Orientadores: Ricardo de Lima Zollner, Jose Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T15:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zantut-Wittmann_DeniseEngelbrecht_D.pdf: 4801105 bytes, checksum: ea1e7d96c898af34bc498dbacdc9b3c8 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O trabalho teve o intuito de estudar aspectos séricos e morfológicos na relação entre a membrana basal do folículo tiroideano e doença tiroideana auto-imune, procurando elementos que possam acrescentar subsidios para o entendimento de sua fisiopatologia. O estudo sorológico de pacientes com diversas alterações tiroideanas foi realizado através de eletroforese de transferência seguida de "immunoblot", com a finalidade de detectar anticorpos anticolágeno IV e antil~rninina, dois dos elementos principais da membrana basal. Tal procedimento possibilitou a detecção de anticorpos reativos a várias frações do colágeno IV encontrados apenas na doença de Basedow-Graves. Da mesma forma, esta especificidade pôde ser verificada para os anticorpos antilarninina existentes nos soros destes pacientes, através do reconhecimento da fração reativa de 57 kDa da estrutura da larninina. . Estes anticorpos estariam envolvidos na fisiopatologia dos mecanismos auto-imunes da doença tiroideana e não somente com o estado hipermetabólico devido à tirotoxicose, pois não ocorreram em hipertiroidismo de origem tumoral benigna. Assim, o estudo morfológico através de imuno-histoquimica, especificamente do colágeno IV e laminina J poderia elucidar alguns aspectos sobre a existência de anormalidades da membrana basal folicular na doença tiroideana auto-imune. Entretanto, não houve a demonstração de alterações importantes da membrana tanto na doença de Basedow-Graves quanto na tiroidite de Hashimoto, especialmente interrupção, inclusive em áreas de intenso infiltrado linfoplasmocitário. Foram vis11:1117.ados locais de adelgaçamento da membrana, sobretudo na doença de Graves, talvez flutos do hipermetabolismo, que liberaria colágeno IV e Jarn1n1na para a circulação, e conseqüentemente, induziria a produção de seus respectivos anticorpos.Desta forma, o anticorpo anticolágeno N poderia tratar¬se não apenas de reflexo do estado hipermetabólico, mas integrante do processo fisiopatológico da doença de Graves. De modo semelhante, nossos resultados sugerem que a tração de 57 kDa da laminina seja um provável marcador sorológico para a Doença de Basedow-Graves, contudo existe a necessidade da ampliação do estudo para que possamos relacioná-los ao estágio da doença / Abstract: The purpose of the present study is to evaluate serological and morphologic aspects concerning the basement membrane (BM) of the thyroid follicle in autoimmune thyroid disease (ATD). In this way, new elements for ~ better understanding of its pathophisiology could be suggested. In order to detect antibodies to collagen IV and laminin, two major components of the BM, serological tests of patients with the diagnosis of different thyroid diseases were performed by the transfer eletrophoresis method followed by immunoblot. Only in the Basedow-Graves' disease antibodies,' to various collagen IV fractions were detected. Also, antibodies to laminin were found in these patients' sera, detected by recognition of the 57 kDa fraction of laminin. These antibodies are probably involved in the pathogenesis of ATD and are not just consequence of hypermetabolic states due to hyperthyroidism, since no antibodies could be detected in thyroid hyperfunction caused by benign thyroid neoplasia. Production of such antibodies could be atributed to or cause BM alterations as a consequence of disturbed immunological tolerance to their components, which are otherwise recognized as self, and induction of immunologic response. If this is true, immunohistochemical staining of collagen IV an Iaminin could be useful in detecting follicIe BM disruption in A TD. Our results do not corroborate this hypothesis, since we were not able to find BM alterations in thyroid diseases, even in areas of heavy lymphoplasmatic inflamation. Finding of focal BM thinning, mainly in Graves' disease, could be preliminarly explained by hypermetabolism, delivery of collagen IV and laminin to the circulation and induction of antibody production against them. This hypothesis, however, is not corroborated by the findings in toxicadenoma, another cause of hyperthyroidism, in wich BM thinning is not present. In Hashimoto thyroiditis, in disagreement with previously reported data, no disruption, nor significant BM thinnin g were seen. The pathogenetic role of these antibodies is not yet clear, but it does not seem that they cause follicular BM damage. Further investigations are needed to characterize biologically such antibodies and to understand their relationship to follicular BM in A TD / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Ciências Médicas

O excesso de iodo inibe a proliferação celular e secreção hormonal, enquanto retarda os efeitos oncogênicos da ativação de RET/PTC3 na célula folicular tiroidiana. A mutação BRAF (T1799A) é a mais prevalente no câncer de tiroide, e modelo transgênico desenvolve câncer que progride para histotipo agressivo. Altos níveis de microRNAs (miRNAs) do cluster miR-17-92 estão associados a histotipos agressivos de câncer de tiroide e modulam a tradução de mRNAs alvo componentes de vias de sinalização oncogênicas. Neste estudo, avaliamos a influência da alta dose de iodo sobre miRNAs frente ativação do oncogene BRAF e seu efeito na biologia da célula folicular tiroidiana. A indução de BRAFT1799A ativa uma robusta expressão de miR-17-92 enquanto alta dose de iodo bloqueia este efeito na célula tiroidiana. miR-19 inibe a tradução de Smad4 e bloqueia a transdução do sinal de TGFb, efeito revertido pelo iodo. O iodo interfere na expressão de miR-17-92 por bloquear ativação da sinalização Notch induzida por BRAF. Estes resultados indicam que o iodo protege a célula folicular tiroidiana durante a indução de BRAFT1799A, revertendo a ativação dos miRNAs oncogênicos do cluster miR-17-92 e restaurando os níveis protéicos de Smad4 por interferir na via de sinalização Notch. / Iodine excess blocks cell proliferation and inhibits hormone synthesis, while delays oncogenic effects of RET/PTC3 activation in thyroid follicular cells. BRAF mutation (T1799A) is the most prevalent genetic alteration in thyroid cancer, and transgenic mice model for BRAF develops thyroid cancer that progress to aggressive histotypes. High levels of microRNAs (miRNAs) of miR-17-92 cluster are associated to aggressive thyroid cancer and modulate translation of target mRNAs in oncogenic signaling pathways. In this study, we evaluated the influence of high dose iodine in miRNAs under BRAF oncogene activation, and its effects in thyroid follicular cell biology. BRAF induction induces high expression of miR-17-92 while high dose iodine blocks this effect in thyroid follicular cells. miR-19 inhibits Smad4 translation and impairs TGFb signaling transduction, effect reverted by iodine. Iodine modulates miR-17-92 expression by interfering in BRAF-induced Notch signaling activation. These results indicate that iodine protects thyroid follicular cell during BRAF induction, reverting oncogenic miR-17-92 activation and restoring protein levels of Smad4 by Notch signaling modulation.

O excesso de iodo inibe a proliferação celular e secreção hormonal, enquanto retarda os efeitos oncogênicos da ativação de RET/PTC3 na célula folicular tiroidiana. A mutação BRAF (T1799A) é a mais prevalente no câncer de tiroide, e modelo transgênico desenvolve câncer que progride para histotipo agressivo. Altos níveis de microRNAs (miRNAs) do cluster miR-17-92 estão associados a histotipos agressivos de câncer de tiroide e modulam a tradução de mRNAs alvo componentes de vias de sinalização oncogênicas. Neste estudo, avaliamos a influência da alta dose de iodo sobre miRNAs frente ativação do oncogene BRAF e seu efeito na biologia da célula folicular tiroidiana. A indução de BRAFT1799A ativa uma robusta expressão de miR-17-92 enquanto alta dose de iodo bloqueia este efeito na célula tiroidiana. miR-19 inibe a tradução de Smad4 e bloqueia a transdução do sinal de TGFb, efeito revertido pelo iodo. O iodo interfere na expressão de miR-17-92 por bloquear ativação da sinalização Notch induzida por BRAF. Estes resultados indicam que o iodo protege a célula folicular tiroidiana durante a indução de BRAFT1799A, revertendo a ativação dos miRNAs oncogênicos do cluster miR-17-92 e restaurando os níveis protéicos de Smad4 por interferir na via de sinalização Notch. / Iodine excess blocks cell proliferation and inhibits hormone synthesis, while delays oncogenic effects of RET/PTC3 activation in thyroid follicular cells. BRAF mutation (T1799A) is the most prevalent genetic alteration in thyroid cancer, and transgenic mice model for BRAF develops thyroid cancer that progress to aggressive histotypes. High levels of microRNAs (miRNAs) of miR-17-92 cluster are associated to aggressive thyroid cancer and modulate translation of target mRNAs in oncogenic signaling pathways. In this study, we evaluated the influence of high dose iodine in miRNAs under BRAF oncogene activation, and its effects in thyroid follicular cell biology. BRAF induction induces high expression of miR-17-92 while high dose iodine blocks this effect in thyroid follicular cells. miR-19 inhibits Smad4 translation and impairs TGFb signaling transduction, effect reverted by iodine. Iodine modulates miR-17-92 expression by interfering in BRAF-induced Notch signaling activation. These results indicate that iodine protects thyroid follicular cell during BRAF induction, reverting oncogenic miR-17-92 activation and restoring protein levels of Smad4 by Notch signaling modulation.

No carcinoma papilífero de tiroide (CPT) ocorrem alterações na via MAPK (do inglês Mitogen-Activated Protein Kinase), sendo a mais frequente mutação a BRAFT1799A. A via MAPK é modulada pelo miRNA, como o let-7 que estão pouco expresso no CPT. A biogênese de let-7 é controlada por proteínas ligantes de RNA LIN28 que inibem o processamento das formas primária e precursora de let-7 (pri-let-7 e pre-let-7). Avaliamos a expressão gênica de LIN28, pri-let-7f, pre-let-7f e let-7f por rtPCR em tempo real, utilizando RNA total das linhagens TPC-1 e BCPAP de PTC e amostras tumorais de pacientes com CPT. A linhagem não tumoral Nthyori 3-1 foi utilizada para induzir LIN28. Observa-se redução de let-7f em 4 dos 5 pacientes analisados enquanto que LIN28A está aumentado em 2 pacientes com BRAFT1799A. Nota-se maior expressão de pri-let-7f em TPC-1 e menor expressão de pre-let-7f e let-7f. Observa-se maior expressão de LIN28A em TPC-1, enquanto que LIN28B está mais expresso em BCPAP com BRAFT1799A. A inibição de BRAFV600E em BCPAP diminui LIN28B e aumenta let-7f, enquanto que a indução de LIN28B reduz a expressão de let-7f. Concluímos que há relação inversa entre LIN28 e let-7f no CPT e LIN28 influencia a diminuição de let-7f podendo assim contribuir com tumorigênese tireoidiana. / In papillary thyroid cancer (PTC) changes in MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinase) pathway are common being BRAFT1799A mutation the most frequent alteration. MAPK pathway is modulated by miRNA such as let-7, an under-expressed miRNA in PTC. The RNA binding protein LIN28 controls let-7 biogenesis, blocking primary and precursor let-7 (pri-let-7 e pre-let-7) processing. We evaluated LIN28, pri-let-7f, pre-let-7f and let-7f gene expression by real time RTPCR using total RNA of human PTC sample and PTC cell lines TPC-1 and BCPAP. Non-tumoral cell line Nthyori 3-1 was used to evaluate LIN28B influence in let-7f. We observed decreased let-7f expression in 4 out of 5 PTC patients, and increased LIN28A in 2 patients with BRAFT1799A mutation. TPC-1 cells express higher levels of pri-let-7f while pre-let-7f and let-7f are less expressed. We noted that LIN28A is more expressed in TPC-1, while LIN28B is more expressed in BCPAP cells with BRAFT1799A. The inhibition of BRAFV600E in BCPAP decreases LIN28B and increases let-7f, while the induction of LIN28B in Nthyori 3-1 reduces let-7f expression. We conclude there is an inverse association between LIN28 and let-7f in PTC, and that LIN28 influences let-7f reduction which could contribute to thyroid tumorigenesis.