Orientador: Carminda da Cruz Landim / Banca: Márcia Maria Gentile Bitondi / Banca: Flávio Henrique Caetano / Banca: Hélio Conte / Banca: Maria Izabel Souza Camargo / Resumo: Nas abelhas eussociais há duas castas femininas, as rainhas que são responsáveis pela produção dos indivíduos que mantêm a população da colônia e fazem sua multiplicação e as operárias que compartilham entre si todas as tarefas de manutenção da colônia e das próprias atividades da rainha. Na espécie estudada, Melipona quadrifasciata anthidioides, uma abelha sem ferrão, as operárias normalmente produzem ovos em seus ovários na fase em que se ocupam do aprovisionamento das células de cria (operárias nutridoras), diferentemente de Apis mellifera em que feromônios da rainha são capazes de inibir a vitelogênese nos ovários das operárias. As diferenças funcionais entre rainhas e operárias em ambas espécies são controladas hormonalmente. O corpo gorduroso (CG) é um tecido constituído basicamente por um único tipo de célula designado trofócito, cuja função se assemelha em vários aspectos à dos hepatócitos. Os trofócitos ao mesmo tempo em que retiram substâncias da hemolinfa e as armazenam ou metabolizam, sintetizam outras que nela descarregam. Entre estas últimas está a vitelogenina, uma proteína precursora do vitelo acumulado pelos ovócitos durante a vitelogênese, como reserva para o futuro desenvolvimento do embrião. Neste trabalho a citoquímica dos trofócitos de rainhas virgens, fisogástricas e de operárias nutridoras foi estudada com microscopia eletrônica de transmissão (MET) e comparadas com a morfologia do desenvolvimento dos ovócitos no ovário com a finalidade de comparar a atividade dos trofócitos com a absorção de substâncias da hemolinfa pelo ovário. Em outra vertente a presença da vitelogenina foi pesquisada no CG e no ovário de ambas as castas, na tentativa de verificar se havia concordância quanto à produção da proteína nos trofócitos e sua presença nos ovários... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eussocial bees have two female castes, the queens that are responsible for producing individuals that will keep the colony population and workers that share among them the tasks of colony maintenance and of the queen care. In the studied species Melipona quadrifasciata anthidioides, a stingless bee, workers normally produce eggs in their ovaries when they are provisioning the brood cells (nurse workers), differently from Apis mellifera, where pheromones from the queen are able of prevent the vitellogenesis in the workers ovaries. The functional differences between queens and workers are, in both castes controlled by hormones. The fat body (FB) tissue is constituted basically by a single kind of cell designated throphocyte whose function is similar in several aspects to the hepatocytes. The throphocytes at the same time that take substances from the hemolymph and storage or metabolize them also synthesize others that are discharged in the body fluid. Among these is the vitellogenin, a precursor protein of the yolk accumulated by oocytes during the vitellogenesis as a reserve for further development of the embryo. In this work the cytochemistry of trophocytes of virgin and physogastric queens and nurse workers was studied with transmission electron microscopy (TEM) and compared to the morphology of oocytes development in the ovary with the purpose of correlate morphologically the activity of trophocytes to the absorption of substances from hemolymph by the ovaries. The presence of vitellogenin was searched in the FB and ovaries extracts of both castes by electrophoresis, as an attempt to see if there was an agreement between production of the protein in the trophocytes and their presence in the ovaries. Finally, taking into account the action of the morphogenetics hormones over the trophocytes, these cells of both castes were incubated into medium containing juvenile hormones III... (Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Francisca Elda Ferreira Dias / Banca: Ivo Walter dos Santos / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Francisco Guilherme Leite / Resumo: O principal objetivo das pesquisas com MIV canina tem sido o desenvolvimento e implementação adequados da fecundação in vitro (FIV) e do cultivo embrionário in vitro (CIV) para a obtenção de embriões das espécies de canídeos em extinção. Concomitantemente à publicação de dados sobre índices de MIV em cadelas, surgiram alguns relatos sobre taxas de maturação completa e indícios de retomada da meiose em oócitos provenientes de folículos pré-ovulatórios. Assim, o presente estudo objetivou investigar a incidência de maturação oocitária intraovariana de cadelas em anestro, estro natural e estro induzido. Os oócitos foram colhidos após fatiamento ovariano e imediatamente corados com bisbenzimida para avaliação dos diferentes graus de configuração cromossômica. Em conclusão podemos afirmar que há retomada e progressão da meiose em oócitos, no ambiente intrafolicular; não há diferença estatística (P<0,05) nas porcentagens das diferentes configurações cromossômicas de acordo com os estádios reprodutivos avaliados neste estudo (anestro/estro e estro induzido). / Abstract: The main canine MIV research goal has been adequate in vitro fecundation develop and implementation (FIV) and the in vitro embryo cultivation (CIV) to obtain in extinction canid species embryos. Concomitantly to data publication about bitch MIV indexes appeared some relates about complete maturation rates and indications of meiosis retaken in oocytes from pre-ovulatory follicles. This way, the present study aimed investigate the anestrus bitches interovarian oocytary maturation incidence, natural estrus and estrus-induced The oocytes were collected after the ovary slicing and immediately colored with bisbenzimide to evaluate the different chromosomic configuration degrees. As a conclusion, can be affirmed there is meiosis progression and resumption in oocytes, in the intra follicular environment. There were no statistical difference (P<0.05) between the different chromosomic configurations percentages according to the reproductive stages evaluated in this study (anestrus/estrus and estrus- induced). / Doutor

Orientador: Gilson Hélio Toniollo / Banca: Renée Laufer Amorim / Banca: Antonio Carlos Alessi / Resumo: Os órgãos reprodutores das fêmeas caninas sofrem transformações morfológicas e funcionais durante o ciclo estral, sob influência do estrógeno e da progesterona. A proteína CYR61 (proteína rica em cisteína, 61kilodaltons), mediada por citocinas inflamatórias, interleucinas, integrinas e outros, regula processos como proliferação e diferenciação celular, quimiotaxia, angiogênese e tumorgênese. É identificada em endometriose em mulheres, ratas e fêmeas de babuíno, acometidas por endometriose ou hiperplasia endometrial. Objetivou-se com este estudo imunolocalizar e quantificar a expressão da CYR61 em órgãos reprodutores das fêmeas caninas saudáveis, sob diferentes níveis séricos de progesterona e estradiol, e acometidas por piometra. Os tecidos coletados das 100 fêmeas caninas foram submetidos à técnica de imunoistoquímica com anticorpo anti-CYR61, e apresentaram marcação citoplasmática positiva nos componentes epiteliais em maior intensidade quando comparada aos componentes estromais. Foi identificada correlação linear positiva de área com marcação citoplasmática no ovário, corno uterino e corpo do útero, na fase lútea do ciclo estral. As tubas uterinas demonstraram maior expressão e correlação linear positiva com a fase proliferativa do ciclo estral. É possível concluir que a expressão do CYR61 está diretamente relacionada com as alterações morfológicas e funcionais dos órgãos reprodutores femininos, provocadas pelos hormônios ovarianos nas diferentes fases do ciclo estral, de forma particular sobre cada tecido, de acordo com suas funções fisiológicas / Abstract: The reproductive organs of female dogs suffer morphological and functional changes during the estrous cycle, under the influence of estrogen and progesterone. CYR61 protein (cystein-rich protein, 61kilodaltons) mediated by inflammatory cytokines, interleukins, integrins and others, regulates the processes such as cell proliferation and differentiation, chemotaxis, angiogenesis and tumorgenesis. It was identified in endometriosis in women, rats and female baboon, who suffers from endometriosis or endometrial hyperplasia. The objective of this study was the immunolocalization and quantification of CYR61 expression in reproductive organs of healthy canine females under different levels of progesterone and estradiol, and females affected by pyometra. The tissues collected from 100 females dogs were subjected to immunohistochemistry analyses with anti-CYR61, and showed cytoplasmatic positive reaction in higher intensity on epithelial components, when compared with stromal components. This study identified positive linear correlation of cytoplasmatic area with positive reaction on the ovary and uterus in luteal phase of the estrous cycle. The fallopian tubes showed higher expression and positive linear correlation with estradiol, in proliferative phase of the estrous cycle. It was concluded that the CYR61 expression is directly related to the morphological and functional changes of the female reproductive organs, caused by the ovarian hormones at different stages of the estrous cycle in a particular way on each tissue, according to their physiological functions / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Luiz Fernando de Souza Rodrigues / Banca: César Roberto Esper / Resumo: Avaliou-se macro e microscopicamente os ovários de ovelhas submetidas a sucessivas aspirações foliculares, com o objetivo de se verificar se houve ou não interferência na produção oocitária e morfologia das gônadas; além da avaliação macroscópica do trato genital interno. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, distribuídas aleatoriamente compuseram três grupos experimentais de igual número (n=6). G0, G1, G9 com 0, 1 e 9 repetições, respectivamente. A sincronização do estro foi feita utilizando-se protocolo curto com MAP, seguindo-se estimulação, em dose única, com 80mg de FSHp e 300 UI de eCG (IM) e após 36 horas realizavam-se as aspirações foliculares por vídeolaparoscopia, com intervalo de 7 dias. Os folículos visibilizados, os aspirados e os oócitos recuperados foram contabilizados. Após a última intervenção foi realizada ovariectomia para avaliar os macro e microscopicamente, a existência ou não de lesões causadas pelas punções foliculares, classificando a intensidade do processo em ausente (0), leve (1), moderada (2) e severa (3). Os dados foram expressos em média e desvio padrão, comparados pelo teste one-way ANOVA e teste de Tukey. Os números de folículos visibilizados, aspirados e oócitos recuperados foram de 13,24±2,0, 11,27±3,03 e 5,79±2,3 respectivamente, com taxa de recuperação de 51,69%, não havendo diferenças entre as nove sessões (p>0,05). Também não se verificou, macroscopicamnte, lesões no trato genital interno, nem alterações consideráveis nas análises histológicas, sendo o escore 0±0 para o G0, 0,1±0,4 para o G1 e 0±0 para o G9 (p>0,05). Conclui-se que as nove sessões de superovulação e aspiração folicular não causam lesões ovarianas e não interferiram na produção de folículos em ovelhas da raça Santa Inês / Abstract: We evaluated macroscopically and microscopically the ovaries of ewes to repeated follicular aspiration, in order to verify whether or not there was interference with the production oocyte and gonad morphology, besides the macroscopic evaluation of internal genital tract. Eighteen sheep Santa Ines, randomly distributed three groups composed of equal numbers (n = 6). G0, G1, G9 with 0, 1 and 9 replicates, respectively. Synchronization of estrus was performed using short protocol with MAP, followed by stimulation in a single dose of 80mg FSHp and 300 IU of eCG (IM) and after 36 hours was held at the follicular aspiration by laparoscopy with interval 7 days. The follicles visualized, aspirated and the oocytes recovered were counted. After the last intervention was performed ovariectomy was performed to assess the macro and microscopically, the presence or absence of lesions caused by follicular puncture, classifying the intensity of the process as absent (0), mild (1), moderate (2) and severe (3) . Data were expressed as mean and standard deviation and compared by using one-way ANOVA and Tukey test. The numbers of follicles visualized, aspirated and oocytes recovered were 13.24 ± 2.0, 11.27 ± 3.03 and 5.79 ± 2.3 respectively, with a recovery rate of 51.69%, with no differences among the nine sessions (p> 0.05). Nor is there, macroscopicamnte, internal genital tract injury, or significant changes in histological evaluations, with a score of 0 ± 0 for G0, 0.1 ± 0.4 for G1 and 0 ± 0 for the G9 (p> 0.05). We conclude the nine sessions of superovulation and ovum do not cause ovarian lesions and did not interfere in the production of follicles in Santa Ines sheep / Mestre

Resumo: Um experimento foi realizado na Unesp, Campus de Jaboticabal, com o objetivo de avaliar o desempenho, a qualidade dos ovos e o peso relativo dos órgãos de poedeiras comerciais submetidas a diferentes métodos de muda forçada em três condições de temperatura. Foram distribuídas 600 aves em um delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5x3 (métodos de muda forçada x temperaturas), com cinco repetições de oito aves cada. Os métodos de muda forçada testados foram rações com inclusão de alfafa, em 90%, 70% e 50%, dieta com 2.800 ppm de zinco e método com jejum alimentar. As temperaturas utilizadas foram ± 20º C, ± 25º C e ± 35º C. Durante o processo de muda e descanso foram avaliadas características de desempenho das aves. No segundo ciclo de produção ao final de cada período foram avaliadas características de desempenho e qualidade dos ovos. Ao final de cada período (muda forçada, descanso e segundo ciclo de produção) foram avaliados os pesos relativos dos órgãos das aves (ovário, oviduto, fígado, pró-ventrículo e moela). Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância pelo programa SAS ® e as médias comparadas por meio de contrastes ortogonais e polinomiais. O método de muda tradicional (jejum alimentar) apresentou resultados satisfatórios quanto ao desempenho das aves. No entanto, como o objetivo do presente estudo foi o de encontrar um método alternativo ao de jejum alimentar, o com maior nível de inclusão de alfafa (90% de alfafa e 10% de ração), demonstrou ser eficiente, quando comparado com os demais métodos, independente da temperatura / Abstract: One experiment was conducted to evaluate the performance, egg quality and organ weights of laying hens subjected to different methods of molt in three temperature conditions. 600 birds were distributed in a completely randomized experimental design using 15 treatments and 5 replications of 8 birds each, according 5x3 factorial (methods of molt x temperature. The diets by molt were: 90%, 70% and 50% inclusion of alfalfa: addition of 2,800 ppm zinc and last group was a total feed restriction. The temperatures were: ± 20 º C, ± 25 º C and ± 35 º C. The performance was evaluated during the molt and bird's rest. In the second cycle of production, and at the end of each period were evaluated the performance and egg quality. At the end of each period (molt, rest, and second cycle) were evaluated relative weights of organs (ovary, oviduct, liver, proventriculus and gizzard). The data were subjected to analysis of variance using SAS ® and the means were compared by orthogonal polynomial contrasts. The traditional method o molt (feed restrition) shown satisfactory results. However, the objective of the study was looking for an alternative method to the traditional also the highest level of inclusion of alfalfa (90% alfalfa and 10% of basal diet) proved to be efficient compared than other methods, independent of the temperature / Orientador: Otto Mack Junqueira / Coorientador: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Marcos Macari / Banca: Lúcio Francelino Araújo / Mestre

Orientador: Carminda da Cruz Landim / Banca: José Eduardo Serrão / Banca: Glaucia Maria Cavasin Oliveira / Banca: Lucio Antonio de Oliveira Campos / Banca: Fabio Camargo Abdalla / Resumo: Entre as abelhas altamente eussociais, o estudo de aspectos da morfologia e da ultra-estrutura tem ajudado a esclarecer uma série de questões sobre a sua biologia. A divisão de trabalho distingue as fêmeas em duas castas, sendo uma com função reprodutiva (rainha) e outra que desempenha as mais diversas tarefas dentro da colônia (operária). Espécies do gênero Frieseomelitta mostram esta divisão de forma mais clara, uma vez que suas operárias nunca põem ovos; começando um processo degenerativo nos ovários ainda no final de sua diferenciação. Porém, nas diferentes espécies e em diferentes condições, as operárias podem desenvolver seus ovários e realizar postura de ovos tróficos que são comidos pelas rainhas, ou dar origem a machos. O primeiro caso mostra que além da contribuição dada pelas operárias na produção de alimento para a cria com suas secreções glandulares, elas contribuem também com seus ovos para produzir alimento. Já o segundo caso pode ser um indicativo de que a divisão do trabalho reprodutivo ainda não está totalmente definida. A fertilidade das rainhas também parece se manifestar de diferentes formas. Em Apis mellifera, é evidenciada pela enorme diferença no número de ovaríolos, bem maior nas rainhas do que nas operárias. Esta diferença é devido a uma redução sofrida pelas operárias durante o desenvolvimento pós-embrionário. Já nos 9 meliponíneos o número de ovaríolos de rainhas e operárias é, para a maioria das espécies, igual e em número de quatro por ovário. Em Trigona spinipes, o número de ovaríolos dos ovários das operárias é sempre igual a quatro, enquanto que nas rainhas pode variar entre oito e quinze, entre as rainhas e entre os ovários da mesma rainha... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The survey of morphological and ultrastructural aspects of highly eusocial bees, have cleared and supported many questions about their biology. The division of labour discern the females in to two castes, being one with reproductive function (queen) and other that perform differents tasks within the colony (worker). Frieseomelitta shows this division clearly. The workers never lay eggs; starting a degenerative process in the ovaries yet in the ending your differentiation. However, in different species and in different conditions, the workers can develop their ovaries and lay eggs that can be trophic and be eaten by the queens, or give rise males. The first condition show that further of the contribution given by the workers in the food production for the brood with yours glandular secretions, they contribute also with yours eggs for to produce food. The second condition can be an evidence that division of reproductive labour is not entirely solved yet. Queen's fertility also seems to be expressed in different ways. In honey bees Apis mellifera, there is a large difference in ovarioles number, which are bigger in queens than workers. This difference is due to the decrease in workers ovarioles number during the post-embryonic development. In Meliponini the ovarioles number of queens and workers is, for most of the species, the same; four per ovary. 11 In Trigona spinipes, the ovarioles number in workers is always four, while in queens can vary from eight to fifteen among queens and among the ovaries of the same queen. Anyway, the ovariole number present in the ovary of queens in Meliponini is very small if compared to Apis mellifera; that suggest that their efficience in egg production can be higher and attached to the ovarioles lengh... (Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Orientador: Irene Bastos Franceschini Vicentini / Banca: Antonio Marcos Orsi / Banca: Maíra Aparecida Stefanini / Banca: Margarida Maria Barros Ferreira Lima / Banca: Maria Terezinha Siqueira Bombonato / Resumo: O presente trabalho realizou o estudo dos aspectos estruturais do hepatopâncreas, ovários e da caracterização hormonal de fêmeas de Macrobrachium amazonicum, nos diferentes estágios de maturação gonadal. Para tanto utilizaram-se 150 fêmeas adultas subdivididas entre os cinco diferentes estágios de maturação ovariana. Após serem capturados os animais foram pesados e mortos por choque térmico. Ovários e hepatopâncreas foram coletados e pesados individualmente para obtenção dos índices gonadossomático (IGS) e hepatossomático (IHS). Para as análises de microscopia de luz e eletrônica de transmissão, ovários e hepatopâncreas foram fixados em solução de Karnovsky e seguiram os procedimentos de rotina de inclusão. Os ovários, hepatopâncreas e hemolinfa destinados à quantificação hormonal foram armazenados em ependorfes e preservados em nitrogênio líquido a -70ºC, para posterior processamento de radioimunoensaio visando avaliação das concentrações de estradiol, progesterona e testosterona. Os resultados relacionados ao IGS e IHS demonstram uma correlação inversa entre os ovários e o hepatopâncreas nos diferentes estágios de maturação gonadal. Em relação ao desenvolvimento ovariano, observa-se a distribuição de cinco tipos celulares ao longo dos cinco estágios de maturação gonadal. Desta forma encontram-se as ovogônias ou células germinativas mais jovens no estágio I de maturação ovariana. As células pré-vitelogênicas, observadas a partir do estágio II, apresentam vesículas de retículo endoplasmático rugoso. Essas vesículas são importantes nas fases de vitelogênese endógena e exógena. Os ovócitos em vitelogênese inicial, característicos do estágio III, apresentam a deposição de vitelo endógeno. As células em vitelogênese avançada, próprias do estágio IV de maturação gonadal, são o alvo principal da vitelogênese ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study described the structural aspects of the hepatopancreas and ovaries, and the hormonal features of females of the freshwater prawn Macrobrachium amazonicum, during the reproductive cycle. The specimens were captured and killed by thermic chock. The gonadosomatic (GSI) and hepatosomatic (HSI) indices were calculated as the percentage of the weight of the gonad and hepatopancreas to total body weight, respectively. Ovaries and hepatopancreas were fixed in Karnovsky solution and destined to light and ultrastructural microscopy studies. Small portions of the ovary, hepatopancreas and hemolymph were frozen in liquid nitrogen, for later steroid quantification (estradiol, progesterone and testosterone). The relationships between GSI and HSI demonstrate an inverse correlation between ovary and hepatopancreas during the maturation cycle. The oocytes distribution is variable depending on the ovarian maturation degree. The ovary in stage I consists of oogonia. The ovary in stage II consists mainly by previtellogenic oocytes that possess vesicles of the endoplasmic reticulum. These vesicles are important to endogenous and exogenous vitelogenesis. Initial vitellogenic oocytes are mainly observed in the ovary in stage III and possess vitelline reserve, called as endogenous vitelogenesis. Ovary in stage IV is composed of late vitellogenic oocytes that uptake exogenous vitellogenin. Mature oocytes present a corion formation. The hepatopancreas is composed by tubules that are lined by a pseudostratified epithelium, which consists of five cell types, identified as E (embryonic), F (fibrillar), B (blisterlike), R (resorptive) and M (basal). These cells present relationships with digestion and nutrient storage, which are very important for the reproductive processes ...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor