Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

O fato da acupuntura ser atualmente considerada eficaz no tratamento de muitos processos patológicos e do fígado ser um órgão alvo de muitas enfermidades tanto em animais como em seres humanos, motivou a realização deste estudo que tem por objetivo verificar o efeito da eletroacupuntura durante a progressão de lesões hepáticas e o seu relacionamento com o funcionamento do órgão através da análise concomitante de marcadores sanguíneos de lesões hepáticas (MSLH). O trabalho foi realizado em ratos albinos (Wistar), machos, com um peso aproximado de 250g, identificados e distribuídos em 7 lotes (CP, CT, CI, E36, E36s, BP6, BP6s), N= 10. Os animais dos lotes: CP, CT e CI foram usados como controle; CP na determinação dos MSLH: alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), - glutamil transferase (GGT), fosfatase alcalina (ALPK), albumina (ALB), proteína total (TP) e bilirrubina total; CT cujos animais receberam apenas o agente hepatotóxico tioacetamida (25 mg/100g) por via intraperitoneal três vezes por semana, durante 7 semanas e o lote CI, no qual os animais, além dos mesmos procedimentos de CT, também foram submetidos ao anestésico usado no experimento (isoflurano) pelo tempo de 20 minutos, objetivando analisar se esse anestésico teve alguma influência nos resultados do trabalho. Quanto aos demais grupos, E36 recebeu os mesmos procedimentos de CI e seus componentes foram tratados com eletroacupuntura no ponto Zusanli (E-36). E36s recebeu procedimentos similares aos de E36, porém a eletroestimulação foi aplicada em um não-ponto de acupuntura (E36 Sham) localizado próximo ao E36 verdadeiro. Os animais de BP6 tiveram os mesmos procedimentos de E36 diferindo somente na eletroacupuntura, que foi aplicada no ponto Sanyinjiao (BP-6). No lote BP6s os procedimentos foram os mesmos realizados em BP6, porém a eletroestimulação foi realizada em um nãoponto de acupuntura (BP6 Sham) localizado próximo ao ponto BP6 verdadeiro. Numa etapa seguinte, os animais dos nove grupos, tiveram seus fígados coletados para estudo histológico, tendo sido comparado os parâmetros bioquímicos obtidos, com objetivo de analisar se as alterações morfológicas e funcionais dos fígados tiveram influência da eletroacupuntura. Resultados: Os MSLH apresentaram como resultados: marcador ALB nos lotes: CP (2,97±0,3529) com CI(2,46±0,3134) e marcador TP nos lotes CP (6,53±0,2452) com CI(5,73±0,4057) provando haver interferência do isoflurano; marcador ALB nos lotes CI com BP6 (2,84±0,2675) e BP6 com E36s (2,4±0,2828), marcador ALT nos lotes CI com BP6 e BP6 com E36s e marcador AST nos lotes BP6 com E36s, todos provando e eficácia do ponto de acupuntura BP6. Os resultados histológicos confirmaram a atuação da tioacetamida (TAA) nos animais (exceto os do lote CP), através das seguintes lesões: inflamação focal, apoptose, necrose em saca-bocado (Piecemeal-necrosis), necrose e inflamação portal, para as análises em Hematoxilina-Eosina e expansão fibrosa e pontes de colágeno para as colorações em Picrossirius. Essas lesões foram achadas nos lotes: CT, CI, E36s, BP6s, E36 e BP6, porém, nos dois últimos ocorreram em menor grau indicando a atuação de eletroacupuntura sobre a morfologia hepática. / The fact o acupuncture have being considered an efficient method to treat lots of diseases and, being the liver, in men and animals, a common susceptible organ, this research was inspired to verify the electroacupuncture effect in hepatic lesion progression and its relationship with the liver performance at the same time that sanguinenous hepatic lesions markers (MSLH) was analysed. Each one identified, male wistar rats arround 250g was ditribucted in 7 (seven) groups, N=10: CP, CT, CI, ST36, ST36s, SP6 and SP6s. The first three was control-groups: CP to be these MSLH reference: alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), gamma-glutamyl transpeptidase (GGT), alkaline phosphatase (ALKP), albumin.(ALB), total protein (TP) and total bilirubin (TB); CT had the animals receiving only the hepatotoxic agent thioacetamide (25mg/100g) interperitoneal pathway, 3 (three) a week, for 7 (seven) weeks and CI had the same last proceedment increased for 20 minutes in isoflurane anesthetic to verify if interferences occures or not. About the others groups, we had ST36 receiving the same CI proceedments and treated by Zusanli (St-36) electroacupuncture point; ST36s again, but in a false-point (Sham ST36) next the real one. Groups SP6 and SP6s had the analogous treatment to points Sanyinjiao (SP-6) and its no-point. The next step was collect the nine groups livers and study them histologically. They was compared with CP references to mesuere some probable electroacupuncture influence in morphological and functional hepatic processes. MSLH results was: ALB in groups CP (2,97±0,3529) with CI (2,46±0,3134) and sanguinenous marker TP in groups CP (6,53±0,2452) with CI (5,73±0,4057), proving isoflurane interference; ALB in gropus CI with SP6 (2,84±0,2675) and in gropus SP6 with ST36s (2,4±0,2828), sanguinenous marker ALT in groups CI with SP6 and in groups SP6 with ST36 and sanguinenous marker AST in groups SP6 with ST36s, all of them proving the SP6 electroacupuncture point efficacy. The histological results conffirmed thioacetamide (TAA) actuation in animals (except group CP), through these lesions: focalized inflammation, apoptosis, piecemeal-necrosis, necrosis and portal-inflammation to hematoxylin and eosin analysis and fibrosis expansion and collagen bridges to Picrosirius colorations. These lesions was discovered in groups CT, CI, ST36s, SP6s, ST36 and SP6s. However, in the last two group was discovered less then the others, indicating electroacupuncture efficience in hepatic morphology.

A cirrose é caracterizada por fibrose e por nódulos regenerativos que resultam na desorganização da arquitetura tecidual, sendo considerado um estágio irreversível. A administração de fatores hepatotróficos exógenos (FHE) poderia estimular a proliferação celular de células hepáticas e reduzir a cirrose induzida em ratos. Deste modo, os FHE atuariam na remodelação da matriz extracelular (ECM). Os objetivos desse trabalho foram avaliar os efeitos dos FHE em ratos cirróticos induzidos experimentalmente por tioacetamida. Foram realizadas análises histopatológicas, imunoistoquímica para BrdU, mensuração de colágeno, microscopia eletrônica de varredura, análises bioquímicas de função hepática e avaliação da expressão gênica de colágeno &alpha;1, TGF&beta;1, TIMP I, MMP 2 e Plau, por PCR em tempo real. Após administração de FHE obteve-se diminuição da expressão gênica dos genes fibrogênicos: colágeno&alpha;1, TGF&beta;1, TIMP I e MMP 2. Durante a remodelação da ECM foram observadas melhoras morfofuncionais, com diminuição do número de nódulos regenerativos parenquimais, diminuição da espessura dos septos fibrosos e reaparecimento de veias centrolobulares. Foi observado aumento do peso e volume do fígado dos ratos, assim como aumento na relação fígado/carcaça. Os animais tratados com FHE apresentaram redução de 29,62% do colágeno parenquimal total, quando comparados com sua própria biópsia antes do tratamento. Animais não submetidos ao tratamento com FHE tiveram um acréscimo de 8,7% de colágeno. Os índices de função hepática revelaram decréscimo significante nos níveis de gamaglutamiltranspeptida (GGT), alanina aminotransferase e aspartato aminotransferase. Desta forma, os FHE atuaram na remodelação da matriz extracelular hepática em fígados cirróticos pela diminuição da expressão de genes fibrogênicos e não necessariamente pelo aumento da expressão de genes fibrolíticos. Ademais, animais cirróticos apresentaram em seu fígado e intestino progranulina, um novo fator de crescimento. Propomos, dessa forma, a utilizalção da progranulina como um possível marcador clínico e alvo terapêutico para doenças hepáticas. / Cirrhosis is characterized by fibrosis and regenerative nodules, which result in the disorganization of the hepatic architecture, being considered an irreversible situation. The administration of exogenous hepatotrophic factors (EHF) could stimulate hepatic regeneration in hepatocytes cells and reduce the cirrhosis induced in rats. The aim of this work was to evaluate the effect of EHF in rat cirrhosis induced experimentally by thioacetamide. It was carried out histopathologics analysis; BrdU imunoperoxidase, collagen measurement, scanning electron microscopy; biochemical analysis for hepatic function and analysis on genic expression for collagen &alpha;1, TGF&beta; 1, TIMP I, MMP 2, and Plau by real time PCR. After the EHF administration, it was observed a reduction in the expression of fibrogenics genes as: collagen&alpha;1, TGF&beta;1, TIMP I and MMP 2. During the extracellular matrix (ECM) remodelation morphofuntional improvements were observed, with decrease of regenerative nodules and fibrous septs thickness as well as reappearance of central vein. It was observed increase in liver weight, volume and in the relation liver/carcass. The animals treated with EHF had a reduction of 29.62% in the total collagen when compared with their own biopsy before treatment, while the non-treated animals had an increase of 8,7%. The index of hepatic functions had significant improvement in the levels of gamaglutamiltranspeptida (GGT), alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase. Therefore, the EHF acts on the extracellular matrix remodelation though reduction of fibrogenics gene expression and not necessarily by fibrolitics genes expression increase. In addiction, we have found progranulin, a new growth factor, in liver and intestine of cirrhotic animals. Hence, we propose the utilization of progranulin as a clinical marker and a therapeutic target for hepatic deseases.

A baixa sensibilidade dos animais à droga e a função hepática pouco alterada são as principais dificuldades para o desenvolvimento da cirrose hepática experimental. A proposta deste trabalho foi aprimorar o modelo de cirrose por injeção intraperitoneal de tioacetamida (TAA) a fim de reduzir a adaptação dos animais ao fármaco. Foram utilizados 5 grupos de fêmeas de ratos Wistar: A (200 mg TAA/kg); B (aumento de 20% aos 48 dias); C (aumento de 10% a cada 24 dias); D (aumento de 15% a cada 24 dias); E (solução salina). Os animais foram injetados 3 vezes por semana durante 14 semanas. Foram realizadas coletas sanguíneas, por punção cardíaca, no início, no final do experimento e antes dos aumentos de dose, para análise dos marcadores de função hepática. A avaliação comportamental foi efetuada pelo método do labirinto em cruz elevado (LCE). Amostras de fígado foram colhidas e submetidas ao processamento para microscopia de luz. Os animais tratados com TAA apresentaram piloereção, icterícia e cromodacriorréia. Os testes do LCE demonstraram estresse e/ou ansiedade nesses animais. Os fígados cirróticos apresentaram nódulos regenerativos e lesões hemorrágicas na superfície. O ganho de peso foi semelhante entre os grupos tratados, porém, inferior ao do grupo E. Os danos de função hepática foram mais acentuados nos grupos em que houve aumento de dose, entretanto, a mortalidade do grupo D foi elevada (44%). O tratamento com TAA levou ao desenvolvimento de cirrose com formação de nódulos regenerativos circundados por septos fibrosos e desarranjo da arquitetura hepática. A deposição de colágeno foi maior nos grupos B e C. O grupo D apresentou quantidade de colágeno semelhante a do grupo A. O exame histopatológico demonstrou intensa proliferação de células ovais e hiperplasia de ductos biliares com produção de muco ácido. Foi observada presença de hemossiderina, hepatócitos balonizados, lesões nucleares e células inflamatórias. A administração de TAA provocou ainda o desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas, sugerindo possível efeito carcinogênico dessa substância. Os resultados demonstraram que os grupos B e C foram os mais eficazes no desenvolvimento da cirrose experimental. O grupo D, apesar do aumento maior na dose, apresentou resultados similares aos do grupo A (dose constante) e alta mortalidade, selecionando animais resistentes à droga. Assim, recomenda-se o modelo de indução do grupo B por apresentar menor mortalidade (5%), menor influência no aspecto emocional e quadro cirrótico tão grave quanto o dos animais do grupo C. / The low sensitivity of animals to drugs and the lack of changes in liver function are the main difficulties for the development of experimental liver cirrhosis. The aim of this study was improving the model of cirrhosis by intraperitoneal injection of thioacetamide (TAA) to reduce the animal adaptation to the drug. We used 5 groups of female Wistar rats: A (200 mg TAA/kg), B (increase of 20% to 48 days), C (increase of 10% every 24 days), D (increase of 15% every 24 days), E (saline). The animals were injected 3 times a week for 14 weeks. Blood samples were collected by cardiac puncture at the start and at the end of the experiment as well as before each dose increment, for analysis of markers of liver function. The behavioral assessment was done by the method of elevated plus-maze. Samples of liver were collected and processed to light microscopy. The animals treated with TAA showed piloerection, jaundice and chromodacryorrhea. Behavioral test showed stress and/or anxiety in these animals. The liver cirrhosis showed regenerative nodules and hemorrhagic lesions on the surface. Weight gain was similar among the groups treated, however, all of them were smaller than those of group E. The damage of the liver function was more pronounced in groups where the dose was increased over the experimental period, however, the mortality of group D was higher (44%). Treatment with TAA led to the development of cirrhosis with formation of regenerative nodules surrounded by fibrous septa and hepatic architecture disruption. The deposition of collagen was higher in groups B and C, whereas group D was similar to group A. Histopathologic evaluation showed intense proliferation of oval cells and bile duct hyperplasia, with production of acid mucin. It was observed the presence of hemosiderin, hepatocyte ballonization, nuclear lesions and inflammatory cells. The administration of TAA led to the development of neoplastic lesions, suggesting possible carcinogenic effect of this substance. The results showed that the treatment of groups B and C were most effective in the development of experimental cirrhosis. Despite that animals of group D received an increment in their TAA dose, their results seems similar to those of group A but with high mortality, probably because the treatment selected resistant animals to the drug. Therefore, it is recommended the model of induction of group B due to the lower mortality (5%), less influence on the emotional aspect and development of cirrhosis as severe as that the rats of group C.

A ocorrência de lesão hepática induzida por drogas representa um problema de saúde crescente e um desafio para os médicos, órgãos reguladores e a indústria farmacêutica, não só devido à sua potencial gravidade, mas também porque muitas vezes é diagnosticada de forma imprecisa, e outras vezes não são declaradas. Estudos sobre o metabolismo de drogas, juntamente com avaliações patológicas e histológicas, fornecem conjuntos de dados importantes para ajudar a compreender mecanismos subjacentes à hepatotoxicidade da droga. Neste estudo avaliamos a participação das espécies reativas de oxigênio (EROs) e do estresse oxidativo, bem como o envolvimento da sinalização intracelular relacionada ao processo de apoptose, através da ativação de membros da família Bcl-2 (Bcl-2 e Bax) e da família das MAPKs (p-ERK1/2), na hepatotoxicidade induzida por tioacetamida (TAA). Ratos machos Wistar foram divididos em 4 grupos experimentais: CO (controle); CO + Q (controle + quercetina); TAA (tioacetamida) e TAA + Q (tioacetamida + quercetina). Nos grupos que receberam TAA, administrou-se duas doses de 350 mg/Kg de TAA em ratos, em intervalo de 8 horas e, 2 horas após a segunda dose, iniciou-se o tratamento com quercetina (50 mg/Kg). Os grupos tratados com quercetina receberam o flavonóide intraperitonealmente por 4 dias, quando os animais foram mortos para análises de enzimas séricas (AST e ALT) e análises morfológicas, bioquímicas e moleculares de amostras de fígado. Os grupos que receberam TAA mostraram um aumento significativo nas aminotransferases séricas acompanhado de alterações morfológicas, com presença de necrose perivenular em absorção, infiltrado inflamatório com linfócitos e macrófagos e eventuais células gigantes multinucleadas. Além disso, estes animais apresentaram aumento da lipoperoxidação e dos metabólitos de óxido nítrico (nitritos e nitratos) no fígado, com alterações na atividade das enzimas antioxidantes e na expressão das enzimas na apoptose das células hepáticas, Bax, Bcl-2 e pERK1/2. O tratamento com quercetina por 4 dias mostrou níveis séricos significativamente reduzidos de AST e ALT, e as alterações morfológicas foram amplamente prevenidas. A administração de quercetina mostrou também uma redução da lipoperoxidação hepática, bem como dos níveis de metabólitos de óxido nítrico. Também observou-se retorno no equilíbrio das defesas antioxidantes e aumento das enzimas antiapoptóticas em relação às pró-apoptóticas. Os resultados obtidos sugerem efeito protetor da quercetina em ratos com lesão hepática induzida por TAA. / Drug-induced liver injury is an increasing health problem and a challenge for physicians, regulatory bodies and the pharmaceutical industry, not only because of its potential severity and elusive pathogenesis but also because it is often inaccurately diagnosed, commonly missed entirely and more often not reported. Drug metabolism studies, together with pathologic and histologic evaluation, provide critical data sets to help understand mechanisms underlying drug-related hepatotoxicity. We evaluated the involvement of reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress, as well as the intracellular apoptosis via activation of the Bcl-2 (Bcl-2 and Bax) and MAPK (p-ERK 1/2) signaling pathway on the thioacetamide (TAA)-induced hepatotoxicity. Male Wistar rats were divided into four groups: CO (control), CO + Q (control + quercetin), TAA (thioacetamide) and TAA + Q (thioacetamide + quercetin). TAA group was administered intraperitoneally (i.p.) two doses of TAA (350 mg / kg) in the range of 8 hours, while TAA + Q group was administered i.p. quercetin (50 mg / kg), 2h after administration of thioacetamide (50 mg / kg). This group received flavonoid quercetin during 4 days, when animals were killed for analysis of serum enzymes (AST and ALT) and morphological, biochemical and molecular study of liver samples. The group receiving TAA showed a significant increase in serum aminotransferases accompanied by morphological changes, with extensive necrosis and inflammatory infiltration, mainly in the centrilobular region and portal tract. Moreover, these animals showed increased lipid peroxidation and nitric oxide metabolites (nitrites and nitrates) in the liver and changes in antioxidant enzyme activity, as wel as expression of apoptotic enzymes in the liver cells (Bax, Bcl-2 and pERK1 / 2). After 4 days treatment with quercetin, rats showed significantly reduced AST and ALT serum levels, with the morphological changes largely prevented. The administration of quercetin also showed a reduction of lipid peroxidation and in the levels of nitric oxide metabolites. It was observed a balance between antioxidant defense systems and production of ROS and increased ratio of anti- versus pro-apoptotic enzymes. The results suggest a protective effect of quercetin in rats with TAA-induced liver disease.

A ocorrência de lesão hepática induzida por drogas representa um problema de saúde crescente e um desafio para os médicos, órgãos reguladores e a indústria farmacêutica, não só devido à sua potencial gravidade, mas também porque muitas vezes é diagnosticada de forma imprecisa, e outras vezes não são declaradas. Estudos sobre o metabolismo de drogas, juntamente com avaliações patológicas e histológicas, fornecem conjuntos de dados importantes para ajudar a compreender mecanismos subjacentes à hepatotoxicidade da droga. Neste estudo avaliamos a participação das espécies reativas de oxigênio (EROs) e do estresse oxidativo, bem como o envolvimento da sinalização intracelular relacionada ao processo de apoptose, através da ativação de membros da família Bcl-2 (Bcl-2 e Bax) e da família das MAPKs (p-ERK1/2), na hepatotoxicidade induzida por tioacetamida (TAA). Ratos machos Wistar foram divididos em 4 grupos experimentais: CO (controle); CO + Q (controle + quercetina); TAA (tioacetamida) e TAA + Q (tioacetamida + quercetina). Nos grupos que receberam TAA, administrou-se duas doses de 350 mg/Kg de TAA em ratos, em intervalo de 8 horas e, 2 horas após a segunda dose, iniciou-se o tratamento com quercetina (50 mg/Kg). Os grupos tratados com quercetina receberam o flavonóide intraperitonealmente por 4 dias, quando os animais foram mortos para análises de enzimas séricas (AST e ALT) e análises morfológicas, bioquímicas e moleculares de amostras de fígado. Os grupos que receberam TAA mostraram um aumento significativo nas aminotransferases séricas acompanhado de alterações morfológicas, com presença de necrose perivenular em absorção, infiltrado inflamatório com linfócitos e macrófagos e eventuais células gigantes multinucleadas. Além disso, estes animais apresentaram aumento da lipoperoxidação e dos metabólitos de óxido nítrico (nitritos e nitratos) no fígado, com alterações na atividade das enzimas antioxidantes e na expressão das enzimas na apoptose das células hepáticas, Bax, Bcl-2 e pERK1/2. O tratamento com quercetina por 4 dias mostrou níveis séricos significativamente reduzidos de AST e ALT, e as alterações morfológicas foram amplamente prevenidas. A administração de quercetina mostrou também uma redução da lipoperoxidação hepática, bem como dos níveis de metabólitos de óxido nítrico. Também observou-se retorno no equilíbrio das defesas antioxidantes e aumento das enzimas antiapoptóticas em relação às pró-apoptóticas. Os resultados obtidos sugerem efeito protetor da quercetina em ratos com lesão hepática induzida por TAA. / Drug-induced liver injury is an increasing health problem and a challenge for physicians, regulatory bodies and the pharmaceutical industry, not only because of its potential severity and elusive pathogenesis but also because it is often inaccurately diagnosed, commonly missed entirely and more often not reported. Drug metabolism studies, together with pathologic and histologic evaluation, provide critical data sets to help understand mechanisms underlying drug-related hepatotoxicity. We evaluated the involvement of reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress, as well as the intracellular apoptosis via activation of the Bcl-2 (Bcl-2 and Bax) and MAPK (p-ERK 1/2) signaling pathway on the thioacetamide (TAA)-induced hepatotoxicity. Male Wistar rats were divided into four groups: CO (control), CO + Q (control + quercetin), TAA (thioacetamide) and TAA + Q (thioacetamide + quercetin). TAA group was administered intraperitoneally (i.p.) two doses of TAA (350 mg / kg) in the range of 8 hours, while TAA + Q group was administered i.p. quercetin (50 mg / kg), 2h after administration of thioacetamide (50 mg / kg). This group received flavonoid quercetin during 4 days, when animals were killed for analysis of serum enzymes (AST and ALT) and morphological, biochemical and molecular study of liver samples. The group receiving TAA showed a significant increase in serum aminotransferases accompanied by morphological changes, with extensive necrosis and inflammatory infiltration, mainly in the centrilobular region and portal tract. Moreover, these animals showed increased lipid peroxidation and nitric oxide metabolites (nitrites and nitrates) in the liver and changes in antioxidant enzyme activity, as wel as expression of apoptotic enzymes in the liver cells (Bax, Bcl-2 and pERK1 / 2). After 4 days treatment with quercetin, rats showed significantly reduced AST and ALT serum levels, with the morphological changes largely prevented. The administration of quercetin also showed a reduction of lipid peroxidation and in the levels of nitric oxide metabolites. It was observed a balance between antioxidant defense systems and production of ROS and increased ratio of anti- versus pro-apoptotic enzymes. The results suggest a protective effect of quercetin in rats with TAA-induced liver disease.

A baixa sensibilidade dos animais à droga e a função hepática pouco alterada são as principais dificuldades para o desenvolvimento da cirrose hepática experimental. A proposta deste trabalho foi aprimorar o modelo de cirrose por injeção intraperitoneal de tioacetamida (TAA) a fim de reduzir a adaptação dos animais ao fármaco. Foram utilizados 5 grupos de fêmeas de ratos Wistar: A (200 mg TAA/kg); B (aumento de 20% aos 48 dias); C (aumento de 10% a cada 24 dias); D (aumento de 15% a cada 24 dias); E (solução salina). Os animais foram injetados 3 vezes por semana durante 14 semanas. Foram realizadas coletas sanguíneas, por punção cardíaca, no início, no final do experimento e antes dos aumentos de dose, para análise dos marcadores de função hepática. A avaliação comportamental foi efetuada pelo método do labirinto em cruz elevado (LCE). Amostras de fígado foram colhidas e submetidas ao processamento para microscopia de luz. Os animais tratados com TAA apresentaram piloereção, icterícia e cromodacriorréia. Os testes do LCE demonstraram estresse e/ou ansiedade nesses animais. Os fígados cirróticos apresentaram nódulos regenerativos e lesões hemorrágicas na superfície. O ganho de peso foi semelhante entre os grupos tratados, porém, inferior ao do grupo E. Os danos de função hepática foram mais acentuados nos grupos em que houve aumento de dose, entretanto, a mortalidade do grupo D foi elevada (44%). O tratamento com TAA levou ao desenvolvimento de cirrose com formação de nódulos regenerativos circundados por septos fibrosos e desarranjo da arquitetura hepática. A deposição de colágeno foi maior nos grupos B e C. O grupo D apresentou quantidade de colágeno semelhante a do grupo A. O exame histopatológico demonstrou intensa proliferação de células ovais e hiperplasia de ductos biliares com produção de muco ácido. Foi observada presença de hemossiderina, hepatócitos balonizados, lesões nucleares e células inflamatórias. A administração de TAA provocou ainda o desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas, sugerindo possível efeito carcinogênico dessa substância. Os resultados demonstraram que os grupos B e C foram os mais eficazes no desenvolvimento da cirrose experimental. O grupo D, apesar do aumento maior na dose, apresentou resultados similares aos do grupo A (dose constante) e alta mortalidade, selecionando animais resistentes à droga. Assim, recomenda-se o modelo de indução do grupo B por apresentar menor mortalidade (5%), menor influência no aspecto emocional e quadro cirrótico tão grave quanto o dos animais do grupo C. / The low sensitivity of animals to drugs and the lack of changes in liver function are the main difficulties for the development of experimental liver cirrhosis. The aim of this study was improving the model of cirrhosis by intraperitoneal injection of thioacetamide (TAA) to reduce the animal adaptation to the drug. We used 5 groups of female Wistar rats: A (200 mg TAA/kg), B (increase of 20% to 48 days), C (increase of 10% every 24 days), D (increase of 15% every 24 days), E (saline). The animals were injected 3 times a week for 14 weeks. Blood samples were collected by cardiac puncture at the start and at the end of the experiment as well as before each dose increment, for analysis of markers of liver function. The behavioral assessment was done by the method of elevated plus-maze. Samples of liver were collected and processed to light microscopy. The animals treated with TAA showed piloerection, jaundice and chromodacryorrhea. Behavioral test showed stress and/or anxiety in these animals. The liver cirrhosis showed regenerative nodules and hemorrhagic lesions on the surface. Weight gain was similar among the groups treated, however, all of them were smaller than those of group E. The damage of the liver function was more pronounced in groups where the dose was increased over the experimental period, however, the mortality of group D was higher (44%). Treatment with TAA led to the development of cirrhosis with formation of regenerative nodules surrounded by fibrous septa and hepatic architecture disruption. The deposition of collagen was higher in groups B and C, whereas group D was similar to group A. Histopathologic evaluation showed intense proliferation of oval cells and bile duct hyperplasia, with production of acid mucin. It was observed the presence of hemosiderin, hepatocyte ballonization, nuclear lesions and inflammatory cells. The administration of TAA led to the development of neoplastic lesions, suggesting possible carcinogenic effect of this substance. The results showed that the treatment of groups B and C were most effective in the development of experimental cirrhosis. Despite that animals of group D received an increment in their TAA dose, their results seems similar to those of group A but with high mortality, probably because the treatment selected resistant animals to the drug. Therefore, it is recommended the model of induction of group B due to the lower mortality (5%), less influence on the emotional aspect and development of cirrhosis as severe as that the rats of group C.

A ocorrência de lesão hepática induzida por drogas representa um problema de saúde crescente e um desafio para os médicos, órgãos reguladores e a indústria farmacêutica, não só devido à sua potencial gravidade, mas também porque muitas vezes é diagnosticada de forma imprecisa, e outras vezes não são declaradas. Estudos sobre o metabolismo de drogas, juntamente com avaliações patológicas e histológicas, fornecem conjuntos de dados importantes para ajudar a compreender mecanismos subjacentes à hepatotoxicidade da droga. Neste estudo avaliamos a participação das espécies reativas de oxigênio (EROs) e do estresse oxidativo, bem como o envolvimento da sinalização intracelular relacionada ao processo de apoptose, através da ativação de membros da família Bcl-2 (Bcl-2 e Bax) e da família das MAPKs (p-ERK1/2), na hepatotoxicidade induzida por tioacetamida (TAA). Ratos machos Wistar foram divididos em 4 grupos experimentais: CO (controle); CO + Q (controle + quercetina); TAA (tioacetamida) e TAA + Q (tioacetamida + quercetina). Nos grupos que receberam TAA, administrou-se duas doses de 350 mg/Kg de TAA em ratos, em intervalo de 8 horas e, 2 horas após a segunda dose, iniciou-se o tratamento com quercetina (50 mg/Kg). Os grupos tratados com quercetina receberam o flavonóide intraperitonealmente por 4 dias, quando os animais foram mortos para análises de enzimas séricas (AST e ALT) e análises morfológicas, bioquímicas e moleculares de amostras de fígado. Os grupos que receberam TAA mostraram um aumento significativo nas aminotransferases séricas acompanhado de alterações morfológicas, com presença de necrose perivenular em absorção, infiltrado inflamatório com linfócitos e macrófagos e eventuais células gigantes multinucleadas. Além disso, estes animais apresentaram aumento da lipoperoxidação e dos metabólitos de óxido nítrico (nitritos e nitratos) no fígado, com alterações na atividade das enzimas antioxidantes e na expressão das enzimas na apoptose das células hepáticas, Bax, Bcl-2 e pERK1/2. O tratamento com quercetina por 4 dias mostrou níveis séricos significativamente reduzidos de AST e ALT, e as alterações morfológicas foram amplamente prevenidas. A administração de quercetina mostrou também uma redução da lipoperoxidação hepática, bem como dos níveis de metabólitos de óxido nítrico. Também observou-se retorno no equilíbrio das defesas antioxidantes e aumento das enzimas antiapoptóticas em relação às pró-apoptóticas. Os resultados obtidos sugerem efeito protetor da quercetina em ratos com lesão hepática induzida por TAA. / Drug-induced liver injury is an increasing health problem and a challenge for physicians, regulatory bodies and the pharmaceutical industry, not only because of its potential severity and elusive pathogenesis but also because it is often inaccurately diagnosed, commonly missed entirely and more often not reported. Drug metabolism studies, together with pathologic and histologic evaluation, provide critical data sets to help understand mechanisms underlying drug-related hepatotoxicity. We evaluated the involvement of reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress, as well as the intracellular apoptosis via activation of the Bcl-2 (Bcl-2 and Bax) and MAPK (p-ERK 1/2) signaling pathway on the thioacetamide (TAA)-induced hepatotoxicity. Male Wistar rats were divided into four groups: CO (control), CO + Q (control + quercetin), TAA (thioacetamide) and TAA + Q (thioacetamide + quercetin). TAA group was administered intraperitoneally (i.p.) two doses of TAA (350 mg / kg) in the range of 8 hours, while TAA + Q group was administered i.p. quercetin (50 mg / kg), 2h after administration of thioacetamide (50 mg / kg). This group received flavonoid quercetin during 4 days, when animals were killed for analysis of serum enzymes (AST and ALT) and morphological, biochemical and molecular study of liver samples. The group receiving TAA showed a significant increase in serum aminotransferases accompanied by morphological changes, with extensive necrosis and inflammatory infiltration, mainly in the centrilobular region and portal tract. Moreover, these animals showed increased lipid peroxidation and nitric oxide metabolites (nitrites and nitrates) in the liver and changes in antioxidant enzyme activity, as wel as expression of apoptotic enzymes in the liver cells (Bax, Bcl-2 and pERK1 / 2). After 4 days treatment with quercetin, rats showed significantly reduced AST and ALT serum levels, with the morphological changes largely prevented. The administration of quercetin also showed a reduction of lipid peroxidation and in the levels of nitric oxide metabolites. It was observed a balance between antioxidant defense systems and production of ROS and increased ratio of anti- versus pro-apoptotic enzymes. The results suggest a protective effect of quercetin in rats with TAA-induced liver disease.