The theoretical part is focused on the preparation of the trans-resveratrol dimers, their occurrence in the plants and their isolation possibility with emphasis to trans-epsilon-viniferin. In the experimental part of master thesis the selected reagents, namely 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone, tetrachloro-1,4-benzoquinone, laccase and ferric chloride, were studied with the aim of the trans-resveratrol dimer preparation. Furthermore, the Fenton reaction and its modification was also studied. Last part of this thesis is devoted to the trans-epsilon-viniferin isolation from grape cane by chromatographic methods.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruna Carletto.pdf: 3521002 bytes, checksum: e937254e660e6d236bdba8d92c4b247c (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / Melanoma is a very lethal skin tumor and, when widespread, presents unfavorable prognosis. Therefore, new drugs and treatments are important to the search for more promising results. Treatment of this type of tumor surgery necessarily depend on having little effect on the supplementary chemotherapy. Studies have shown resveratrol as a drug that acts in different stages of carcinogenesis. Allied to this, modified release systems of drugs are being studied to improve unwanted features and optimize their actions. The aim of this study was to develop polymeric nanocapsules containing resveratrol and assess their potential antitumor in B16F10 melanoma strain. The nanocapsules of poly -caprolactone) (PCL) containing resveratrol were successfully prepared by interfacial deposition of preformedpolymer. All formulations showed encapsulation efficiency values suitable above 97%. Nanocapsules revealed spherical shape with smooth surface. Infrared Fourier transform spectra indicated no chemical interaction between the polymer and resveratrol after the nanoencapsulation. The analysis of X-ray diffraction showed that the process of nanoencapsulation led to an amorphisation of the system. Cell viability assays for neutral red and MTT confirmed that resveratrol-containing nanocapsules have cytotoxic effect on murine melanoma cells at concentrations of 300 and 100 micrometers. When analyzed the morphology of the cells treated with resveratrol free, it can be seen that they enter into the process of cell death by apoptosis. In the in vivo assay, the results demonstrated that treatment with resveratrol-containing nanocapsules led to a reduction in tumor volume of the mice in the groups treated with resveratrol and free controls. Treated animals also showed an increase in body mass suggesting that these animals had a better response to treatment compared to the control group. Histological analysis revealed an increase in necrotic area in the tumor and inflammation in the animals treated with the nanocapsules containing resveratrol and the treatment also led to the development of non-pulmonary hemorrhage and metastasis. These results indicate that the nanocapsules prepared from the PCL containing resveratrol have antiproliferative action front melanoma cells, with an interesting alternative in their treatment. / O melanoma é um tumor de pele muito letal e, quando disseminado, apresenta prognóstico pouco favorável. Por isso, novos fármacos e tratamentos são importantes para a busca de resultados mais promissores. O tratamento deste tipo de tumor depende necessariamente de intervenção cirúrgica tendo pouco resultado com a quimioterapia complementar. Estudos evidenciaram o resveratrol como um fármaco que atua em diversas etapas da carcinogênese. Aliado a isso, os sistemas de liberação modificada de fármacos estão sendo estudados para melhorar características indesejadas e otimizar suas ações. O principal objetivo deste trabalho foi desenvolver nanocápsulas poliméricas contendo resveratrol e avaliar o seu potencial antitumoral na linhagem de melanoma B16F10. As nanocápsulas de poli (ε-caprolactona) (PCL) contendo resveratrol foram preparadas com sucesso pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado. Todas as formulações apresentaram valores de eficiência de encapsulação adequados, superiores a 97%. As nanocápsulas revelaram formato esférico com superfície lisa. Os espectros de infravermelho com transformada de Fourier não indicaram nenhuma interação química entre o resveratrol e o polímero após a nanoencapsulação. As análises de difração de raios X demonstraram que o processo de nanoencapsulação levou a uma amorfização do sistema. Os ensaios de viabilidade celular por MTT e vermelho neutro confirmaram que as nanocápsulas contendo resveratrol possuem efeito citotóxico sobre as células de melanoma murino nas concentrações de 300 e 100 μM. Quando analisada a morfologia das células tratadas com resveratrol livre, pode-se observar que as mesmas entram em processo de morte celular por apoptose. No ensaio in vivo, os resultados demonstraram que o tratamento com as nanocápsulas contendo resveratrol levou a uma redução do volume tumoral dos camundongos em relação aos grupos tratados com resveratrol livre e os controles. Os animais tratados também apresentaram um aumento da massa corporal sugerindo que estes animais tiveram uma melhor resposta ao tratamento quando comparado ao grupo controle. A análise histológica revelou um aumento da área necrótica e da inflamação no tumor nos animais tratados com as nanocápsulas contendo resveratrol, e o tratamento também levou ao não desenvolvimento de hemorragia pulmonar e metástase. Esses resultados indicam que as nanocápsulas elaboradas a partir da PCL contendo resveratrol possuem ação antiproliferativa frente as células de melanoma, sendo uma alternativa interessante no seu tratamento.

Las especies vegetales están continuamente desafiadas por un extenso número de microorganismos patógenos en su ambiente natural, principalmente bacterias, hongos y virus. Las plantas cuentan con un amplio arsenal de mecanismos de defensa tanto constitutivos como inducibles frente a estos patógenos. Los mecanismos inducibles incluyen el estadillo oxidativo, muerte celular rápida y localizada, acumulación de fitoalexinas y la síntesis de proteínas relacionadas con la patogénesis (Proteínas PR). Centrándose en las fitoalexinas, estas son compuestos antimicrobianos de bajo peso molecular producidos por las plantas en respuesta a estrés biótico y abiótico. Las fitoalexinas poseen un amplio rango de propiedades antifúngicas en varias especies de plantas. Debido a esto, estos compuestos han sido objeto de numerosos estudios en los últimos 20 años. En la Vid, Vitis vinífera L., la respuesta mejor caracterizada y más frecuente frente a la infección fúngica es la extensa acumulación de fitoalexinas y de proteínas relacionadas con la patogénesis. Entre la gran diversidad de compuestos naturales bioactivos producidos por las especies de Vitis sp. las fitoalexinas están formadas por un grupo reducido de moléculas que pertenecen a la familia de los estilbenos. Las células de vid son capaces de acumular estilnenos en respuesta a estrés biótico y abiótico. Los estilbenos de la vid derivan primariamente del trans-resveratrol (tR) (3,4`,5 -trihidroxiestilbeno), el cual puede sufrir modificaciones químicas, como glicosilación, metilación, hidroxilación y oligomerización, dando lugar a varios derivados bioactivos. tR es producido como producto final de la ruta fenilpropanoide mediante la condensación de tres moléculas de malonil-CoA con una molécula de 4-cumaroil-CoA en una reacción catalizada por la Estilbeno Sintasa (STS). Los estilbenos de la vid han sido ampliamente estudiados ya que poseen unas propiedades en la salud humana sorprendentes. Se han observado beneficios del tR en las principales enfermedades humanas, como agente cardioprotector, como inhibidor de la carcinogénesis, neuro protector y antienvejecimiento entre otros, ya que tR posee un alto efecto antioxidante. Por lo tanto, el interés farmacéutico, nutracéutico y biotecnológico del tR y por tanto de la vid, han ido en aumento desde los últimos 20 años. De la misma manera, la respuesta de defensa ha sido estudiada en cultivos celulares de vid utilizando inductores naturales de esta respuesta. En este sentido, la 2,6 dimetil-ꞵ-ciclodextrina (MBCD) ha demostrado poseer un gran poder elicitor, promoviendo la producción de tR y su acumulación extracelular. Estos estudios han permitido profundizar en los diferentes mecanismos de regulación de la producción de estos compuestos a través de análisis transcriptómicos y proteómicos. Sin embargo, estos análisis revelaron algunos genes y proteínas cuyo papel en esta respuesta es desconocida hasta hoy. Este es el caso de dos parálogos de Fosfoenolpiruvato carboxilasa quinasa (PPCK). La presente tesis doctoral está centrada en el estudio del posible papel regulador de la enzima fosfoenolpiruvato carboxilasa quinasa (PPCK) en la producción de resveratrol y otros metabolitos secundarios en cultivos celulares de vid. La hipótesis principal de esta tesis es que dicha enzima podría estar regulando el flujo del carbono entre el metabolismo primario y secundario, con la finalidad de potenciar este último en condiciones de estrés. Para demostrar esta hipótesis, el contenido de la tesis se divide en 4 capítulos principales. El primer capítulo consiste en el desarrollo de un método analítico basado en espectrometría de masas de triple cuadrupolo para la detección precisa y la cuantificación exacta de resveratrol y sus derivados bioactivos, producidos por la vid. El segundo capítulo es un estudio transcripcional de 2 isoformas de la enzima PPCK, así como el sustrato de esta última (la enzima fosfoenolpiruvato carboxilsa, PPC), en condiciones de estrés, además de estudiar la coexpression con enzimas y factores de transcripción cuyo papel en la producción de resveratrol se conoce con anterioridad. En este capítulo se demuestra tanto en cultivos celulares de vid, como en hojas intactas, que los genes PPCK son fuertemente reprimidos en condiciones de estrés, mientras que los genes PPC permanecen invariables. En cambio se produce un descenso en torno al 20-30% en la actividad específica de la enzima PPC en tales condiciones. Por otro lado, en tales condiciones se observa la correlación entre la represión de los genes PPCK y el incremento en la producción de resveratrol y otros estilbenos. Es conocido que los cambios de actividad en la enzima PPC son debidos a cambios en la fosforilación de la misma, los cuales a su vez son regulados por la PPCK. Por lo tanto el capítulo 3 consiste en el desarrollo de un método para detectar y cuantificar cambios en el patrón de fosforilación de la enzima PPC, adoptando una estrategia de proteómica dirigida. El desarrollo de esté método para la proteína PPC ha permitido observar como el estrés inducido por MBCD provoca un descenso en el grado de fosforilación de la enzima PPC, lo cual correlaciona directamente con el descenso en su actividad específica, y ambos efectos a su vez están correlacionados con la represión génica de su proteína reguladora PPCK. Por último el capítulo 4 es el análisis funcional de los genes PPCK, a través de transformación genética estable de cultivos celulares de vid, con la finalidad de sobreexpresar los genes PPCK, y del silenciamiento genético de los mismos. Los cultivos celulares transformates que sobreexpresaban alguno de los dos parálogos de PPCK resultaron acumular menos resveratrol en condiciones de estrés en comparación con la estirpe silvestre (WT) avalando de esta manera nuestra hipótesis inicial. Además, este efecto no afectaba únicamente a la producción de resveratrol, si no a una gran variedad de metabolitos secundarios producidos en la ruta fenilpropanoide (Flavonoides, taninos condensados, ácidos hidroxicinámicos etc.) sugiriendo que el papel de la enzima PPCK está implicado en la regulación del suministro de carbono hacia esa vía en condiciones de estrés. Por último, el silenciamiento genético tuvo una eficiencia inadecuada, sugiriendo que los genes PPCK pueden ser esenciales, y difícilmente manipulables por en la región metabólica en la que participan. / La presente tesis doctoral ha sido financiada gracias a la subvención de Ministerio de economía y competitividad (BIO2014-51861-R) y (BIO2017- 82374-R). Así mismo, las dos estancias de investigación realizadas en el Integrative Biology Institute, Liverpool University, (Liverpool) han sido financiadas por la Escuela de Doctorado de la Universidad de Alicante, a través del programa de subvenciones para facilitar la obtención de la mención de Doctorado internacional en el título de Doctor y por la European Molecular Biology Organization (EMBO) a través de su programa Short-term Fellowships (ASTF No 7754).

Em virtude da necessidade de proteger a pele contra as espécies reativas de oxigênio, geradas excessivamente após exposição ao raios UV, substâncias antioxidantes têm sido adicionadas aos fotoprotetores. Entretanto associações fotoinstáveis podem levar à formação de intermediários reativos, que são prejudiciais ao organismo, e à redução da atividade fotoprotetorados filtros solares e antioxidantes. Além disso, as características de penetração dos filtros solares e antioxidantes influenciam diretamente a segurança e a eficácia dos fotoprotetores. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar a fotoestabilidade e a penetração cutânea de formulações fotoprotetoras contendo diferentes associações de filtros solares acrescidas ou não de trans-resveratrol e beta-caroteno, por meio do uso de CLAE e espectrofotometria e de células de Franz, respectivamente. Para tal, foram desenvolvidas formulações contendo diferentes associações de filtros solares (associações 1, 2 e 3), que apresentavam em comum avobenzona, metoxicinamato de etil-hexila e octocrileno, acrescidas de trans-resveratrol e beta-caroteno, isoladamente ou em combinação. Para avaliar a fotoestabilidade, amostras das formulações foram aplicadas em lâminas de vidro e expostas à radiação UVA e, a seguir, submetidas a análises por CLAE, para determinar o teor dos filtros solares e antioxidantes em estudo, e por espectrofotometria, para determinação da razão UVA/UVB. Para avaliar a penetração cutânea, as formulações contendo a associação de filtros solares mais fotoestável foram aplicadas sobre a pele de orelha de porco, e foi realizada a quantificação das substâncias em estudo, presentes no estrato córneo (EC), na epiderme/derme (E+D) e na solução receptora, por CLAE. O estudo de fotoestabilidade por CLAE dos filtros solares e antioxidantes presentes nas formulações avaliadas mostrou que, apesar de terem apresentado boa fotoestabilidade, todas as substâncias foram fotoinstáveis, com exceção do bemotrizinol, octiltriazona e octocrileno. Além disso, foi observado que o uso dos antioxidantes em associação foi melhor do que utilizá-los separadamente em fotoprotetores. As análises espectrofotométricas mostraram que, após irradiação, houve redução significativa da razão UVA/UVB de todas as formulações e que as formulações contendo bemotrizinol (associação 2) e octiltriazona (associação 3) apresentaram, respectivamente, aumento e redução significativos da razão UVA/UVB, com relação às formulações que não apresentavam esses filtros. No estudo de penetração cutânea, foi observado que, após aplicação das formulações contendo bemotrizinol (associação 2), os filtros solares e antioxidantes avaliados penetraram a pele, mas não permearam até a solução receptora, ou seja, ficaram retidos no EC, majoritariamente, e na E+D. Além disso, foi observada redução significativa da retenção no EC dos filtros solares e antioxidantes avaliados na presença do beta-caroteno. Os resultados desse estudo contribuíram para mostrar os benefícios da utilização de uma combinação de antioxidantes em fotoprotetores, uma vez que a combinação do trans-resveratrol e do beta-caroteno, resultou em melhor fotoestabilidade das formulações e também apresentou vantagens no estudo de penetração cutânea, pois reduziu a penetração dos filtros solares. / Due to the need to protect the skin against reactive oxygen species, which are excessively generated after exposure to UV rays, antioxidants compounds have been added to sunscreens. However, photounstable combinations can lead to generation of reactive intermediates, that are harmful to the body, and decrease the photoprotective activity of UV-filters and antioxidants. Furthermore, the penetration characteristics of UV-filters and antioxidants influence directly sunscreens safety and efficacy. Thus, the aim of this study was to develop and to evaluate the photostability and cutaneous penetration of sunscreen formulations containing different combinations of UV-filters supplemented or not with trans-resveratrol and beta-carotene, by using HPLC and spectrophotometry and Franz cells, respectively. For this, formulations containing different UV-filters combinations (combinations 1, 2 and 3), which had in common avobenzone, ethyl-hexyl methoxycinnamate and octocrylene, supplemented with trans-resveratrol and beta-carotene, alone or in combination, were prepared. For photostability evaluation, samples of the formulations were spread onto glass plates, exposed to UVA radiation and then analyzed by HPLC to determine the concentration of UV-filters and antioxidants under study, and by spectrophotometry to determine the UVA/UVB ratio. To assess cutaneous penetration, formulations containing the most photostable combination of UV-filters were applied on pig ear skin, and the quantification of substances under study present into stratum corneum (SC), viable epidermis plus dermis (E+D) and receptor fluid was performed by HPLC. HPLC photostability study, which analyzed the UV-filters and antioxidants present in formulations, showed that all substances, despite having good photostability, were photounstable, except bemotrizinole, octyltriazone and octocrylene. Furthermore, it was observed that the use of antioxidants in combination was better than using them separately in sunscreens. The spectrophotometric analysis showed that after irradiation, all formulations had a significant decrease of UVA/UVB ratio, and that formulations containing bemotrizinole (combination 2) and octyltriazone (combination 3) presented, respectively, significant increase and decrease of the UVA/UVB ratio, in comparison with formulations that did not contained these UV-filters. In the cutaneous penetration study it was observed that after application of formulations containing bemotrizinole (combination 2), the UV-filters and antioxidants under study penetrated the skin, but did not reach the receptor fluid, which means that they were retained in SC, predominantly, and in E+D. Furthermore, a significant decrease on SC retention of UV-filters and antioxidants under study in the presence of beta-carotene was observed. The results of this study contributed to demonstrate the benefits of using a combination of antioxidants in sunscreens, since the combination of trans-resveratrol with beta-carotene, resulted in improved photostability of the formulations and also showed advantages in the skin penetration study, because it reduced UV-filters penetration.

Em virtude da necessidade de proteger a pele contra as espécies reativas de oxigênio, geradas excessivamente após exposição ao raios UV, substâncias antioxidantes têm sido adicionadas aos fotoprotetores. Entretanto associações fotoinstáveis podem levar à formação de intermediários reativos, que são prejudiciais ao organismo, e à redução da atividade fotoprotetorados filtros solares e antioxidantes. Além disso, as características de penetração dos filtros solares e antioxidantes influenciam diretamente a segurança e a eficácia dos fotoprotetores. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar a fotoestabilidade e a penetração cutânea de formulações fotoprotetoras contendo diferentes associações de filtros solares acrescidas ou não de trans-resveratrol e beta-caroteno, por meio do uso de CLAE e espectrofotometria e de células de Franz, respectivamente. Para tal, foram desenvolvidas formulações contendo diferentes associações de filtros solares (associações 1, 2 e 3), que apresentavam em comum avobenzona, metoxicinamato de etil-hexila e octocrileno, acrescidas de trans-resveratrol e beta-caroteno, isoladamente ou em combinação. Para avaliar a fotoestabilidade, amostras das formulações foram aplicadas em lâminas de vidro e expostas à radiação UVA e, a seguir, submetidas a análises por CLAE, para determinar o teor dos filtros solares e antioxidantes em estudo, e por espectrofotometria, para determinação da razão UVA/UVB. Para avaliar a penetração cutânea, as formulações contendo a associação de filtros solares mais fotoestável foram aplicadas sobre a pele de orelha de porco, e foi realizada a quantificação das substâncias em estudo, presentes no estrato córneo (EC), na epiderme/derme (E+D) e na solução receptora, por CLAE. O estudo de fotoestabilidade por CLAE dos filtros solares e antioxidantes presentes nas formulações avaliadas mostrou que, apesar de terem apresentado boa fotoestabilidade, todas as substâncias foram fotoinstáveis, com exceção do bemotrizinol, octiltriazona e octocrileno. Além disso, foi observado que o uso dos antioxidantes em associação foi melhor do que utilizá-los separadamente em fotoprotetores. As análises espectrofotométricas mostraram que, após irradiação, houve redução significativa da razão UVA/UVB de todas as formulações e que as formulações contendo bemotrizinol (associação 2) e octiltriazona (associação 3) apresentaram, respectivamente, aumento e redução significativos da razão UVA/UVB, com relação às formulações que não apresentavam esses filtros. No estudo de penetração cutânea, foi observado que, após aplicação das formulações contendo bemotrizinol (associação 2), os filtros solares e antioxidantes avaliados penetraram a pele, mas não permearam até a solução receptora, ou seja, ficaram retidos no EC, majoritariamente, e na E+D. Além disso, foi observada redução significativa da retenção no EC dos filtros solares e antioxidantes avaliados na presença do beta-caroteno. Os resultados desse estudo contribuíram para mostrar os benefícios da utilização de uma combinação de antioxidantes em fotoprotetores, uma vez que a combinação do trans-resveratrol e do beta-caroteno, resultou em melhor fotoestabilidade das formulações e também apresentou vantagens no estudo de penetração cutânea, pois reduziu a penetração dos filtros solares. / Due to the need to protect the skin against reactive oxygen species, which are excessively generated after exposure to UV rays, antioxidants compounds have been added to sunscreens. However, photounstable combinations can lead to generation of reactive intermediates, that are harmful to the body, and decrease the photoprotective activity of UV-filters and antioxidants. Furthermore, the penetration characteristics of UV-filters and antioxidants influence directly sunscreens safety and efficacy. Thus, the aim of this study was to develop and to evaluate the photostability and cutaneous penetration of sunscreen formulations containing different combinations of UV-filters supplemented or not with trans-resveratrol and beta-carotene, by using HPLC and spectrophotometry and Franz cells, respectively. For this, formulations containing different UV-filters combinations (combinations 1, 2 and 3), which had in common avobenzone, ethyl-hexyl methoxycinnamate and octocrylene, supplemented with trans-resveratrol and beta-carotene, alone or in combination, were prepared. For photostability evaluation, samples of the formulations were spread onto glass plates, exposed to UVA radiation and then analyzed by HPLC to determine the concentration of UV-filters and antioxidants under study, and by spectrophotometry to determine the UVA/UVB ratio. To assess cutaneous penetration, formulations containing the most photostable combination of UV-filters were applied on pig ear skin, and the quantification of substances under study present into stratum corneum (SC), viable epidermis plus dermis (E+D) and receptor fluid was performed by HPLC. HPLC photostability study, which analyzed the UV-filters and antioxidants present in formulations, showed that all substances, despite having good photostability, were photounstable, except bemotrizinole, octyltriazone and octocrylene. Furthermore, it was observed that the use of antioxidants in combination was better than using them separately in sunscreens. The spectrophotometric analysis showed that after irradiation, all formulations had a significant decrease of UVA/UVB ratio, and that formulations containing bemotrizinole (combination 2) and octyltriazone (combination 3) presented, respectively, significant increase and decrease of the UVA/UVB ratio, in comparison with formulations that did not contained these UV-filters. In the cutaneous penetration study it was observed that after application of formulations containing bemotrizinole (combination 2), the UV-filters and antioxidants under study penetrated the skin, but did not reach the receptor fluid, which means that they were retained in SC, predominantly, and in E+D. Furthermore, a significant decrease on SC retention of UV-filters and antioxidants under study in the presence of beta-carotene was observed. The results of this study contributed to demonstrate the benefits of using a combination of antioxidants in sunscreens, since the combination of trans-resveratrol with beta-carotene, resulted in improved photostability of the formulations and also showed advantages in the skin penetration study, because it reduced UV-filters penetration.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EnioRMS_DISSERT.pdf: 3992326 bytes, checksum: bb9137184687e3f768baf2f24b7cf158 (MD5) Previous issue date: 2013-08-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Studies show the great influence of free radicals and other oxidants as responsible for aging and degenerative diseases. On the other hand, the natural phenolic compounds has shown great as antioxidants to inhibit lipid peroxidation and lipoxygenase in vitro. Among these, is highlighted trans-resveratrol ( 3,5,4 `- trihydroxystilbene ) phenolic compound , characterized as a polyphenol stilbene class. The vegetables popularly known as "Azedinha" (Rumex Acetosa) has trans-resveratrol in its composition and from this, the present work aimed to study on the supercritical extraction and conventional extraction (Soxhlet and sequential) in roots of Rumex Acetosa, evaluating the efficiency of extractive processes, antioxidant activity, total phenolic content and quantification of trans-resveratrol contained in the extracts. Extractions using supercritical CO2 as solvent, addition of co-solvent (ethanol) and were conducted by the dynamic method in a fixed bed extractor. The trial met a 23 factorial design with three replications at the central point, with the variable reply process yield and concentration of trans-resveratrol and pressure as independent variables, temperature and concentration of co-solvent (% v/v). Yields ( mass of dry extract / mass of raw material used ) obtained from the supercritical extraction ranged from 0,8 to 7,63 % , and the best result was obtained at 250 bar and 90 ?C using the co-solvent 15% ethanol (% v/v). The value was calculated for YCER a flow rate of 1,0 ? 0,17 g/min resulting in 0,0469 CO2 ( g solute / g solvent ). The results of the mass yield varied between conventional extractions 0,78 % ( hexane) and 9,97 % (ethanol). The statistical model generated from the data of the concentration of trans-resveratrol performed as meaningful and predictive for a 95% confidence. GC analysis on HPLC (High Performance Liquid Chromatography), transresveratrol was quantified in all extracts and concentration values ranged between 0,0033 and 0,42 ( mg / g extract) for supercritical extracts and between 0,449 and 17,046 (mg / g extract) to conventional extractions and therefore, the Soxhlet extraction with ethanol for more selective trans-resveratrol than the supercritical fluid. Evaluation of antioxidant (radical method to sequester 2,2- diphenyl-1- picryl - hydrazyl - DPPH) the supercritical extracts resulted in EC50 values (concentration effective to neutralize 50% of free radicals) of between 7,89 and 18,43 mg/mL , while resulting in a Soxhlet extraction with EC50 values in the range of 6,05 and 7,39 mg/mL. As for quantification of the phenolic compounds (Method Spectrophotometer Folin-Ciocalteau) the supercritical extracts resulted in values between 85,3 and 194,79 mg GAE / g extract, whereas values derived from the Soxhlet extract resulted in values between 178,5 and 237,8 mg GAE / g extract. The high antioxidant activity can not be attributed solely to the presence of phenolic compounds, but the presence of other antioxidants in the existing Rumex acetosa / Estudos revelam a grande influ?ncia dos radicais livres e outros oxidantes como respons?veis pelo envelhecimento e por doen?as degenerativas. Por outro lado, os compostos fen?licos naturais tem-se apresentado como ?timos antioxidantes por inibirem a peroxida??o lip?dica e a lipooxigenase in vitro. Dentre estes, encontra-se em destaque o trans-resveratrol (3,5,4 trihidroxiestilbeno), composto fen?lico, caracterizado como um polifenol da classe estilbeno. A hortali?a popularmente conhecida como Azedinha (Rumex acetosa) possui o trans-resveratrol em sua composi??o e a partir disto, o presente trabalho teve como objetivo geral o estudo sobre a extra??o supercr?tica e a extra??o convencional (Soxhlet e sequencial) em ra?zes da Rumex acetosa, avaliando-se a efici?ncia dos processos extrativos, a atividade antioxidante, o teor de fen?licos totais e a quantifica??o do trans-resveratrol contido nos extratos. As extra??es supercr?ticas utilizaram CO2 como solvente, adicionado de co-solvente (etanol) e foram conduzidas pelo m?todo din?mico em um extrator de leito fixo. Os ensaios obedeceram a um planejamento fatorial 23 com triplicata no ponto central, tendo como vari?vel resposta o rendimento do processo e a concentra??o de trans-resveratrol e como vari?veis independentes a press?o, a temperatura e a concentra??o de co-solvente (% v/v). Os rendimentos (massa de extrato seco/ massa de mat?ria-prima utilizada) obtidos da extra??o supercr?tica variaram de 0,8 a 7,63%, sendo que o melhor resultado foi obtido a 250 bar e 90?C, com uso do co-solvente etanol a 15% (v/v). O valor de YCER foi calculado para uma vaz?o de 1,0 ? 0,17 g/min de CO2 resultando em 0,0469 (g soluto/ g solvente). Os resultados de rendimento em massa para as extra??es convencionais variaram entre 0,78% (hexano) e 9,97% (etanol). O modelo estat?stico gerado a partir dos dados de concentra??o de transresveratrol se apresentou como significativo e preditivo para uma confian?a de 95%. Atrav?s de an?lises cromatogr?ficas em CLAE (Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia), o transresveratrol foi quantificado em todos os extratos obtidos e os valores de concentra??o variaram entre 0,0033 e 0,42 (mg/g extrato) para os extratos supercr?ticos e entre 0,449 e 17,046 (mg/g extrato) para extra??es convencionais, sendo, portanto, a extra??o Soxhlet com etanol mais seletiva em trans-resveratrol que a supercr?tica. A avalia??o do poder antioxidante Extra??o, caracteriza??o e avalia??o bioativa do extrato de Rumex acetosa iii ?nio Rafael de Medeiros Santos, Agosto de 2013 (m?todo do sequestro do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazil-DPPH) dos extratos supercr?ticos resultaram em valores de EC50 (Concentra??o efetiva que neutraliza 50% dos radicais livres) compreendidos entre 7,89 e 18,43 μg/mL, enquanto que as extra??es com Soxhlet resultaram em valores de EC50 na faixa de 6,05 e 7,39 μg/mL. J? a quantifica??o dos compostos fen?licos totais (M?todo espectrofot?metro de Folin-Ciocalteau) dos extratos supercr?ticos resultaram em valores compreendidos entre 85,3 e 194,79 mg EAG/g extrato, enquanto que os valores dos extratos oriundos do Soxhlet resultaram em valores compreendidos entre 178,5 e 237,8 mg EAG/g extrato. A alta atividade antioxidante pode ser atribu?da n?o somente ? presen?a de compostos fen?licos, mas tamb?m ? presen?a de outros antioxidantes existentes na Rumex acetosa

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-05T15:52:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Milleno Dantas Mota (2012).pdf: 1199233 bytes, checksum: a649e5b9bd0f55f2c7ed56b1596245ba (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-15T13:30:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Milleno Dantas Mota (2012).pdf: 1199233 bytes, checksum: a649e5b9bd0f55f2c7ed56b1596245ba (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-15T13:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Milleno Dantas Mota (2012).pdf: 1199233 bytes, checksum: a649e5b9bd0f55f2c7ed56b1596245ba (MD5) / CAPES / O presente trabalho objetiva apresentar um novo método testado para análise de trans-resveratrol em diferentes marcas e variedades de vinhos tintos por meio de calibração multivariada, no qual foram analisados os espectros das amostras, e das amostras aditivadas com o padrão de trans-resveratrol, obtidos por espectroscopia UV-VIS, através de tratamento quimiométrico de análise de componentes principais (PCA) e calibração multivariada. Na PCA obtida com os espectros de absorção, observou-se que com apenas 4 componentes principais foi possível agrupar amostras com base nas características de variedade e/ou região de produção. Através dos loadings ficou demonstrado que os comprimentos de onda de 230 e 260 nm foram os maiores responsáveis por esse agrupamento. A partir da construção de modelos de calibração por mínimos quadrados parciais (PLS) e por regressão linear múltipla (RLM) foi possível predizer a concentração de trans-resveratrol das amostras que apresentaram semelhanças entre os grupos observados na PCA e as amostras utilizadas na construção dos modelos. O teor de trans-resveratrol predito nessas amostras variou entre 0,29 e 23,3 mg/L. A comparação do método multivariado empregado com o univariado sugere uma maior capacidade de predição das concentrações pelo primeiro, uma uma vez que apresentou valores mais próximos daqueles descritos na literatura. / Salvador

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-12T18:27:28Z No. of bitstreams: 1 EnioRafaelDeMedeirosSantos_TESE.pdf: 2342949 bytes, checksum: 3af05779dbf2fc774f0fc56044099d59 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-13T20:32:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EnioRafaelDeMedeirosSantos_TESE.pdf: 2342949 bytes, checksum: 3af05779dbf2fc774f0fc56044099d59 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T20:32:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EnioRafaelDeMedeirosSantos_TESE.pdf: 2342949 bytes, checksum: 3af05779dbf2fc774f0fc56044099d59 (MD5) Previous issue date: 2017-09-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Pesquisas apresentam o excesso de radicais livres como um dos respons?veis por diversas doen?as degenerativas e pelo envelhecimento. Nesse contexto, desponta a utiliza??o de compostos fen?licos naturais por apresentarem ?tima atividade antioxidante e por inibirem a forma??o desses radicais. Em meio aos estudos acerca desses compostos, os antioxidantes: cis e trans-resveratrol, cis e trans-piceid e emodina ganham destaque no meio cient?fico. Trabalhos cient?ficos comprovam a presen?a desses compostos fen?licos na herb?cea ?Azedinha? (Rumex acetosa), logo, os extratos de suas ra?zes v?m sendo cada vez mais utilizadas em aplica??es farmacol?gicas. A partir disso, este trabalho teve por objetivo central a obten??o de extratos dessas ra?zes utilizando t?cnicas de extra??o com fluido supercr?tico (SFE), extra??o com l?quidos pressurizados (PLEs), extra??o com utiliza??o de micro-ondas (MAE), extra??o com solvente a baixa press?o (LPSE) e a extra??o Soxhlet. Na SFE, foi avaliado o efeito das vari?veis de processo (temperatura, vaz?o, press?o e concentra??o de cossolvente) sobre a cin?tica da extra??o, rendimento e solubilidade do extrato. Nas PLEs, tanto foram avaliadas a temperatura e a press?o, como a influ?ncia dos diferentes solventes (?gua, etanol, hexano, tolueno, acetonitrila e isopropanol) e seu uso sequenciado como PLE sequenciada. As curvas obtidas nas SFEs e PLEs foram ajustadas segundo os modelos: Mart?nez, Crank e Sovov? e seus desvios m?dios calculados. Na extra??o Soxhlet foi avaliado o uso de quatro solventes (etanol, acetonitrila, isopropanol e ?lcool terc-but?lico), enquanto que na extra??o LPSE e MAE foi utilizado o etanol como solvente. Tamb?m foi testada a utiliza??o da precipita??o por anti-solvente supercr?tico (SAS) como forma de secagem. O teor de fen?licos totais, a capacidade antioxidante dos extratos e os principais componentes do extrato foram determinados. Os rendimentos obtidos em todas as t?cnicas variaram de 0,2 a 8,7%, sendo o melhor resultado obtido na extra??o PLE com etanol. A SFE apresentou o extrato com maior concentra??o de emodina (42,8 mg/g). A concentra??o de trans-resveratrol em todos os extratos variou entre 1,0 e 5,7 mg/g, a depender da t?cnica utilizada. A atividade antioxidante e os compostos fen?licos totais resultaram em valores compreendidos entre 3,4 e 163,4 ?g/mL e 27,6 e 157,0 mg EAG/ge, respectivamente, a depender da t?cnica utilizada. A MAE obteve extratos com 130,6 mg EAG/ge, e 3,4 ?g/mL em 30 minutos de opera??o. As extra??es com fluidos pressurizados (PLEs e SFEs) demonstraram ?timos resultados, principalmente quanto ? extra??o sequencial, na qual foi poss?vel a separa??o de trans-resveratrol e emodina. / Research presents the excess of free radicals as one responsible for various degenerative diseases and aging. In this context, the use of natural phenolic compounds appears to have excellent antioxidant activity and to inhibit the formation of these radicals. In the middle of studies about these compounds, the antioxidants: cis and trans-resveratrol, cis and trans-piceid and emodin are prominent in the scientific world. Scientific works prove the presence of these phenolic compounds in the herbaceous "Azedinha" (Rumex acetosa), so extracts from their roots have been increasingly used in pharmacological applications. From this, the main objective of this work was to extract extracts of these roots using supercritical fluid extraction (SFE), pressurized fluid extraction (PLEs), microwave extraction (MAE), solvent extraction low pressure (LPSE) and Soxhlet extraction. In SFE, the effect of the process variables (temperature, flow, pressure and cosolvents concentration) on the kinetics of extraction, yield and solubility of the extract was evaluated. In the PLEs, both temperature and pressure and the influence of the different solvents (water, ethanol, hexane, toluene, acetonitrile and isopropanol) were evaluated and their use sequenced as PLE. The curves obtained in the SFEs and PLEs were adjusted according to the models: Mart?nez, Crank and Sovov? and their calculated mean deviations. In the Soxhlet extraction, the use of four solvents (ethanol, acetonitrile, isopropanol and tert-butyl alcohol) was evaluated, while in the LPSE and MAE extraction ethanol was used as the solvent. The use of supercritical anti-solvent (SAS) precipitation as a drying method was also tested. The total phenolic content, the antioxidant capacity of the extracts and the main components of the extract were determined. The yields obtained in all the techniques varied from 0.2 to 8.7%, being the best result obtained in the PLE extraction with ethanol. SFE presented the extract with the highest concentration of emodin (42.8 mg/g). The concentration of trans-resveratrol in all extracts ranged from 1.0 to 5.7 mg/g, depending on the technique used. The antioxidant activity and the total phenolic compounds resulted in values between 3.4 and 163.4 ?g/mL and 27.6 and 157.0 mg EAG/g, respectively, depending on the technique used. MAE obtained extracts with 130.6 mg EAG/g and 3.4 ?g/mL in 30 minutes of operation. Extractions with pressurized fluids (PLEs and SFEs) showed excellent results, mainly regarding sequential extraction, in which the separation of trans-resveratrol and emodin was possible.

Stilbene phytoalexins such as resveratrol, 1, and the arachidins, including arachidin-1,2, are naturally synthesised by peanut (Arachis hypogaea) plants. The peanut phytoalexins are polyphenolic compounds consisting of a stilbene backbone, with a number of derivatives also possessing a prenyl moiety. These distinctive phytoalexins have gained attention, as they exhibit various biological activities, for instance arachidin-1, 2, has been reported to be more potent than resveratrol, 1, in the inhibition of lipopolysaccharide-induced expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and COX-2 mRNA, in vitro at doses that were low in cytotoxicity. Additionally the various arachidins have recently been shown to exhibit their anti-inflammatory properties, through the inhibition of a number of inflammatory mediator pathways. In this work, various routes into the synthesis of arachidin-1, 2, are described, via use of the Horner-Wadsworth-Emmons (HWE) reaction. Three different methodologies were explored, the first approach involving silyl ether (TIPS or TBDMS) protected benzaldehydes, proved unsuccessful due to cleavage of the silyl ether protecting groups, in basic and/or acidic conditions. This led to an alternative approach, whereby formation of the stilbene backbone proceeded via the regioselective demethylation of an acetal in the presence of sodium metal, subsequent electrophilic substitution using iodomethane and finally acetal hydrolysis of the acetal, gave the isolated aldehyde in moderate yield (52 %). Coupling of the aldehyde with the substituted benzylphosphonate, via the HWE reaction gave the desired trans-stilbene in good yield (86 %), however incorporation of the prenyl side chain proved to be challenging via the Wohl-Ziegler bromination. Further adaptation of the aforementioned route, whereby alkylation using diethyl iodomethylphosphonate, enabled the incorporation of the prenyl moiety and the subsequent construction of the trans-stilbene backbone, gave the 4-(3-methyl-but-1- enyl)-3,5,3',4'-tetramethoxystilbene, 3, albeit in poor yield (47 %). The final step involving demethylation using BBr3 gave arachidin-1, 2, also in poor yield (30 %), nevertheless this approach has been proved to be a successful route for the total synthesis of arachidin-1, 2, however optimised studies are required in order to obtain the desired compound in quantitative yields. Synthetic analogues of resveratrol, 1, are also known for their biological activities, including anti-inflammatory and chemopreventative properties. Recently, the anti-proliferative activity of a number of stilbenesulfonamides, against the National Cancer Institute's 60 (NCI-60) human tumour cell line has been reported. Furthermore, the anti-inflammatory effects of novel heterocyclic methylsulfone and sulfonamide analogues, via inhibition of the COX-2 protein have also been published, however both synthetic routes described require a total of six or seven steps, from the sulfanilamide and are limited to the synthesis of primary sulphonamides (SO2NH2). In this work, an efficient three step synthesis has been designed and successfully implemented, proceeding via chlorosulfonation of diethyl benzylphosphonate, to form the sulfonyl chloride intermediate. Aminolysis of the sulfonyl chloride intermediate was then performed, using a range of primary, secondary and cyclic alkyl amines, as well as aromatic amines; including ammonia, dimethylamine, morpholine and diphenylamine. Finally, formation of the stilbene backbone with various substituted aldehydes, via the HWE reaction offered a short, versatile and alternative route to the synthesis of novel primary, secondary and tertiary trans-stilbene benzenesulfonamides and heterocyclic analogues, in yields of 42 - 100 %. The activity of a selection of the synthesised stilbene benzenesulfonamides was evaluated against the human lung adenocarcinoma epithelial cell line (A549). Amongst the compounds tested, analysis of the data showed that the novel analogue, 4, was found to be the most potent compound, with a GI50 of 0.1 μM. Comparison with the previously published data found analogue, 4, to be approximately 500-fold more potent than the lead compound resveratrol, 1, (GI50 = 51.64 μM) and approximately twice as potent than 5-fluorouracil (GI50 = 0.189μM), a chemotherapy drug used to treat various forms of cancer 8. Overall, these results demonstrate that the total synthesis of trans-arachidin-1, 2, can be achieved via a five step methodology. A versatile route to the synthesis of novel stilbene benzenesulfonamides has also been successfully achieved, amongst the compounds synthesised one appears to show promising anticancer activity, and warrants further investigation (i.e. in vitro studies using other cancer cell lines, and the synthesis of additional compounds using analogue, 4, as a lead compound).