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Previous issue date: 2010-02-22 / Surinam cherry leaves are popularly used as an alternative treatment for diabetes mellitus. They are
rich in phenolic compounds which have antioxidant properties. Besides, it is well known that reactive species influence in the progression of diabetes. The aim of this study was to evaluate the antioxidant, cytotoxic and cytoprotective activity of the crude leaf extracts of Eugenia uniflora L. and some major components of the extracts, quercetin (QE) and myricetin (MI); and the effect of these substances on the functionality of RINm5f cells. The methodologies performed were: Folin-
Ciocalteau method, MTT reduction, DPPH method, hematoxylin-eosin stain, radioimmunoassay and Western Blot analyses. The total phenolic content obtained for the extracts was 440.27 g/mL and 37.83Yg/mL catechin equivalent/mg of aqueous extract (AE) and ethanol extract (EE), respectively. In the DPPH essay, the IC50 of AE was 321.50 g/mL, MI was 152.63 g/mL and QE
was 110.278 g/mL. The EE didn’t show significant antioxidant activity. The AE and the EE are not cytotoxic in the concentrations between 12.5 - 75 g/mL and 31.25 - 500Yg/mL, respectively. QE and MI are not cytotoxic in the concentrations between 3.13 – .25 g/mL and 3.13 – 12.5 g/mL, respectively. Most of the compounds didn’t interfere in insulin secretion, except for EE, which increased at least 3 times insulin secretion and MI which decreased insulin secretion in its lower concentration tested. Hydrogen peroxide (H2O2) induced a reduction of 33% of cell viability in acute assay and 45% in chronic assay. The AE had a cytoprotective effect mainly in the chronic assay and in its higher concentrations. The EE had a similar effect only when chronically tested. QE showed a dose-dependent result (6.5 > 3.13 g/mL) in the acute assay and prevented 100% of the damage caused by H2O2 in the chronic assay. One possible cytoprotective mechanism for these compounds and extracts is the inhibition of the activation of NF-κB. Besides that, H2O2 altered intercellular adhesion with intense modification of cellular morphology. The cells presented a round shape, with the formation of folds in the membrane and reduction of cytoplasm basophily.
Both extracts and isolated compounds also prevented changes in morphology caused by H2O2, suggesting prevention of lipid peroxidation. There was no variation in the expression of the proteins superoxide dismutase (SOD), Bax, disulfide isomerase (PDI) and GRP94 (glucoseregulated protein), however, the increased protein content of GRP78 was an indicative of reticular
stress. These results are an evidence that Eugenia uniflora L. can be used as an alternative treatment for diabetes mellitus. / Folhas de pitanga são popularmente utilizadas no tratamento alternativo do diabetes mellitus. Portanto, o
objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antioxidante, citotóxica e citoprotetora dos extratos brutos das folhas de Eugenia uniflora L. e de compostos encontrados nos extratos: quercetina (QE) e miricetina
(MI), além do efeito destes sobre a funcionalidade de células RINm5f. As metodologias utilizadas foram:
Folin-Ciocalteau, redução do MTT, captura do DPPH, coloração por hematoxilina e eosina, radioimunoensaio e Western Blot. O conteúdo total de fenóis obtido nos extratos foi 440,27 g/mL e 37,83 g/mL equivalentes de catequina/mg de extrato aquoso (EA) e alcoólico (EE), respectivamente. No ensaio de captura do DPPH, o EA apresentou um IC50 de 321,50 g/mL, a MI de 152,63 g/mL e a QE de 110,278 g/mL. O EE não apresentou significativa atividade antioxidante. O EA e o EE não apresentaram citotoxicidade nas concentrações entre 12,5 - 75 g/mL e 31,25 - 500 g/mL, respectivamente. Já a QE e MI são mais citotóxicas, apresentando viabilidade celular superior a 90% entre 3,13 - 6,25 g/mL e 3,13 - 12,5 g/mL, respectivamente. Quanto à funcionalidade celular, o EA e a QE não interferiram na secreção de insulina. A MI causou redução na secreção de insulina na concentração de 3,13 g/mL enquanto o EE aumentou mais de 3 vezes a secreção deste hormônio. O peróxido de hidrogênio (H2O2) reduziu, em média, 33% da viabilidade das células no ensaio agudo e 45% no ensaio crônico. O EA promoveu citoproteção principalmente no ensaio crônico e nas maiores concentrações testadas. Já o EE apresentou citoproteção apenas quando incubado cronicamente. A QE apresentou resultado dose-dependente (6,5 > 3,13 g/mL) no ensaio agudo e preveniu 100% dos danos causados pelo H2O2 no ensaio crônico. Um possível mecanismo de ação relacionado com a proteção dos extratos e compostos isolados é o bloqueio da ativação do NF-κB pelo H2O2. Além disso, o
H2O2 alterou a adesão intercelular com intensa modificação na morfologia destas. As células
apresentaram formato mais arredondado, com formação de pregas na membrana e redução da basofilia
citoplasmática. Os extratos e compostos isolados preveniram alterações na morfologia causadas por
H2O2, sugerindo prevenção da peroxidação lipídica. Não houve variação na concentração protéica da superóxido dismutase (SOD), BAX, dissulfito isomerase (PDI) e GRP94 (proteína regulada por glicose), entretanto houve aumetno da concentração da proteína GRP78 indicando estresse reticular. Os resultados apresentados são um indicativo de que a E. uniflora L. possa ser usada no tratamento alternativo do diabetes mellitus.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.uepg.br:prefix/951 |
| Date | 22 February 2010 |
| Creators | Braatz, Simoní Marinéia |
| Contributors | Emilio, Henriettte Rosa de Oliveira, Kanunfre, Carla Cristine, Faveró, Giovani Marino, Oliveira, Marcia Regina Paes de |
| Publisher | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas, UEPG, BR, Biologia Evolutiva |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPG, instname:Universidade Estadual de Ponta Grossa, instacron:UEPG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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