SOUSA FILHO, Marcus Vinícius Ponte de. Inibição da migração de neutrófilos e da hipernocicepção pelo pré-condicionamento isquêmico remoto : participação da via L-
arginina-NO-GMPc-Canais K+ATP. 2011. 128 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T14:33:50Z
No. of bitstreams: 1
2011_tese_mvpsousafilho.pdf: 2936273 bytes, checksum: 80dd27073338a77c31509e26608741aa (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T14:34:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2011_tese_mvpsousafilho.pdf: 2936273 bytes, checksum: 80dd27073338a77c31509e26608741aa (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-21T14:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2011_tese_mvpsousafilho.pdf: 2936273 bytes, checksum: 80dd27073338a77c31509e26608741aa (MD5)
Previous issue date: 2011 / The reperfusion injury (RI) occurs when there is de lay in restoring blood flow to organs and tissues.
Among the strategies proposed to attenuate the RI i
s the ischemic preconditioning (IPC), which
consists of induction of brief ischemic periods fol
lowed by reperfusion performed before the sustained
ischemic insult. In the first part, this study aim
ed to evaluate the role of nitric oxide (NO), cycli
c
guanosine monophosphate (cGMP) and ATP-sensitive po
tassium channels (K
+
ATP
) in the inhibitory
effect of hind limb IPC on the mice peritoneal cavi
ty neutrophil migration (NM). In the second part, t
he
objective was to evaluate the potential systemic an
tinociceptive effect of IPC in mechanical plantar
hypernociception test (MPH; Von Frey) in rats and t
o evaluate the involvement of NO, cGMP and
K
+
ATP
channels in this event. In the first part, the IPC
was induced by hind limb ischemia for 10 min
followed by 30 min of reperfusion in wild and knock
out mice to inducible NO synthase (iNOS -/-). The
leukocyte rolling (LR), leukocyte adhesion (LA) and
NM were induced by ip administration of
Carrageenan (Cg, 500
μ
g/cavity) and results expressed in number of leukoc
ytes/min, number of
adherent leukocytes/100
μ
m
2
cells and number of neutrophils x 10
6
/cavity, respectively. Different
groups of animals were treated with saline (SAL), A
minoguanidine (AG, sc, 100mg/kg), ODQ (ip, 8
μ
mol/kg) or Glibenclamide (GBC, sc, 20 mg/kg) 30 min
before IPC induction. Controls received the
same treatment, but without IPC. In the second part
, the IPC was induced by hind limb ischemia for 10
min followed by 30 min of reperfusion in male Wista
r rats (180-200g). Cg (300
μ
g, intraplantar) or
Prostaglandin E
2
(PGE
2
- 400 ng, intraplantar) were used as hypernocicept
ive stimulus on left paw
immediately after induction of IPC in contralateral
paw. Different groups of animals were treated 30
min before induction of IPC with AG (100
μ
g/kg, intraplantar), LNMMA (50
μ
g, intraplantar), ODQ (8
μ
g, intraplantar) or GBC (160
μ
g, intraplantar). Controls received the same treatm
ents, but without
IPC. The quantification of MPH was performed throug
h subtraction strength/pressure (g) required to
cause withdrawal of paw in contact with an apparatu
s of eletronic von Frey mensuread before
hypernociceptive stimulus, by measure obtained 3h a
fter administration of Cg or PGE2. The LR, LA
and NM induced by Cg in the peritoneal cavity were
significantly (p <0,01) inhibited by hind limb IPC
of
wild animals (LR= 75.94%, LA= 56.51%, NM= 79.01 %),
but these effects were not observed in
animals iNOS -/-. The treatment of wild animals wit
h AG and ODQ, but not with GBC, abrogated the
inhibitory effect of IPC on NM induced by Cg. Treat
ment of animals with AG, GBC or ODQ did not
significantly alter the NM induced by Cg in the per
itoneal cavity. We also observed that IPC did not
alter the TNF-
α
, IL1-
β
and CXCL1 chemokine levels induced by Cg in the pe
ritoneal cavity. The
mechanical hypernociception induced by Cg or PGE2 i
n left hind paw was significantly reduced (p
<0,01) when IPC was performed in the right paw (55%
and 68%). The treatment of animals with AG,
LNMMA, ODQ or GBC, before IPC, abrogated the antino
ciceptive effect of IPC. Treatment of animals
with AG, LNMMA, ODQ or GBC did not significantly al
ter the hypernociception induced by noxious
stimulation. Our results show that IPC has an inhib
itory effect on remote NM, with NO an important
mediator involved in this process, probably through
the cGMP pathway. This inhibitory effect of IPC
does not depend on the opening of K
+
ATP
channels, or inhibition of synthesis and/or releas
e of pro-
inflammatory cytokines. The elucidation of the mech
anism by which IPC inhibits the NM may make
important contributions to clinical situations wher
e neutrophil infiltration is a complicating factor.
The
IPC also has a potent inhibitory effect on inflamma
tory pain, with NO seems to be one important
mediator involved in this protective effect of IPC,
acting through the cGMP/K
+
ATP
channel pathway.
This is the first demonstration described in the li
terature of systemic antinociceptive effect of IPC,
and
the elucidation of the mechanisms involved in this
process is fundamental for pain management
induced by several inflammatory stimuli. / A lesão de reperfusão (LR) ocorre quando há retardo
do restabelecimento do fluxo sanguíneo para
órgãos e tecidos. Dentre as estratégias propostas p
ara atenuar a LR está o pré-condicionamento
isquêmico (PCI), que consiste na indução de curtos
períodos de isquemia seguidos de reperfusão
realizados antes da isquemia prolongada. Na primeir
a parte deste trabalho, o objetivo do estudo foi
avaliar a participação do Óxido Nítrico (NO), guano
sina monofosfato cíclico (GMPc) e canais de
potássio sensíveis a ATP (K
+
ATP
) no efeito inibitório do PCI da pata posterior na
migração de
neutrófilos (MN) para cavidade peritoneal de camund
ongos. Na segunda parte, o objetivo foi avaliar o
potencial antinociceptivo sistêmico do PCI no teste
de hipernocicepção plantar mecânico (HPM; Von
Frey) em ratos, bem como avaliar o envolvimento do
NO, GMPc e canais K
+
ATP
neste evento. Na
primeira parte, o PCI foi induzido através da isque
mia da pata posterior direita por 10 min seguidos d
e
30 min de reperfusão em camundongos selvagens e com
deleção gênica da NO sintase induzível
(NOSi -/-). O rolamento de leucócitos (RL), adesão
de leucócitos (AL), bem como a MN foram
induzidos através da administração ip de Carragenin
a (Cg, 500
μ
g/cavidade), sendo os resultados
expressos em número de leucócitos/min, número de cé
lulas aderidas/100
μ
m
2
, e número de
neutrófilos x 10
6
/cavidade, respectivamente. Diferentes grupos de an
imais foram tratados com salina,
Aminoguanidina (AG, sc, 100mg/kg), ODQ (ip, 8
μ
mol/kg) ou Glibenclamida (GBC, sc, 20mg/kg) 30
min antes da indução do PCI. Os controles receberam
o mesmo tratamento, porém sem PCI. Na
segunda parte, o PCI foi induzido através da isquem
ia da pata posterior direita de ratos machos
Wistar (180-200g) por 10 min seguidos de 30 min de
reperfusão. Cg (300
μ
g, intraplantar) ou
Prostaglandina E
2
(PGE
2
– 400 ng, intraplantar) foram utilizadas como estí
mulo hipernociceptivo na
pata esquerda imediatamente após a indução do PCI n
a pata contralateral. Diferentes grupos de
animais foram tratados 30 min antes da indução do P
CI com AG (100mg/kg, sc), LNMMA (50
μ
g,
intraplantar), ODQ (8
μ
g, intraplantar) ou GBC (160
μ
g, intraplantar). Os controles receberam os
mesmos tratamentos, porém sem PCI. A quantificação
da HPM foi realizada através da subtração da
força /pressão (g) necessária para provocar a retir
ada da pata em contato com o aparelho de von
Frey eletrõnico mensurada antes do estímulo hiperno
ciceptivo, pela medida obtida 3h após a
administração do estímulo. O RL, AL e MN induzidos
por Cg na cavidade peritoneal foram
significativamente (p<0,01) inibidos pelo PCI da pa
ta posterior dos animais selvagens (RL= 75,94%,
AL= 56,51%, MN= 79,01%), o mesmo não sendo observad
o nos animais NOSi -/-. O tratamento dos
animais selvagens com AG e ODQ, mas não com GBC, an
ularam o efeito inibitório do PCI sobre a
MN induzida por Cg. O tratamento dos animais com AG
, ODQ ou GBC não alterou significativamente
a MN induzida por Cg na cavidade peritoneal. Observ
ou-se ainda que o PCI não alterou os níveis de
TNF-
α
, IL1-
β
e quimiocina CXCL1 induzidos por Cg na cavidade pe
ritoneal. A hipernocicepção
mecânica induzida por Cg ou PGE
2
na pata posterior esquerda foi reduzida significat
ivamente
(p<0,01) quando se realizou o PCI na pata direita (
55% e 68%), sendo o efeito antinociceptivo do PCI
anulado quando os animais foram tratados com AG, LN
MMA, ODQ ou GBC antes do PCI. O
tratamento dos animais com AG, LNMMA, ODQ ou GBC nã
o alterou significativamente a
hipernocicepção induzida pelos estímulos nociceptiv
os. Nossos resultados demonstram que o PCI
apresenta um efeito inibitório na MN a distância, s
endo o NO um importante mediador envolvido neste
processo, provavelmente através da via GMPc. Este e
feito inibitório do PCI parece não depender da
abertura de canais K
+
ATP
, nem da inibição da síntese e/ou liberação de cito
cinas pro-inflamatórias. O
esclarecimento do mecanismo através do qual o PCI i
nibe a MN poderá trazer importantes
contribuições em situações clínicas onde a infiltra
ção neutrofílica constitui um fator complicador. O
PCI apresenta ainda um potente efeito inibidor na d
or inflamatória, parecendo ser o NO um
importante mediador envolvido neste efeito protetor
do PCI, atuando através da via GMPc / canais
K
+
ATP
. Esta é a primeira demonstração descrita na litera
tura do efeito antinociceptivo sistêmico do
PCI, sendo o esclarecimento dos mecanismos envolvid
os neste processo fundamental para manuseio
da dor induzida pelos mais diversos estímulos.
Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/7745 |
Date | January 2011 |
Creators | Sousa Filho, Marcus Vinícius Ponte de |
Contributors | Ribeiro, Ronaldo de Albuquerque |
Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
Language | Portuguese |
Detected Language | English |
Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0081 seconds