Introdução: O Haemophilus influenzae type b (Hib) é a primeira maior causa de meningites e pneumonias provocadas por bactérias encapsuladas. Trabalhos revelam que anticorpos maternos, séricos e secretores, podem proteger recém nascidos (RN) destes patógenos encapsulados e contribuem para a maturação do sistema imune do infante. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo investigar a transferência materno-infantil de anticorpos anti-Hib em mães vacinadas e que não receberam a vacina anti-Hib. Materiais e Métodos: Nós avaliamos 29 mulheres saudáveis, das quais 13 foram vacinadas e 16 não receberam a vacina ActHib®. Destas mães foram obtidas amostras de sangue periférico e do cordão umbilical, colostro e leite, sendo determinadas as imunoglobulinas totais (lgG e IgA) e suas subclasses (IgG1 e 2) por Imunodifusão Radial Quantitativa (IDR) e nefelometria. A concentração de anticorpos IgG, as subclasses (lgG1 e 2) e IgA anti-Hib foram analisados por ensaio imunoenzimático (ELlSA), também utilizado para determinar a avidez dos anticorpos IgG e IgA anti-Hib. Avaliação qualitativa destes anticorpos foi realizada a partir de ensaios de immunoblotting (IB). Resultados: As amostras maternas de mães vacinadas não apresentaram diferenças quantitativas de imunoglobulinas secretoras (lgA), séricas (lgG) e suas subclasses (lgG1 e 2) totais, comparadas às amostras de mães que não receberam a vacina anti-Hib. O grupo vacinado mostrou maior concentração e avidez de anticorpos específicos para o Hib quando relacionados ao grupo de mães não vacinado. Os soros de cordões umbilicais de mães imunizadas apresentaram menor taxa de passagem transplacentária que os cordões de mães não vacinadas. Em ambos os grupos, as amostras de colostro apresentaram maior concentração de imunoglobulinas totais e específicas para o Hib que as amostras de leite. O 18 revelou o mesmo padrão de reconhecimento antigênico para o Hib entre as amostras maternas, nas duas populações. Conclusão: Os resultados revelaram que o perfil de resposta humoral de mães vacinadas pode proteger mais o infante que as mães não vacinadas, pois o primeiro grupo transferiu maior quantidade de anlicorpos com melhor avidez para a criança, conferindo proteção eficaz com relação às doenças causadas por Hib. / Background: Haemophilus influenzae, type b (Hib) has been one of the major causes of bacterial meningitis and pneumonia. Recent works show that maternal, seric and secretory antibodies, may protect the newborn and contribute the maturation of the infant immune system. Objective: The present study has as aim to investigates the maternal-infantile transfer of anti-Hib antibodies in immunized and not immunized mothers\' with anti-Hib vaccine. Material and Methods: We evaluated 29 healthy women, from whitch 13 mothers were immunized and 16 not immunized mothers with the ActHib® vaccine. From these mothers it were obtained peripheric and cord serum, colostrum and milk samples, the total immunoglobulin (IgG and IgA) and its subclass (lgG1 and IgG2) was determined by Quantitative Radial Immunodiffusion (IDR) and nephelometry. The concentration of anti-Hib IgG, subclass (lgG1 IgG2) and IgA antibodies were analyzed by immunoenzymatic assay (ELlSA), it also were utilized to determine the antibodies avidities\'. Qualitative evaluation these antibodies were determined by Immunoblotting assays (IB). Results: The results didn\'t show difference between maternal samples of the immunized and not immunized mothers in the concentration of the total secretory and seric imunoglobulins as well as its total immunoglobulins subclasses. The immunized set showed higher avidity and anti-Hib antibody levels comparing to the non-immunized mother sets. The umbilical cord serums\' from immunized mothers revealed lower rate of placental transfer than the cord serum of not immunized mothers. In both sets, the colostrum sample showed higher antibody levels comparing to the milk samples. IB revealed the same recognition pattern of Hib antigens between mother and cord serum IgG and colostrum and milk IgA, in both populations. Conclusion: The results shows that the antibodies profile response of the immunized mother can protect more the infant than the not immunized mother, because the first set transported higher quantity of antibodies with better avidity for the children, these antibodies confere an efficient protection to infections provoked by Hib.

Submitted by CRISTIANE DE CASTRO PERNET HARA null (cris_hara@hotmail.com) on 2017-01-19T01:22:00Z No. of bitstreams: 1 tese Cristiane Hara (final).pdf: 5145540 bytes, checksum: 622fefbf8e4e6d0b87d3139952cc8f17 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-24T13:45:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 hara_ccp_dr_bot.pdf: 5145540 bytes, checksum: 622fefbf8e4e6d0b87d3139952cc8f17 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-24T13:45:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 hara_ccp_dr_bot.pdf: 5145540 bytes, checksum: 622fefbf8e4e6d0b87d3139952cc8f17 (MD5) Previous issue date: 2016-12-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / INTRODUÇÃO - Durante a gravidez, a hiperglicemia materna altera a expressão e a transferência de células imunorregulatórias e de imunoglobulinas e o perfil de citocinas na interface materno-fetal. OBJETIVO – Avaliar, em gestações complicadas por hiperglicemia, a expressão de células NK e o perfil de citocinas no sangue, materno e do cordão umbilical, e na placenta (artigo 1); quantificar a produção de anticorpos e a passagem de IgG total, e respectivas subclasses, via receptor FcRn (artigo 2). MÉTODO - Foram avaliadas 120 gestantes, distribuídas nos grupos: não-diabético (ND; N = 30), hiperglicemia gestacional leve (HGL; N = 30), diabetes mellitus gestacional (DMG; N = 30) e diabetes mellitus tipo 2 (DM2; N = 30). Técnicas de citometria de fluxo foram utilizadas para análise de células e citocinas e, de ELISA, para avaliação das concentrações de IgG total e subclasses. A transferência placentária de anticorpos totais, e respectivas subclasses, foi definida pela relação [(concentrações no sangue de cordão umbilical/sangue materno) x 100]. Na análise estatística foram realizadas análises de variância (ANOVA), seguida pelo teste de Tukey, e de correlação de Pearson, com p < 0,05. RESULTADOS - No sangue materno dos grupos hiperglicêmicos, as células NK CD16+CD56– aumentaram, enquanto que CD16+CD56+ foi menor no grupo DMG. No sangue do cordão do grupo DM2 mostrou uma maior proporção de células CD16+CD56– e CD16–CD56+. As camadas extravilosas da placenta dos grupos DMG e DM2 mostraram maior expressão de CD16+CD56– e independente da camada, a proporção de CD16–CD56+ foi maior em HGL e DMG e menor em DM2. Em relação às citocinas, IL-2 foi menor no sangue materno e IFN-y mais elevados no sangue materno e do cordão do grupo DMG. IL-17 foi mais elevada no sangue materno e do cordão do grupo DM2. A camada extravilosa placentária da HGL mostrou níveis elevados de IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, e IFN-γ e baixos níveis de IL-1β e IL-8, enquanto que a camada vilosa placentária continha alta níveis de IL-17 e IFN-γ. O grupo HGL, independentemente da região, apresentaram maiores níveis de IL-8. O grupo DM-2, independentemente da região da placenta mostrou níveis elevados de TNF-α, IL-17, e IFN-γ. O sangue materno de DM-2 e o sangue do cordão umbilical de HGL exibiram uma poporção mais elevada de CD19+ expressas por células B. DM2 mostrou a menor proporção de células CD19+na placenta. A expressão de FcRn aumentou nas células do cordão e placenta de HGL. As células do sangue materno, do sangue do cordão e da placenta de DM2 mostraram menor expressão de FcRn. A maior expressão de FcRn, independente do estado hiperglicêmico foi observada nas células da placenta. Houve menores níveis de IgG no sangue materno em DM2 e maiores no sangue do cordão umbilical de HGL. Os níveis mais elevados de IgG4 foi detectado no sangue de mães hiperglicêmicas. Os níveis mais elevados de IgG3 e IgG4 no sangue do cordão foram detectados em HGL, e os menores de IgG2 e IgG3 níveis em DM2. CONCLUSÃO - A hiperglicemia produz ambiente inflamatório com elevada produção de citocinas, apresentando alterações na expressão de células NK, de FcRn na placenta, na produção e taxa de transferência de IgG. Os níveis celulares que expressam CD16+ e de citocinas no sangue materno, sangue do cordão umbilical e tecido placentário são modificados em gestações complicadas pelo diabetes. A hiperglicemia materna compromete a transferência placentária de IgG1, IgG3 e IgG4. Os resultados sugerem que a hiperglicemia materna, diminui a expressão FcRn em células da placenta e sangue e compromete a produção e transferência de anticorpos maternos para os recém-nascidos. / INTRODUCTION - During pregnancy, the immune response associated with diabetes alters the expression and the transfer of immune cells, including regulatory, immunoglobulins and the profile of cytokines in the maternal-fetal interface. OBJECTIVE - To evaluate the expression of NK cells, and the profile of cytokines in maternal blood, umbilical cord and placenta, quantify the production of antibodies, as well as, the passage of IgG and subclasses, via receptors FcRn in pregnancies complicated by diabetes or hyperglycemia. METHOD - were assessed 120 pregnant women, distributed as non-diabetic (ND; n=30), Mild Gestational Hyperglycemia (MGH; n=30), Gestational Diabetes Mellitus (GDM; n=30) and type 2 Diabetes Mellitus (DM2; N=30). The cells and cytokines were evaluated by flow cytometry. The concentrations of total IgG and subclasses were analyzed by ELISA. Placental transfer of the total and subclasses antibodies were defined in each assay by the ratio [(cord concentrations/maternal concentrations) x 100]. In the statistical analysis we used analysis of variance (ANOVA), followed by Tukey test, and Pearson's linear correlation, with p < 0.05. RESULTS - In the maternal blood from the hyperglycemic groups, the CD16+CD56− NK cells increased, whereas that of CD16+CD56+ decreased in GDM group. Cord blood from DM2 showed a higher proportion of CD16+CD56− and CD16−CD56+. The placental extravillous layer of GDM and DM2 showed an increase of CD16+CD56− cells and, irrespective of region, the proportion of CD16−CD56+ cells was higher in MGH and GDM and lower in DM-2. IL-2 was lower in maternal blood and IFN-����������������������� higher in maternal and cord blood from the GDM group. IL-17 was higher in maternal and cord blood from the DM-2 group. The placental extravillous layer of the MGH showed high levels of IL-4, IL-6, IL-10, IL- 17, and IFN-����������������������� and low levels of IL-1����������������������� and IL-8, whereas the placental villous layer contained high levels of IL-17 and IFN-�����������������������. The GDM group, irrespective of region, showed higher levels of IL-8. The DM-2 group, irrespective of region, placenta showed high levels of TNF-�����������������������, IL-17, and IFN-�����������������������. Maternal blood from DM-2 and cord blood from MGH exhibited a higher proportion of CD19+ expression by B cells. DM-2 showed a lower proportion of CD19+ cells in placenta. FcRn expression increased in cells from cord blood and placenta from MGH. Maternal blood, cord blood and placenta cells from DM-2 showed lower FcRn expression. The highest FcRn expression, irrespective of glycemic status, was observed in placenta cells. Maternal blood IgG levels were lower in DM-2, and cord blood IgG levels were higher in MGH. The highest levels of IgG4 were detected in the blood of hyperglycemic mothers. The highest IgG3 and IgG4 levels in cord blood were detected in MGH, and the lowest IgG2 and IgG3 levels in DM-2. CONCLUSIONS - Hyperglycemia produces inflammatory environment with high production of cytokines, presenting changes in expression of NK cells, FcRn in the placenta, in production and rate of transfer of IgG. The levels of cells expressing CD16+ and cytokines in maternal blood, cord blood, and placental tissue are modified in pregnancies complicated by diabetes. Maternal hyperglycemia compromised placental transfer of IgG1, IgG3 and IgG4. The results suggest that regardless of hyperglycemia degree, it decreases FcRn expression in placenta and blood cells and compromises the production and transfer of antibodies from maternal blood to newborns. / FAPESP: 2012/24212-4 / FAPESP: 2013/13017-9

Introdução: O Haemophilus influenzae type b (Hib) é a primeira maior causa de meningites e pneumonias provocadas por bactérias encapsuladas. Trabalhos revelam que anticorpos maternos, séricos e secretores, podem proteger recém nascidos (RN) destes patógenos encapsulados e contribuem para a maturação do sistema imune do infante. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo investigar a transferência materno-infantil de anticorpos anti-Hib em mães vacinadas e que não receberam a vacina anti-Hib. Materiais e Métodos: Nós avaliamos 29 mulheres saudáveis, das quais 13 foram vacinadas e 16 não receberam a vacina ActHib®. Destas mães foram obtidas amostras de sangue periférico e do cordão umbilical, colostro e leite, sendo determinadas as imunoglobulinas totais (lgG e IgA) e suas subclasses (IgG1 e 2) por Imunodifusão Radial Quantitativa (IDR) e nefelometria. A concentração de anticorpos IgG, as subclasses (lgG1 e 2) e IgA anti-Hib foram analisados por ensaio imunoenzimático (ELlSA), também utilizado para determinar a avidez dos anticorpos IgG e IgA anti-Hib. Avaliação qualitativa destes anticorpos foi realizada a partir de ensaios de immunoblotting (IB). Resultados: As amostras maternas de mães vacinadas não apresentaram diferenças quantitativas de imunoglobulinas secretoras (lgA), séricas (lgG) e suas subclasses (lgG1 e 2) totais, comparadas às amostras de mães que não receberam a vacina anti-Hib. O grupo vacinado mostrou maior concentração e avidez de anticorpos específicos para o Hib quando relacionados ao grupo de mães não vacinado. Os soros de cordões umbilicais de mães imunizadas apresentaram menor taxa de passagem transplacentária que os cordões de mães não vacinadas. Em ambos os grupos, as amostras de colostro apresentaram maior concentração de imunoglobulinas totais e específicas para o Hib que as amostras de leite. O 18 revelou o mesmo padrão de reconhecimento antigênico para o Hib entre as amostras maternas, nas duas populações. Conclusão: Os resultados revelaram que o perfil de resposta humoral de mães vacinadas pode proteger mais o infante que as mães não vacinadas, pois o primeiro grupo transferiu maior quantidade de anlicorpos com melhor avidez para a criança, conferindo proteção eficaz com relação às doenças causadas por Hib. / Background: Haemophilus influenzae, type b (Hib) has been one of the major causes of bacterial meningitis and pneumonia. Recent works show that maternal, seric and secretory antibodies, may protect the newborn and contribute the maturation of the infant immune system. Objective: The present study has as aim to investigates the maternal-infantile transfer of anti-Hib antibodies in immunized and not immunized mothers\' with anti-Hib vaccine. Material and Methods: We evaluated 29 healthy women, from whitch 13 mothers were immunized and 16 not immunized mothers with the ActHib® vaccine. From these mothers it were obtained peripheric and cord serum, colostrum and milk samples, the total immunoglobulin (IgG and IgA) and its subclass (lgG1 and IgG2) was determined by Quantitative Radial Immunodiffusion (IDR) and nephelometry. The concentration of anti-Hib IgG, subclass (lgG1 IgG2) and IgA antibodies were analyzed by immunoenzymatic assay (ELlSA), it also were utilized to determine the antibodies avidities\'. Qualitative evaluation these antibodies were determined by Immunoblotting assays (IB). Results: The results didn\'t show difference between maternal samples of the immunized and not immunized mothers in the concentration of the total secretory and seric imunoglobulins as well as its total immunoglobulins subclasses. The immunized set showed higher avidity and anti-Hib antibody levels comparing to the non-immunized mother sets. The umbilical cord serums\' from immunized mothers revealed lower rate of placental transfer than the cord serum of not immunized mothers. In both sets, the colostrum sample showed higher antibody levels comparing to the milk samples. IB revealed the same recognition pattern of Hib antigens between mother and cord serum IgG and colostrum and milk IgA, in both populations. Conclusion: The results shows that the antibodies profile response of the immunized mother can protect more the infant than the not immunized mother, because the first set transported higher quantity of antibodies with better avidity for the children, these antibodies confere an efficient protection to infections provoked by Hib.

Intimina é uma adesina de natureza protéica das bactérias diarreiogênicas Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) e enterohemorrágica (EHEC), capazes de induzir a lesão \'attaching e effacing\' em enterócitos. Os principais subtipos de intiminas de EPEC e EHEC prevalentes no Brasil são &#945;, &#946; e &#947;. Nosso objetivo foi investigar a transferência de anticorpos maternos anti-intiminas aos recém-nascidos de mães saudáveis de São Paulo, Brasil. Foram pesquisados anticorpos SIgA no colostro e IgG no soro de 50 mulheres saudáveis e no soro de cordão umbilical de seus recém-nascidos, por ELISA utilizando como antígeno proteínas recombinantes purificadas das regiões conservadas e variáveis de intiminas &#945;, &#946; e &#947;. As concentrações de anticorpos no colostro foram superiores quando comparadas com as concentrações do soro para todos os tipos de intiminas. Não se observaram diferenças estatísticas entre as concentrações de anticorpos reativos com as diferentes intiminas nas amostras de colostro. As concentrações de anticorpos reativos com a região conservada da intimina foram significativamente mais elevadas em comparação com as regiões variáveis no soro dos grupos de mães e de recém-nascidos. Houve alta correlação entre todos os anticorpos anti-intiminas nas amostras de colostro. Comparando-se as concentrações de anticorpos séricos, os coeficientes foram maiores entre anti-&#945; e anti-&#946; que entre os outros pares. Nossos resultados confirmam a transferência de anticorpos maternos para o recém-nascido pela placenta e pelo aleitamento materno e reforça o efeito protetor da amamentação contra infecção por EPEC. / Intimin is a proteic adhesin of enteropatogenic (EPEC) and enterohemorragic (EHEC) Escherichia coli, capable of inducing attachment and effacement lesion in enterocytes. The main subtypes of intimins of EPEC and EHEC prevalent in Brazil are &#945;, &#946; and &#947;. Our aim is to investigate the transference of maternal anti-intimin antibodies to the newborns of healthy mothers from Sao Paulo, Brazil. IgG and SIgA antibodies were determined in sera and colostrum from 50 healthy women and cord sera from their newborns, by ELISA using as antigens purified recombinant proteins, conserved and variable regions of &#945;, &#946; and &#947; intimins. The IgA antibody concentrations of colostrum are higher than IgG antibodies in serum for all intimins and there were no statistical differences between them in colostrum samples. The concentrations of antibodies reactive with the conserved region of intimin are significantly higher compared to the variable regions in the sera groups, mothers and newborns. There were high correlation coefficients between all the anti-intimins antibodies in colostrum samples. In the comparison of the seric antibody concentrations, the coefficients were higher between anti-&#945; and anti-&#946; than all the other pairs. Our results confirm the transference of maternal antibodies to the newborns by placenta and breastfeeding and reinforce the high protection effect of breastfeeding against EPEC infection.

Intimina é uma adesina de natureza protéica das bactérias diarreiogênicas Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) e enterohemorrágica (EHEC), capazes de induzir a lesão \'attaching e effacing\' em enterócitos. Os principais subtipos de intiminas de EPEC e EHEC prevalentes no Brasil são &#945;, &#946; e &#947;. Nosso objetivo foi investigar a transferência de anticorpos maternos anti-intiminas aos recém-nascidos de mães saudáveis de São Paulo, Brasil. Foram pesquisados anticorpos SIgA no colostro e IgG no soro de 50 mulheres saudáveis e no soro de cordão umbilical de seus recém-nascidos, por ELISA utilizando como antígeno proteínas recombinantes purificadas das regiões conservadas e variáveis de intiminas &#945;, &#946; e &#947;. As concentrações de anticorpos no colostro foram superiores quando comparadas com as concentrações do soro para todos os tipos de intiminas. Não se observaram diferenças estatísticas entre as concentrações de anticorpos reativos com as diferentes intiminas nas amostras de colostro. As concentrações de anticorpos reativos com a região conservada da intimina foram significativamente mais elevadas em comparação com as regiões variáveis no soro dos grupos de mães e de recém-nascidos. Houve alta correlação entre todos os anticorpos anti-intiminas nas amostras de colostro. Comparando-se as concentrações de anticorpos séricos, os coeficientes foram maiores entre anti-&#945; e anti-&#946; que entre os outros pares. Nossos resultados confirmam a transferência de anticorpos maternos para o recém-nascido pela placenta e pelo aleitamento materno e reforça o efeito protetor da amamentação contra infecção por EPEC. / Intimin is a proteic adhesin of enteropatogenic (EPEC) and enterohemorragic (EHEC) Escherichia coli, capable of inducing attachment and effacement lesion in enterocytes. The main subtypes of intimins of EPEC and EHEC prevalent in Brazil are &#945;, &#946; and &#947;. Our aim is to investigate the transference of maternal anti-intimin antibodies to the newborns of healthy mothers from Sao Paulo, Brazil. IgG and SIgA antibodies were determined in sera and colostrum from 50 healthy women and cord sera from their newborns, by ELISA using as antigens purified recombinant proteins, conserved and variable regions of &#945;, &#946; and &#947; intimins. The IgA antibody concentrations of colostrum are higher than IgG antibodies in serum for all intimins and there were no statistical differences between them in colostrum samples. The concentrations of antibodies reactive with the conserved region of intimin are significantly higher compared to the variable regions in the sera groups, mothers and newborns. There were high correlation coefficients between all the anti-intimins antibodies in colostrum samples. In the comparison of the seric antibody concentrations, the coefficients were higher between anti-&#945; and anti-&#946; than all the other pairs. Our results confirm the transference of maternal antibodies to the newborns by placenta and breastfeeding and reinforce the high protection effect of breastfeeding against EPEC infection.