Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T19:21:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Dissertação-RicardoSilva.pdf: 2010474 bytes, checksum: fa5ce1fda4e849fa7743b5d5b4e55481 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T19:21:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Dissertação-RicardoSilva.pdf: 2010474 bytes, checksum: fa5ce1fda4e849fa7743b5d5b4e55481 (MD5) Previous issue date: 2011-05-30 / Dentre vários compostos sintetizados pelo Laboratório de Planejamento e Síntese de Fármacos (LPSF) da Universidade Federal de Pernambuco, o derivado tiazolidínico (3-(2-Bromo-benzil)-5-(5-bromo-2-metoxi-benzilideno)-tiazolidina-2,4-diona) (LPSF/GQ-113B) apresentou importante atividade antiinflamatória em ratos Wistar. Tal resultado despertou nosso interesse no desenvolvimento e validação de um método bioanalítco para determinação do LPSF/GQ-113B em fluídos biológicos. Nesse contexto, um método bioanalítico sensível e seletivo foi desenvolvido e validado utilizando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a um detector ultravioleta (CLAE-UV) para quantificação do LPSF/GQ-113B em plasma de ratos Wistar. O método envolveu precipitação das proteínas plasmática com acetonitrila e, o LPSF/GQ-113B foi separado utilizando uma fase móvel composta por uma mistura de acetonitrila/água e ácido acético (85:14:1 v/v/v) eluida de forma isocrática através de uma coluna analítica Phenomenex® C18 5μ (150mm x 4.6mm) a uma temperatura de 40 ºC. O comprimento de onda para a detecção foi de 254 nm. A curva de calibração foi linear na faixa de 500-16000 ng/ml/L, com coeficientes de determinação (r²) próximos da unidade (0.997-0.999). Os rendimentos de extração para as concentrações de 1500, 7500 e 13.000 ng/ml/L foram 94.2%, 92.2% e 97.3%, respectivamente. O limite de quantificação para o LPSF/GQ-113B foi de 500 ng/mL. A validação do método incluiu a análise dos parâmetros analíticos de exatidão e precisão intra-dia e inter-dia que se apresentaram dentro dos limites exigidos pela legislação pertinente. Dessa forma, o método proposto pode ser aplicado para determinação quantitativa do LPSF/GQ-113B em plasma de ratos Wistar em estudos farmacológicos, toxicológicos, farmacocinéticos e de biodisponibilidade. / Among several compounds synthesized by the Laboratory of Planning and Synthesis of Drugs, from Federal University of Pernambuco, the thiazolidine derivative (3 - (2-bromo-benzyl) -5 - (5-bromo-2-methoxy-benzylidene)-thiazolidine -2,4-dione) (LPSF/GQ-113B) showed significant antiinflammatory activity in rats. This result has stimulated our interest in the development and validation of a method for determining LPSF/GQ-113B in biological fluids. In this context a fast, sensitive, and selective detection has been developed and validated for quantifying LPSF/GQ-113B in rat plasma by high-performance liquid chromatography coupled UV detector method . A plasma protein precipitation method was used with acetonitrile and, LPSF/GQ-113B was separated using a mobile phase (acetonitrile/water/acetic acid (85:14:1 v/v/v)) on the analytical column Phenomenex ® C18 5μm ( 150mm x 4.6mm) stored into the oven at 40 ºC temperature. The wavelength selected for detection was 254 nm. Over the range 500-16000 ng/mL, the calibration curve was linear with coefficient of determination (r²) were close to unit (0.997564- 0.999765). The recoveries at concentrations of 500, 7500 and 13000 ng/mL were 94.2%, 92.2% and 97.3%. The lower limit of quantification obtained was 500 ng/mL. Validation of the method included analysis of the analytical parameters of accuracy and within-batch and between-batch were inside the limits required by the competent authorities. Thus, the proposed method can be applied for quantitative determination of LPSF/GQ-113B in plasma of Wistar rats in pharmacological studies, toxicological, pharmacokinetic and bioavailability.

A mistura triterpênica ¤ e ß- amirinas é comumente encontrada em quantidades significativas em espécies do gênero Protium (Burseraceae) e possuem reconhecidas atividades anti-inflamatória, hepatoprotetora, gastroprotetora e analgésica, dentre outras. Entretanto, pouco se sabe sobre sua farmacocinética e metabolismo. Neste sentido, esta tese teve o objetivo de desenvolver metodologias bioanalíticas para determinar a farmacocinética e a eliminação de ? e ?-amirinas isoladas de P. spruceanum bem como avaliar o metabolismo in vitro destes triterpenos. A mistura de ¤ e ß-amirinas foi isolada em grau de pureza cromatográfica acima de 99%. Foi desenvolvida e caracterizada uma nanoemulsão do tipo O/A contendo ¤ e ß-amirinas a fim de viabilizar a administração por vias oral e endovenosa e realizar os estudos de disposição cinética dessas substâncias em camundongos. O tamanho médio das partículas da nanoemulsão foi de 103,5 ± 0,44 nm, com porcentagem de encapsulação de acima de 99%. Os estudos de liberação in vitro mostraram baixa taxa de liberação após 24 horas. A avaliação da disposição cinética de ? e ?-amirinas em camundongos mostrou que após administração oral a suspensão de CMC não foi absorvida, entretanto a nanoemulsão contendo as substancias foi absorvida e a biodisponibilidade oral de ¤ e ß-amirinas foi de 1,03 ± 0,08 e 1,56 ± 0,24%, respectivamente. O Vd foi elevado e a T1/2 foi de 2,61±0,15 e 2,57±0,07 horas, respectivamente. O ClB mostrou-se elevado, comparado ao ClR. Após administração oral da nanoemulsão, praticamente toda a mistura foi eliminada inalterada nas fezes devido a baixa absorção. Entretanto, após administração endovenosa cerca de 50% da mistura foi eliminada inalterada pela via biliar. Estudos de eliminação renal de ¤ e ß-amirinas mostraram que apenas cerca de 0,2% das substâncias foram eliminadas por via renal após administração endovenosa. O fenômeno Flip-Flop ocorreu para a via extravascular utilizada. Os resultados da eliminação parcial e de baixa liberação in vitro sugerem que após administração endovenosa da nanoemulsão pode ocorrer acúmulo extravascular dos compostos, corroborando com altos Vd. As reações biomiméticas de oxidação de ¤ e ß-amirinas mostraram baixa taxa degradação. Apenas um metabólito putativo foi encontrado, entretanto, não foi possível observá-lo nas matrizes biológicas analisadas. / The triterpene mixture of ¤ and ß-amyrins is generally found in significative amounts in Protium species (Burseraceae). They have known biological activities as anti-inflammatory, hepatoprotective, gastroprotective and antinociceptive effects among others. However, their pharmacokinetics and metabolism are practically unknown. The purpose of this thesis was to develop bioanalytical methodologies to perform pharmacokinetic and elimination studies of ¤ and ß-amyrins from P. spruceanum as well as to evaluate in vitro metabolism of these triterpenes. The mixture ¤ and ß-amyrins was isolated with chromatography purity above 99%. One ¤ and ß-amyrins loaded O/W nanoemulsion was developed and characterized to enable the intravenous and oral administration and to performed pharmacokinetic studies of these compounds in mice. The average particle size was 103.5 ± 0.44 nm and the encapsulation efficiency was higher than 99%. In vitro release study demonstrated low release rater after 24 hours. The pharmacokinetics studies of ? and ?-amyrins indicated CMC suspension was not absorbed, however ¤ and ß-amyrins loaded O/W nanoemulsion was poorly absorved and bioavailability was 1.03 ± 0.08 and 1.56 ± 0.24% respectively. The Vd was high and T1/2 was 2.61 ± 0.15 e 2.57± 0.07 hours respectively. The ClB was high compared to ClR. After oral administration almost all ¤ and ß-amyrins were eliminated unchanged in faeces due to low absorption. However, after intravenous administration about 50% was excluded unchanged by biliar excretion pathway. Studies of ¤ and ß-amyrins renal elimination directed only 0.2 % were removed unchanged by renal pathway after intravenous administration. The Flip-Flop phenomenon was happen when ¤ and ß- amyrins was dispensed by extravascular via. The partial biliar excretion in vivo and low release rate in vitro suggests ¤ and ß-amyrins could be stored after nanoemulsion intravenous administration confirming high Vd. The biomimetic reactions of oxidation of ¤ and ß-amyrins showed low degradation rate and only one metabolite was found however it was not detected in biological samples.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-09-09T11:45:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Lorena_Maione_Silva_Ciencias_Farmaceuticas.pdf: 516603 bytes, checksum: ec25498f249629c65bc31a3ef2bd8588 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-09T11:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Lorena_Maione_Silva_Ciencias_Farmaceuticas.pdf: 516603 bytes, checksum: ec25498f249629c65bc31a3ef2bd8588 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Genistein (GEN), isoflavone contained in soybeans, shows activity against a large number of cancers, including skin cancer. However, to be used topically it is essential the association of GEN in an appropriate formulation. The aim of this study was the development and characterization of solid lipid nanoparticles (SLN) contends genistein for topical application. A bioanalytical method was developed and validated for GEN quantification in skin layers with High Performance Liquid Chromatographer (HPLC) with UV detection. The SLN was obtained with glyceryl behenate, polysorbate 80, sorbitan trioleate and different amounts of cetylpyridinium chloride (CPC) (0.5 - 0.05%). The characteristics in terms of particle size, size distribution, zeta potential, entrapment efficiency and drug recovery were evaluated. In vitro release, passive and iontophoretic, skin permeation studies were performed. Cytotoxicity studies were carried out in melanoma cells (B16F10) with free drug and SLN with and without GEN. The analytical method was linear in the concentration range of 0.1 to 60 mg/mL. Limit of quantification was 100 ng/mL for both skin layers. Recovery of the drug ranged from 95.57 to 97.57%. The method was able to analyze the GEN without suffering interference from endogenous skin components. SLN loaded with GEN showed positive surface (+ 23 mV) and average size of 343 nm. Particles were obtained with high entrapment efficiency (93%) and drug load was 5.45%. In vitro release studies demonstrated that the release of GEN from SLN occurs in two stages with a large amount of drug released within the first six hours, followed by a slow release of the remaining drug in the lipid matrix of SLN in the following hours. When administered in the skin, during in vitro passive permeation studies, the SLN increased retention of GEN in stratum corneum and remaining skin compared with free GEN. After iontophoresis application in formulation of SLN containing GEN thirteen times more GEN was retained on stratum corneum and three times more drug was retained on remaining skin. In cellular cytotoxicity studies SLN favored the increase of interaction of drug with the cells and the cytotoxicity was concentration-dependent. Thus, GEN loaded SLN increased drug skin permeation and retention and shows to be a potential formulation for topical application. / A genisteína (GEN), isoflavona contida nos grãos da soja, apresenta atividade contra um grande número de tipos de câncer, incluindo o câncer de pele. No entanto, para ser usada topicamente é fundamental que a GEN esteja associada a uma formulação adequada. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) contendo genisteína para aplicação tópica. Para a quantificação da genisteína nas diferentes camadas da pele foi desenvolvida e validada uma metodologia bioanalítica em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detecção no UV. As NLS foram obtidas com behenato de glicerila, polissorbato 80, trioleato de sorbitano e tensoativo catiônico cloreto de cetilpiridínio (CPC) em diferentes quantidades (0,5 – 0,05%). As NLS foram caracterizadas quanto ao tamanho, PdI, potencial zeta, eficiência de encapsulação e recuperação. Foram realizados estudos in vitro de liberação e permeação cutânea passiva e iontoforética. Estudos de citotoxicidade foram realizados em linhagem de melanoma (B16F10) com fármaco livre e NLS com e sem GEN. O método de quantificação do fármaco mostrou-se linear na faixa de concentração de 0,1 a 60 μg/mL. O limite de quantificação foi de 100 ng/mL para ambas as camadas da pele. A recuperação do fármaco variou entre 95,57 a 97,57%. Ainda, o método foi capaz de analisar a GEN sem sofrer interferência dos componentes endógenos da pele. As NLS carregadas com fármaco apresentaram carga superficial positiva (+ 23 mV) e tamanho médio de 343 nm. Também foram obtidas partículas com alta eficiência de encapsulação (93%) e carga de fármaco de 5,45%. Os estudos de liberação in vitro demonstraram que a liberação da GEN a partir das NLS ocorre em duas fases, com uma grande quantidade de fármaco liberada nas seis primeiras horas, seguida por uma liberação lenta do restante do fármaco da matriz lipídica das NLS nas horas seguintes. Quando administrada na pele, nos estudos de permeação passiva in vitro, as NLS aumentaram a retenção da GEN tanto no estrato córneo quanto na pele remanescente em comparação à administração da GEN livre. Após a aplicação da iontoforese na formulação de NLS contendo GEN, treze vezes mais GEN ficou retida no EC e três vezes mais fármaco ficou retido na pele remanescente. Nos estudos de citotoxicidade, as NLS favoreceram o aumento da interação do fármaco com as células e a citotoxicidade foi concentração-dependente. Deste modo, a encapsulação da GEN em NLS aumentou a permeação e retenção do fármaco na pele, demonstrando assim, potencial para aplicação tópica.

A mistura triterpênica ¤ e ß- amirinas é comumente encontrada em quantidades significativas em espécies do gênero Protium (Burseraceae) e possuem reconhecidas atividades anti-inflamatória, hepatoprotetora, gastroprotetora e analgésica, dentre outras. Entretanto, pouco se sabe sobre sua farmacocinética e metabolismo. Neste sentido, esta tese teve o objetivo de desenvolver metodologias bioanalíticas para determinar a farmacocinética e a eliminação de ? e ?-amirinas isoladas de P. spruceanum bem como avaliar o metabolismo in vitro destes triterpenos. A mistura de ¤ e ß-amirinas foi isolada em grau de pureza cromatográfica acima de 99%. Foi desenvolvida e caracterizada uma nanoemulsão do tipo O/A contendo ¤ e ß-amirinas a fim de viabilizar a administração por vias oral e endovenosa e realizar os estudos de disposição cinética dessas substâncias em camundongos. O tamanho médio das partículas da nanoemulsão foi de 103,5 ± 0,44 nm, com porcentagem de encapsulação de acima de 99%. Os estudos de liberação in vitro mostraram baixa taxa de liberação após 24 horas. A avaliação da disposição cinética de ? e ?-amirinas em camundongos mostrou que após administração oral a suspensão de CMC não foi absorvida, entretanto a nanoemulsão contendo as substancias foi absorvida e a biodisponibilidade oral de ¤ e ß-amirinas foi de 1,03 ± 0,08 e 1,56 ± 0,24%, respectivamente. O Vd foi elevado e a T1/2 foi de 2,61±0,15 e 2,57±0,07 horas, respectivamente. O ClB mostrou-se elevado, comparado ao ClR. Após administração oral da nanoemulsão, praticamente toda a mistura foi eliminada inalterada nas fezes devido a baixa absorção. Entretanto, após administração endovenosa cerca de 50% da mistura foi eliminada inalterada pela via biliar. Estudos de eliminação renal de ¤ e ß-amirinas mostraram que apenas cerca de 0,2% das substâncias foram eliminadas por via renal após administração endovenosa. O fenômeno Flip-Flop ocorreu para a via extravascular utilizada. Os resultados da eliminação parcial e de baixa liberação in vitro sugerem que após administração endovenosa da nanoemulsão pode ocorrer acúmulo extravascular dos compostos, corroborando com altos Vd. As reações biomiméticas de oxidação de ¤ e ß-amirinas mostraram baixa taxa degradação. Apenas um metabólito putativo foi encontrado, entretanto, não foi possível observá-lo nas matrizes biológicas analisadas. / The triterpene mixture of ¤ and ß-amyrins is generally found in significative amounts in Protium species (Burseraceae). They have known biological activities as anti-inflammatory, hepatoprotective, gastroprotective and antinociceptive effects among others. However, their pharmacokinetics and metabolism are practically unknown. The purpose of this thesis was to develop bioanalytical methodologies to perform pharmacokinetic and elimination studies of ¤ and ß-amyrins from P. spruceanum as well as to evaluate in vitro metabolism of these triterpenes. The mixture ¤ and ß-amyrins was isolated with chromatography purity above 99%. One ¤ and ß-amyrins loaded O/W nanoemulsion was developed and characterized to enable the intravenous and oral administration and to performed pharmacokinetic studies of these compounds in mice. The average particle size was 103.5 ± 0.44 nm and the encapsulation efficiency was higher than 99%. In vitro release study demonstrated low release rater after 24 hours. The pharmacokinetics studies of ? and ?-amyrins indicated CMC suspension was not absorbed, however ¤ and ß-amyrins loaded O/W nanoemulsion was poorly absorved and bioavailability was 1.03 ± 0.08 and 1.56 ± 0.24% respectively. The Vd was high and T1/2 was 2.61 ± 0.15 e 2.57± 0.07 hours respectively. The ClB was high compared to ClR. After oral administration almost all ¤ and ß-amyrins were eliminated unchanged in faeces due to low absorption. However, after intravenous administration about 50% was excluded unchanged by biliar excretion pathway. Studies of ¤ and ß-amyrins renal elimination directed only 0.2 % were removed unchanged by renal pathway after intravenous administration. The Flip-Flop phenomenon was happen when ¤ and ß- amyrins was dispensed by extravascular via. The partial biliar excretion in vivo and low release rate in vitro suggests ¤ and ß-amyrins could be stored after nanoemulsion intravenous administration confirming high Vd. The biomimetic reactions of oxidation of ¤ and ß-amyrins showed low degradation rate and only one metabolite was found however it was not detected in biological samples.