Thesis (Ph. D.)--Indiana University School of Dentistry, 1998. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis--Karolinska Institute. / Includes reprints of four supporting articles. Includes bibliographical references (leaves 43-47).

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1988. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--University of Göteborg, 1991. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Thesis--Karolinska Institute. / Includes reprints of four supporting articles. Includes bibliographical references (leaves 43-47).

Orientador: Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T06:14:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_LucianaSallesBrancode_M.pdf: 997625 bytes, checksum: 22585531caf6213f9ef4a62e5b018a3b (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Este estudo avaliou a atividade antimicrobiana de extratos da Rheedia brasiliensis contra Streptococcus mutans e o potencial anticárie do seu composto ativo isolado. Os extratos hexânicos (EH), acetato de etila e etanólico (concentrações entre 6,25-800 µg/ml) do fruto (¿bacupari¿) foram testados contra S. mutans UA159 por meio de determinação das concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM). Biofilmes de 5 dias de formação foram tratados com os extratos ativos (100 x CIM), por 0, 1, 2, 3 e 4 h, e plaqueados para contagem das UFC/ml (time kill). Os extratos ativos foram submetidos à análise química por métodos espectroscópicos, e o composto ativo isolado (0,625-80 µg/ml) foi testado contra células de S. mutans por meio de CIM/CBM. A influência do composto isolado (12,5-100 µg/ml) sobre a síntese de glucanos foi avaliada através da atividade da enzima glucosiltranferase (GTF) B em superfície de hidroxiapatita. A ação do composto sobre biofilmes (125 e 250 µg/ml) foi testada com os ensaios de queda de pH e inibição de formação de biofilme. O potencial anticárie do composto (250 µg/ml) foi avaliado em ratas Wistar sob alto desafio cariogênico. Os EH (casca e semente) inibiram S. mutans em baixas concentrações (CIM:12,5-25 µg/ml) e reduziram células viáveis dos biofilmes após 4 h de exposição. O composto ativo presente foi identificado como a 7- epiclusianona (7-epi), a qual inibiu o crescimento do S. mutans (CIM:1,25-2,5 µg/ml), a atividade da GTF B em superfície (48% de inibição) e a produção de ácidos do S. mutans em biofilme, porém não reduziu a formação e o acúmulo dos biofilmes. No estudo animal, a 7-epi reduziu a incidência e a severidade de cárie e a microbiota total, mas não diminuiu a porcentagem de S. mutans. A 7-epi diminuiu a virulência do S. mutans e inibiu o desenvolvimento de cárie in vivo, sugerindo ser um agente terapêutico promissor para o controle do biofilme dental cariogênico. Palavras-chave: Rheedia brasiliensis, 7-epiclusianona, Streptococccus mutans, fatores de virulência, cárie animal / Abstract: The present study evaluated the antimicrobial activity of Rheedia brasiliensis extracts against Streptococcus mutans and the anticaries properties of its isolated bioactive compound. Hexane (HE), ethyl-acetate and ethanolic extracts (concentrations ranging from 6.25 to 800 µg/ml) of R. brasiliensis fruits (¿bacupari¿) were tested against S. mutans UA159 by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (MBC). S. mutans 5-days-old biofilms were treated with active extracts (100 x MIC), for 0, 1, 2, 3 e 4 h (time-kill), and plated for colony counting (UFC/ml). Such extracts were submitted to exploratory chemical analyses to isolate and identify the bioactive compound using spectroscopic methods. The compound (0.625-80 µg/ml) was then tested against S. mutans cells using MIC/MBC assays. The influence of the bioactive compound (12.5-100 µg/ml) on glucans synthesis was evaluated by testing the activity of glucosyltranferase (GTF) B on hydroxyapatite surface. The effects of the compound (125 e 250 µg/ml) on biofilms were analyzed using glycolytic pH-drop and inhibition of formation assays. The anticaries activity of such compound (250 µg/ml) was evaluated in Wistar rats submitted to a high cariogenic challenge. HE (peel and seeds) reduced S. mutans cells at low concentrations (MIC:12.5-25 µg/ml) and also biofilm viability after four hours, confirming the presence of the bioactive compound. This compound was identified as 7-epiclusianone (7-epi), which inhibited the S. mutans growth (MIC:1.25-2.5 µg/ml), the activity of GTF B (48% of inhibition) and the acid production, not interfering with the formation and accumulation of biofilms. In the animal study, 7-epi additionally reduced the incidence and severity of caries and also the total microbiota, however no reduction on the percentage of S. mutans was observed. In conclusion, 7-epi may be considered a promising agent to control cariogenic dental biofilm. Keywords: Rheedia brasiliensis, 7-epiclusianone, Streptococccus mutans, virulence factors, animal caries / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Orientador: Jaime Aparecido Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:16:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CcahuanaVasquez_RenzoAlberto_D.pdf: 3034196 bytes, checksum: 00640a6cb63bb31d61a9ad6b5692b87c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Modelos in vitro e in situ tem sido desenvolvidos para o estudo do biofilme dental. Protocolos que simulem episódios de "fartura-miséria" quando açúcares da dieta estão presentes na cavidade bucal e permitam avaliação de cárie dental são necessários. Por outro lado, poucos estudos da expressão gênica de biofilmes formados in situ foram realizados. Assim, este trabalho teve como objetivos: Desenvolver e validar um modelo de formação de biofilme de S. mutans que simule episódios de "fartura-miséria" e permita avaliar mudanças no biofilme, e desmineralização do esmalte dental. Também, avaliar o efeito da sacarose na expressão de genes gtfB, gtfC, gtfD e dexA de biofilme dental formado in vitro e in situ. Para os primeros objetivos, biofilmes de S. mutans UA159 cresceram durante 5 dias sobre blocos de esmalte bovino a 37oC, 10% CO2, em meio de cultura ultrapurificado, sendo avaliado: o efeito de concentração (1 a 20%) de sacarose e da freqüência (0 a 8x/dia) de exposição à sacarose. O efeito da clorexidina (0, 012 a 0,12%) 2x/dia e de NaF 0,05% foram testados para validar o modelo. Foram determinadas: viabilidade bacteriana, acidogenicidade do biofilme, biomassa e polissacarídeos; e a desmineralização do esmalte. Para o último objetivo, no estudo in vitro biofilmes de S. mutans UA159 cresceram nas mesmas condições acima citadas e foram expostos à sacarose 1% constante (controle) ou sacarose 10% 8x/dia (grupo intermitente) e após 48, 72 e 120 h os biofilmes foram coletados para análise gênica de gtfB, gtfC, gtfD e dexA. No experimento in situ, um estudo cruzado de 2 fases experimentais de 7 dias foi realizado, com 9 voluntários que usaram um dispositivo palatino contendo 12 blocos de dentina que foram submetidos 8x/dia a soluções de sacarose de 1, 5, 10 e 20%. No final, os biofilmes foram coletados para análise microbiológica, bioquímica e de expressão gênica de gtfB, gtfC, gtfD e dexA. Os resultados de padronização mostraram que as concentrações de sacarose de 10% e 20% e a frequência 8x/dia provocam mudanças no biofilme e na demineralização similares ao controle. Clorexidina mostrou efeito dose resposta, diminuindo biomassa, viabilidade bacteriana, acidogenicidade do biofilme e demineralização do esmalte, NaF 0,05% não mostrou atividade antimicrobiana, mas apresentou similar efeito a clorexidina 0,12% na redução da desmineralização. Para o último objetivo, os resultados in vitro do grupo intermitente mostraram que a expressão de genes analisados parece ser constante enquanto que no controle a expressão desses genes incrementou-se em função ao tempo. No estudo in situ, o incremento da concentração de sacarose aumentou os valores de peso úmido do biofilme, lactobacilos e polissacarídeos extracelulares do biofilme. Quanto a expressão gênica, só foi possível quantificar o gtfB e não apresentou diferenças entre os grupos. Em conclusão, o modelo in vitro apresenta potencial para avaliar o efeito antimicrobiano de substâncias sobre biofilmes e desmineralização dental. A quantificação da expressão de genes gtfB, gtfC, gtfD e dexA foi possível in vitro, mas in situ somente a expressão de gtfB foi determinada e não parece ser regulada pela concentração de sacarose. / Abstract: In vitro and in situ models have been developed to study dental biofilms. Protocols, that simulate the alternations of "feast or famine" episodes that happen in oral environment in the presence of dietary carbohydrates and allowing dental caries evaluation, are necessaries. On the other hand, few studies about gene expression of dental biofilm formed in situ were performed. Thus, the objectives of this research were: To develop and to validate a model of S. mutans biofilm formation simulating 'feast-famine' episodes that allows biofilms and dental demineralization changes assessment. Also, to evaluate the effect of sucrose exposure on expression of gtfB, gtfC, gtfD and dexA of in vitro and in situ dental biofilms. For the first objectives, S. mutans UA159 biofilms were grown during 5 days on bovine enamel slabs at 37oC, 10% CO2 in ultra-purified culture media. To develop the model, the effect of sucrose concentration (1 - 20%) 8x/day and frequency (0 - 8x/day) exposure were evaluated and to validate the model, chlorhexidine (CHX) effect (0.012- 0.12%) 2x/day was tested. Bacterial viability, biofilm acidogenicity, biomass and polysaccharides were determined, and enamel demineralization was evaluated by surface hardness loss. To the last objective, for in vitro study, S. mutans UA159 biofilms were grown in the same conditions of previous experiments and were exposed to 1% sucrose constantly (control) or 10% sucrose 8x/day (intermittent group) and after 48, 72 and 120 h the biofilms were collected for analysis. For in situ experiment, a crossover study was conducted in two phases of 7 days each, with nine volunteers that wore intraoral palatal appliances containing 12 dental dentin slabs, which were extra orally submitted 8 times/day to sucrose solutions of 1%, 5%, 10% and 20% . On the 7th day, biofilms were collected for analysis. RNA from the in vitro and in situ biofilms were extracted and purified. Gene expression of gtfB, gtfC, gtfD and dexA were evaluated by real time PCR. In vitro development and validation results showed that 10% and 20% sucrose concentrations and frequency 8x/day provoked biofilm and enamel demineralization changes similar to control group. CHX showed dose-response effect decreasing biomass, bacterial viability and enamel demineralization (p<0.05). Also, 0.05% NaF did not show antimicrobial effect but had similar effect than 0.12% CHX decreasing enamel demineralization (p<0.05). With regard to gene expression of in vitro experiment, gene expression of intermittent group was constant along the time. In situ results showed that biofilm wet weight, lactobacillus, extracellular polysaccharides values of the biofilm increased according to the increase of sucrose exposure. No differences for gtfB gene expression between the groups were observed (p<0.05) and no levels of gtfC, gtfD and dexA were detected. In conclusion, the model developed and validated has potential to assess substances with antimicrobial effect on biofilm and dental demineralization. Quantification of gtfB, gtfC, gtfD and dexA gene expression levels were possible for S. mutans biofilms in vitro study but only gtfB gene expression of in situ study can be determined and was not regulated by sucrose concentration. / Doutorado / Cariologia / Doutor em Odontologia

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / The aim of the present study was to find a relation between salivary peptides, caries experience and mutans streptococci (MS) levels in saliva of caries free (CF) and caries susceptible (CS) children in early childhood. One hundred and six 10 â 71 month-old children participated in the study. Fifty-eight children were CF and 48 who had experienced dental caries formed the CS group. Two samples of whole saliva were collected from all participants. Unstimulated whole saliva was collected, subsequently centrifuged. Supernatants were lyophilized, divided into two pools (CF and CS) and individual samples, and stored at -20oC for posterior analysis using LC-MS (Liquid Chromatography Mass Spectrometry) to study the peptide profile. Identification of salivary peptides was based on theoretical molecular masses available from online databases. Stimulated whole saliva was collected and used for MS detection in MSB agar medium. MS concentration in saliva was reported in cfu/mL. Dental examination was performed and dmfs/dmft scores were calculated. Data was analysed by using logistic regression. The chromatograms from CF and CS pools of saliva had different peak patterns. The identification of molecular masses suggested the presence of 9 peptides. Three of them were significantly related with caries experience. The presence of HNP-3 (&#945;-defensin 3) (p = 0.019) and HBD-3 (&#946;-defensin 3) (p = 0.034) reduced the chances of experiencing early childhood caries (ECC). The presence of PRP IB-4 significantly increased caries experience (p = 0.035). In addition, age (p = 0.020) and MS counts (p = 0.036) increased caries experience, however gender was not associated with dental caries (p = 0.877). Our results suggest that presence of specific peptides in saliva of CF or CS children in early childhood predisposes to a higher or lower risk of caries experience. / Este trabalho buscou estudar o perfil de peptÃdeos salivares de crianÃas com cÃrie da primeira infÃncia, relacionando-o com nÃveis de estreptococos do grupo mutans (EGM) salivares e experiÃncia de cÃrie. Cento e seis crianÃas, na faixa etÃria de 10 a 71 meses de idade, participaram do estudo, sendo 48 com experiÃncia de cÃrie e 58 sem cÃrie da primeira infÃncia. Duas amostras de saliva total foram coletadas de todos os participantes. A primeira amostra era composta de saliva nÃo estimulada, utilizada para anÃlise dos peptÃdeos. ApÃs coletada, essa saliva foi centrifugada, o sobrenadante retirado, liofilizado, dividido em pools com cÃrie, sem cÃrie e em amostras individuais e armazenado em freezer a -20oC atà anÃlise em aparelho de LC-MS (Cromatografia LÃquida acoplado ao EspectrÃmetro de Massa). A busca por peptÃdeos foi baseada em massas conhecidas de peptÃdeos existentes em bancos de dados. Saliva estimulada representou a segunda coleta, utilizada para o cultivo dos EGM (UFC/mL) em meio Ãgar mitis salivarius bacitracina (MSB). Anamnese e exame dentÃrio foram realizados para cÃlculo do Ãndice ceo-s e ceo-d. Os dados foram analisados por meio de modelo logÃstico binÃrio. Resultados foram considerados significantes quando p-valor < 0,05. Os cromatogramas obtidos a partir dos pools de crianÃas com/sem cÃrie apresentaram diferenÃas em relaÃÃo aos picos apresentados. A identificaÃÃo das massas moleculares sugeriram a presenÃa de nove peptÃdeos. RegressÃo logÃstica mostrou que 3 peptÃdeos se relacionaram com experiÃncia de cÃrie. PRP IB-4 associou-se a um aumento de experiÃncia de cÃrie (p=0,035); &#945;-defensina 3 (p=0,019) e &#946;-defensina 3 (p=0,034) associaram-se à reduÃÃo de experiÃncia de cÃrie. Em adiÃÃo, aumento na idade (p=0,020) e aumento na contagem de EGM (p=0,036) ocasionaram um aumento na experiÃncia de cÃrie, mas sexo nÃo se relacionou com cÃrie dentÃria (p=0,877). A partir desses resultados, pÃde-se concluir que a presenÃa de peptÃdeos especÃficos na saliva de crianÃas com e sem cÃrie dentÃria predispÃem a um maior ou menor risco à essa doenÃa.

nÃo hà / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro e in situ os efeitos de um agente de limpeza cavitÃria a base de digluconato de clorexidina a 2% (CHX) na desinfecÃÃo de dentina cariada, bem como determinar a susceptibilidade de diferentes espÃcies a este agente antimicrobiano. Setenta blocos de dentina humana foram distribuÃdos de forma aleatÃria e submetidos a desafio cariogÃnico por um mÃtodo microbiolÃgico in vitro (n=15), bem como um in situ (n=20). No estudo in vitro, 30 blocos de dentina foram imersos por 5 dias, em caldo BHI inoculado com Streptococcus mutans, para induÃÃo de cÃrie. No estudo in situ, 20 voluntÃrios usaram dispositivos palatinos contendo dois blocos de dentina, que foram gotejados com soluÃÃo de sacarose 40%, 10 vezes ao dia, durante 14 dias. Ao final de cada perÃodo experimental, os blocos de dentina foram divididos aleatoriamente em dois grupos: Controle (soluÃÃo de NaCl a 0,9%) e CHX. Amostras de dentina infectada foram coletadas antes e 5 min apÃs cada tratamento, em seguida, as bactÃrias foram cultivadas e os microorganismos contados. Foram avaliados os seguintes microorganismos: estreptococos mutans in vitro e in situ, estreptococos totais, microorganismos viÃveis totais e lactobacilos, in situ. A reduÃÃo microbiana promovida por cada tratamento foi calculada e comparada entre os grupos pelo teste t, a susceptibilidade dos microorganismos isolados in situ foi comparada pela anÃlise de variÃncia ANOVA (&#61537;= 5%). A reduÃÃo microbiana promovida pela CHX foi significativamente maior quando comparada ao grupo controle para todos os microorganismos avaliados tanto in vitro quanto in situ. No entanto, nÃo houve diferenÃa na susceptibilidade dos vÃrios microorganismos avaliados. Desta forma, a CHX foi capaz de reduzir a populaÃÃo microbiana em dentina infectada, sugerindo que esta abordagem pode ser uma ferramenta auxiliar para desinfecÃÃo de dentina cariada residual suprimindo o crescimento de microorganismos associados ao desenvolvimento de cÃrie.

O surgimento de resistência bacteriana aos tratamentos convencionais tem proporcionado o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento e/ou controle da cárie dentária. Nesse contexto, a utilização da terapia fotodinâmica (TFD) é sugerida como alternativa para a inativação de microrganismos patogênicos envolvidos na gênese da cárie. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) sobre três culturas de S. mutans: uma cepa padrão de S. mutans (ATCC 25175) e dois isolados clínicos (43513 e 47513) oriundos da saliva de crianças. O corante (C) azul de orto-toluidina (TBO) foi utilizado associado à iluminação com LEDs (L) no comprimento de onda vermelho. Estas suspensões foram transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com quatro concentrações de TBO (0,25; 2,5; 25 e 250 µg/mL) e expostas a quatro dosimetrias (12; 24; 36 e 48 J/cm2) constituindo o grupo C+L+ (TFD). Suspensões adicionais foram tratadas somente com as quatro concentrações de TBO (C+L-) ou apenas com as quatro dosimetrias (C-L+). Amostras não submetidas ao tratamento com a fonte de luz nem ao corante, constituíram a condição C-L- (controle positivo). Alíquotas de 100 µL de cada orifício foram transferidas para tubos de ensaio para se verificar a presença ou ausência de crescimento microbiológico. Adicionalmente, alíquotas de 25 µL do grupo correspondente a TFD (C+L+) foram semeadas em placas de Petri, as quais foram incubadas a 370C por 48 horas para posterior visualização de halos de inibição e/ou crescimento microbiológico correspondente a efetividade ou ineficiência da TFD, respectivamente. Com o intuito de confirmar os achados, essas mesmas amostras foram submetidas à análise pela microscopia confocal a laser. Os resultados demonstraram que a TFD, em determinadas condições experimentais, foi efetiva no controle do crescimento microbiológico das espécies de S. mutans usadas neste estudo. A concentração mínima de TBO necessária para a inativação in vitro das três culturas de S. mutans foi de 2,5 µg/mL associada à dosimetria mínima de 24 J/cm2 da fonte de luz LED utilizada no estudo. / The increase of bacterias resistance to conventional treatment resulted in the development of new therapeutic modalities for dental caries treatment and/or prevention. In this field, the use of photodynamic therapy (PDT) is suggested as an alternative for inactivation of patogenic microrganisms involved in the etiology of tooth decay. The aim of this study was to evaluate in vitro the antimicrobian effect of the photodynamic therapy (PDT) on bacteria suspensions of S. mutans (ATCC 25175) and two suspensions (43513 and 47513) from infants saliva. Toluidine blue O (TBO) (D) and a red light-emmiting diodes (LEDs) (L) were used in association. Samples were inserted into 96 well-plate and treated with four TBO concentrations (0.25; 2.5; 25 e 250 µg/mL) and exposed to four dosimetries (12; 24; 36 e 48 J/cm2) defining the D+L+ group (PDT). Additional samples were treated only with TBO (D+L-) or only with red LEDs (D-L+). The treatment without dye and none red LED constituted the D-L- condition (positive control). Aliquots from D+L+ (TFD group) were inserted in Petri dishes, which were incubated at 370C for 48 hours. Posterior analysis of microbiologic growth, corresponding to PDT effectivity, was conducted. These samples were also submitted to laser confocal microscopy analysis for microbiologic data confirmation. The results showed PDT effectiveness for S. mutans inactivation in particular conditions. It was demonstrated that PDT was efficient to kill S. mutans species in the presence of the TBO at 2.5 µg/mL (minimum concentration) associated to 24 J/cm2 dosimetry.