One of the purposes of allergen-specific immunotherapy (SIT) is to modulate the humoral
immune response against allergens with significant increases in allergen-specific IgG1 and
IgG4 levels. These antibodies are associated with blocking activity by preventing IgE binding
to allergen and leading to reduced inflammatory responses. This study aimed to investigate in
vitro blocking activity of allergen-specific IgG antibodies on IgE reactivity to D.
pteronyssinus (Dpt) in sera from atopic patients. Dpt-specific IgG antibodies were obtained
from atopic sera and irrelevant IgG from non-atopic sera. IgG antibodies were purified by
ammonium sulfate precipitation followed by Protein-G affinity chromatography and evaluated
with regards to purity by SDS-PAGE and immunoreactivity by slot-blot and immunoblot
assays. The blocking activity was evaluated by inhibition ELISA. The electrophoretical
profile after salting-out precipitation showed an enrichment of high molecular weight proteins
in the precipitated fraction and strongly stained bands in the ligand fraction after
chromatography, compatible with molecular weight of human IgG. It was detected strong
immunoreactivity to IgG, negligible to IgA, and no reactivity to IgE and IgM. Dpt-specific
IgG fraction was capable to significantly reduce levels of IgE anti-Dpt, resulting in 35-51%
inhibition of IgE reactivity to Dpt in atopic patient sera. Allergen-specific IgG antibodies
purified using available and standardized methodology are able to inhibit IgE reactivity to Dpt
allergen extract. In addition to the clinical symptoms improvement (subjective parameter),
this approach reinforces that the intermittent measurement of serum allergen-specific IgG
antibodies will be an important objective laboratorial parameter that will help specialists to
follow their patients under SIT. / Uma das propostas da imunoterapia alérgeno específica é a de modular a resposta imune
humoral contra alérgenos, com aumento significativo nos níveis de IgG1 e IgG4 específicos.
Esses anticorpos estão associados com uma atividade bloqueadora, impedindo a ligação de
anticorpos IgE ao alérgeno e levando a uma redução nas respostas inflamatórias. Esse estudo
objetivou investigar a atividade bloqueadora, in vitro, de anticorpos IgG específicos sobre a
reatividade de IgE a D. pteronyssinus (Dpt) em soros de pacientes atópicos. Anticorpos IgG
específicos foram obtidos de soros de pacientes atópicos, e IgG irrelevante a partir de soros de
não atópicos, e depois purificados por precipitação com sulfato de amônio, seguido de
cromatografia de afinidade em Proteina G-agarose. A pureza desses anticorpos foi avaliada
por SDS-PAGE, a imunoreatividade por ensaios de slot-blot e immunoblot, e a atividade
bloqueadora por ELISA inibição. O perfil eletroforético, após precipitação com sulfato de
amônio, mostrou um enriquecimento de proteínas de alto peso molecular na fração
precipitada,e bandas fortemente coradas na fração ligante após a cromatografia, compatíveis
com o peso molecular de IgG humana. Foi detectada uma forte imunoreatividade para IgG,
leve para IgA, e nenhuma reatividade para IgE e IgM. A Fração IgG específica foi capaz de
reduzir significantemente os níveis de IgE anti-Dpt, resultando em 35-51% de inibição da
reatividade de IgE a Dpt em pools de soros de pacientes atópicos. Anticorpos IgG específicos
purificados, através de uma metodologia disponível e padronizada, são capazes de inibir a
reatividade de IgE ao extrato alergênico Dpt. Além da melhoria da sintomatologia clínica,
considerada um parâmetro subjetivo, essa abordagem reforça que a avaliação intermitente de
anticorpos IgG alérgeno-específicos pode ser uma ferramenta importante, auxiliando
especialistas a acompanharem seus pacientes em processo de imunoterapia específica. / Mestre em Ciências da Saúde
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/12772 |
| Date | 22 June 2013 |
| Creators | Siman, Isabella Lima |
| Contributors | Taketomi, Ernesto Akio, Rodrigues, Rosângela Maria, Silva, Neide Maria da |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde, UFU, BR, Ciências da Saúde |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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