infections, a complete factor I deficiency was recognized. One of the pacients died after fulminant sepsis. Hemolytic activity of the alternative pathway was not detectable in the patients' sera due to decreased plasma concentrations of C3, factor B and properdin. As a consequence of factor I deficiency, C3b could not be metabolized with Che result that no C3-derived split products (C3dg/C3d) were detectable in the patients' sera. In vitro reconstitution with purified factor I restored the regulatory function in the patients' sera with the subsequent cleavage of C3b to C3c and C3dg. Factor H levels were decreased in all patients' sera and found to be tightly complexed with C3b resulting in a modified electrophoretic mobility. Upon factor I reconstitution, factor H was released from C3b regaining its pi electrophoretic mobility. Complement-mediated biological functions like opsonization of bacteria, chemotactic activity and phagocytosis in these patients were impaired. The parents (cousins, 2nd degree) and 3A siblings had significantly reduced factor I plasma levels without further alteration in their complement profile. 3 of these obviously heterozygously deficient family members suffered from recurrent bacterial infections of different frequency and severity / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

As freqüências de variantes alélicas de diferentes genes envolvidos no desenvolvimento da resposta imune foram analisadas em uma população de origem japonesa do sul do Brasil (n=119). Polimorfismos bialélicos dos genes CCR5, TNFR-II e IL-10, e dos segmentos gênicos TCRBV3S1, TCRBV13S5 e TCRBV18 foram analisados por PCR-RFLP. As freqüências alélicas foram determinadas e comparadas com as freqüências encontradas em outros grupos étnicos (caucasóides e afro-brasileiros). Nós observamos a ausência do alelo CCR5D32 na população testada. Os polimorfismos dos segmentos gênicos TCRBV3S1 e TCRBV13S5, e do gene IL-10 apresentaram freqüências alélicas significativamente diferentes das freqüências observadas em caucasóides e afro-brasileiros. O polimorfismo do segmento gênico TCRBV18 apresentou freqüências alélicas estatisticamente diferentes de caucasóides. Além disso, a comparação de duas sub-populações (definidas em nossa amostra de acordo com a origem geográfica no Japão) indicou diferenças entre as freqüências alélicas dos polimorfismos gênicos de TCRBV18 e IL-10 das mesmas. Esses dados indicam a existência de diferentes padrões imunogenéticos entre diferentes grupos étnicos. Outros polimorfismos SNPs de genes ligados ao sistema imune serão testados e comparados em nosso laboratório, utilizando as mesmas populações.

Resumo não disponível