La Enfermedad de Carrión, es causada por la bacteria Bartonella bacilliformis, que se transmite por varias especies del insecto vector del género Lutzomyia. No se conoce ningún reservorio animal, aparentemente el hombre es el único. Es una enfermedad endémica en el Perú y actualmente es considerada como reemergente debido a que su área geográfica se viene expandiendo. Es importante estudiar marcadores moleculares que sirvan para el diseño de métodos de diagnóstico rápido y efectivos, así como evaluar los antibióticos recomendados como medidas terapéuticas contra esta enfermedad, e indagar más acerca de las proteínas antigénicas de esta bacteria a fin de seleccionar antígenos candidatos para desarrollar, una vacuna contra esta enfermedad o pruebas de diagnóstico para su detección de laboratorio de mayor sensibilidad y especificidad que las actuales. IalB y FlaA son proteínas interesantes debido a su participación en la invasión bacteriana al eritrocito humano. / Carrion’s Disease is caused by Bartonella bacilliformis bacterium, and is transmitted by several species of the vector insect of the Lutzomyia genus. Animal reservoir is not known; seemingly the man is the only one. This disease is endemic in Peru and is actually considered as re-emergent because their geographical distribution comes expanding. Thus it is important to study its molecular markers for established diagnosis methods that are quick and effective. On the treatment aspect, it is necessary to evaluate the antibiotics used against the disease. On the therapeutic topic, more research is required regarding the antigenic proteins from this bacterium; this fact is important to develop future vaccine against this disease or diagnostic assay for their detection in the laboratory or to improve the sensitivity and specificity of the current methods. IalB and FlaA are interesting proteins due to than they are involved in the bacterial invasion to the human erythrocyte.

La Enfermedad de Carrión, es causada por la bacteria Bartonella bacilliformis, que se transmite por varias especies del insecto vector del género Lutzomyia. No se conoce ningún reservorio animal, aparentemente el hombre es el único. Es una enfermedad endémica en el Perú y actualmente es considerada como reemergente debido a que su área geográfica se viene expandiendo. Es importante estudiar marcadores moleculares que sirvan para el diseño de métodos de diagnóstico rápido y efectivos, así como evaluar los antibióticos recomendados como medidas terapéuticas contra esta enfermedad, e indagar más acerca de las proteínas antigénicas de esta bacteria a fin de seleccionar antígenos candidatos para desarrollar, una vacuna contra esta enfermedad o pruebas de diagnóstico para su detección de laboratorio de mayor sensibilidad y especificidad que las actuales. IalB y FlaA son proteínas interesantes debido a su participación en la invasión bacteriana al eritrocito humano. / Carrion’s Disease is caused by Bartonella bacilliformis bacterium, and is transmitted by several species of the vector insect of the Lutzomyia genus. Animal reservoir is not known; seemingly the man is the only one. This disease is endemic in Peru and is actually considered as re-emergent because their geographical distribution comes expanding. Thus it is important to study its molecular markers for established diagnosis methods that are quick and effective. On the treatment aspect, it is necessary to evaluate the antibiotics used against the disease. On the therapeutic topic, more research is required regarding the antigenic proteins from this bacterium; this fact is important to develop future vaccine against this disease or diagnostic assay for their detection in the laboratory or to improve the sensitivity and specificity of the current methods. IalB and FlaA are interesting proteins due to than they are involved in the bacterial invasion to the human erythrocyte. / Tesis

Thesis (Ph. D.)--Georgia State University, 2008. / Title from file title page. Barbara Baumstark, committee chair; Phang-Cheng Tai, Zehava Eichenbaum, committee members. Electronic text (251 p. : ill. (some col.)) : digital, PDF file. Description based on contents viewed July 14, 2008. Includes bibliographical references (p. 223-238).

La presente investigación titulada “Características Clínicas Epidemiológicas de Bartonelosis aguda y sus Formas Graves Complicadas en Pediatría en el Hospital General de Jaén. Enero 2002 – Junio 2004”, es del tipo observacional, descriptivo, retroprospectivo y se realizó con una muestra de 278 pacientes. El objetivo del estudio es determinar las características clínicas epidemiológicas y sus formas graves complicadas de Bartonelosis aguda pediátrica, para lo cual se revisaron historias clínicas obtenidas de los libros de alta del servicio de estadística del hospital en estudio, con el diagnóstico clínico de Bartonelosis Aguda y que se haya verificado por el frotis de sangre periférica. Luego del análisis de los datos se concluyó en lo siguiente: -Que, la Fiebre, la Palidez, la Taquicardia y el Edema son las características clínicas más frecuentes asociadas a la Bartonelosis Aguda Pediátrica. -Que, el Sistema Hematopoyético y el Sistema Cardiovascular son las formas graves complicadas más frecuentes de la Bartonelosis Aguda Pediátrica. -Que, el Sexo Masculino es el más afectado por la Bartonelosis Aguda, los Niños de 1 a 4 años presentan mayor frecuencia de la enfermedad. Así mismo, el mayor Tiempo de la Enfermedad es menor a 15 días y los meses de Abril, Mayo y Junio son los que presentan mayor incidencia de la enfermedad.

La presente investigación titulada “Características Clínicas Epidemiológicas de Bartonelosis aguda y sus Formas Graves Complicadas en Pediatría en el Hospital General de Jaén. Enero 2002 – Junio 2004”, es del tipo observacional, descriptivo, retroprospectivo y se realizó con una muestra de 278 pacientes. El objetivo del estudio es determinar las características clínicas epidemiológicas y sus formas graves complicadas de Bartonelosis aguda pediátrica, para lo cual se revisaron historias clínicas obtenidas de los libros de alta del servicio de estadística del hospital en estudio, con el diagnóstico clínico de Bartonelosis Aguda y que se haya verificado por el frotis de sangre periférica. Luego del análisis de los datos se concluyó en lo siguiente: -Que, la Fiebre, la Palidez, la Taquicardia y el Edema son las características clínicas más frecuentes asociadas a la Bartonelosis Aguda Pediátrica. -Que, el Sistema Hematopoyético y el Sistema Cardiovascular son las formas graves complicadas más frecuentes de la Bartonelosis Aguda Pediátrica. -Que, el Sexo Masculino es el más afectado por la Bartonelosis Aguda, los Niños de 1 a 4 años presentan mayor frecuencia de la enfermedad. Así mismo, el mayor Tiempo de la Enfermedad es menor a 15 días y los meses de Abril, Mayo y Junio son los que presentan mayor incidencia de la enfermedad.

Evalúa in silico y serológicamente el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis. Por medio del análisis in silico se escogió a la proteína LptD por estar localizado en la membrana externa, poseer una alta probabilidad de ser antigénica, no presentar similitud con proteínas humanas, de ratón o de cerdo, ser una proteína de mediano peso molecular (86.80 kDa), presentar epítopes con alta afinidad a HLA clase I y II, los cuales, presentaron un alto índice de cobertura poblacional (Perú 100%, Sudamérica 93.8% y a nivel Mundial 99.28%). Mediante el uso de la tecnología de ADN recombinante se clonó en Escherichia coli TOP10 el gen del dominio extracelular de LptD fusionada a una cola de seis histidinas y se expresó en E. coli BL21 (DE3) pLysS. Las condiciones para inducción de la proteína recombinante fueron 0.5 mM IPTG, 16 horas, medio TB etanol al 3% (v/v), 28 0C, OD600: 1-1.5 y 200 r.p.m. La purificación se realizó en condiciones denaturantes con resina Ni-IDA (His60 Ni Superflow) a pequeña escala y se obtuvo 2.6 μg de LptD recombinante parcialmente purificada por cada 1 mL de cultivo bacteriano inducido (OD600: 1 - 1.5). El resultado positivo del ensayo de Western Blot permitió evidenciar la antigenicidad de la proteína LptD recombinante ante sueros de pacientes que sufrieron la enfermedad de Carrión. En conclusión, la proteína LptD recombinante muestra antigenicidad tanto in silico y serológicamente, estos resultados son base para posteriores estudios de la proteína LptD en la línea de investigación de candidatos vacunales contra la enfermedad de Carrión. / Perú. Ministerio de la Producción. Programa Nacional de Innovación para la Competitividad y Productividad (Innóvate Perú). Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / La enfermedad de Carrión, también llamada Bartonelosis es una enfermedad desatendida, presente en los países de Colombia, Ecuador y especialmente en Perú; causada por la bacteria Bartonella bacilliformis y transmitida por mosquitos del género Lutzomyia. Los flebotominos de las especies Lutzomyia verrucarum y Lutzomyia peruensis han sido descritos como los vectores principales de la enfermedad. Sin embargo, existen áreas endémicas de Bartonelosis en algunas regiones ubicadas al norte del Perú, en los departamentos de Cajamarca y Amazonas en donde no se han reportado la presencia de estos dos vectores pero se han reportado una gran abundancia de flebotominos de las especies Lutzomyia serrana y Lutzomyia maranonensis, las cuales podrían estar implicadas como potenciales vectores de la enfermedad de Carrión. El objetivo de este estudio fue evaluar molecularmente la presencia de B. bacilliformis en flebotominos de la especie L. maranonensis de 4 distritos de la provincia de Cutervo, departamento de Cajamarca, Perú. Esta especie aún no ha sido definida como portadora del agente etiológico. Se analizaron muestras de flebotonimos hembras adultas colectadas con trampas de luz de tipo CDC en los años 2007 y 2008. La comprobación de la identificación de la especie se hizo mediante claves morfológicas, se agruparon en conjuntos de cinco individuos teniendo en cuenta el distrito y lugar de muestreo (intradomiciliario o peridomiciliario). Se extrajo ADN, posteriormente se realizó una PCR convencional y una PCR en tiempo real (RT-PCR) para detectar la presencia de B. bacilliformis, posteriormente se confirmó mediante secuenciación. Se analizaron un total de 383 individuos de la especie L. maranonensis. Se identificó mediante secuenciación que 2 (2.6%) de los grupos de mosquitos positivos por PCR convencional y RT-PCR eran 2 B. bacilliformis, dichos grupos provinieron del distrito de Querocotillo. Además, 2 (2.6%) otros grupos positivos por PCR convencional pero negativos por RT-PCR se identificaron mediante secuenciación como Mesorhizobium spp., una protobacteria filogenéticamente cercana a B. bacilliformis. Este estudio presenta evidencia molecular de que L. maranonensis es portador de B. bacilliformis y potencial vector de la Enfermedad de Carrión en el distrito de Querocotillo del departamento de Cajamarca. Futuras investigaciones podrían determinar si L. maranonensis es un vector que podría transmitir B. bacilliformis. / Tesis

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The experiment would then have shown that there are not two diseases, but only one, that which, since then, bears his name as a tribute to the heroic gesture of inoculation. According to current knowledge about the disease, it has two stages in its evolution or syndromes. A febrile phase, anemiante, acute and of high risk for the patient's life; another phase, which follows the first, is the development of a characteristic skin neoformation, with the form of papules blood, called Peruvian wart. The historiography of the disease, after 1940, suggests that this duality of pathological manifestation represented the clinical difficulty explaining the genesis and outcome of the experiment of Carrion. However, research of documents relevant to the experiment of 1885, made in the first chapter of our thesis, showed that the experiment was not aimed at overcoming the dichotomy of two diseases. The student already had an advanced understanding of the overall clinical progression of the disease, including its two stages. From our investigation, moreover, we conclude that the peruvian medicine considered demonstrated that the inoculation produced Oroya fever, but the peruvian medicine does not present anywhere the ways in which one can recognize the Oroya fever. Due to these problems was undertaken in the second chapter, the study of the period of foundation of Peruvian wart clinic (1842-1872) and came to the conclusion that at this time there already was a complete understanding of the evolution of disease, including its stages and forms of development. At this point in our investigation, the existence of the notion of Oroya fever has appeared as unnecessary for the clinical knowledge of the disease. Therefore, the third chapter of our thesis investigated the period from 1872 to 1885, a time when the notion of Oroya fever appears in medical literature. Our investigation has shown that the notion appeared in Peruvian medicine because it regarded the disease as being a strictly benign, afebrile rash. Consequently, the Peruvian nosological dualism appears as a result of its inability to explain the phenomena of the general economy’s commitment that anticipate the eruption of Peruvian wart. With this new understanding of the clinical description of disease, we retake, in the fourth chapter, what happened in the study of disease, after the experiment of Carrión. A review of medical literature of the period between 1885 and 1898 showed that the historical narrative of Lima on the 7 experiment of Carrion became a guiding discipline of all research on the disease of this new period. During one stage of that Peruvian research (1885-1898), required to remain still only clinic, the study of disease was a prisoner of its assumptions - it became necessary, to keep the interpretation of the experiment as true, to define the concept of Oroya fever. But the final solution was not reached because the effort of maintaining doctrinal assumptions was placed above the results of observation. This closed circle began to be broken with the discovery of Tamayo, in 1905, that part of what physicians called Oroya fever was the result of a very common complication of severe cases of Peruvian wart with paratyphoid bacilli. The fourth chapter is concerned, yet, to the period after the discovery of Tamayo, from 1905 to 1913, to know the fate of Oroya fever. This research shows that the Peruvian medicine did not give up of the traditional historical narrative about the Carrion’s experiment. After Tamayo’s explanation of the reasons of part of what is called Oroya fever, the Peruvian medicine refused to give up of the use of this notion. Arce, the main Peruvian defender of the traditional historical narration about the disease, in 1913, meaning to seek the recovery of significance of Oroya fever that kept alive the dual polarity needed to remain true to the idea that, in 1885, has been demonstrated the unity between the two diseases. This doctoral thesis has obtained, thus, the construction of a new history of knowledge of Carrion’s disease, for the period 1842 to 1913. / Esta tese doutoral é uma investigação histórica e epistemológica da idade clínica da doença de Carrión (1842-1885) ao início da idade bacteriológica de seu estudo (1885-1913). Trata-se de uma doença nascida no interior de uma narrativa histórica médica sobre os efeitos da inoculação experimental que o estudante de medicina Daniel Alcides Carrión, se fez fazer em agosto de 1885. Segundo a narrativa médica limenha sobre o experimento, suas origens e suas consequências, o estudante inoculara-se com o sangue de uma doença conhecida como verruga peruana, mas desenvolveu e morreu, em cinco de outubro daquele mesmo ano, da doença chamada febre de Oroya. O experimento teria, assim, demonstrado que não há duas doenças, mas uma só que, desde então, leva seu nome, como homenagem ao gesto heroico da inoculação. Segundo o conhecimento atual sobre a doença, ela possui duas fases ou síndromes em sua evolução. Uma febril, anemiante, aguda e de alto risco para a vida do doente. Outra, que sucede a primeira, é o desenvolvimento de uma neoformação cutânea característica, com a forma de pápulas sanguíneas, chamada verruga peruana. A historiografia sobre a doença, posterior a 1940, sugere de que esta dualidade de manifestação patológica representou a dificuldade clínica que explica a gênese e o resultado do experimento de Carrión. Entretanto, a investigação dos documentos pertinentes ao experimento de 1885, feita no primeiro capítulo de nossa tese, mostrou que o experimento não visava a ultrapassar a dicotomia de duas doenças. O estudante já detinha uma compreensão clínica global avançada da evolução da doença, incluindo as suas duas etapas. Da nossa investigação, ademais, resultou que a medicina limenha deu por demonstrado que a inoculação produziu a febre de Oroya, mas ela não apresentou, em lugar algum, os modos pelos quais se pode reconhecer a febre de Oroya. Em função destes problemas, empreendeu-se, no capítulo segundo, o estudo do período de fundação da clínica da verruga peruana (1842 a 1872) e chegou-se à conclusão de que, nesta época, já havia uma compreensão global da evolução completa da doença, incluindo as suas etapas e formas de desenvolvimento. A esta altura da nossa investigação, a existência da noção de febre de Oroya já aparecia como desnecessária para o conhecimento clínico da doença. Por isso, o capítulo terceiro de nossa tese investigou o período de 1872 a 1885, época em que a noção de febre de Oroya aparece na literatura médica. Nossa investigação mostrou que a noção surgiu na medicina limenha porque esta concebia a doença como sendo estritamente uma erupção cutânea, apirética e benigna. Consequentemente, o dualismo nosológico peruano aparece como resultado da sua incapacidade de explicar os fenômenos de comprometimento geral da economia que antecipam a erupção da verruga peruana. Com essa nova compreensão da descrição clínica da doença, retoma-se, no quarto capítulo, o que aconteceu, no estudo da doença, depois do experimento de Carrión. A análise da literatura médica do período de 1885 a 1898, aí realizada, mostrou que a narrativa 5 histórica limenha sobre o experimento de Carrión tornou-se uma disciplina ordenadora de toda pesquisa sobre a doença deste novo período. Durante uma etapa da pesquisa (1885-1898), obrigada a ainda permanecer apenas clínica, o estudo da doença esteve prisioneiro de seus pressupostos. Tornou-se necessário, para manter como verdadeira a interpretação do experimento, definir o conceito de febre de Oroya. Mas não se chegava à solução definitiva porque o esforço de manutenção dos pressupostos doutrinários era colocado acima dos resultados da observação. Este círculo fechado começou a ser quebrado com a descoberta de Tamayo, em 1905, de que parte daquilo que os clínicos chamavam de febre de Oroya era resultado de uma complicação muito frequente dos casos graves de verruga peruana por bacilos paratifoides. O capítulo quarto ocupa-se, ainda, do período posterior à descoberta de Tamayo, de 1905 a 1913, para conhecer o destino da febre de Oroya. Desta investigação resulta que a medicina peruana não abriu mão da narrativa histórica tradicional do experimento de Carrión. Depois que Tamayo deu a explicação das razões de parte daquilo a que se chamara de febre de Oroya, a medicina peruana não aceitou desistir do uso desta noção. Arce, o principal defensor da narração histórica tradicional sobre a doença, em 1913, procurou recuperar uma significação para a febre de Oroya que mantivesse viva a polaridade dualista necessária para que permanecesse verdadeira a ideia de que, em 1885, foi demonstrada a unidade entre duas doenças. A presente tese doutoral obteve, assim, a construção de uma nova história do conhecimento da doença de Carrión, relativa ao período de 1842 a 1913.