Två huvudsakliga metodprinciper används inom cytologi för diagnostisering av cellförändringar, nämligen konventionell och vätskebaserad metod. De kan båda appliceras på såväl gynekologiska som icke-gynekologiska prover, där den senare bland annat omfattar olika sorters exsudat. Syftet med den här studien var att utveckla metoden för den vätskebaserade metoden så att etanolfixerade exsudat kunde prepareras och även påvisa bättre resultat än då de preparerats med konventionell metod. För att göra detta har 61 unika prover kategoriserade som exsudat preparerats totalt, varav 61 med konventionell metod, 54 med vätskebaserad metod och 22 med vätskebaserad metod med tillsats av ättiksyra. De färdiga glasen bedömdes sedan i mikroskop och gavs scorevärden utifrån fyra parametrar: mängden celler exklusive inflammatoriska celler; bedömbarheten av cellmorfologin; mängden inflammatorisk komponent samt mängden bakgrundsmaterial. Resultaten visade ingen förbättring mellan de glas som preparerats med konventionell eller vätskebaserad metod. Däremot visade resultaten för de ättiksyrabehandlade proverna på förbättrade scorevärden jämfört med de andra metoderna. Som slutsats drogs att vätskebaserad metod med tillsats av ättiksyra uppnår syftet eftersom det reducerar mängden bakgrundsmaterial, förekomst av ring på objektglasen samt vidhåller en god cellmorfologi, vilket gör proverna lättare att diagnostisera för cytodiagnostikerna. / Two main principles is used within cytology in order to diagnose cytological abnormalities; conventional and liquid-based cytology. Both methods can be applied on both gynaecological and non-gynaecological samples of which the later includes samples categorized as exudate. The aim of this study was to develop the method for liquid-based cytology so that exudate fixated with ethanol could be prepared and also achieve better results compared to conventional method. In order to do so, 61 unique samples were prepared of which 61 with conventional method, 54 with liquid-based method and 22 with liquid-based method with added acetic acid. The slides was then examined in microscope and was given score values within four parameters: amount of cells; cell morphology; amount of inflammatory component and amount of background. The results indicated no difference between the slides prepared with conventional or liquid-based method. However, the slides prepared with addition of acetic acid indicated more opportunistic score values when compared. The conclusion was that liquid-based method with the addition of acetic acid did satisfy the aim of this study as it reduces the amount of background, reduces “ring formation” on the slides and preserve the cells morphology well, which makes the samples easier to diagnose.

No description available.

Immuncytokemi (ICC) har blivit en framgångsrik metod inom cancerdiagnostiken. ICC bygger på antikropps- och antigenreaktion då infärgning med specifika antikroppar kan lokalisera strukturer hos celler. Hos klinisk patologi i Kalmar utförs ICC med den traditionella prepareringsmetoden där materialet formalinfixeras, bäddas i paraffin och snittas enligt cell block teknik (CBT). Vid ICC med vätskebaserad cytologi (LBC, liquid-based cytology) kan infärgning utföras på en mindre mängd material samt ge ett resultat 1-2 dagar innan resultat fås med CBT. ICC med LBC saknar kontroller vilket medför att resultatet blir mindre tillförlitligt. Syftet med examensarbetet var att ta fram positivt kontrollmaterial för ICC av LBC-preparerat material. Kontrollmaterial selekterades från tidigare diagnostiserade och immunfärgade patientprover i form av exsudat och tonsillmaterial. En panel av 6 monoklonala antikroppar bestående av anti-CD20, anti-CD3, anti-CK5, anti-CK7, anti-Ki-67 och anti-WT1 användes. Kontrollmaterialet preparerades enligt ThinPrep™-metoden och sattes till objektglas med Cytospin™. När kontrollmaterialets positivitet bekräftats testades det i rutinarbete ihop med 10 patientprover. Patientproverna preparerades med ThinPrep™-metod och placerades på objektglasen med hjälp av en ThinPrep™5000 processor. Samtliga resultat jämfördes med infärgning gjord med CBT och majoriteten av resultaten var likvärdiga. Ur resultatet drogs slutsatsen att metoden verkar lovande men prepareringssteg och färgprotokoll behöver optimeras samt att större studier med fler patientprover behövs för att kunna beräkna tillförlitlig statistik. / Immunocytochemistry (ICC) has become a successful method of cancer diagnosis. ICC is based on antibody and antigen response, where staining with specific antibodies can localize structures in cells. Today at clinical pathology in Kalmar ICC is performed with the traditional method of preparation where the material is formalin fixed, embedded in paraffin and then cut into thin sections called cell block technique (CBT). ICC with liquid-based cytology (LBC) can be performed on a smaller amount of material and give results 1-2 days before results are obtained with CBT. ICC combined with LBC lacks controls so the result is not reliable. Purpose of this essay was to produce positive control material for the ICC of LBC-prepared material. Control materials were selected from previously diagnosed and immune-stained patient samples consisting of exudate and tonsillar material. A panel of 6 monoclonal antibodies, anti-CD20, anti-CD3, anti-CK5, anti-CK7, anti-Ki-67 and anti-WT1, was used. Control material was prepared according to the ThinPrep ™ method and was added to slides with Cytospin ™. After confirming the positivity of the control material, it was tested in routine work with 10 patient samples. Patient samples were prepared using the ThinPrep ™ method and added to the slides with the ThinPrep ™ 5000 processor. Results compared to staining with CBT showed correlation. Conclusion was that the method seems promising but stages of preparation and staining protocols need to be optimized and larger studies with more patient samples must be done in order to get reliable statistic data.

År 2020 stod lungcancer för högst andel cancer-relaterade dödsfall. Cellblockstekniken används inom diagnostik av vätskebaserad cytologi för att morfologiskt undersöka cellernas utseende och tumörcellers ursprung. I dagsläget upplever personal på Avdelningen för Klinisk patologi och cytologi Jönköping problematik vid klotformering av cellerna, vilket kan resultera i cellförlust. Syftet var att testa en ny metod för preparering av cellblock för lungcytologi samt utvärdera immunohistokemisk färgning med metoden. Studien behandlade 20 prover av pleuravätska och 20 lungcytologiprover som bearbetades till cellblock. Proteinglycerol och formaldehyd ersatte nuvarande agglutineringslösning bestående av koncentrerad formaldehyd och ättiksyra. Cellmängd beräknades på 39 snitt av två cytodiagnostiker, och graderades i tre nivåer från sparsam till riklig (1–3). Åtta cellblock selekterades för immunohistokemisk färgning. Det totala medelvärdet för cellularitet på snitten var måttlig (2,04). För pleuraproverna var medelvärdet 1,775 och för lungcytologiprover 2,315. Inga celler hittades på n=4 prover. Samtliga (n=8) immunohistokemiska färgningar med tillhörande kontroller godkändes av metodspecialist. Metoden ger snitt med tillräcklig cellularitet som fungerar väl med immunohistokemisk färgning. Metoden kan optimeras i relation till proteinförhållande och provtagning för att vid implementering bidra till en effektiviserad och individualiserad diagnostik. / In 2020, lung cancer accounted for the highest proportion of cancer-related mortalities. The cell-block technique is used in liquid-based cytology to morphologically examine the appearance of cells and the origin of tumour-cells.  Staff at the Department of Clinical pathology and cytology in Jönköping are experiencing problems with clot-formation of cells, which can result in cell-loss. The aim was to test a new method for preparing cell-blocks for lung cytology, and evaluate immunohistochemical staining with the method. The study treated 20 pleural fluids and 20 fine needle aspirations that were processed into cell-blocks. Protein-glycerol and formaldehyde replaced the current agglutination solution consisting of concentrated formaldehyde and acetic acid. The cell-count on 39 sections were graded by two Cytotechnologists in three levels from sparse to abundant (1-3). Eight cell-blocks were selected for immunohistochemical staining. The mean cellularity was moderate (2,04). For the pleural and lung cytology samples the mean values were 1,775 and 2.315. No cells were found on n=4 sections. Every (n=8) immunohistochemical staining with associated controls was approved by method specialist. The method provides sufficient cellularity and works with immunohistochemical staining. It can be optimized in relation to protein-ratio and sampling to contribute to streamlined and individualized diagnosis if implemented.