Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / As células necessitam do contato com outras células e com a matriz extracelular, para a formação de tecidos. As junções gap são estreitos canais que conectam o citoplasma de células adjacentes, promovendo a passagem de íons orgânicos, aminoácidos, nucleotídeos e outros metabólitos. Estas junções são compostas por dois conexons ou hemicanais, que atravessam a membrana plasmática da célula a que pertencem, e são compostos por seis proteínas integrais de membrana denominadas conexinas (Cxs). A Cx43 é a mais expressa, e é fosforilada ao longo do ciclo de vida, sofrendo mudanças conformacionais, resultando em diferentes isoformas (P0, P1 e P2), apresentando propriedades distintas. A Cx43 apresenta-se distribuída em todo o rim adulto. A injúria renal aguda (IRA) é uma síndrome metabólica em que ocorre redução aguda da função renal e rápida diminuição da taxa de filtração glomerular, sendo hipóxia decorrente da isquemia sua causa principal. A restrição de oxigênio e nutrientes, e o acúmulo de metabólitos, resultam na injúria das células epiteliais tubulares. A depleção dos níveis de ATP, aumento nos níveis de cálcio intracelular, alterações na membrana e deformações no citoesqueleto caracterizam esta injúria. A reoxigenação tecidual atua como agressão adicional devido à liberação de radicais livres. Estudos sugerem que a ativação de hemicanais de Cx43, resultante da desfosforilação da proteína, durante depleção de ATP, esteja envolvida na IRA. Este trabalho verificou o envolvimento da Cx43 em modelo murino desta injúria, ocasionada por isquemia/reperfusão. Foram utilizados camundongos machos da linhagem C57BL/6J. A isquemia foi induzida por clampeamento das artérias renais por 45 minutos. A reperfusão ocorreu durante 24 horas após cirurgia. Foram utilizados 6 animais por grupo (isquêmicos, reperfundidos e controle). Após sacrifício, fragmentos dos rins foram submetidos a ensaios de western blot, PCR em tempo real, imuno-histoquímica e imunofluorescência. O modelo experimental foi validado através da dosagem de uréia e creatinina plasmática. As análises estatísticas foram realizadas pela análise de variância (ANOVA), seguido do teste de Bonferroni. Observou-se aumento significativo dos níveis de uréia e creatinina nos animais isquêmicos e reperfundidos, em relação ao controle. A expressão gênica apresentou aumento significativo apenas nos rins de camundongos reperfundidos (1,9 vezes; P<0,01 vs controle). No western blot verificou-se aumento na quantidade da isoforma hiperfosforilada da Cx43 (P2) em rins isquêmicos (2,73 vezes; P<0,05 vs controle), com diminuição significativa nos reperfundidos (2,37 vezes; P<0,05 vs isquêmico). Nas isoformas menos fosforiladas (P1/P0), observou-se aumento nos rins isquêmicos (2,33 vezes; P<0,05 vs controle), com diminuição nos reperfundidos (10 vezes; P<0,01 vs isquêmico). Nos ensaios imuno-histológicos verificou-se diferentes localizações da Cx43 nas células epiteliais de túbulos corticais nos grupos comparados. Nos controles verificou-se distribuição difusa, e nos isquêmicos observou-se intensa marcação em superfície celular apical. Nos rins reperfundidos, a distribuição da Cx43 foi basolateral. As alterações observadas na expressão gênica, fosforilação protéica e distribuição da Cx43 nos rins foram semelhantes às mudanças observadas na isquemia cardíaca. Este estudo mostrou pela primeira vez a regulação da Cx43 em níveis transcricionais e pós-traducionais, e sua localização celular na IRA ocasionada por isquemia/reperfusão, indicando sua participação neste processo. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Escherichia coli pode causar infecção intestinal e extra-intestinal, de origem comunitária ou hospitalar, prevalecendo como agente de infecção do trato urinário (ITU). O objetivo do presente estudo foi caracterizar a produção de <font face=\"Symbol\">b-lactamases de espectro estendido (ESBL), grupos filogenéticos, e a relação clonal em isolados clínicos de E. coli recuperados de pacientes ambulatoriais e internados atendidos em um Hospital Universitário de São Paulo, no período de 2005 a 2007. Seis por cento (34/562) dos isolados de E. coli estudados foram caracterizados como produtores de ESBL, sendo associados exclusivamente a infecções extra-intestinais, tanto nos pacientes ambulatoriais (10/28, 36%) como nos internados (18/28, 64%), dos quais 56% (19/34) foram recuperados de uroculturas. Os isolados produtores de ESBL exibiram um fenótipo multirresistente apresentando um perfil de resistência a ampicilina (100%), cefalotina (100%), cefotaxima (100%), ceftazidima (79%), sulfametoxazol-trimetoprim (62%), gentamicina (56%), ciprofloxacina (50%) e amicacina (6%) e permanecendo suscetíveis ao imipinem. A produção de ESBL esteve associada com a presença de genes do tipo blaCTX-M-2 (94%, 32/34), blaCTX-M-15 (3%, 01/34) e blaCTX-M-1 (3%, 01/34). Entre os isolados produtores de ESBL, os grupos filogenéticos B1 (53%, 18/34) e A (18%, 6/34), de baixa virulência, foram predominantes sobre os grupos filogenéticos, de alta virulência, B2 (12%, 4/34) e D (18%, 6/34). De fato, os genes de virulência pap, cnf1, sfa, hly, e iuc, associados com adesão, invasão e disseminação, não foram identificados. A tipagem genotípica por PFGE (utilizando a enzima Xbal) com posterior análise em dendrograma, identificou a presença de 31 clusters entre os 34 isolados produtores de ESBL. Em resumo, a alta incidência de isolados clonalmente não relacionados, pertencentes aos grupos filogenéticos A e B1, de baixa virulência, sugere que cepas comensais de E. coli podem adquirir genes de resistência do tipo blaCTX-M por transferência horizontal contribuindo no estabelecimento e no prognóstico de infecções extra-intestinais, principalmente do trato urinário. / Escherichia coli can produce both intestinal and extraintestinal community- or nosocomial-acquired infection, being the main agent of urinary tract infection (UTI). The aim of this study was to characterize the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production, phylogenetic groups, and clonal relationship among E. coli clinical isolates recovered from inpatients and outpatients admmited at a university hospital in São Paulo. During 2005 to 2007, six percents (34/562) E. coli isolates were characterized as ESBL producers, being associated exclusively to extraintestinal infections in both inpatients (10/28, 36%) and outpatients (18/28, 64%), of which 56% (19/34) were recovered from urine cultures. ESBL-producing E. coli exhibited a multidrug-resistant phenotype with a resistance profile to ampicillin (100%), cephalotin (100%), cefotaxime (100%), ceftazidime (79%), sulphamethoxazole-trimethoprim (62%), gentamicin (56%), ciprofloxacin (50%), and amikacin (6%), and remaining susceptible to imipenem. In this regard, ESBL production was associated with the presence of blaCTX-M-2 (94%, 32/34), blaCTX-M-15 (3%,1/34) and blaCTX-M-1 (94%, 32/34) genes. On the other hand, low-virulence phylogenetic groups B1 (53%, 18/34) and A (18%, 6/34) were predominant over high-virulence phylogenetic groups B2 (12%, 4/34) and D (18%, 6/34), among ESBL-producing E. coli isolates studied. In fact, pap, cnf1, sfa, hly, and iuc virulence genes associated with adhesion, invasion and dissemination were not identified. Finally, genotyping by PFGE (using XbaI restriction) with subsequent cluster analysis (dendrogram) revealed the presence of 31 cluster among 34 ESBL-producing E. coli. In summary, the high prevalence of clonally unrelated ESBL-producing E. coli belonging to low-virulence phylogenetic groups A and B1 suggest that comensal E. coli can acquire blaCTX-M-like resistance genes through horizontal gene tranfer, contributing to the establishment and outcome of extraintestinal infections, mainly in the urinary tract.

Escherichia coli pode causar infecção intestinal e extra-intestinal, de origem comunitária ou hospitalar, prevalecendo como agente de infecção do trato urinário (ITU). O objetivo do presente estudo foi caracterizar a produção de <font face=\"Symbol\">b-lactamases de espectro estendido (ESBL), grupos filogenéticos, e a relação clonal em isolados clínicos de E. coli recuperados de pacientes ambulatoriais e internados atendidos em um Hospital Universitário de São Paulo, no período de 2005 a 2007. Seis por cento (34/562) dos isolados de E. coli estudados foram caracterizados como produtores de ESBL, sendo associados exclusivamente a infecções extra-intestinais, tanto nos pacientes ambulatoriais (10/28, 36%) como nos internados (18/28, 64%), dos quais 56% (19/34) foram recuperados de uroculturas. Os isolados produtores de ESBL exibiram um fenótipo multirresistente apresentando um perfil de resistência a ampicilina (100%), cefalotina (100%), cefotaxima (100%), ceftazidima (79%), sulfametoxazol-trimetoprim (62%), gentamicina (56%), ciprofloxacina (50%) e amicacina (6%) e permanecendo suscetíveis ao imipinem. A produção de ESBL esteve associada com a presença de genes do tipo blaCTX-M-2 (94%, 32/34), blaCTX-M-15 (3%, 01/34) e blaCTX-M-1 (3%, 01/34). Entre os isolados produtores de ESBL, os grupos filogenéticos B1 (53%, 18/34) e A (18%, 6/34), de baixa virulência, foram predominantes sobre os grupos filogenéticos, de alta virulência, B2 (12%, 4/34) e D (18%, 6/34). De fato, os genes de virulência pap, cnf1, sfa, hly, e iuc, associados com adesão, invasão e disseminação, não foram identificados. A tipagem genotípica por PFGE (utilizando a enzima Xbal) com posterior análise em dendrograma, identificou a presença de 31 clusters entre os 34 isolados produtores de ESBL. Em resumo, a alta incidência de isolados clonalmente não relacionados, pertencentes aos grupos filogenéticos A e B1, de baixa virulência, sugere que cepas comensais de E. coli podem adquirir genes de resistência do tipo blaCTX-M por transferência horizontal contribuindo no estabelecimento e no prognóstico de infecções extra-intestinais, principalmente do trato urinário. / Escherichia coli can produce both intestinal and extraintestinal community- or nosocomial-acquired infection, being the main agent of urinary tract infection (UTI). The aim of this study was to characterize the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production, phylogenetic groups, and clonal relationship among E. coli clinical isolates recovered from inpatients and outpatients admmited at a university hospital in São Paulo. During 2005 to 2007, six percents (34/562) E. coli isolates were characterized as ESBL producers, being associated exclusively to extraintestinal infections in both inpatients (10/28, 36%) and outpatients (18/28, 64%), of which 56% (19/34) were recovered from urine cultures. ESBL-producing E. coli exhibited a multidrug-resistant phenotype with a resistance profile to ampicillin (100%), cephalotin (100%), cefotaxime (100%), ceftazidime (79%), sulphamethoxazole-trimethoprim (62%), gentamicin (56%), ciprofloxacin (50%), and amikacin (6%), and remaining susceptible to imipenem. In this regard, ESBL production was associated with the presence of blaCTX-M-2 (94%, 32/34), blaCTX-M-15 (3%,1/34) and blaCTX-M-1 (94%, 32/34) genes. On the other hand, low-virulence phylogenetic groups B1 (53%, 18/34) and A (18%, 6/34) were predominant over high-virulence phylogenetic groups B2 (12%, 4/34) and D (18%, 6/34), among ESBL-producing E. coli isolates studied. In fact, pap, cnf1, sfa, hly, and iuc virulence genes associated with adhesion, invasion and dissemination were not identified. Finally, genotyping by PFGE (using XbaI restriction) with subsequent cluster analysis (dendrogram) revealed the presence of 31 cluster among 34 ESBL-producing E. coli. In summary, the high prevalence of clonally unrelated ESBL-producing E. coli belonging to low-virulence phylogenetic groups A and B1 suggest that comensal E. coli can acquire blaCTX-M-like resistance genes through horizontal gene tranfer, contributing to the establishment and outcome of extraintestinal infections, mainly in the urinary tract.