Introdução: Métodos quantitativos sensíveis e acurados para monitorar o quimerismo hematopoiético após Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) são necessários para verificar o sucesso do enxerto, uma vez que os resultados influenciam a abordagem terapêutica. Método: A técnica de detecção de DNA baseada em primers inserção-específicos de marcadores genéticos do tipo InDel (Inserção/Deleção) foi avaliada quanto a sua utilidade em quantificar quimerismo em amostras de DNA em baixa concentração, em PCR em Tempo Real (qPCR). Para isso, amostras de DNA de dez pacientes submetidos a Transplante de Medula Óssea (TMO) foram analisados para quantificar a concentração de DNA residual em diferentes períodos pós-transplante. Os resultados obtidos pela InDelqPCR foram comparados com a evolução clínica descrita nos prontuários. Resultados: As quantificações do DNA residual variaram de 0,021 ng/µL a 11,71 ng/µL, correspondendo a fração de 0,065% a 40,6% do DNA total presente na amostra. Os resultados obtidos (presença ou ausência do alelo inserção) foram condizentes com a evolução clínica dos pacientes, em alguns casos, evidenciando quimerismo prévio ao relatado nos prontuários. Conclusão: Nossos dados demonstram a utilidade do método InDel-qPCR, baseada em primers inserçãoespecíficos, no monitoramento de quimerismo hematopoiético. / Introduction: Sensitive and accurate quantitative methods to monitor hematopoietic chimerism after Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) are necessary to evaluate engraftment since the results influence a therapeutic approach. Method: DNA detection technique based on insert-specific primers for Insertion/Deletion polymorphism (InDel) was evaluated for chimerism quantification of samples with low amounts of DNA, by quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR). Samples of patients undergoing Bone Marrow Transplantation (BMT) collected at different post-transplantation times were analyzed to quantify the residual DNA concentration. Then, the results found using InDel-qPCR were compared to the medical records. Results: DNA quantifications ranged from 0.021 ng/?L to 11.71 ng/?L, corresponding to a fraction of 0.065% to 40.6% of the total DNA. Our results, in some cases, shows chimerism presence previously to that reported in the medical records. Conclusion: Our data demonstrate the usefulness of the InDelqPCR method based on insertion-specific primers in the monitoring of hematopoietic chimerism.
Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-30052019-163658 |
Date | 21 December 2018 |
Creators | Santos, Marcela Dambrowski dos |
Contributors | Simões, Aguinaldo Luiz |
Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
Source Sets | Universidade de São Paulo |
Language | Portuguese |
Detected Language | Portuguese |
Type | Tese de Doutorado |
Format | application/pdf |
Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
Page generated in 0.0014 seconds