Os polímeros de impressão molecular (MIP) são materiais promissores para
aplicação em extração em fase sólida (SPE). Os MIP são obtidos através da
preparação de polímeros com sítios de reconhecimento sintéticos e têm uma
seletividade pré-determinada para um ou mais analitos, o que se deve ao arranjo de
monômeros funcionais polimerizáveis ao redor da molécula molde. Nesse trabalho
foi sintetizado MIP - usando como monômero funcional o ácido metacrílico (AMA) e
como moléculas molde a amitriptilina (AMI) e a imipramina - e também o MIS,
polímeros de sílica organicamente modificada – usando o 3-
aminopropiltrimetoxisilano (APTMS) como monômero funcional e a AMI e
nortriptilina (NOR) como moléculas molde. Também foram sintetizados os
polímeros não impressos (NIP e NIS) correspondentes. Os polímeros foram
avaliados na extração em fase sólida (MISPE) para análise de AMI e NOR em
amostras aquosas e de plasma, por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE).
A dessorção dos moldes foi realizada em extrator de Soxhlet até que níveis
negligenciáveis fossem obtidos, monitorados através da CLAE. Os MISPE foram
preparados em cartuchos de polipropileno contendo 200 mg do polímero e
utilizando sistema de vácuo multicomponente para as percolações das amostras e
dos solventes. As diferentes etapas do MISPE foram otimizadas, como o
condicionamento, carregamento, lavagem e eluição dos analitos. Também foi feita
uma revalidação de método de preparo de amostra por SPE octadecila seguida de
análise em CLAE, para fins de comparação de resultados. A seletividade dos
polímeros, avaliada pelo fator de impressão, i.é., a relação da resposta MIS versus
NIS, mostrou valores de 2,5 e 2,6 para a AMI e NOR, respectivamente, no MISAMI,
e de 1,7 e 3,5 para a AMI e NOR, respectivamente, no MIS-NOR. No método
usando SPE C18, foram obtidos parâmetros de validação adequados para uso na
monitorização terapêutica, como linearidade entre 20 e 400 ng mL-1 (r = 0,996); LQ
de 20 ng mL-¹; precisão intra-ensaio entre 3,2 - 16,4% para a AMI e entre 9,5 -
14,8% para a NOR; recuperação média de 99,1% para a AMI e de 93,8% para a
NOR. Nenhum dos polímeros sintetizados nesta pesquisa seja por síntese em
“bulk” de ácido metacrílico (MIP-AMI e MIP-IMI) ou por processo sol-gel usando o
APTMS (MIS-AMI e MIS-NOR), mostrou condições satisfatórias para uso em
MISPE, na análise por CLAE de AMI e NOR, principalmente devido à baixa
precisão de resultados nos níveis pretendidos. Por outro lado, o uso dos MISPE no
preparo das amostras resultou em perfil cromatográfico mais limpo, quando
comparado com o obtido com cartuchos C18 no preparo de amostras. / Molecularly imprinted polymers (MIP) have appeared as new selective sorbents for
solid-phase extraction (SPE). MIP is obtained through the preparation of polymers
with synthetic recognition sites and they show predetermined selectivity to one or
more analytes that can be attributed to the arrangement of functional polymer
around the template. In this research MIP - using methacrylic acid (MAA) as
monomer and amitryptiline (AMI) and imipramine as templates – and also a
organically modified molecularly imprinted silica (MIS) – using 3-
aminopropyltrimethoxysilane (APTMS) as monomer and AMI and NOR as templates
– as well as the corresponding non imprinted polymers (NIP and NIS) were
synthesized. The polymers were evaluated to application in SPE for high
performance liquid chromatography (HPLC) analysis of AMI and NOR in aqueous
and plasma samples. Desorption of the templates were performed in Soxhlet
apparatus until negligible levels were obtained, as monitored by HPLC analysis. The
MISPE were packed on polypropylene cartridges containing 200 mg of the polymer
and using a vacuum manifold system for the sample and solvents percolations. The
different steps of SPE: conditioning, loading, washing and elution were optimized. A
SPE C18- HPLC method was also re-validated to compare the results. The
selectivity of the polymers, evaluated by imprinting factors, i.e., response in MIS
versus NIS, showed values of 2.5 and 2.6 for AMI and NOR respectively, in MISAMI
and 1.7 and 3.5 in MIS-NOR for AMI and NOR respectively, in MIS-NOR. In the
extraction using SPE C18, adequate parameters of validation were obtained
showing the reliability of the method to the therapeutic drug monitoring, as linearity
between 20 and 400 ng mL-1 (r=0.996); LOQ of 20 ng mL-¹; intra assay precision
between 3.2 - 16.4% for AMI and 9.5 - 14.8% for NOR; mean recovery of 99.1% for
AMI and 93.8% for NOR. Neither polymers prepared, by the synthesis in bulk of
MAA (MIP-AMI and MIP-IMI) or by sol-gel process using APTMS (MIS-AMI and
MIS-NOR) showed satisfactory conditions for using in MISPE coupled with HPLCUV
analysis of AMI and NOR, mainly due to poor precision of the results in
concentration range of concern. On the other hand, the use of MISPE resulted in
cleaner chromatographic profile when compared to the SPE C18 cartridges in
sample preparation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/743 |
| Date | 27 June 2008 |
| Creators | FREITAS, Maria Betânia de |
| Contributors | SIQUEIRA, Maria Elisa Pereira Bastos de, http://lattes.cnpq.br/8767683530787456, SAKAKIBARA, Isarita Martins, LEITE, Edna Maria Alvarez |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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