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Previous issue date: 2013-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The platelet activating factor (PAF) is produced by macrophages during inflammation
and infection. The role of PAF in leishmaniasis, a disease caused by the protozoan
Leishmania spp is not yet fully elucidated. This study was aimed to evaluate the
modulation of human macrophage infection with L. (V.) braziliensis by PAF.
Monocyte-derived macrophages were incubated with promastigote forms and the
infection was assessed under light microscopy (infection index = % infected
macrophages x the mean number of parasites per macrophage) after 4 h or 48 h
incubation. The NBT assay was used to evaluate the production of superoxide anion.
Treatment with PAF 10-10 M, 3 h before the addition of the parasites, increased
infection index after 4 h of incubation (Medium vs PAF: 212 vs 324, p <0.05), whereas
the infection decreased after 48 h of incubation when PAF was added together with
parasites (554 vs 181, p <0.05). The effect of PAF seems to be on macrophages and
not on parasites, since the treatment of parasites before incubation with the cells
decreased the infection index after 4 h (p <0.05). It was observed that treatment of
macrophages with rIFNg, PAF and LPS simultaneously intensified the decreasing of
infection index, but the results were not significantly different of those from cultures
treated with only PAF. Treatment of macrophages with a PAF antagonist, PCA 4248,
30 min before incubation with the parasites caused a significant increase of the infection
index in a concentration-dependent manner (p <0.05) after 48 h. The effect of PCA
4248 was observed only when it was present during the first 4 h of incubation. The
inhibition of the reactive oxygen intermediates (ROI) and nitric oxide (NO) production
with apocynin and aminoguanidine, respectively, increased the infection (Medium vs
apocynin: 200 vs 501; vs Aminoguanidine: 389, p <0.05). In parallel, it was showed that
L. (V.) braziliensis induces the production of ROI (superoxide anion) which is further
increased by exogenous or endogenous PAF. In conclusion, PAF modulates
phagocytosis and increases the microbicidal activity depending on the concentration,
contributing to the control of the human macrophage infection with L. (V.) braziliensis.
The data showed that Leishmania (V.) braziliensis induces the production of ROI and
NO in human macrophages, and suggested that PAF-enhanced microbicidal activity is
mediated by an increased production of ROI. The data indicate that PAF activates
human macrophages, and can play an important role in the control of the infection by L.
(V.) braziliensis. / O fator ativador de plaquetas (PAF) é produzido por macrófagos durante a
inflamação e infecções. O papel do PAF na leishmaniose, doença causada pelo
protozoário Leishmania spp ainda não está completamente elucidado. Neste trabalho foi
avaliado se o PAF é capaz de modular a infecção de macrófagos humanos com L. (V.)
braziliensis. Macrófagos foram derivados de monócitos e incubados com formas
promastigotas, sendo a infecção avaliada sob microscopia de luz (Índice de infecção =
% macrófagos infectados x número médio de parasitos por macrófagos), após 4 h ou
48 h de incubação. O ensaio do NBT foi utilizado para avaliar a produção de ânion
superóxido. O tratamento com o PAF 10-10 M, 3 h antes da adição dos parasitos,
aumentou o índice de infecção após 4 h de incubação (Meio vs PAF: 212 vs 324,
p < 0,05), enquanto diminuiu este índice após 48 h de incubação, quando o PAF foi
adicionado junto com os parasitos (554 vs 181, p < 0,05). O efeito do PAF parece ser
nos macrófagos e não nos parasitos, uma vez que o tratamento dos parasitos antes da
incubação com as células diminuiu significantemente a infecção após 4 h (p < 0,05). Foi
observado que o tratamento dos macrófagos com rIFNg, PAF e LPS simultaneamente,
apesar de causar uma redução mais acentuada nos índices de infecção, não mostrou
diferença estatisticamente significativa em relação ao tratamento com o PAF sozinho. O
tratamento dos macrófagos com um antagonista de PAF, o PCA 4248, 30 min antes da
incubação com os parasitos causou um aumento significante do índice de infecção, de
maneira dependente da concentração (p < 0,05), após 48 h. O efeito do PCA 4248 foi
observado somente quando este estava presente durante as primeiras 4 h de incubação.
A inibição da produção de reativos intermediários do oxigênio (ROI) e óxido nítrico
(NO), com apocinina e aminoguanidina, respectivamente, aumentou a infecção (Meio vs
Apocinina 10-3 M: 200 vs 501; vs Aminoguanidina 10-3 M: 389, p < 0,05). Em paralelo,
a quantificação da produção de ânion superóxido, demonstrou que L. (V.) braziliensis
induz a produção de ROI e que esta produção pode ser aumentada pelo PAF exógeno ou
endógeno. Em conclusão, o PAF modula a fagocitose e aumenta a atividade
microbicida, dependendo da concentração, contribuindo para o controle da infecção de
macrófagos humanos com L. (V.) braziliensis. A infecção de macrófagos humanos com
L. (V.) braziliensis induz a produção de ROI e NO, sendo sugerido que o PAF aumenta
a atividade microbicida dos macrófagos via aumento da produção de ROI. Os dados
indicam que o PAF ativa os macrófagos humanos, podendo ser relevante no controle da
infecção por L. (V.) braziliensis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/4532 |
| Date | 28 February 2013 |
| Creators | Borges, Arissa Felipe |
| Contributors | Dias, Fátima Ribeiro, Dias, Fátima Ribeiro, Amaral, André Correa, Bonzinis, Marize Campos Valadares |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6085308344741430434, 600, 600, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, 8765449414823306929, 2075167498588264571, -961409807440757778, -2555911436985713659 |
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