Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / INTRODUCCIÓN: Las resinas compuestas dentales se están utilizando cada vez más como materiales de restauración. Sin embargo, un inconveniente importante de las resinas compuestas es que tienden a acumular más biofilm y placa bacteriana que otros materiales de restauración. La caries adyacente a restauración es aquella que se detecta en los márgenes de una restauración existente, y es la razón más frecuente para reemplazar restauraciones. Diversos estudios muestran que Streptococcus mutans es la principal bacteria aislada de placa dental y con mayor potencial cariógenico. La incorporación de agentes antibacterianos en los materiales dentales puede inhibir la caries adyacente a restauración in vitro y reducir la formación de biofilm. A pesar de que existen diversas publicaciones científicas que demuestran las propiedades bactericidas de las nanopartículas de cobre (CuNP), su evaluación en adhesivos dentales ha sido poco explorada. MATERIAL Y METODOS: Se incorporaron CuNP a un adhesivo comercial (“Prime & Bond 2.1” Dentsply®). Se prepararon piezas cortadas de terceros molares con los adhesivos modificados y la versión comercial. El adhesivo modificado con CuNP se caracterizó mediante espectroscopia infrarroja de reflectancia total atenuada (FTIR-ART) y microscopia electrónica de barrido (SEM). La actividad antibacteriana se evaluó cuantificando formación de biofilm de Streptococcus mutans a través de tinción con cristal violeta, y por medio de recuento bacteriano. La liberación de cobre desde el adhesivo modificado con CuNP se evaluó en saliva artificial. RESULTADOS: Mediante la caracterización de las muestras se identificaron las CuNP incorporadas en el adhesivo y se comprobó que la estructura química del adhesivo no es alterada. En los ensayos de actividad antibacteriana, los adhesivos modificados con CuNP presentaron menor cantidad de biofilm y menor recuento bacteriano comparado con el control (98-99 % de inhibición de crecimiento bacteriano). Se comprobó que el adhesivo modificado presenta liberación de cobre al medio, lo cual podría explicar en parte su actividad antibacteriana. CONCLUSIÓN: El sistema adhesivo modificado con CuNP posee una marcada actividad antimicrobiana frente a Streptococcus mutans, afectando su adherencia y viabilidad. Este nuevo material modificado con CuNP podría ser una promisoria alternativa para la prevención de caries adyacentes a restauraciones.

FURTADO, E.F. Análise das propriedades antifouling de fios de sutura revestidos com eugenol sobre a formação de biofilmes de streptococcus mutans atc 25175. 2017. 84 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2017. / Submitted by Mestrado Biotecnologia (biotecnologiasobral@gmail.com) on 2017-07-13T18:02:08Z No. of bitstreams: 1 dis_2017_effurtado.pdf: 2411957 bytes, checksum: 486815b549f057f37ebf9161be89287e (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-07-14T11:25:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dis_2017_effurtado.pdf: 2411957 bytes, checksum: 486815b549f057f37ebf9161be89287e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-14T11:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dis_2017_effurtado.pdf: 2411957 bytes, checksum: 486815b549f057f37ebf9161be89287e (MD5) Previous issue date: 2017-06-15 / Biofilms are microbial communities that are attached to biotic or abiotic surfaces. The presence of these communities in biomedical and dental devices has been one of the growing causes of nosocomial infections, being called infections associated with biomaterials. Streptococcus mutans is a Gram-positive bacterium, member of the oral microbiota, with acidogenic and acidic characteristics. It stands out as the main responsible for the progression of caries and other oral diseases, and may also cause infections in the endocardium and intraabdominal. Sutures are part of an essential procedure in dental practice. They are materials that tend to attract bacteria, forming biofilms, consequently worsening surgical site infections. The development of antiadhesive surfaces, by coating with bioactive substances, has stood out among the strategies that prevent the microbial colonization and subsequent establishment of the biofilm. In this context, natural products have been increasingly studied and applied as promising biotechnological tools. Eugenol, popularly called clove oil, is a member of the phenylpropanoids, has effective pharmacological properties and antibacterial action against a wide variety of gram-positive and gram-negative microorganisms. Thus, the objective of this work was to evaluate the influence of the compound on the antimicrobial activity, as well as the capacity of interaction with cotton suture to prevent adhesion and biofilm formation by Streptococcus mutans ATCC 25175. A minimum inhibitory concentration (MIC), minimal bactericidal concentration (MBC), as well as eugenol antibiofilm assays were performed for several Gram-positive microorganisms of Streptococcus genus separately. Before the obtained, all the microorganisms tested demonstrated to be susceptible to the compound, being S. mutans ATCC 25175 the most relevant, and therefore selected for the antiadhesion tests. On these assays, eugenol showed antiadhesive properties by halving the viability of cells initially adhered to the yarn. The biomass and metabolism of the biofilm formed in the suture also experienced significant reductions of approximately one third and fifty percent, respectively. These data corroborate the eugenol efficacy found in the literature in different strategies. In conclusion, these results demonstrate that the compound has great potential of antimicrobial action, being able to be applied as a coating of surfaces, bringing perspectives for the prevention of diseases associated with biomaterials. / Biofilmes são comunidades microbianas que se encontram aderidas a superfícies bióticas ou abióticas. A presença dessas comunidades em dispositivos biomédicos e odontológicos tem sido uma das causas crescentes de infecções hospitalares, sendo denominadas infecções associadas a biomateriais. Streptococcus mutans é uma bactéria Gram-positiva, membro da microbiota oral, com características acidogênica e acidúrica. Destaca-se como a principal responsável pela progressão da cárie e outras doenças bucais, podendo também ocasionar infecções no endocárdio e intra-abdominais. As suturas fazem parte de um procedimento essencial na prática odontológica. São materiais que tendem a atrair bactérias, formando biofilmes, agravando consequentemente infecções de sítio cirúrgico. O desenvolvimento de superfícies antiadesivas, por revestimento com substâncias bioativas, tem se destacado entre as estratégias que impedem a colonização microbiana e posterior estabelecimento do biofilme. Nesse contexto, os produtos naturais têm sido crescentemente estudados e aplicados como ferramentas biotecnológicas promissoras. O eugenol, popularmente chamado de óleo de cravo, é um membro dos fenilpropanóides, possui propriedades farmacológicas eficazes e ação antibacteriana contra uma ampla variedade de microrganismos Gram-positivos e Gramnegativos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do composto na atividade antimicrobiana, bem como a capacidade de interação com sutura de algodão em impedir a adesão e formação de biofilme por Streptococcus mutans ATCC 25175. Foi verificada a concentração inibitória mínima (CIM), a concentração bactericida mínima (CBM), assim como ensaios antibiofilme do eugenol, realizado para vários microrganismos Gram-positivos do gênero Streptococcus, separadamente. Diante do obtido, todos os microrganismos testados demonstraram ser suscetíveis ao composto, sendo S. mutans ATCC 25175 o mais relevante, e por isso selecionado para os testes antiadesão. Sobre esses ensaios, o eugenol apresentou propriedades antiadesivas por reduzir pela metade a viabilidade de células inicialmente aderidas ao fio. A biomassa e o metabolismo do biofilme formado na sutura também sofreram reduções expressivas de aproximadamente um terço e cinquenta por cento, respectivamente. Esses dados corroboram a eficácia do eugenol encontrados na literatura em diferentes estratégias. Em conclusão, estes resultados demonstram que o composto possui grande potencial de ação antimicrobiana, podendo ser aplicado como revestimento de superfícies, trazendo perspectivas para a prevenção de doenças associadas à biomateriais.

No tratamento de lesões profundas de cárie, a Remoção Parcial de Dentina Cariada (RPDC) e restauração tem sido proposta como alternativa conservadora para evitar perda de tecido dentário e exposição pulpar. Existe uma hipótese de que uma seleção de bactérias ocorre abaixo de restaurações devido a um acesso limitado de nutrientes. No entanto, há falta de conhecimento sobre a diversidade e potencial de virulência das bactérias cariogênicas residuais seladas abaixo de restaurações sobre dentina cariada. O objetivo deste estudo foi caracterizar Streptococcus mutans e lactobacilos isolados de dentina cariada antes e após o estresse nutricional por selamento da cavidade. S. mutans e lactobacilos foram obtidos por cultivo da dentina cariada de lesões cavitadas de quatro e seis pacientes, respectivamente. Duas amostras de dentina cariada foram coletadas e cultivadas por paciente: uma antes e outra após três meses de selamento da cavidade. Colônias de S. mutans e lactobacilos preditos foram selecionadas, isoladas e analisadas por coloração de Gram. Genes “housekeeping” foram utilizados na identificação da espécie (gtfB para S. mutans e pheS/rpoA/groEL/16SrRNA para lactobacilos) e a técnica de AP-PCR foi utilizada para genotipagem. A análise fenotípica (produção de ácido e de tolerância ao ácido) foi realizada. Um total de 48 isolados representativos de S. mutans foram analisados (31 antes e 17 após estresse nutricional por meio do selamento). O número de genótipos diferentes de S. mutans encontrado foi de nove e seis antes e após selamento, respectivamente. Pelo menos um dos genótipos encontrados antes do selamento foi também encontrado na dentina após o estresse nutricional por meio do selamento. Em relação aos lactobacilos, analisou-se 86 cepas, 41 antes e 45 após estresse nutricional. L. paracasei e L. rhamnosus prevaleceram e apenas quatro isolados não pertenciam a estas espécies. Um total de 27 e 15 genótipos de lactobacilos diferentes foram encontrados antes e após selamento, respectivamente. Não houve diferença entre isolados de S. mutans e lactobacilos de dentina cariada antes e após o estresse nutricional na produção de ácido ou tolerância ao ácido. L. paracasei apresentaram menor valor de pH em 48h de crescimento. Em conclusão, a diversidade genotípica diminuiu após o estresse nutricional, mas a virulência de S. mutans e lactobacilos permaneceu a mesma. L. rhamnosus foi selecionado após o estresse nutricional. Algumas espécies de lactobacilos apareceram após o selamento, sugerindo pressão seletiva no sítio antes do selamento pela alta disponibilidade de nutrientes. Mais estudos avaliando outras características de virulência são necessários para entender melhor a cariogenicidade das cepas residuais seladas abaixo de restaurações e para compreender a resistência de L. rhamnosus a este sítio. / A hypothesis exists that a selection of bacteria occurs underneath restoration due to a limited access of nutrients. However, there is a lack of evidence regarding their role in the progression of carious process beneath restorations after Partial Dentin Caries Removal. It still unclear if the diversity and the virulence potential of the sealed bacteria remain the same after sealing. The aim of this study was to characterize Streptococcus mutans and Lactobacillus species isolated from caries dentin before and after starvation stress by cavity sealing. S. mutans and lactobacilli were obtained by culture of carious dentin from four and six patients, respectively. Two carious dentin samples were collected and cultured per patient: 1st before and 2nd after three months of cavity sealing. Presumptive S. mutans and lactobacilli were selected, isolated and analyzed by Gram staining. Housekeeping genes sequencing were used to the species identification (gtfB for S. mutans and pheS/rpoA/groEL/16SrRNA for lactobacilli) and Arbitrary Primer-PCR (AP-PCR) was used for genotyping. Phenotypic analysis (acid production and acid tolerance) was performed. A total of 48 representative S. mutans isolates were genotyped (31 before and 17 after the sealing). The number of different genotypes identified was nine and six before and after sealing, respectively. At least one of the genotypes found before the sealing was also found on dentin after the sealing in all patients. Regarding lactobacilli, it was analyzed 86 strains, 41 before and 45 after starvation stress by sealing. L. paracasei and L. rhamnosus prevailed and only four isolates did not belong to these species. A total of 27 and 15 different genotypes were found before and after sealing, respectively. There was no difference between isolates from carious dentin before and after starvation stress, neither regarding acid production or acid tolerance, although L. paracasei showed lower pH value in 48 h of growth. In conclusion, genotypic diversity of S. mutans decreased after starvation stress, but the virulence traits of S. mutans remained unchangeable. L. paracasei and L. rhamnosus were the most prevalent species of this genus, besides L. rhamnosus was selected after starvation stress. There was a decreased genotypic diversity of lactobacilli at the strains level and an increased diversity of species in sealed carious dentin. More studies evaluating other virulence traits are necessary to better understand the cariogenicity of the residual strains underneath restorations and to understand the resistance of L. rhamnosus to this site.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-20T03:12:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334850.pdf: 2079150 bytes, checksum: e9fd6f0704b5a86cef767b5a5d6611c9 (MD5) Previous issue date: 2015 / (Poli-éter-éter-cetona) PEEK representa atualmente uma alternativa para implantes ortopédicos devido à sua biocompatibilidade e baixo módulo de elasticidade quando comparado ao titânio. PEEK tem mostrado ser muito atraente para a incorporação de compostos, graças ao processo de sulfonação que promove um balanço entre as propriedades mecânicas e estabilidade termo-oxidativa com uma alta probalidade para geração de novos materiais com excelentes propriedades químico-mecânicas. O objetivo deste trabalho foi de funcionalizar o PEEK, a fim de incorporar novos compostos anti-biofilme derivados de lactamas. Grânulos de PEEK foram funcionalizadas por tratamento com ácido sulfúrico e, em seguida, dissolvidos em solução de dimetilsulfóxido. Após a funcionalização, antibiofilme à base de lactama foi adicionado à solução de poli(éter-éter-cetona) sulfonado (SPEEK). Uma técnica de revestimento por imersão foi utilizada para sintetizar um filme fino sobre um substrato à base de vidro. O grau de sulfonação (DS) e a incorporação de lactama no SPEEK foram determinados por espectroscopia de infravermelho com transformada de fourier (FTIR), ressonância magnética nuclear (RMN), análise termogravimétrica (TGA), e microscopia electrônica de varredura (SEM-EDS). Em seguida, foi avaliada a eficácia do tratamento do antibiofilme incorporado ao polímero através da medida de formação de biofilmes pela bacteria Streptococcus mutans sobre os materiais funcionalizados. Foi determinado grau de sulfonação (DS) de 65%, enquanto que as curvas TGA e FTIR confirmaram a presença de SO3H e lactamas na estrutura de SPEEK. A densidade do biofilme na superfície de SPEEK contendo lactamas foi menor do que no SPEEK livre de lactama, indicando que a atividade desses compostos antibiofilme foi mantida após incorporação no SPEEK.<br> / Abstract : PEEK is currently presented as an alternative for orthopedic implants due to its biocompatibility and low modulus compared to titanium. PEEK has been shown to be very attractive for incorporating compounds thanks to the sulphonation process, which promotes a balance between the mechanical properties and thermo-oxidative stability. The objective of this study was to functionalize the poly (ether-ether-ketone) (PEEK) in order to incorporate new anti-biofilm compounds, lactam derivatives. PEEK samples were functionalized by treatment with sulfuric acid and then dissolved in dimethylsulfoxide solution resulting in SPEEK. After functionalization, lactam-based antibiofilm compounds were added to the sulphonated poly (ether ether ketone) SPEEK to produce a thin film coating a glass-based substrate. The degree of sulphonation (DS) and the incorporation of anti-biofilm compounds (lactams) in SPEEK were determined by Infrared Fourier Transform Spectroscopy (FTIR), Nuclear Magnetic Resonance (NMR), Thermogravimetric Analysis (TGA) and Electron Microscopy Scanning (SEM-EDS). Then, the effectiveness of the treatment applied to antiobiofilm polymer was evaluated biofilm formation capacity of Streptococcus mutans on the SPEEK functionalized. The characterization indicated a high DS of 65%, while the TGA curves confirmed the presence of SO3H in SPEEK and lactam structure. The biofilm density on SPEEK containing lactam was lower than SPEEK without lactam, indicating that the activity of these compounds was maintained antibiofilm after incorporation into SPEEK.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:01:42Z : No. of bitstreams: 1 estebanflorez_fl_dr_arafo.pdf: 4910696 bytes, checksum: e884d7becfc9aea487606418b718612d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O uso indiscriminado dos antibióticos e seu mecanismo de ação levaram ao desenvolvimento de cepas bacterianas altamente resistentes e de maior virulência. Estas cepas causam doenças muito mais agressivas e de difícil tratamento, constituindo-se um dos principais desafios enfrentados por profissionais da área da saúde. Como a terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDA) baseia seu mecanismo de ação em reações oxidativas não especificas, esta passou a ser uma alternativa interessante para o tratamento de todas as doenças de origem microbiana, uma vez que, nem bactérias, nem vírus ou fungos tem capacidade de desenvolver resistência a TFDA. Considerando que a carie dental é uma doença de origem bacteriana especifica e que a eficácia da TFDA depende do tipo e dose de energia luminosa utilizada, do fotossensibilizador e da taxa de oxigênio nos tecidos a serem tratados, decidimos investigar a viabilidade da TFDA para prevenção e tratamento da cárie dental. Para tal, foram realizados 3 estudos: 1) Revisão critica da literatura sobre fotossensibilizadores utilizados para controle antimicrobianos de Streptococcus mutans. 2) Avaliação do efeito antibacteriano de três fotossensibilizadores (curcumina, hipericina e hematoporfirina) sobre Streptococcus mutans em suspensões planctônicas e 3) Avaliação do efeito antibacteriano de três fotossensibilizadores (curcumina, hipericina e photogem®) Esteban Florez FL. Terapia Fotodinâmica em microrganismos cariogênicos – Estudo in vitro. [Tese de doutorado]. Araraquara: sobre biofilme maduro formado a partir de cepa de Streptococcus mutans. Dos fotossensibilizadores utilizados a hipericina foi a que apresentou maior efeito antimicrobiano sobre suspensão planctônica. Foi comprovado que a eficácia da TFDA esta diretamente relacionada com o tipo... / The indiscriminate use of antibiotics and its mechanisms of action led to the development of highly resistant bacterial strains and more virulent ones. This strains can cause diseases much more aggressive and difficult to treat, and in that way they consist in one of the major challenges to the health care professionals. As the antimicrobial photodynamic therapy (APDT) it is based on non-specific oxidative reaction, this is now considered as an interesting alternative to treat all diseases from bacterial origins, once that, neither bacterias, neither viruses nor fungi can develop acquired resistance from the therapy. Taking into consideration that dental caries is a specific bacterial disease and that the APDT's efficiency is directed related to factors as, wavelength, energy dose, photosensitizer used, and with the oxygen present in the target tissue, we have decided to investigate the APDT to prevent and treat dental decay. To accomplish that, it was realized three studies: 1) Critical Literature revision about photosensitizers used to control S.mutans. 2) Evaluation of the antimicrobial effect of three different photosensitizers (Curcumin, Hypericin and Hematoporfirin) over Streptococcus mutans in planktonic cultures and 3) Evaluation of the antimicrobial effect of three photosensitizers (Curcumin, Hypericin and Hematoporfirin) over mature biofilms obtained from Streptococcus mutans strains. From the photosensitizers used Hypericin was the one that showed the most antibacterial observed effect on the planktonic cultures. It was demonstrated by our data that the APDT efficacy is directly related to the time of irradiation of the samples, with the kind of photosensitizer used, its concentration and with the energy dose delivered. None of the proposed protocols were able to show any significant effect over the microorganisms when in biofilm... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo:O presente estudo avaliou isolados de Streptococcus mutans e leveduras do gênero Candida quanto à capacidade de formação de biofilme in vitro, perfil molecular e a interação destes micro-organismos procedentes de saliva e biofilme dental de crianças com diferentes históricos da doença cárie. A partir de amostras de saliva e biofilme de 38 crianças, foram obtidos 83 isolados de S. mutans e 31 leveduras do gênero Candida, verificando-se 12 (31,5%) indivíduos multicolonizados. Os isolados de Candida spp. foram caracterizados quanto à formação de biofilme, assim como, analisados quanto à região parcial do gene D1/D2, ITS1-5,8S-ITS2 do DNA ribossomal e avaliação do perfil genotípico pelo sistema ABC. Um total de 20 isolados de S. mutans foram selecionados, sendo 12 procedentes de crianças coinfectadas e 08 de crianças não coinfectadas. Estes foram caracterizados, quanto a formação de biofilme in vitro e pelo sequenciamento parcial dos genes HtrA e GtfB. De acordo com os resultados verificou-se entre as linhagens de Candida analisadas que 26 pertenciam à espécie C. albicans (83,8%) e 05 identificadas como Candida não-albicans (16,12%), entre essas, 03 de C. tropicalis (9,6%), 01 C. glabrata (3,2%) e 01 de C. guilliermondii (3,2%). Todas as crianças coinfectadas eram colonizadas com pelo menos uma linhagem de C. albicans, entre as quais foram detectados os genótipos A e B, sendo que o genótipo A foi mais frequente nas crianças com histórico de cárie, ocorrendo em 77% delas, enquanto que o genótipo B foi mais frequente nas crianças sem histórico da doença (87,5%). As espécies não-albicans, principalmente a C. tropicalis estavam associadas à microbiotas cariogênicas, sugerindo que essas espécies podem potencializar a virulência de Streptococcus mutans, aumentando potencialmente o risco da doença. Ambos os micro-organismos avaliados apresentaram variação na concentração de células aderidas durante a formação do biofilme in vitro. Entretanto verificou-se uma variação maior da capacidade de formação de biofilme in vitro entre os isolados de S. mutans procedentes de crianças coinfectadas em relação ao grupo de isolados procedentes de crianças não coinfectadas. Os isolados de S. mutans geneticamente diferentes variavam quanto ao padrão fenotípico da aderência, apresentaram diversidade a qual pôde ser correlacionada ao histórico da doença cárie e padrão de aderência in vitro. Além disso, verificou-se que o padrão de aderência pode ser modificado em função da associação com as leveduras do gênero Candida. As imagens pela técnica de microscopia de fluorescência confocal e por microscopia eletrônica de varredura (MEV) confirmaram a maior expressão de exopolissararídeos na matriz do biofilme formado pela associação de S. mutans com C. albicans confirmando a potencialização da virulência de S. mutans nos biofilmes associados com os dois micro-organismos. A multicolonização, genótipos e distribuição das espécies de Candida encontradas parecem ter uma relação expressiva com o desenvolvimento da cárie dental, sendo que, indivíduos colonizados pela espécie C. tropicalis apresentaram maior incidência da doença. Palavras-chave: Biofilme. Candida albicans. Streptococcus mutans.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-06Bitstream added on 2014-08-13T17:59:41Z : No. of bitstreams: 1 000775944.pdf: 1525174 bytes, checksum: 243559115d903e6589baa6f94c5ac6c3 (MD5) / As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e tem grande importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações microbianas entre Streptococcus mutans e Candida albicans em modelos de biofilmes formados in vitro e em modelo experimental de Galleria mellonella. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de S. mutans sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de S. mutans sobre C. albicans e também os efeitos indiretos de S. mutans sobre C. albicans, utilizando apenas o sobrenadante da sua cultura. Além disso, foram testados os efeitos de S. mutans sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, pela primeira vez na literatura, foram inoculados S. mutans juntamente com C. albicans em lagartas de G. mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de S. mutans sobre a candidose experimental em G. mellonella foram avaliados pela análise da curva de sobrevivência, pelo estudo da cultura da hemolinfa para quantificação de C. albicans e através da avaliação histológica da presença de hifas de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Os resultados in vitro demonstraram que as células de S. mutansfavoreceram a formação de biofilme por C. albicans .... / Interactions between fungi and bacteria are present in nature and has great medical and environmental importance. The development of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential for understanding the pathogenesis of diseases and discovery of new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Streptococcus mutans and Candida albicans in vitro and in an experimental model of Galleria mellonella. In the in vitro study, the effects of S. mutans on biofilm formation and on the filamentation ability by C. albicans were evaluated. On both tests, we evaluated the direct effects of S. mutans cells and indirect effects of the supernatant culture of S. mutans on C. albicans. Furthermore, the effects of the S. mutans were tested on C. albicans at different stages of growth of the bacterial culture (4, 6, 18 and 24 h). In vivo study, were inoculated S. mutans together with C. albicans in larvae of G. mellonella for induction of experimental infection. The effects of S. mutans on experimental candidiasis in G. mellonella was evaluated by analysis of the survival curve, the study of the culture of hemolymph for quantification of C. albicans and by histological evaluation the formation of hyphae of C. albicans in the host tissues. The results of in vitro tests and number of CFU/mL in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The data obtained in the survival of G. mellonella were analyzed using the log- rank test. In all tests, were adopted significance level 5%. In vitro results showed that cells of S. mutans favored biofilm formation by C. albicans, however when C. albicans was put in contact with the only supernatant of a culture of S. mutans, there was a reduction in biofilm formation and inhibition of the morphological transition of C. albicans. In the in vivo study, it was found that the injection of ....

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-20Bitstream added on 2014-08-27T15:57:12Z : No. of bitstreams: 1 000734833.pdf: 2189317 bytes, checksum: 8cc1e7c303126f49a3ecd91ad07bb881 (MD5) / O trabalho investigou o potencial antimicrobiano fotodinâmico (PACT) mediado por um fotossensibilizador (FS) natural, curcumina (C), exposto a uma fonte de luz LED azul (L) aplicado sobre biofilme maduro de Streptococcus mutans (SM) formado sobre discos de hidroxiapatita e comparou esse potencial com biofilmes submetidos a imersão única com solução de clorexidina a 0.12% (CHX). Adicionalmente, verificou-se a eficácia de uma fonte de luz de amplo espectro (luz branca) de alta intensidade de potência na presença de C e azul de toluidina (T) a baixas concentrações expostos a um tempo extra curto de iluminação. Material e Método: Biofilmes de SM foram submetidos a tratamento com soluções de C e iluminadas com um LED azul (L) a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 e a imersão em CHX. Adicionalmente, uma fonte de luz branca (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) foi utilizada na presença de baixas concentrações de C e T por um período extra curto de iluminação sobre suspensões de SM. A eficácia das tratamentos foi realizada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mg de biofilme seco e UFC/ml de suspensão) e análise morfológica dos biofilmes foram realizadas por meio de microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura ambiental. Resultados: PACT (C a 2.5 mM e L a 48 J/cm2) apresentou a maior redução bacteriana substancial quando comparada a CHX. A luz branca apresentou fotossensibilização letal nos parâmetros utilizados. Conclusão: A utilização da curcumina, um corante natural e a luz branca, capaz de ativar FS em curtos períodos de tempo, são avanços nesse campo antimicrobiano alternativo. / This work investigated the antimicrobial photodynamic potential (PACT) mediated by a natural photosensitizer (PS), curcumin (C), exposure to an source of blue LED (L) applied over a Streptoccocus mutans (SM) mature biofilm formed on hidroxiapatite discs and compared this potential with biofilms submitted to single immersion of chlorhexidine at 0.12% (CHX). Additionally, it was verified the efficacy of a broad visible spectrum light source (white light) of high potency intensity in the presence of C and toluidine blue (T) at low concentrations and exposure to an extra short illumination time. Materials: SM biofilms were submitted to a treatment with C solutions and exposure to a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 of L and immersion in CHX. Furthermore, a white light source (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) was used in the presence of low concentrations of C and T for an extra short period over SM suspensions. The efficacy of the treatments were performed by colony forming units counting (CFU/mg of dry biofilm and CFU/ml of suspension) and the morphological analysis of biofilms were performed using confocal laser scanning microscopy images and environmental scanning electron microscopy. Results: PACT (C at 2.5 mM and L at 48 J/cm2) presented a bacterial substantial reduction when compared with CHX treatment. The white light showed lethal photossensibilization in the utilized parameters. Conclusion: The use of curcumin, a natural compound and the white light, able to activate FS at shorts periods, are advance on this antimicrobial alternative field.

Orientador: Lourdes Aparecida Martins dos Santos-Pinto / Banca: Alessandra Nara Souza Rastelli / Banca: Osmir Batista de Oliveira Junior / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado / Banca: Simone Duarte / Resumo: O trabalho investigou o potencial antimicrobiano fotodinâmico (PACT) mediado por um fotossensibilizador (FS) natural, curcumina (C), exposto a uma fonte de luz LED azul (L) aplicado sobre biofilme maduro de Streptococcus mutans (SM) formado sobre discos de hidroxiapatita e comparou esse potencial com biofilmes submetidos a imersão única com solução de clorexidina a 0.12% (CHX). Adicionalmente, verificou-se a eficácia de uma fonte de luz de amplo espectro (luz branca) de alta intensidade de potência na presença de C e azul de toluidina (T) a baixas concentrações expostos a um tempo extra curto de iluminação. Material e Método: Biofilmes de SM foram submetidos a tratamento com soluções de C e iluminadas com um LED azul (L) a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 e a imersão em CHX. Adicionalmente, uma fonte de luz branca (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) foi utilizada na presença de baixas concentrações de C e T por um período extra curto de iluminação sobre suspensões de SM. A eficácia das tratamentos foi realizada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mg de biofilme seco e UFC/ml de suspensão) e análise morfológica dos biofilmes foram realizadas por meio de microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura ambiental. Resultados: PACT (C a 2.5 mM e L a 48 J/cm2) apresentou a maior redução bacteriana substancial quando comparada a CHX. A luz branca apresentou fotossensibilização letal nos parâmetros utilizados. Conclusão: A utilização da curcumina, um corante natural e a luz branca, capaz de ativar FS em curtos períodos de tempo, são avanços nesse campo antimicrobiano alternativo. / Abstract: This work investigated the antimicrobial photodynamic potential (PACT) mediated by a natural photosensitizer (PS), curcumin (C), exposure to an source of blue LED (L) applied over a Streptoccocus mutans (SM) mature biofilm formed on hidroxiapatite discs and compared this potential with biofilms submitted to single immersion of chlorhexidine at 0.12% (CHX). Additionally, it was verified the efficacy of a broad visible spectrum light source (white light) of high potency intensity in the presence of C and toluidine blue (T) at low concentrations and exposure to an extra short illumination time. Materials: SM biofilms were submitted to a treatment with C solutions and exposure to a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 of L and immersion in CHX. Furthermore, a white light source (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) was used in the presence of low concentrations of C and T for an extra short period over SM suspensions. The efficacy of the treatments were performed by colony forming units counting (CFU/mg of dry biofilm and CFU/ml of suspension) and the morphological analysis of biofilms were performed using confocal laser scanning microscopy images and environmental scanning electron microscopy. Results: PACT (C at 2.5 mM and L at 48 J/cm2) presented a bacterial substantial reduction when compared with CHX treatment. The white light showed lethal photossensibilization in the utilized parameters. Conclusion: The use of curcumin, a natural compound and the white light, able to activate FS at shorts periods, are advance on this antimicrobial alternative field. / Doutor

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Liliana Scorzoni / Resumo: As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e tem grande importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações microbianas entre Streptococcus mutans e Candida albicans em modelos de biofilmes formados in vitro e em modelo experimental de Galleria mellonella. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de S. mutans sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de S. mutans sobre C. albicans e também os efeitos indiretos de S. mutans sobre C. albicans, utilizando apenas o sobrenadante da sua cultura. Além disso, foram testados os efeitos de S. mutans sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, pela primeira vez na literatura, foram inoculados S. mutans juntamente com C. albicans em lagartas de G. mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de S. mutans sobre a candidose experimental em G. mellonella foram avaliados pela análise da curva de sobrevivência, pelo estudo da cultura da hemolinfa para quantificação de C. albicans e através da avaliação histológica da presença de hifas de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Os resultados in vitro demonstraram que as células de S. mutansfavoreceram a formação de biofilme por C. albicans .... / Abstract: Interactions between fungi and bacteria are present in nature and has great medical and environmental importance. The development of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential for understanding the pathogenesis of diseases and discovery of new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Streptococcus mutans and Candida albicans in vitro and in an experimental model of Galleria mellonella. In the in vitro study, the effects of S. mutans on biofilm formation and on the filamentation ability by C. albicans were evaluated. On both tests, we evaluated the direct effects of S. mutans cells and indirect effects of the supernatant culture of S. mutans on C. albicans. Furthermore, the effects of the S. mutans were tested on C. albicans at different stages of growth of the bacterial culture (4, 6, 18 and 24 h). In vivo study, were inoculated S. mutans together with C. albicans in larvae of G. mellonella for induction of experimental infection. The effects of S. mutans on experimental candidiasis in G. mellonella was evaluated by analysis of the survival curve, the study of the culture of hemolymph for quantification of C. albicans and by histological evaluation the formation of hyphae of C. albicans in the host tissues. The results of in vitro tests and number of CFU/mL in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The data obtained in the survival of G. mellonella were analyzed using the log- rank test. In all tests, were adopted significance level 5%. In vitro results showed that cells of S. mutans favored biofilm formation by C. albicans, however when C. albicans was put in contact with the only supernatant of a culture of S. mutans, there was a reduction in biofilm formation and inhibition of the morphological transition of C. albicans. In the in vivo study, it was found that the injection of .... / Mestre