Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Banca: Nei Moreira / Resumo: O estudo da proteína fosfolipase C zeta (PLCζ), considerada o fator espermático ativador do oócito em mamíferos, pode beneficiar algumas técnicas de reprodução assistida, como a injeção espermática intracitoplasmática e transferência nuclear, por propiciar conhecimento a respeito do processo de fertilização e a possibilidade de utilização da PLCζ presente nos extratos espermáticos. Portanto, o objetivo deste estudo foi localizar a PLCζ em extratos provenientes do citosol e matriz perinuclear de espermatozóides de gatos domésticos normospérmicos e teratospérmicos. Amostras de sêmen foram colhidas de seis gatos adultos: normospérmicos (n=3), teratospérmicos (n=2) e de qualidade seminal intermediária (n=1). As proteínas do citosol foram extraídas utilizando os procedimentos de sonicação, ultracentrifugação, ultrafiltração e precipitação em sulfato de amônio. Por sua vez, as proteínas da matriz perinuclear foram extraídas após incubação em Na2CO3, sonicação, ultracentrifugação, ultrafiltração e precipitação em sulfato de amônio. Com base na avaliação ultraestrutural dos espermatozóides e dosagem de proteína total, foi confirmada a eficiência de ambos os protocolos de extração. As amostras da matriz perinuclear apresentaram 3,3 vezes menos proteína total e diferente perfil protéico na eletroforese unidimensional e bidimensional quando comparadas as amostras obtidas do citosol. Após análise das proteínas encontradas, foi concluído que nos extratos espermáticos do citosol e matriz perinuclear de gatos domésticos normospérmicos e teratospérmicos estão presentes proteínas de peso molecular semelhante ao previamente descrito para a proteína PLCζ em outras espécies de mamíferos / Abstract: The study of phospholipase C zeta protein (PLCζ), considered as the oocyte activating sperm factor in mammals, could benefit some assisted reproductive techniques, such as intracytoplasmic sperm injection and nuclear transfer, by providing knowledge about the process of fertilization and the possibility of using the PLCζ contained in the sperm extracts. Thus, the aim of this study was to localize the phospholipase C zeta (PLCζ) protein in extracts from the spermatozoa cytosol and perinuclear matrix of normospermic and teratospermic domestic cat. Sperm samples were collected from six adult male cats: normospermic (n=3), teratospermic (n=2) and with intermediate sperm quality (n=1). Proteins from the cytosol were extracted using the procedures of sonication, ultracentrifugation, ultrafiltration and precipitation in ammonium sulfate. On the other hand, proteins from perinuclear matrix were extracted after incubation in Na2CO3, sonication, ultracentrifugation, ultrafiltration and precipitation in ammonium sulfate. Based on the ultrastructural analysis of the spermatozoa and total protein determination, the efficiency of both extraction protocols was confirmed. Samples from perinuclear matrix showed 3.3 times less total recovered protein and different protein profile in the uni- and bidimensional electrophoresis when compared to the samples obtained from the cytosol. After protein profile analysis, it can be concluded that several proteins showing similar molecular weight to that previously described for PLCζ protein in other mammalian species are presented in both sperm extracts from cytosol and perinuclear matrix of normospermic and teratospermic domestic cats / Doutor

Resumo: O Diabetes mellitus, doença que atinge milhões de pessoas em todo o mundo, é considerado um significante fator de risco para o desenvolvimento de problemas cardiovasculares. Caracterizado principalmente pelo quadro de hiperglicemia, o diabetes pode apresentar ainda um conjunto de características que, associadas, contribuem para o surgimento de complicações vasculares e para o aumento do risco de morte por problemas cardíacos independente de outros fatores. Atualmente, o exercício físico regular, juntamente com a insulinoterapia e o planejamento alimentar, tem sido considerada como uma das principais abordagens no tratamento do diabetes tipo I, com o objetivo de aproximar as condições metabólicas do paciente a um estado fisiológico normal, impedindo ou retardando as complicações crônicas do diabetes. Este estudo tem por objetivo avaliar as alterações morfológicas causadas pelo diabetes na musculatura ventricular esquerda de ratos diabéticos, bem como o efeito do exercício físico na recuperação ou prevenção destas alterações. Para isso, foram utilizados ratos adultos da linhagem Wistar divididos em quatro grupos: diabéticos sedentários (DS), diabéticos treinados (DT), controle sedentário (CS) e controle treinado (CT), sendo que os grupos treinados realizaram um protocolo de exercício físico. O diabetes experimental do tipo I foi induzido por meio da aplicação de aloxana monoidratada Sigma® (35 mg/kg de peso corporal) dissolvida em tampão citrato 0,01M, pH 4,5. O protocolo de treinamento consistiu de natação por 60 minutos diários, 5 dias por semana, durante 8 semanas consecutivas com uma carga de 4,8% (para animais diabéticos) e 5,2% (para os animais saudáveis), correspondente à máxima fase estável de lactato. As análises histológicas e histoquímicas mostraram várias alterações morfológicas em decorrência do diabetes experimental... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diabetes mellitus, a disease that affects millions of people around the world, is considered a significant risk factor for developing cardiovascular problems. Mainly characterized by hyperglycemia, diabetes can also present a set of characteristics wich when associated contribute to the onset of vascular complications and to the increase of the risk of death from heart disease independent of other factors. Currently, regular exercise, along with insulin therapy and meal planning, has been regarded as one of the main approaches in the treatment of type 1 diabetes, aiming to approximate the metabolic conditions of the patient to a normal physiological state, preventing or delaying the chronic complications of diabetes. This study aims to analyse the morphological changes caused by diabetes in the left ventricular muscle of diabetic rats and the effect of exercise on recovery or prevention of these changes. To do this, were used adult male Wistar rats, wich were divided into four groups: diabetic sedentary (DS), diabetic training (DT), sedentary control (SC) and trained control (TC), and the trained groups conducted a protocol of physical exercise. Experimental diabetes type 1 was induced by the application of alloxan monohydrate Sigma® (35 mg / kg body weight) dissolved in citrate buffer 0.01 M, pH 4.5. Training protocol consisted of swimming for 60 minutes daily, 5 days a week for 8 weeks, with a load of 4.8% (for diabetic animals) and 5.2% (for healthy animals), corresponding to the maximal lactate steady state. Histological and histochemical analisys showed morphological changes due to experimental diabetes. It was evident through the hematoxylin-eosin technique tissue disorganization of the ventricular muscle which occurred in DS. However tissue organization was close to normal in DT animals. The PAS reaction was most intense in DS animals, both in the endomysium as in the cytoplasm... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Flávio Henrique Caetano / Coorientador: Ricardo José Gomes / Banca: Gustavo Puggina Rogatto / Banca: Claudia Helena Pellizzon / Mestre

Orientador: Carminda da Cruz Landim / Banca: José Eduardo Serrão / Banca: Glaucia Maria Cavasin Oliveira / Banca: Lucio Antonio de Oliveira Campos / Banca: Fabio Camargo Abdalla / Resumo: Entre as abelhas altamente eussociais, o estudo de aspectos da morfologia e da ultra-estrutura tem ajudado a esclarecer uma série de questões sobre a sua biologia. A divisão de trabalho distingue as fêmeas em duas castas, sendo uma com função reprodutiva (rainha) e outra que desempenha as mais diversas tarefas dentro da colônia (operária). Espécies do gênero Frieseomelitta mostram esta divisão de forma mais clara, uma vez que suas operárias nunca põem ovos; começando um processo degenerativo nos ovários ainda no final de sua diferenciação. Porém, nas diferentes espécies e em diferentes condições, as operárias podem desenvolver seus ovários e realizar postura de ovos tróficos que são comidos pelas rainhas, ou dar origem a machos. O primeiro caso mostra que além da contribuição dada pelas operárias na produção de alimento para a cria com suas secreções glandulares, elas contribuem também com seus ovos para produzir alimento. Já o segundo caso pode ser um indicativo de que a divisão do trabalho reprodutivo ainda não está totalmente definida. A fertilidade das rainhas também parece se manifestar de diferentes formas. Em Apis mellifera, é evidenciada pela enorme diferença no número de ovaríolos, bem maior nas rainhas do que nas operárias. Esta diferença é devido a uma redução sofrida pelas operárias durante o desenvolvimento pós-embrionário. Já nos 9 meliponíneos o número de ovaríolos de rainhas e operárias é, para a maioria das espécies, igual e em número de quatro por ovário. Em Trigona spinipes, o número de ovaríolos dos ovários das operárias é sempre igual a quatro, enquanto que nas rainhas pode variar entre oito e quinze, entre as rainhas e entre os ovários da mesma rainha... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The survey of morphological and ultrastructural aspects of highly eusocial bees, have cleared and supported many questions about their biology. The division of labour discern the females in to two castes, being one with reproductive function (queen) and other that perform differents tasks within the colony (worker). Frieseomelitta shows this division clearly. The workers never lay eggs; starting a degenerative process in the ovaries yet in the ending your differentiation. However, in different species and in different conditions, the workers can develop their ovaries and lay eggs that can be trophic and be eaten by the queens, or give rise males. The first condition show that further of the contribution given by the workers in the food production for the brood with yours glandular secretions, they contribute also with yours eggs for to produce food. The second condition can be an evidence that division of reproductive labour is not entirely solved yet. Queen's fertility also seems to be expressed in different ways. In honey bees Apis mellifera, there is a large difference in ovarioles number, which are bigger in queens than workers. This difference is due to the decrease in workers ovarioles number during the post-embryonic development. In Meliponini the ovarioles number of queens and workers is, for most of the species, the same; four per ovary. 11 In Trigona spinipes, the ovarioles number in workers is always four, while in queens can vary from eight to fifteen among queens and among the ovaries of the same queen. Anyway, the ovariole number present in the ovary of queens in Meliponini is very small if compared to Apis mellifera; that suggest that their efficience in egg production can be higher and attached to the ovarioles lengh... (Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Orientador: Carminda da Cruz-Landim / Banca: Karina Patrício / Banca: José Lino Neto / Banca: José Chaud Netto / Banca: Daniela Carvalho dos Santos / Resumo: Os ovários das rainhas diferem dos de operárias de Apis mellifera quanto ao número e comprimento dos ovaríolos. Tanto o número, como o comprimento destes, é muito maior na rainha que nas operárias. No entanto, em ambos os casos os ovários são funcionais, isto é, capazes de produzir óvulos maduros. Apesar disso, operárias e rainhas diferem muito quanto à fertilidade e aos mecanismos controladores/estimuladores da vitelogênese, ou seja, da maturação dos óvulos. Em condições normais da colônia, nas rainhas a vitelogênese é desencadeada pelo acasalamento e nas operárias, pela ausência da rainha ou do recebimento de informações sobre sua presença na colônia. Passada a ocasião própria para o acasalamento no caso da rainha, e em idade avançada das operárias, os ovários entram em degeneração. O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar como se comporta o desenvolvimento do ovário em rainhas e operárias mantidas fora dos condicionamentos da colônia e o efeito do tratamento destas com CO2, prática corrente na apicultura. Para tanto, operárias e rainhas foram mantidas aprisionadas em caixas com candy e água durante 15 dias e seguida a seqüência de desenvolvimento de seus ovários. O efeito do não acasalamento na época própria e do tratamento com CO2 foi feito estudando a morfologia do desenvolvimento da ovogênese, usando TUNEL e reação de fosfatase acida para caracterizar possíveis alterações celulares. As células do filamento terminal apresentaram-se empilhadas em fila única. Na transição para o germário as células tornam-se piramidais com a base apoiada sobre a lâmina própria e o ápice voltado para o centro do ovaríolo. São encontradas células esféricas, provavelmente ovogônias. No germário estão presentes células somáticas e germinativas, sendo da linhagem germinativa, os cistoblastos, os cistócitos, os ovócitos e as futuras... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The ovaries of queens and workers of Apis mellifera differs in number and length of the ovarioles. Length and number of ovarioles are larger in queen than in workers. However, in both cases, the ovaries are functional, i.e., it is able of produce mature eggs. Despite of that, workers and queens differ very in fertility and mechanisms of controlling/inducing vitellogenesis. In colony conditions, queen's vitellogenesis is triggered by the matting and in workers by the absence of the queen or of the receipt of information about its presence in the colony. After the age proper to mate or in workers advanced age, the ovaries enter in degeneration. The objective of the present work was the evaluating of the ovary development in queens and workers maintained caged outside of the colony conditionings and the effect of the narcosis with CO2, practice current in the beekeeping. Newly emerged queens and workers were caged with candy and water during 15 days. For the queens the effect of the mate delay and CO2 narcosis were studied using TUNEL and acid fosfatase reaction to evaluate cell damages. The cells of the terminal filament appear as rows of one single cell, with a rectangular shape, poor in organelles and with a big central nucleus. In the transition for the germarium the cells present a pyramidal form with their base widened resting on tunica propria and the apex directed to center of the ovariole. Below the region of transition to the germarium are spherical cells, probably the oogonia. In the germarium are found somatic (pre-follicular cells) and germinative (cystoblasts, the cystocists, the oocytes and the future nurse cells) cells. The queen's ovaries develop normally until the mating age, 5 days old queens. About the 10 days, the virgin queen beginning to presents an ovariolar disorganization with big incidence of injured cells with characteristics of apoptosis and autofagic death... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O diabetes mellitus resulta de uma complexa interação entre vários graus de susceptibilidade genética e fatores ambientais. Sua principal característica é a secreção deficiente de insulina (hipoinsulinemia), ou ainda a baixa sensibilidade dos tecidos periféricos a este hormônio, fatos que resultam em uma elevação característica nos níveis de glicose no sangue (hiperglicemia). O diabetes tipo I caracteriza-se pela hipoinsulinemia, sendo acompanhado por alterações metabólicas e bioquímicas, além de prejuízos morfológicos em diversos tecidos, como o fígado e o intestino grosso. A prática regular de exercícios é reconhecida como um fator preventivo muito importante para os casos de diabetes, aumentando a sensibilidade e resposta à insulina e diminuindo sua necessidade em indivíduos diabéticos. A fim de analisar estas alterações, ratos Wistar foram distribuídos em quatro grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS) e diabético treinado (DT). O diabetes foi induzido por aloxana monoidratada Sigma. Amostras de fígado e intestino grosso foram coletadas para a realização de técnicas histoquímicas e ultraestruturais. Desta forma, este estudo teve como objetivo principal investigar os prejuízos provenientes do desenvolvimento do diabetes nos tecidos analisados e, a partir desta análise, avaliar os efeitos do treinamento físico na amenização ou prevenção destas alterações. Resultados histoquímicos bastante expressivos foram encontrados no fígado, principalmente em relação ao acúmulo de glicogênio e de fibras colágenas perisinusoidais nas células hepáticas que, após a realização de treinamento físico moderado, atingiram níveis mais próximos dos considerados normais. Os resultados ultraestruturais demonstraram grandes alterações na presença de mitocôndrias e retículo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diabetes mellitus results from a complex interaction between various degrees of genetic susceptibility and environmental factors. Its main feature is a deficient insulin secretion (hypoinsulinemia), or the low sensitivity of peripheral tissues to this hormone, facts that result in a characteristic elevation of blood glucose levels (hyperglycaemia). Type I diabetes is characterized by hypoinsulinemia, and is followed by metabolic and biochemical alterations, besides morphological impairment in various tissues, such as liver and large intestine. Regular exercise is recognized as an important preventative factor in cases of diabetes, increasing sensitivity and response to insulin and decreasing its necessity in diabetic individuals. In order to analyze these changes, Wistar rats were divided into four groups: Sedentary Controls (SC), Trained Controls (TC), Sedentary Diabetics (SD) and Trained Diabetics (TD). Diabetes was induced by monohydrate alloxan Sigma. Liver and large intestine samples were collected for carrying out histochemical and ultrastructural techniques. Thus, this study aimed to investigate the damage proceeding from the development of diabetes in the analyzed tissues and evaluate, from this analysis, the effects of physical training in alleviating or preventing these changes. Very promising histochemical results were found in the liver, especially related to the accumulation of glycogen and perisinusoidal collagen fibers in liver cells that, after performing moderate physical training, reached levels near those considered normal. Ultrastructural results showed important variations in the presence of mitochondria and rough endoplasmic reticulum in the cytosol of diabetic rats' hepatocytes. Slight recovery was observed as result of exercise. Large intestine, in turn, presented significant histochemical changes in the amount of mucin secreted, besides alterations... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Flávio Henrique Caetano / Coorientador: Ricardo José Gomes / Banca: Dimitrius Leonardo Pitol / Banca: Fernando José Zara / Mestre