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Alterações anatomopatológicas em corações de camundongos submetidos à inalação crônica de cocaína crack / Anatomopathological alterations in hearts of mice submitted to chronic inhalation of crack cocaineMoraes, Alcides Gilberto 24 August 2009 (has links)
A cocaína crack é a forma popular da cocaína nos dias de hoje, em decorrência do baixo custo relativo da droga e da rapidez dos seus efeitos no sistema nervoso central. São conhecidas alterações provocadas pela cocaína no coração de humanos e animais, sendo frequentes graves transtornos no sistema cardiovascular, muitas vezes fatais. Mas diante do crescente e preocupante aumento do uso dessa forma fumada da cocaína, particularmente pelos jovens, tornam-se necessários estudos experimentais utilizando-se a droga in natura, que não se encontra habitualmente disponibilizada para experimentos, diante das dificuldades legais. Este estudo objetivou a avaliação dos efeitos da inalação crônica da cocaína crack no coração de camundongos, tendo sido utilizados 24 animais BALB/c machos, jovens e adultos, 6 animais de cada grupo (n=6), que foram expostos à fumaça originada da queima de 5 g de cocaína, por 5 minutos, 5 dias da semana, durante 39 dias, em um período de dois meses; utilizouse uma câmara de inalação para a manutenção dos animais durante as sessões e os animais do grupo controle, em igual nº (n=6), foram mantidos no biotério em condições favoráveis. A droga teve como origem a apreensão policial (195,2 g) e o seu uso, na pesquisa previamente autorizada pela justiça. A análise farmacológica da droga constatou a presença de 57,66% de cocaína nas pedras de crack, satisfazendo as necessidades para a experiência. A quantificação de cocaína de 212,5 ng/ml no sangue dos animais também foi considerada representativa para os nossos objetivos de pesquisar alterações morfológicas no coração dos camundongos. Os resultados foram analisados pela One-Way-Anova e Modelo Linear Generalizado, e as diferenças consideradas significativas quando p< 0,05. Os estudos mostraram diminuição significativa da media (±DP) de peso dos corações nos animais expostos à droga, adultos e jovens, quando comparados com os grupos controles correspondentes. No grupo jovem, o aumento do número de núcleos, por área ventricular, pode ser relacionada com atrofia miocárdica dos ventrículos, direito e esquerdo (p< 0,001), demonstrada pela morfometria das fibras musculares estriadas cardíacas, utilizando-se o sistema de retículo de pontos. Nos adultos expostos, apesar da diminuição de peso do coração, a morfometria não constatou atrofia de miocárdio de nenhum dos lados (p> 0,05). Nos exames microscópicos das paredes ventriculares, com a coloração da hematoxilina-eosina, foi detectado, discreto número de fibras musculares cardíacas, com perda das estriações e hialinizações do citoplasma, favorecendo apoptose. A morfometria dos vasos coronarianos intramurais, com medições das luzes, camadas médias e adventícias demonstrou diminuição significativa da proporção (razão) luz/parede nos animais expostos, independente da idade, quando comparado com os grupos controle (p=0,001). Esses dados caracterizam a vasoconstrição por provável ação simpaticomimética da droga, justificando uma isquemia relativa no coração e conseqüente aumento da apoptose, bem documentada pela imunoistoquímica através da coloração do TUNEL. Esta imunocoloração marcou extensamente os núcleos de células apoptóticas, nos ventrículos direito e esquerdo dos animais expostos, quando comparado aos animais não expostos (p<0,001). A microscopia óptica com H&E e Picro-sirius sugeriu fibrose peri-adventicial nos animais expostos adultos A quantificação do colágeno, após a polarização, mostrou aumento não significativo, nos ramos coronarianos dos animais expostos adultos e interstício do ventrículo direito dos dois grupos expostos (p>0,05). As pesquisas realizadas com um modelo experimental inédito confirmam alterações anatomopatológicas já descritas na literatura, como a vasoconstrição com isquemia aguda e aumento da apoptose e mostram alterações ainda não referidas, em efeitos crônicos da cocaína, como a diminuição de peso do coração e atrofia do miocárdio. Os estudos, embora tenham limitações por não ter sido isolada outra substância eventualmente presente na amostra teste, constataram achados morfológicos importantes para a saúde pública, que devem ser pesquisados nas autópsias. Novos estudos são recomendados, utilizando-se outros tempos e ambientes de exposição, com e sem a associação de drogas, assim como porcentagens diferentes de cocaína no crack e isolando-se as substâncias presentes na droga in natura. / Crack cocaine is the currently popular form of cocaine, due to its low cost and rapid effects on the central nervous system. Alterations caused by cocaine on the hearts of humans and animals are well known and severe disorders in the cardiovascular system, which are sometimes fatal, are frequent. Considering the growing concern regarding the increase in the use of this smoked form of cocaine, especially by young individuals, it becomes necessary to carry out experimental studies using the drug in its natural form, which is not usually available for experiments due to legal difficulties. The present study aimed at assessing the effects of the chronic inhalation of crack cocaine on the hearts of mice. A total of 24 BALB/c male animals were used in the experiment, both young and old, with 6 animals in each group (n=6), which were exposed to crack cocaine smoke that resulted from the burning of 5 g of cocaine, for 5 minutes, 5 days a week, for 39 days, except on weekends and holidays, during a two-month period. An inhalation chamber was used to keep the animals during the sessions, whereas the same number of animals from the control group (n=6) were kept at the animal facility of the institution under favorable conditions. The drug had been originally apprehended by the police in the course of criminal investigations and its use in research was previously authorized by the Department of Justice. The pharmacological analysis of the drug verified the presence of 57.66% of cocaine in the crack rocks, which satisfied the criterion used for the experience. The quantification of cocaine at 212.5 ng/mL in the blood of the animals was also considered representative for our objectives of assessing morphological alterations in the hearts of mice. The results were analyzed by One-Way-ANOVA and Generalized Linear Model, and the differences were considered significant when p<0.05. The studies showed a significant difference in the mean (±SD) weight of the hearts of the animals exposed to the crack cocaine smoke, both young and adult ones, when compared to the corresponding control groups. In the young group, the increased number of nuclei per ventricular area might be related to the myocardial atrophy of the right and left ventricles (p<0.001), demonstrated by the morphometry of the striated heart muscle fibers, using the system of point reticulum. In the exposed adult animals, in spite of the decreased heart weight, the morphometry did not show myocardial atrophy in neither side (p>0.05). The microscopic assessment of the ventricular walls, carried out with hematoxylin and eosin (H&E) staining, showed a small number of heart muscle fibers with loss of striations and hyalinization of the cytoplasm, which favored apoptosis. The morphometry of the intramural coronary vessels, with lumen, medial and adventitial layer measurement, showed a significant decrease in the lumen/wall ratio in exposed animals, regardless of age, when compared to the control group (p=0.001). These data characterize vasoconstriction, due to the probable sympatheticomimetic action of the drug, which justifies a relative ischemia of the heart and a consequent increase in apoptosis, well documented by immunohistochemistry through TUNEL staining. This immunostaining extensively identified the nuclei of apoptotic cells in the right and left ventricles of the exposed animals, when compared to the non-exposed animals (p< 0.001). Optical microcopy with H&E and Picrosirius suggested periadventitial fibrosis in the adult exposed animals. Collagen quantification after polarization showed a non-significant increase in the coronary branches of the adult exposed animals and in the right ventricular interstitium in the two exposed groups (p>0.05). The present study, carried out using a novel experimental model, confirmed the presence of anatomopathological alterations that had been previously described in the literature, such as vasoconstriction with acute ischemia and increased apoptosis and showed alterations that had not been previously reported as being chronic effects of cocaine, such as decreased heart weight and myocardial atrophy. Although there were limitations, considering that other substances eventually present in the test sample were not identified, the present study demonstrated important morphological findings for public health, which must be studied in autopsies. Further studies are recommended, using other exposure durations and environments, with and without the association of drugs, as well as different percentages of cocaine in crack rocks and isolating the substances present in the drug in its natural form.
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Biomarcadores genéticos na hemorragia subaracnoidea aneurismática em pacientes da Amazônia / Genetic biomarkers in patients with aneurysmal subarachnoid hemorrhage in the Amazon patientsPaschoal, Eric Homero Albuquerque 24 August 2017 (has links)
Hemorragia subaracnoidea aneurismática (HSAa) é considerada causa importante de morte e de sequelas neurológicas. A taxa de mortalidade desta doença pode alcançar 50% nos primeiros dois meses após sangramento de aneurisma encefálico. Apesar dos avanços científicos da modernidade, o resultado do tratamento da HSAa não mudou nos últimos anos. O presente estudo avaliou o papel de 14 biomarcadores genéticos, incluindo o polimorfismo (SNP) do gene eNOS, em pacientes da Amazônia com HSAa, para verificar as alterações alélicas associadas ao risco de vasoespasmo encefálico e déficit neurológico tardio. Avaliou-se a ancestralidade desta amostra de pacientes em que se utilizou 48 marcadores para identificar possível etnia associada à predisposição ao VE. Investigou-se 14 biomarcadores genéticos no tocante à resposta inflamatória encefálica na HSAa. Foram avaliados 265 doentes que foram divididos em dois grupos: grupo I (pacientes com vasoespasmo encefálico) e grupo 2 (pacientes sem vasoespasmo). A média das idades foi 51 anos, havia 224 mulheres (84%) e 124 pacientes (46,79%) apresentaram vasoespasmo encefálico (VE). A maior incidência de VE ocorreu na idade entre 50 e 59 anos. Tabagismo e hipertensão arterial sistêmica foram os fatores de risco mais associados à VE. Aneurismas encefálicos de tamanho pequeno e médio predominaram nesta casuística. As escalas amarela e vermelha do VASOGRADE associaram-se ao risco de VE (p < 0,001). Não houve variação na distribuição ancestral entre os grupos estudados e o que ocorre na população brasileira saudável na região Amazônica. O gene da eNOS com seus respectivos polimorfismos T-786C e 27VNTR4 correlacionaram-se com VE. Outros marcadores observados foram TP53, CASP8, ACE2, IL4 e XRCC1. O gene TP53 (modelo recessivo alelo 1) mostrou-se ser um fator protetor de VE, enquanto que genes com mutações INDEL CASP8 (modelo recessivo alelo 2) e o XRCC1 (modelo recessivo alelo 1) mostraram tendência ao desenvolvimento de VE com risco 2 vezes maior e 1,4 vezes maior que o grupo II (p < 0,001). Conclui-se que SNPs da eNOS se correlacionam com desenvolvimento de VE sintomático pós-HSAa. Este estudo também mostrou o papel dos marcadores inflamatórios na HSAa, o que auxiliaria na condução da terapia clínica. / Aneurysmal subarachnoid hemorrhage (aSAH) is a leading cause of premature death and neurological disability. It is considered as a devastating condition that accounts to 50% of mortality during the first two months after a hemorrhagic event. Despite foremost advances in the clinical management of post-aSAH patients, the rates of mortality and morbidity have not changed in recent years. This study appraised the role of 14 genetic biomarkers, including the eNOS polymorphism (SNP) between Amazon\'s patients with aSAH, as means to document how variant alleles are related to a higher disposition to cerebral vasospasm (CV) and delayed cerebral ischemia (DCI). 265 patients were evaluated and then divided into two clusters: Group I (with symptomatic CV) and group II (presenting no symptomatic CV). The median ages of patients were 51.61 years of age, 224 (84.52%) were women and 124 patients (46.97%) had symptoms of cerebral vasospasm (CV). Tobacco smoking and systemic arterial hypertension are the risk factors most associated to CV. In the course of this research, most aneurysms found were small and medium-sized. The score VASOGRADE yellow and VASOGRADE red presented a high risk of CV (p < 0.001). We established a panel of 48 ancestry informative markers for estimating which ethnicity could present a predisposition to CV. There was no variation in the ancestral distribution between study groups and healthy brazilian folk over the Amazon region. The eNOS gene with its polymorphisms T-786C and 27 VNTR4 were correlated to CV. Other markers were accomplished: TP53, CASP8, ACE2, IL4, and XRCC1. The TP53 gene (recessive genetic model allele 1) supporting evidence of the protective role to CV. Whilst other genes with INDEL mutation like as CASP8 (recessive model allele 2) and the XRCC1 (recessive model allele 1) indicated a propensity to spread out CV with odds 2-fold higher, and 1.414 times greater than group II (p < 0.001). It follows that eNOS SNPs correlate to a positive association with a syntomatic CV post-aSAH. Also, this study showed up the role of inflammatory markers at aSAH to a further educated therapeutic choice for a better clinical response
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Biomarcadores genéticos na hemorragia subaracnoidea aneurismática em pacientes da Amazônia / Genetic biomarkers in patients with aneurysmal subarachnoid hemorrhage in the Amazon patientsEric Homero Albuquerque Paschoal 24 August 2017 (has links)
Hemorragia subaracnoidea aneurismática (HSAa) é considerada causa importante de morte e de sequelas neurológicas. A taxa de mortalidade desta doença pode alcançar 50% nos primeiros dois meses após sangramento de aneurisma encefálico. Apesar dos avanços científicos da modernidade, o resultado do tratamento da HSAa não mudou nos últimos anos. O presente estudo avaliou o papel de 14 biomarcadores genéticos, incluindo o polimorfismo (SNP) do gene eNOS, em pacientes da Amazônia com HSAa, para verificar as alterações alélicas associadas ao risco de vasoespasmo encefálico e déficit neurológico tardio. Avaliou-se a ancestralidade desta amostra de pacientes em que se utilizou 48 marcadores para identificar possível etnia associada à predisposição ao VE. Investigou-se 14 biomarcadores genéticos no tocante à resposta inflamatória encefálica na HSAa. Foram avaliados 265 doentes que foram divididos em dois grupos: grupo I (pacientes com vasoespasmo encefálico) e grupo 2 (pacientes sem vasoespasmo). A média das idades foi 51 anos, havia 224 mulheres (84%) e 124 pacientes (46,79%) apresentaram vasoespasmo encefálico (VE). A maior incidência de VE ocorreu na idade entre 50 e 59 anos. Tabagismo e hipertensão arterial sistêmica foram os fatores de risco mais associados à VE. Aneurismas encefálicos de tamanho pequeno e médio predominaram nesta casuística. As escalas amarela e vermelha do VASOGRADE associaram-se ao risco de VE (p < 0,001). Não houve variação na distribuição ancestral entre os grupos estudados e o que ocorre na população brasileira saudável na região Amazônica. O gene da eNOS com seus respectivos polimorfismos T-786C e 27VNTR4 correlacionaram-se com VE. Outros marcadores observados foram TP53, CASP8, ACE2, IL4 e XRCC1. O gene TP53 (modelo recessivo alelo 1) mostrou-se ser um fator protetor de VE, enquanto que genes com mutações INDEL CASP8 (modelo recessivo alelo 2) e o XRCC1 (modelo recessivo alelo 1) mostraram tendência ao desenvolvimento de VE com risco 2 vezes maior e 1,4 vezes maior que o grupo II (p < 0,001). Conclui-se que SNPs da eNOS se correlacionam com desenvolvimento de VE sintomático pós-HSAa. Este estudo também mostrou o papel dos marcadores inflamatórios na HSAa, o que auxiliaria na condução da terapia clínica. / Aneurysmal subarachnoid hemorrhage (aSAH) is a leading cause of premature death and neurological disability. It is considered as a devastating condition that accounts to 50% of mortality during the first two months after a hemorrhagic event. Despite foremost advances in the clinical management of post-aSAH patients, the rates of mortality and morbidity have not changed in recent years. This study appraised the role of 14 genetic biomarkers, including the eNOS polymorphism (SNP) between Amazon\'s patients with aSAH, as means to document how variant alleles are related to a higher disposition to cerebral vasospasm (CV) and delayed cerebral ischemia (DCI). 265 patients were evaluated and then divided into two clusters: Group I (with symptomatic CV) and group II (presenting no symptomatic CV). The median ages of patients were 51.61 years of age, 224 (84.52%) were women and 124 patients (46.97%) had symptoms of cerebral vasospasm (CV). Tobacco smoking and systemic arterial hypertension are the risk factors most associated to CV. In the course of this research, most aneurysms found were small and medium-sized. The score VASOGRADE yellow and VASOGRADE red presented a high risk of CV (p < 0.001). We established a panel of 48 ancestry informative markers for estimating which ethnicity could present a predisposition to CV. There was no variation in the ancestral distribution between study groups and healthy brazilian folk over the Amazon region. The eNOS gene with its polymorphisms T-786C and 27 VNTR4 were correlated to CV. Other markers were accomplished: TP53, CASP8, ACE2, IL4, and XRCC1. The TP53 gene (recessive genetic model allele 1) supporting evidence of the protective role to CV. Whilst other genes with INDEL mutation like as CASP8 (recessive model allele 2) and the XRCC1 (recessive model allele 1) indicated a propensity to spread out CV with odds 2-fold higher, and 1.414 times greater than group II (p < 0.001). It follows that eNOS SNPs correlate to a positive association with a syntomatic CV post-aSAH. Also, this study showed up the role of inflammatory markers at aSAH to a further educated therapeutic choice for a better clinical response
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Alterações anatomopatológicas em corações de camundongos submetidos à inalação crônica de cocaína crack / Anatomopathological alterations in hearts of mice submitted to chronic inhalation of crack cocaineAlcides Gilberto Moraes 24 August 2009 (has links)
A cocaína crack é a forma popular da cocaína nos dias de hoje, em decorrência do baixo custo relativo da droga e da rapidez dos seus efeitos no sistema nervoso central. São conhecidas alterações provocadas pela cocaína no coração de humanos e animais, sendo frequentes graves transtornos no sistema cardiovascular, muitas vezes fatais. Mas diante do crescente e preocupante aumento do uso dessa forma fumada da cocaína, particularmente pelos jovens, tornam-se necessários estudos experimentais utilizando-se a droga in natura, que não se encontra habitualmente disponibilizada para experimentos, diante das dificuldades legais. Este estudo objetivou a avaliação dos efeitos da inalação crônica da cocaína crack no coração de camundongos, tendo sido utilizados 24 animais BALB/c machos, jovens e adultos, 6 animais de cada grupo (n=6), que foram expostos à fumaça originada da queima de 5 g de cocaína, por 5 minutos, 5 dias da semana, durante 39 dias, em um período de dois meses; utilizouse uma câmara de inalação para a manutenção dos animais durante as sessões e os animais do grupo controle, em igual nº (n=6), foram mantidos no biotério em condições favoráveis. A droga teve como origem a apreensão policial (195,2 g) e o seu uso, na pesquisa previamente autorizada pela justiça. A análise farmacológica da droga constatou a presença de 57,66% de cocaína nas pedras de crack, satisfazendo as necessidades para a experiência. A quantificação de cocaína de 212,5 ng/ml no sangue dos animais também foi considerada representativa para os nossos objetivos de pesquisar alterações morfológicas no coração dos camundongos. Os resultados foram analisados pela One-Way-Anova e Modelo Linear Generalizado, e as diferenças consideradas significativas quando p< 0,05. Os estudos mostraram diminuição significativa da media (±DP) de peso dos corações nos animais expostos à droga, adultos e jovens, quando comparados com os grupos controles correspondentes. No grupo jovem, o aumento do número de núcleos, por área ventricular, pode ser relacionada com atrofia miocárdica dos ventrículos, direito e esquerdo (p< 0,001), demonstrada pela morfometria das fibras musculares estriadas cardíacas, utilizando-se o sistema de retículo de pontos. Nos adultos expostos, apesar da diminuição de peso do coração, a morfometria não constatou atrofia de miocárdio de nenhum dos lados (p> 0,05). Nos exames microscópicos das paredes ventriculares, com a coloração da hematoxilina-eosina, foi detectado, discreto número de fibras musculares cardíacas, com perda das estriações e hialinizações do citoplasma, favorecendo apoptose. A morfometria dos vasos coronarianos intramurais, com medições das luzes, camadas médias e adventícias demonstrou diminuição significativa da proporção (razão) luz/parede nos animais expostos, independente da idade, quando comparado com os grupos controle (p=0,001). Esses dados caracterizam a vasoconstrição por provável ação simpaticomimética da droga, justificando uma isquemia relativa no coração e conseqüente aumento da apoptose, bem documentada pela imunoistoquímica através da coloração do TUNEL. Esta imunocoloração marcou extensamente os núcleos de células apoptóticas, nos ventrículos direito e esquerdo dos animais expostos, quando comparado aos animais não expostos (p<0,001). A microscopia óptica com H&E e Picro-sirius sugeriu fibrose peri-adventicial nos animais expostos adultos A quantificação do colágeno, após a polarização, mostrou aumento não significativo, nos ramos coronarianos dos animais expostos adultos e interstício do ventrículo direito dos dois grupos expostos (p>0,05). As pesquisas realizadas com um modelo experimental inédito confirmam alterações anatomopatológicas já descritas na literatura, como a vasoconstrição com isquemia aguda e aumento da apoptose e mostram alterações ainda não referidas, em efeitos crônicos da cocaína, como a diminuição de peso do coração e atrofia do miocárdio. Os estudos, embora tenham limitações por não ter sido isolada outra substância eventualmente presente na amostra teste, constataram achados morfológicos importantes para a saúde pública, que devem ser pesquisados nas autópsias. Novos estudos são recomendados, utilizando-se outros tempos e ambientes de exposição, com e sem a associação de drogas, assim como porcentagens diferentes de cocaína no crack e isolando-se as substâncias presentes na droga in natura. / Crack cocaine is the currently popular form of cocaine, due to its low cost and rapid effects on the central nervous system. Alterations caused by cocaine on the hearts of humans and animals are well known and severe disorders in the cardiovascular system, which are sometimes fatal, are frequent. Considering the growing concern regarding the increase in the use of this smoked form of cocaine, especially by young individuals, it becomes necessary to carry out experimental studies using the drug in its natural form, which is not usually available for experiments due to legal difficulties. The present study aimed at assessing the effects of the chronic inhalation of crack cocaine on the hearts of mice. A total of 24 BALB/c male animals were used in the experiment, both young and old, with 6 animals in each group (n=6), which were exposed to crack cocaine smoke that resulted from the burning of 5 g of cocaine, for 5 minutes, 5 days a week, for 39 days, except on weekends and holidays, during a two-month period. An inhalation chamber was used to keep the animals during the sessions, whereas the same number of animals from the control group (n=6) were kept at the animal facility of the institution under favorable conditions. The drug had been originally apprehended by the police in the course of criminal investigations and its use in research was previously authorized by the Department of Justice. The pharmacological analysis of the drug verified the presence of 57.66% of cocaine in the crack rocks, which satisfied the criterion used for the experience. The quantification of cocaine at 212.5 ng/mL in the blood of the animals was also considered representative for our objectives of assessing morphological alterations in the hearts of mice. The results were analyzed by One-Way-ANOVA and Generalized Linear Model, and the differences were considered significant when p<0.05. The studies showed a significant difference in the mean (±SD) weight of the hearts of the animals exposed to the crack cocaine smoke, both young and adult ones, when compared to the corresponding control groups. In the young group, the increased number of nuclei per ventricular area might be related to the myocardial atrophy of the right and left ventricles (p<0.001), demonstrated by the morphometry of the striated heart muscle fibers, using the system of point reticulum. In the exposed adult animals, in spite of the decreased heart weight, the morphometry did not show myocardial atrophy in neither side (p>0.05). The microscopic assessment of the ventricular walls, carried out with hematoxylin and eosin (H&E) staining, showed a small number of heart muscle fibers with loss of striations and hyalinization of the cytoplasm, which favored apoptosis. The morphometry of the intramural coronary vessels, with lumen, medial and adventitial layer measurement, showed a significant decrease in the lumen/wall ratio in exposed animals, regardless of age, when compared to the control group (p=0.001). These data characterize vasoconstriction, due to the probable sympatheticomimetic action of the drug, which justifies a relative ischemia of the heart and a consequent increase in apoptosis, well documented by immunohistochemistry through TUNEL staining. This immunostaining extensively identified the nuclei of apoptotic cells in the right and left ventricles of the exposed animals, when compared to the non-exposed animals (p< 0.001). Optical microcopy with H&E and Picrosirius suggested periadventitial fibrosis in the adult exposed animals. Collagen quantification after polarization showed a non-significant increase in the coronary branches of the adult exposed animals and in the right ventricular interstitium in the two exposed groups (p>0.05). The present study, carried out using a novel experimental model, confirmed the presence of anatomopathological alterations that had been previously described in the literature, such as vasoconstriction with acute ischemia and increased apoptosis and showed alterations that had not been previously reported as being chronic effects of cocaine, such as decreased heart weight and myocardial atrophy. Although there were limitations, considering that other substances eventually present in the test sample were not identified, the present study demonstrated important morphological findings for public health, which must be studied in autopsies. Further studies are recommended, using other exposure durations and environments, with and without the association of drugs, as well as different percentages of cocaine in crack rocks and isolating the substances present in the drug in its natural form.
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