Immunocytokemi på utstryk är en metod för sortering av celltyper och identifiering av maligna celler. Metoden anses som ett aktuellt alternativ till den redan etablerade immunocytokemi på cellblock-metoden vid diagnostik av maligniteter. Syftet med examensarbetet är metodutvärdering och etablering av immunocytokemi på utstryk för sortering och identifiering av olika celltyper och maligna celler, samt metodjämförelse mellan utstryk och cellblock. Fem prover från pleuravätska framställdes till utstryk och cellblock. Immunocytokemi med antikropparna anti-Epithelial Specific Antigen, anti-Cytokeratin 7 och anti-Carcinoembryonic Antigen tillämpades på dessa. Resultatbedömning omfattade bevarandet av morfologin, färgupptag och ospecifik färgning hos celler och bakgrund, samt möjligheten att ställa säker diagnos för utstryk. Resultat visar färgupptag och viss bevarad morfologi hos utstryk. Samtliga utstryk har ospecifik färgning och kontamination som medför svårighet att urskilja celltyper och identifiera maligna celler. Möjlighet att ställa diagnos med utstryk varierar med preparaten. Färgningen hos samtliga cellblock är robust och mer specifik för celler och bakgrund. Examensarbetet når slutsatsen att etablering av immunocytokemi- metoden på utstryk är möjligt och bör tillämpas i vissa situationer. Etablering som rutinmetod är olämpligt. Framställning av preparat med hög kvalitet och specifika markörer är utvecklingsområden för laboratoriet och vidare forskning. / The method of immunocytochemistry on smears is utilized for categorizing cell types and identifying malignant cells. Immunocytochemistry on smears is a prospective alternative to the already implemented cell block method when diagnosing malignancies. The thesis aims to evaluate and implement immunocytochemistry on smears for categorizing and identifying cell types and malignant cells, along with comparing smears and cell blocks. Five pleural samples were processed into smears and cell blocks. Staining of these occurred with antibodies anti- Epithelial Specific Antigen, anti-Cytokeratin 7 and anti-Carcinoembryonic Antigen. Evaluated factors included preservation of morphology, stain uptake and non-specific staining for cells and background and finally the ability to generate a definitive diagnosis for smears. Results demonstrate stain uptake and preservation of morphology in some smears. All smears demonstrate non-specific staining and contamination, causing difficult categorization and identification. Generating a definitive diagnosis varies among samples. The thesis concludes that immunocytochemistry is a suitable platform for smears and a prospective implementation at the laboratory in certain situations. Immunocytochemistry on smears is not eligible as a routine method. Preparation of high-quality smears and specific antibody markers are deemed points of interest for the laboratory and future studies.

Malignt mesoteliom är en ovanlig och aggressiv cancerform. Den är vanligast i pleura och kallas då pleuralt mesoteliom. Vanligaste orsaken till utveckling av pleuralt mesoteliom är exponering för asbest. Insjuknande patienter har dålig prognos och begränsade behandlingsmöjligheter. Röntgen kan i ett första stadie ge diagnos av sjukdomen. Oftast behövs också en biopsi tas för fastställande av diagnos. Även provtagning av pleuravätskan kan ge värdefull diagnostisk information. Immunhistokemi är en viktig tilläggsanalys för diagnos med biopsier och cellblock. Immunhistokemi innebär färgning med antikroppar. För pleuralt mesoteliom kan exempelvis antikropparna PD-L1 och calretinin användas för diagnostisering. I denna studie färgades 10 parade pleurabiopsier och cellblock från pleuravätska från patienter med malignt mesoteliom. Antikropparna PD-L1 och calretinin användes. Syftet var att utvärdera uttrycket av PD-L1 och calretinin. Alla infärgade glas undersöktes i ljusmikroskop. För PD-L1 ansågs enbart membranfärgning som positivt infärgad och för calretinin ansågs cytoplasmatisk och/eller kärnfärgning som positiv. Procentuellt antal positiva tumörceller undersöktes vid två cutoff värden, ≥1 % och ≥10 %. Procentuellt antal <1 % vid cutoff ≥1 % och procentuellt antal <10 % vid cutoff ≥10 % ansågs negativt. Detta gällde för båda antikropparna. Antal positiva och negativa biopsier samt cellblock och konkordansen redovisades. Overall percentage agreement (OPA), Cohen’s kappa (κ) och konfidensintervall (CI) beräknades också. Resultatet visade på lägre antal positiva färgningar för cellblocken jämfört med biopsierna för båda antikropparna. För konkordansen visades att den vara lika för PD-L1 och calretinin vid cutoff ≥1 % men högre för PD-L1 än för calretinin vid cutoff ≥10 %. / Malignant mesothelioma is a rare and aggressive cancer. It is most common in the pleura, called pleural mesothelioma. The most common reason for developing pleural mesothelioma is exposure to asbestosis. Patients that get sick have a poor prognosis and limited treatment options. X-ray can in a first stadium give diagnose of the disease. A biopsy is often necessary to confirm the diagnosis. Even sampling of pleural fluid can give valuable diagnostic information. Immunohistochemistry is a common additional analysis for diagnosis with biopsy and cell block. Immunohistochemistry implies staining with antibodies. For example, for pleural mesothelioma the antibodies PD-L1 and calretinin can be used for diagnosis. In this study 10 paired pleural biopsies and cell blocks from pleural fluid from patients with malign mesothelioma were immunostained. The study aimed to evaluate expression of PD-L1 and calretinin. All the stained glasses were evaluated by a light microscope. For PD-L1, only membranous staining was considered positive and for calretinin cytoplasmic and/or nuclear staining was considered positive. Percentage number of positive tumor cells were evaluated at two cutoff values, ≥1 % and ≥10 %. Percentage number <1 % at cutoff ≥1 % and percentage number <10 % at cutoff ≥10 % were considered negative. The same criteria were applied for both antibodies. The number of positive and negative biopsies as well as cell blocks and the concordance were reported. Overall percentage agreement (OPA), Cohen’s kappa (κ) and confidence interval (CI) was also calculated. Result showed lower number of positive staining for the cell blocks than for the biopsies for both antibodies. The concordance was shown to be equal for PD-L1 and calretinin at cutoff ≥1 % but higher for PD-L1 than for calretinin at cutoff ≥10 %.

År 2020 stod lungcancer för högst andel cancer-relaterade dödsfall. Cellblockstekniken används inom diagnostik av vätskebaserad cytologi för att morfologiskt undersöka cellernas utseende och tumörcellers ursprung. I dagsläget upplever personal på Avdelningen för Klinisk patologi och cytologi Jönköping problematik vid klotformering av cellerna, vilket kan resultera i cellförlust. Syftet var att testa en ny metod för preparering av cellblock för lungcytologi samt utvärdera immunohistokemisk färgning med metoden. Studien behandlade 20 prover av pleuravätska och 20 lungcytologiprover som bearbetades till cellblock. Proteinglycerol och formaldehyd ersatte nuvarande agglutineringslösning bestående av koncentrerad formaldehyd och ättiksyra. Cellmängd beräknades på 39 snitt av två cytodiagnostiker, och graderades i tre nivåer från sparsam till riklig (1–3). Åtta cellblock selekterades för immunohistokemisk färgning. Det totala medelvärdet för cellularitet på snitten var måttlig (2,04). För pleuraproverna var medelvärdet 1,775 och för lungcytologiprover 2,315. Inga celler hittades på n=4 prover. Samtliga (n=8) immunohistokemiska färgningar med tillhörande kontroller godkändes av metodspecialist. Metoden ger snitt med tillräcklig cellularitet som fungerar väl med immunohistokemisk färgning. Metoden kan optimeras i relation till proteinförhållande och provtagning för att vid implementering bidra till en effektiviserad och individualiserad diagnostik. / In 2020, lung cancer accounted for the highest proportion of cancer-related mortalities. The cell-block technique is used in liquid-based cytology to morphologically examine the appearance of cells and the origin of tumour-cells.  Staff at the Department of Clinical pathology and cytology in Jönköping are experiencing problems with clot-formation of cells, which can result in cell-loss. The aim was to test a new method for preparing cell-blocks for lung cytology, and evaluate immunohistochemical staining with the method. The study treated 20 pleural fluids and 20 fine needle aspirations that were processed into cell-blocks. Protein-glycerol and formaldehyde replaced the current agglutination solution consisting of concentrated formaldehyde and acetic acid. The cell-count on 39 sections were graded by two Cytotechnologists in three levels from sparse to abundant (1-3). Eight cell-blocks were selected for immunohistochemical staining. The mean cellularity was moderate (2,04). For the pleural and lung cytology samples the mean values were 1,775 and 2.315. No cells were found on n=4 sections. Every (n=8) immunohistochemical staining with associated controls was approved by method specialist. The method provides sufficient cellularity and works with immunohistochemical staining. It can be optimized in relation to protein-ratio and sampling to contribute to streamlined and individualized diagnosis if implemented.